PAC-1

引言 P2Y12作为经典GPCR靶点，很多课题组都在摸索高效的小分子筛选办法。单纯只用分子对接做初筛短板很明显，筛出来不少结合不稳的假阳性分子。 本次研究搭建一套分级生信筛选思路，先用配体相似性检索快速缩小候选范围，再开展受体口袋精准对接，叠加200ns分子动力学、MM/GBSA自由能评估层层缩库，后续配套多维度生物试验交叉核验，给同类型GPCR分子筛选提供一套能直接照搬落地的完整计算思路。 文献解读 文章标题：基于P2Y12的计算筛选和功能验证识别具有抗血栓活性的抗血小板化合物 发表期刊：Journal of Advanced Research 发表时间：2026年7月15日 影响因子：IF17.3/Q1 研究背景 氯吡格雷有人吃了不起效，替格瑞洛又怕出血，抗血栓药这些年基本卡在P2Y12上了。市面上大多数虚拟筛法图省事用刚性对接，TM6螺旋明明会动，它当没看见。 他们先诱导契合对接把柔性考虑进去，MD跑稳了再说，体外测ADP聚集筛活性，最后拉到斑马鱼上真刀真枪看血栓。三步下来，专找那种骨架没见过、绕着TM6疏水区走、出血风险低的抑制剂。 研究方法 先拿替格瑞洛做参照，配体相似性（Tanimoto≥0.6）初筛，再诱导契合对接+200 ns MD+MM/GBSA重打分，两万多化合物最后卡出42个。 提取人源富血小板血浆，测ADP诱导的聚集率，流式看CD62P和PAC-1，WB看VASP Ser157磷酸化。 最后斑马鱼激光打伤看血栓，同时用P2Y12过表达的HEK293T膜，HPLC测化合物与受体的直接结合。 研究结果 1 / P2Y12蛋白建模及先导分子结合模式分析 / 研究搭建替格瑞洛-P2Y12复合物体系，跑完200ns动力学模拟，锁定Ser101、Lys179等关键氨基酸。依靠受体、配体双路线虚拟筛选，初步得到42个候选分子【图1】。 图1：P2Y12分子建模与候选分子结合模式分析 思路复现： 先下载P2Y12晶体4NTJ，用SWISS-MODEL补全长，替格瑞洛做阳性参照跑200ns Amber动力学。对接这块，静态打分高的分子有十几个，但一跑MD就露馅，最后我们定了个硬指标：RMSD飘过3Å的直接淘汰，不纠结。配体相似性初筛和AutoDock Vina对接做完，再用MM/GBSA算结合自由能做最后把关。 2 /先导化合物体外抗血小板活性评价/ 10μM浓度下两种化合物可以把ADP诱导的血小板聚集率压低近60%；梯度给药结果证实抑制效果存在剂量依赖。流式检测进一步发现，CD62P、PAC-1阳性比例与荧光强度明显下降【图2】。 图2：先导化合物体外抑制血小板聚集与活化 思路复现： 人血用枸橼酸钠抗凝，设1、2.5、5、10μM四个浓度梯度，37℃预孵育5分钟再加ADP刺激，聚集仪记录6分钟。流式检测活化标记物，预孵育时间要比聚集实验长一些，CD62P和PAC-1标记完固定好再上机。DMSO做空白对照，替格瑞洛做阳性对照，所有样本同一批处理，不然时间差带来的批次效应比药物效应还大。 3 / 荧光斑马鱼模型评估体内抗血栓作用 / 荧光成像能够清晰观察，给药组损伤区域的血小板聚集规模远小于对照组。统计结果显示，GNE-493可以拉长血小板初次黏附时间；损伤90秒时，两组给药样本的血小板数量显著下降【图3】。 图3：斑马鱼体内抑制激光诱导血栓形成 思路复现： 用4dpf cd41:eGFP荧光鱼，药物浸泡预处理后低麻，平铺在玻璃底皿上，激光定点打背主动脉。连续拍荧光图像，统计首次黏附时间和90秒时病灶处的血小板数，每30秒记一次做动态曲线。 4 / 膜结合验证与血小板信号通路机制解析 / HPLC定量结果说明，分子能够特异性富集在P2Y12过表达细胞膜上。WB数据显示化合物下调ADP诱导的AKT磷酸化；VASP检测证明，分子可以逆转ADP对VASP磷酸化的抑制【图4】。 图4：分子结合P2Y12膜组分并调控下游信号通路 思路复现： 先用慢病毒构建P2Y12过表达的HEK293T细胞，冰上裂解后高速离心提膜。膜蛋白和药物室温共孵育，过滤板洗掉游离的，甲醇把结合态药物洗脱下来，HPLC打峰面积定量。信号实验这边，血小板给药加ADP刺激后提总蛋白，WB跑p-AKT；VASP检测用PGE1+ADP联合刺激，流式上机读磷酸化水平。 研究结论 该研究搭建适配P2Y12靶点、融合计算筛选与干湿实验的新药研发方案，筛选出VS-5584、GNE-493两款先导化合物。二者特异性结合靶点膜蛋白，体外抑制血小板活化，斑马鱼活体有效抗血栓，还可双重调控下游通路，具备抗血栓研发价值，后续仍需要补充哺乳动物药效与完整毒理试验。 点赞 分享 收藏

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溶解性与理化参数：P8RI水溶性优异，25℃条件下水中溶解度可达90mg/mL以上，可直接用无菌纯水或PBS缓冲液配制实验母液，无需有机溶剂助溶；几乎不溶于石油醚、乙酸乙酯等非极性有机溶剂。体外细胞给药全程推荐纯水/PBS配制母液，无有机溶剂细胞毒性，无需控制有机试剂终浓度，适配各类免疫细胞培养体系。理论密度1.36±0.1g/cm³，理论pKa值3.32±0.10。多肽粉末及水溶液均对光照敏感，可见光及紫外光照射会加速多肽降解，降低CD31激动活性，全程实验操作与储存均需要求避光处理。同时该多肽具备优异水溶性细胞膜穿透能力，可直接作用于细胞膜表面CD31靶点，无需转染试剂辅助即可完成体外细胞给药，操作简便适配高通量细胞实验。三、产品简介 P8RI（CAS：2147724-76-1）是靶向CD31的特异性仿生激动多肽，由8个D型氨基酸线性合成，核心作用为激活CD31免疫抑制信号通路，主要应用于免疫调控机制研究、血管内皮细胞功能实验、炎症反应调控、免疫细胞互作研究等科研场景。该多肽可精准结合CD31胞外功能结构域，重启细胞内源CD31抑制通路，有效抑制过度免疫应答、减轻细胞炎症损伤，同时可调控血管内皮细胞稳态，影响细胞黏附、迁移及血管新生过程。产品采用多肽冻干工艺制备，经过严格除内毒素处理，有效工作浓度范围内对免疫细胞、内皮细胞无明显细胞毒性，适配人脐静脉内皮细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞等多种细胞模型。本品仅限体外科研实验使用，严禁用于人体临床用药、体内动物长期给药、生物制剂加工及食品日化添加，禁止直接接触人体血液、创面及活体组织。四、主要用途 本品为CD31通路专属激动型多肽试剂，仅适用于体外细胞实验、分子靶点验证、免疫机制基础科研场景，禁止人体直接接触、体内注射及非科研商用加工。 CD31靶点激动验证实验，检测P8RI结合细胞膜CD31受体后下游信号蛋白磷酸化水平变化，验证多肽靶点特异性激动效果 细胞免疫抑制机制研究，探究P8RI激活CD31通路后，巨噬细胞、T细胞等免疫细胞炎症因子分泌及免疫活化水平变化 血管内皮细胞功能实验，分析多肽对内皮细胞黏附、迁移、管腔形成及血管新生能力的调控作用 炎症损伤保护实验，构建体外细胞炎症模型，评估P8RI通过CD31通路缓解细胞炎症应激、降低细胞凋亡的保护效应 细胞间黏附作用研究，探究CD31激活后免疫细胞与内皮细胞之间黏附能力的改变，解析血管炎症细胞浸润调控机制 免疫抑制剂候选多肽筛选，作为阳性对照试剂，对比天然多肽与人工合成多肽的免疫抑制活性差异 CD31通路上下游分子机制深挖，转录组、蛋白组联合检测，完善CD31介导的免疫抑制及血管稳态调控网络五、储存条件 固体冻干粉末长期储存：原装试剂密封避光、真空干燥环境保存，-20℃冷冻存放，隔绝水汽与光照，未开封原装粉末保质期可达24个月； 水溶液母液储存：纯水复溶后立即分装为单次实验用量，彻底规避反复冻融断裂多肽肽键、降低活性；分装后-80℃避光密封可保存3个月，-20℃避光密封可保存1个月，水溶液室温放置时长不得超过2小时； 储存禁忌：禁止室温长期敞口存放、强光直射，远离高温烘箱、水浴锅等热源设备；严禁与强酸、强碱、强氧化性试剂混放；若粉体颜色发黄、水溶液出现浑浊沉淀，代表多肽已降解失效，需按照实验室生物危废规范统一处理。六、安全注意事项 基础操作防护：多肽称量、母液复溶、细胞加样全流程建议在生物安全柜内完成；实验人员全程佩戴一次性无尘手套、护目镜及医用口罩，避免多肽粉尘吸入、溶液直接接触皮肤黏膜。 皮肤接触应急处理：粉体或多肽溶液沾染皮肤后，立即使用流动清水冲洗污染部位5分钟以上，擦拭干净后观察皮肤状态，若出现红疹、瘙痒等过敏反应，及时就医处理。 眼部接触应急处理：多肽溶液不慎溅入眼部，立刻使用大量无菌生理盐水冲洗结膜囊15分钟以上，保持眼睑张开充分冲洗，后续及时前往眼科进行专业检查。 实验废弃物处理：沾染多肽的废液、枪头、离心管、细胞培养耗材均归类为生物危险废物，按照实验室生物废弃物管理要求高压灭菌后统一回收，严禁直接排入下水道。 其他操作规范：多肽复溶时轻柔吹打混匀，避免剧烈震荡导致多肽变性；试剂取用完毕立即密封管口，快速放回低温避光储存环境；实验结束后清洁消毒操作台，做好手部卫生消杀。PA452试剂（CAS：457657-34-0）简洁文档一、基础信息 中文名称 PA452 中文别名 选择性ROCK2抑制剂、ROCK2通路特异性阻断剂、细胞骨架调控抑制剂、血管平滑肌细胞调节剂 英文名称 PA452 英文别名 ROCK2 selective inhibitor, ROCK2 pathway blocker, PA-452, Rho-associated kinase 2 inhibitor CAS编号 457657-34-0 分子式 C22H23N5O3 分子量 405.45 纯度规格 HPLC≥99%，单杂含量≤1%，无重金属残留、无内毒素污染；提供固体粉末、DMSO预制母液两种常规规格，可按需定制不同浓度无菌工作液，适配细胞给药及分子体外实验 产品级别 细胞通路抑制实验级、分子靶点筛选级、细胞骨架调控专用级、体外药理机制研究级二、理化性质 外观：常温常压下为白色至淡黄色结晶粉末，无刺激性异味，粉体质地均匀；溶于有机溶剂后呈无色至淡黄色澄清液体，无沉淀、无悬浮物。该试剂为小分子特异性激酶抑制剂，对ROCK2靶点具备高度选择性，可精准结合ROCK2蛋白激酶结构域，强效抑制ROCK2磷酸化活性，几乎不抑制ROCK1同源蛋白活性，有效规避非特异性通路干扰，大幅提升Rho/ROCK通路实验数据准确性。小分子化学结构稳定，在常规细胞培养液、DMSO储存液中活性稳定，极端高温、强酸碱环境以及长时间紫外照射会破坏分子结构，直接丧失激酶抑制活性。 溶解性与理化参数：PA452脂溶性优异，易溶于DMSO、DMF等极性有机溶剂，常温下DMSO溶解度可达50mg/mL；微溶于无水乙醇，几乎不溶于纯水、PBS等水性缓冲液。体外细胞实验统一推荐DMSO配制母液，后续用培养基梯度稀释至工作浓度，严格控制DMSO终浓度≤0.1%，避免有机溶剂产生细胞毒性干扰实验结果。理论pKa值6.85±0.10，熔点区间168-172℃。该小分子试剂对光照和高温敏感，长期光照会引发分子氧化降解，温度高于37℃会加速试剂失效，全程储存与实验稀释操作均需避光、低温处理，无需转染辅助，可自由穿透细胞膜快速发挥胞内靶点抑制作用。三、产品简介 PA452（CAS：457657-34-0）是一款高选择性小分子ROCK2抑制剂，区别于广谱ROCK抑制剂，可特异性靶向抑制ROCK2激酶活性，不影响ROCK1及其他丝氨酸/苏氨酸激酶功能。核心作用为阻断RhoA/ROCK2下游信号通路，调控细胞骨架重组、抑制细胞收缩、迁移与侵袭行为，同时可缓解血管平滑肌异常收缩、减轻组织纤维化进程、调控内皮细胞屏障功能。产品经过纯化除杂与除菌处理，有效工作浓度范围内无明显细胞毒性，适配血管平滑肌细胞、内皮细胞、成纤维细胞、肿瘤细胞等多种体外细胞模型。本品仅限体外基础科研实验使用，严禁用于人体临床诊疗、体内动物活体给药、药物制剂研发生产以及食品、化妆品添加，禁止直接接触人体皮肤创面、血液及活体组织。四、主要用途 本品为ROCK2通路专属选择性小分子抑制剂，仅适用于体外分子实验、细胞功能验证、通路机制科研研究，禁止人体接触、体内注射及非科研商用加工。 ROCK2靶点特异性抑制验证实验，检测给药后ROCK2及其下游MLC、cofilin蛋白磷酸化水平变化，验证靶点抑制专一性 细胞骨架调控研究，探究PA452阻断ROCK2通路后细胞应力纤维组装、细胞形态及细胞收缩能力的变化规律 细胞迁移与侵袭功能实验，用于肿瘤细胞、血管内皮细胞迁移侵袭模型构建，明确ROCK2通路对细胞运动能力的调控机制 血管功能调控实验，研究小分子抑制ROCK2后血管平滑肌细胞舒张状态变化，分析血管张力调控机制 组织纤维化体外机制研究，通过抑制ROCK2通路减少肌成纤维细胞活化，探究抗纤维化分子作用机理 广谱ROCK抑制剂对照实验，对比非选择性ROCK抑制剂与PA452的功能差异，区分ROCK1与ROCK2各自生物学功能 心血管疾病体外药理模型构建，助力心血管损伤、血管重构相关疾病的基础机制研究与药物靶点验证五、储存条件 固体粉末长期储存：原装试剂密封避光干燥保存，-20℃恒温冷冻存放，隔绝空气水汽与光照，未开封原装粉末保质期可达36个月； DMSO母液储存：DMSO复溶后快速分装为单次实验用量，杜绝反复冻融造成小分子结构破坏、活性下降；分装后-80℃避光密封可保存6个月，-20℃避光密封可保存2个月，母液室温放置时长不得超过4小时； 储存禁忌：禁止室温敞口放置、紫外线直射，远离水浴锅、烘箱等高温热源；不可与强氧化剂、强酸强碱试剂混存；若粉体颜色加深、母液出现絮状沉淀，说明试剂已降解失效，需按照实验室化学危废标准统一处理。六、安全注意事项 基础操作防护：试剂称量、母液配制、细胞加样全程在通风橱内操作；实验人员全程佩戴耐有机溶剂手套、护目镜及防毒口罩，避免试剂粉尘吸入、有机溶剂蒸气接触呼吸道，防止溶液直接沾染皮肤黏膜。 皮肤接触应急处理：粉末或母液沾染皮肤后，立即用无水乙醇擦拭污染区域，再使用流动清水冲洗10分钟以上，若后续出现皮肤刺痛、红肿过敏症状，需及时就医检查。 眼部接触应急处理：试剂不慎溅入眼部，第一时间用大量流动清水持续冲洗结膜囊15分钟以上，保持眼睑充分张开，冲洗完成后立即前往眼科做专业检测。 实验废弃物处理：沾染试剂的废液、枪头、离心管、培养耗材均归类为化学危险废物，经专用废液桶收集、高压灭菌处理后统一合规回收，严禁直接倒入下水道。 其他操作规范：母液配制时轻柔混匀，避免剧烈震荡产生气泡导致试剂氧化；取用试剂后立刻密封瓶盖，快速放回低温避光储存环境；实验结束后彻底消杀通风橱及操作台，完成手部及衣物清洁。PA-9试剂（CAS：1436004-46-4）简洁文档一、基础信息 中文名称 PA-9 中文别名 PAC1受体拮抗剂、垂体腺苷酸环化酶激活肽1型受体阻断剂、神经病理性疼痛抑制剂、炎症疼痛调控小分子 英文名称 PA-9 英文别名 PA9, PA 9, PAC1 receptor antagonist, N-[2-(1H-imidazol-5-yl)ethyl]-1-(1H-indazol-3-yl)-5-oxopyrrolidine-3-carboxamide CAS编号 1436004-46-4 分子式 C17H18N6O2 分子量 338.36 纯度规格 HPLC≥98%，单杂含量≤2%，无重金属残留、无内毒素、无核酸酶污染；提供固体粉末、DMSO预制母液两种常规规格，可定制不同浓度无菌工作液，适配体外细胞实验与动物离体给药模型 产品级别 神经通路阻断实验级、受体靶点拮抗专用级、疼痛机制研究级、体外神经细胞药理实验级二、理化性质 外观：常温常压下为白色至浅黄色固体结晶粉末，无刺激性异味，粉体细腻均匀；溶于有机溶剂后形成无色澄清透明溶液，无絮状物、无沉淀析出。该试剂为全新小分子高特异性受体拮抗剂，是首款靶向PAC1受体的专一性小分子阻断剂，可精准结合PAC1受体蛋白口袋结构，高效阻断PACAP介导的下游信号激活，IC50低至5.6 nM，靶点拮抗活性极强，且不会干扰PAC家族其他受体及神经细胞表面其他G蛋白偶联受体活性，最大程度降低实验非特异性干扰，保障神经通路实验数据精准度。小分子化学结构稳定性优异，常规DMSO母液、细胞培养液中可长期维持拮抗活性，高温、强酸碱环境以及长时间紫外光照会破坏分子疏水结合位点，直接丧失受体阻断功能。 溶解性与理化参数：PA-9脂溶性突出，极易溶于DMSO，25℃下DMSO溶解度可达250mg/mL；可适度溶于甲醇、乙醇等极性有机溶剂，几乎不溶于纯水、PBS等水性缓冲液。体外细胞实验统一推荐DMSO配制储存母液，后续用细胞培养基梯度稀释至工作浓度，严格控制DMSO终浓度≤0.1%，规避有机溶剂引发的细胞毒性。该小分子无需转染试剂辅助，可自由穿透细胞膜，快速作用于细胞膜表面PAC1受体起效。理化参数：脂水分配系数LogP=0.4，熔点240-241℃；试剂对光照、高温敏感，长期光照易发生分子氧化降解，温度高于40℃会加速活性衰减，所有储存、分装及实验操作均需避光、低温环境开展。三、产品简介 PA-9（CAS：1436004-46-4）是高特异性PAC1受体小分子拮抗剂，可浓度依赖性抑制PACAP诱导的细胞内cAMP上调，阻断下游CREB蛋白磷酸化激活，全面阻滞PAC1受体介导的神经信号通路。核心研究方向聚焦神经病理性疼痛、炎症性疼痛机制解析，可有效缓解PACAP诱发的机械性异常疼痛与脊髓内不良应激反应，同时可调控神经细胞兴奋性、干预神经细胞信号传导过程。产品经过多级纯化、除菌及除内毒素处理，有效工作浓度范围内对神经元、胶质细胞无明显细胞毒性，适配CHO稳转细胞株、脊髓神经细胞、小鼠原代神经细胞等多种细胞及动物离体模型。本品仅限体外基础科研、离体组织实验使用，严禁用于人体临床诊疗、活体动物长期体内给药、药物制剂研发生产，禁止直接接触人体创面、血液及活体组织。四、主要用途 本品为PAC1受体专属特异性小分子拮抗剂，仅适用于体外细胞通路验证、神经药理机制研究、离体组织功能实验，禁止人体直接接触、活体动物常规体内注射及非科研商用加工。 PAC1受体拮抗效能验证实验，检测给药后cAMP含量、CREB磷酸化水平变化，定量分析PA-9对PAC1下游信号通路的阻断效果 神经病理性疼痛体外机制研究，构建神经细胞疼痛应激模型，解析PAC1通路介导疼痛信号传导的分子机理 炎症性疼痛调控实验，探究PA-9阻断PAC1受体后，神经炎症因子释放水平变化，明确疼痛与神经炎症关联机制 PACAP/PAC1信号轴功能研究，对比阻断前后神经细胞兴奋性、细胞钙信号波动差异，完善神经内分泌调控网络 离体脊髓组织功能实验，用于离体神经组织给药，评估小分子对脊髓中枢疼痛信号传导的抑制作用 G蛋白偶联受体靶向药物筛选对照实验，作为特异性阳性阻断剂，对比其他候选小分子对PAC1受体的作用差异 神经保护机制基础研究，探索PA-9通过抑制异常神经信号激活，缓解神经细胞应激损伤、减少神经细胞凋亡的作用机制五、储存条件 固体粉末长期储存：原装试剂密封避光、干燥环境保存，-20℃恒温冷冻存放，隔绝空气水汽与光照，未开封原装粉末保质期可达36个月；4℃冷藏避光密封存放，保质期为24个月。 DMSO母液储存：有机溶剂复溶后立即分装为单次实验用量，彻底避免反复冻融破坏小分子空间结构、降低拮抗活性；分装后-80℃避光密封可保存6个月，-20℃避光密封可保存1个月，母液室温放置时长不得超过4小时。 储存禁忌：禁止室温敞口存放、紫外线直射，远离水浴锅、烘箱等各类高温热源；严禁与强氧化剂、强酸强碱试剂混合存放；若粉体颜色明显变黄、母液出现浑浊沉淀，说明试剂已降解失效，需按照实验室化学危险废物规范统一处理。六、安全注意事项 基础操作防护：试剂称量、母液配制、细胞及离体组织给药全程需在通风橱内完成；实验人员全程佩戴耐有机溶剂手套、护目镜及防毒口罩，避免试剂粉尘吸入、有机溶剂蒸气刺激呼吸道，防止溶液直接接触皮肤与眼结膜。 皮肤接触应急处理：粉末或DMSO母液沾染皮肤后，第一时间用无水乙醇擦拭污染部位，再使用流动清水持续冲洗10分钟以上，密切观察皮肤状态，若出现刺痛、红肿、皮疹等过敏反应，立即就医处理。 眼部接触应急处理：试剂不慎溅入眼部，立刻使用大量流动清水持续冲洗结膜囊15分钟以上，全程保持眼睑张开保证充分冲洗，冲洗结束后及时前往眼科进行专业检查。 实验废弃物处理：沾染试剂的废液、枪头、离心管、细胞培养耗材及离体组织耗材均归类为化学危险废物，经专用废液桶收集、高压灭菌处理后统一合规回收，严禁直接排入实验室下水道。 其他操作规范：母液配制过程轻柔吹打混匀，禁止剧烈震荡引发试剂氧化失效；试剂取用完毕立即密封瓶盖，快速放回低温避光储存区域；实验结束后全面消杀通风橱及操作台，完成手部及衣物清洁消杀工作。PAC-1试剂（CAS：315183-21-2）简洁文档一、基础信息 中文名称 PAC-1 中文别名 procaspase-3激活剂、半胱天冬酶3前体激活剂、细胞凋亡诱导剂、抗肿瘤小分子凋亡诱导试剂 英文名称 PAC-1 英文别名 Procaspase-3 activator, Caspase-3 activator, 2-(4-chlorophenyl)-5-(4-methoxyphenyl)-1,3,4-oxadiazole CAS编号 315183-21-2 分子式 C15H11ClN2O2 分子量 286.71 纯度规格 HPLC≥99%，单杂含量≤1%，无重金属残留、无内毒素、无蛋白酶污染；提供固体粉末、DMSO预制母液两种常规规格，可按需定制无菌梯度工作液，适配体外细胞凋亡实验与离体组织给药实验 产品级别 细胞凋亡通路激活实验级、caspase靶点激活专用级、抗肿瘤机制研究级、体外肿瘤细胞药理实验级二、理化性质 外观：常温常压下为白色至类白色结晶性粉末，无刺激性异味，晶体颗粒均匀规整；溶于有机溶剂后呈无色澄清透明溶液，无絮状悬浮物、无沉淀析出，溶液稳定性佳。该试剂为小分子特异性procaspase-3激活剂，可直接结合procaspase-3蛋白的隐蔽锌离子结合位点，解除锌离子对caspase-3前体的自抑制作用，强效激活procaspase-3转化为活化型caspase-3，启动内源性细胞凋亡通路。靶点特异性极强，仅靶向激活caspase-3家族蛋白，不会非特异性激活caspase-8、caspase-9等上下游凋亡蛋白，有效减少凋亡实验背景干扰，保证细胞凋亡通路数据精准可靠。小分子化学结构稳定，常规DMSO母液、无血清培养基中可长期保留激活活性，高温、强酸碱环境及长时间紫外光照会破坏分子杂环结构，彻底丧失caspase激活功能。 溶解性与理化参数：PAC-1脂溶性良好，易溶于DMSO、DMF等极性有机溶剂，25℃条件下DMSO溶解度可达30mg/mL；微溶于甲醇、乙醇，几乎不溶于纯水、PBS等水性缓冲液。体外细胞实验统一采用DMSO配制储存母液，后续用完全细胞培养基梯度稀释至工作浓度，严格控制DMSO终浓度≤0.1%，避免有机溶剂毒性干扰细胞凋亡实验结果。理化参数：熔点192-195℃，理论pKa值4.21±0.10；小分子可自由穿透细胞膜，无需转染试剂辅助即可快速进入胞内发挥作用。该试剂对光照、高温敏感，光照易引发分子氧化分解，温度超过40℃会加速活性衰减，所有分装、实验操作及储存全过程均需避光、低温处理。三、产品简介 PAC-1（CAS：315183-21-2）是靶向procaspase-3的专一性小分子激活剂，无需上游凋亡信号刺激，可直接绕过上游凋亡通路，直接激活细胞内休眠的procaspase-3，快速启动肿瘤细胞内源性凋亡程序。相较于常规凋亡诱导试剂，该小分子具备肿瘤细胞偏好性，对正常体细胞毒性极低，可选择性诱导多种肿瘤细胞凋亡，同时可协同化疗药物提升肿瘤细胞药物敏感性。产品经过多级层析纯化、除菌除内毒素处理，在有效工作浓度区间内对正常体细胞无明显损伤，适配肝癌细胞、肺癌细胞、结肠癌细胞、胶质母细胞瘤细胞等多种肿瘤细胞模型，也可用于离体肿瘤组织凋亡机制验证。本品仅限体外基础科研实验、离体组织实验使用，严禁用于人体临床抗肿瘤治疗、活体动物体内长期给药、抗肿瘤药物制剂研发生产，禁止直接接触人体创面、血液及活体组织。四、主要用途 本品为procaspase-3专属小分子激活剂，仅适用于体外细胞凋亡实验、凋亡通路机制解析、抗肿瘤药理基础研究，禁止人体直接接触、活体动物体内注射及非科研商用加工。 procaspase-3靶点激活验证实验，检测给药后活化caspase-3蛋白表达水平、凋亡底物剪切程度，验证小分子靶点激活特异性 肿瘤细胞内源性凋亡机制研究，探究PAC-1单独给药诱导肿瘤细胞凋亡的作用浓度梯度与时间效应关系 抗肿瘤药物联合用药实验，联合化疗药、靶向药共同处理肿瘤细胞，评估PAC-1增敏抗肿瘤药物、逆转肿瘤耐药的效果 凋亡通路上下游信号网络研究，检测Bax、Bcl-2等凋亡相关蛋白表达变化，完善caspase-3介导的凋亡调控通路 离体肿瘤组织凋亡诱导实验，用于离体肿瘤组织给药，模拟体外肿瘤凋亡微环境，验证小分子组织层面凋亡诱导效果 细胞凋亡阳性对照试剂，作为经典caspase-3特异性激活阳性对照，对比其他凋亡诱导试剂的作用差异与通路区别 肿瘤耐药机制体外研究，针对耐药肿瘤细胞模型，探究PAC-1克服肿瘤细胞凋亡抵抗、恢复细胞凋亡能力的分子机理五、储存条件 固体粉末长期储存：原装试剂密封避光、干燥环境保存，-20℃恒温冷冻存放，隔绝空气水汽与光照，未开封原装粉末保质期可达36个月；4℃冷藏避光密封存放，保质期为18个月。 DMSO母液储存：有机溶剂复溶后立刻分装为单次实验用量，坚决避免反复冻融破坏小分子空间结构、降低蛋白激活活性；分装后-80℃避光密封可保存6个月，-20℃避光密封可保存2个月，母液室温放置时长不得超过4小时。 储存禁忌：禁止室温敞口放置、紫外线直射，远离水浴锅、烘箱等高温热源设备；严禁与强氧化剂、强酸强碱试剂混放储存；若粉体颜色发黄、母液出现浑浊沉淀，代表试剂已降解失效，需按照实验室化学危险废物管理规范统一处理。六、安全注意事项 基础操作防护：试剂称量、母液配制、细胞加样及离体组织给药全流程均需在通风橱内操作；实验人员全程佩戴耐有机溶剂手套、护目镜及防毒口罩，避免试剂粉尘吸入、有机溶剂蒸气刺激呼吸道黏膜，防止试剂溶液直接沾染皮肤及眼部。 皮肤接触应急处理：粉末或DMSO母液沾染皮肤后，先用无水乙醇擦拭污染区域，再用流动清水持续冲洗10分钟以上，后续持续观察皮肤状态，若出现刺痛、红肿、皮疹等过敏症状，需立即就医处理。 眼部接触应急处理：试剂不慎溅入眼部，立即使用大量流动清水持续冲洗结膜囊15分钟以上，全程保持眼睑张开保证充分冲洗，冲洗完毕后及时前往眼科进行专业检查。 实验废弃物处理：沾染试剂的废液、枪头、离心管、细胞培养耗材及离体组织耗材均归类为化学危险废物，经专用废液桶收集、高压灭菌达标后统一合规回收处置，严禁直接排入实验室下水道。 其他操作规范：母液配制时轻柔吹打混匀，禁止剧烈震荡引发试剂氧化失效；试剂取用完成后立即密封瓶盖，快速放回低温避光储存区域；实验结束后全面消杀通风橱与操作台，完成手部及衣物清洁消杀。Pamabrom试剂（CAS：606-04-2）简洁文档一、基础信息 中文名称 帕马溴 中文别名 帕马溴复合物、8-溴茶碱-2-氨基-2-甲基-1-丙醇复合物、利尿消肿小分子、经前期水肿调节剂 英文名称 Pamabrom 英文别名 8-Bromotheophylline 2-amino-2-methyl-1-propanol compound, 2-Amino-2-methyl-1-propanol 8-bromotheophyllinate, Pamabromum CAS编号 606-04-2 分子式 C11H18BrN5O3 分子量 348.20 纯度规格 HPLC≥99%，单杂含量≤1%，无重金属残留、无内毒素、无微生物污染；提供固体粉末、乙醇预制母液两种常规规格，可定制无菌水溶液工作液，适配体外细胞渗透实验、离体肾脏组织药理实验 产品级别 利尿通路药理实验级、渗透压调控实验级、肾脏功能体外研究级、体液平衡调控专用级二、理化性质 外观：常温常压下为白色至类白色结晶粉末，无明显刺激性异味，粉体干燥不易结块；溶于醇类溶剂或纯水后形成无色澄清溶液，无浑浊、无絮状沉淀，溶液均一性良好。该试剂为8-溴茶碱与2-氨基-2-甲基-1-丙醇形成的有机复合盐类小分子利尿剂，具备温和的渗透性利尿作用，可特异性调控肾小管水分与钠离子重吸收过程，区别于强效袢利尿剂，无明显电解质紊乱副作用。靶点作用专一，主要作用于肾脏近曲小管上皮细胞，不会过度干扰机体其他离子转运通路，适合体液平衡、细胞渗透压相关基础科研实验。小分子复合盐结构稳定性良好，中性水溶液、乙醇储存液中活性可长期保持，强酸强碱环境、长时间高温加热以及紫外直射会破坏复合盐离子键结构，直接丧失利尿与渗透压调控活性。 溶解性与理化参数：Pamabrom水溶性中等，25℃条件下水中溶解度约18mg/mL；易溶于无水乙醇、甲醇等极性醇类溶剂，微溶于DMSO，几乎不溶于正己烷、乙酸乙酯等非极性有机溶剂。体外细胞及离体组织实验推荐优先使用无菌纯水或无水乙醇配制母液，乙醇体系需严格控制终浓度≤0.5%，避免醇类溶剂影响肾脏细胞活性。理化参数：熔点162-166℃，理论pKa值7.45±0.10；该小分子可自由穿透细胞膜，无需转染试剂辅助即可作用于肾小管上皮细胞，起效温和持久。试剂对高温敏感，温度高于50℃易出现粉体分解变色，光照稳定性较好，常规室内避光存放即可满足短期实验需求，长期储存仍建议全程避光。三、产品简介 Pamabrom（CAS：606-04-2）是一款温和型渗透性利尿小分子复合物，由8-溴茶碱和2-氨基-2-甲基-1-丙醇按固定比例复合而成，核心作用为抑制肾小管对钠、氯离子及水分的重吸收，促进体内多余体液排出，有效缓解细胞水肿、组织液潴留症状。该试剂利尿作用温和，不会引发钾离子大量流失，对肾脏正常生理功能损伤极低，常应用于体液平衡调控、细胞水肿损伤修复、肾脏离子转运机制、经前期水肿病理机制等科研场景。产品经过重结晶纯化、除菌除杂处理，有效工作浓度范围内对肾小管上皮细胞、正常体细胞无明显细胞毒性，适配人肾小管上皮细胞、离体大鼠肾脏组织、水肿模型细胞等多种实验体系。本品仅限体外基础科研、离体组织药理实验使用，严禁用于人体临床利尿治疗、活体动物体内给药、药品及保健品原料加工，禁止直接接触人体血液、创面及活体组织。四、主要用途 本品为温和型渗透性利尿专用小分子试剂，仅适用于体外细胞水肿模型、肾脏离子转运机制、离体组织药理研究，禁止人体直接接触、活体动物体内注射及非科研商用加工。 肾小管离子转运机制验证实验，检测Pamabrom干预后肾小管上皮细胞钠、氯、水离子转运蛋白表达变化，解析利尿作用分子通路 细胞水肿损伤修复实验，构建细胞低渗水肿模型，评估该小分子通过调控细胞渗透压、缓解细胞肿胀损伤的保护效果 温和利尿剂药理对照实验，作为温和利尿阳性对照，对比强效利尿剂与温和利尿剂对肾脏细胞的毒性差异及作用机制区别 组织液潴留病理机制研究，探究体液异常堆积过程中离子转运失衡规律，明确渗透压调控在组织水肿中的核心作用 经前期水肿体外机制研究，模拟体内激素波动引发的细胞水肿模型，分析Pamabrom改善水肿症状的作用机理 肾脏细胞生理功能调控实验，监测小分子干预后肾脏细胞增殖、凋亡及屏障功能变化，验证其肾脏安全性 复方利尿制剂体外配伍实验，开展该小分子与其他消肿活性物质联合用药研究，分析协同消肿利尿效果五、储存条件 固体粉末长期储存：原装试剂密封、干燥、避光环境保存，-20℃恒温冷冻存放，隔绝水汽与灰尘，未开封原装粉末保质期可达36个月；4℃冷藏密封避光存放，保质期为24个月。 母液储存：纯水/乙醇复溶后立即分装为单次实验用量，规避反复冻融破坏复合盐结构、降低利尿活性；分装后-80℃避光密封可保存4个月，-20℃避光密封可保存2个月，水溶液母液室温放置时长不得超过6小时。 储存禁忌：禁止高温环境存放、长期敞口暴露于空气，远离烘箱、水浴锅等热源；不可与强酸、强碱及强氧化性试剂混放；若粉体颜色加深、水溶液出现结晶析出，代表试剂结构分解失效，需按照实验室化学危废规范统一处理。六、安全注意事项 基础操作防护：试剂称量、母液配制、细胞加样及离体组织给药全程建议在通风橱内完成；实验人员全程佩戴一次性手套、护目镜及医用口罩，避免试剂粉尘吸入，防止溶液直接沾染皮肤与眼结膜。 皮肤接触应急处理：粉体或母液沾染皮肤后，立即使用流动清水冲洗污染部位5分钟以上，擦干后观察皮肤状态，若出现瘙痒、轻微泛红等不适，及时清洗并就医。 眼部接触应急处理：试剂不慎溅入眼部，立刻使用大量无菌生理盐水冲洗结膜囊15分钟以上，保持眼睑张开充分冲洗，冲洗完成后及时前往眼科进行专业检查。 实验废弃物处理：沾染试剂的废液、枪头、离心管、细胞培养耗材均归类为化学危险废物，统一收集后经高压灭菌处理，合规交由专业机构回收，严禁直接排入下水道。 其他操作规范：母液配制时轻柔混匀，避免剧烈震荡导致溶液析出结晶；试剂取用完毕立即密封管口，快速放回低温避光储存环境；实验结束后清洁消杀操作台，做好手部卫生清洁。pAP1-luc试剂（CAS：RH-01444）简洁文档一、基础信息 中文名称 pAP1-luc 中文别名 AP1荧光素酶报告质粒、激活蛋白1转录活性报告基因质粒、AP1通路荧光报告载体、萤火虫荧光素酶AP1报告质粒 英文名称 pAP1-luc 英文别名 AP1 luciferase reporter plasmid, Activator protein 1 reporter vector, Firefly luciferase AP1 reporter plasmid, pAP1-luciferase CAS编号 RH-01444 载体骨架 pGL6基础质粒骨架 插入元件 AP1特异性转录结合序列+萤火虫荧光素酶报告基因 质粒浓度与纯度 质粒浓度≥1μg/μL，OD260/OD280=1.80±0.05，无基因组DNA污染、无RNA残留、无内毒素、无核酸酶污染；测序全长100%匹配，无碱基突变 产品规格 原装质粒干粉、无菌TE缓冲液预制质粒溶液两种规格，可定制不同浓度无菌转染工作液，适配细胞瞬时转染、稳定细胞株构建实验 产品级别 转录因子报告实验级、细胞信号通路验证级、荧光素酶检测专用级、体外基因转染科研级二、理化性质 外观：常温常压下质粒干粉为白色疏松絮状粉末；TE缓冲液复溶后为无色澄清透明核酸溶液，无浑浊、无絮状沉淀、无肉眼可见杂质，核酸溶液均一性稳定。该载体为特异性AP1转录因子荧光素酶报告质粒，载体上游串联多拷贝AP1保守结合序列，下游连接萤火虫荧光素酶luc报告基因，可精准响应胞内AP1转录因子活性变化。当细胞内AP1通路激活后，AP1蛋白特异性结合质粒上游启动子序列，启动下游荧光素酶基因转录与翻译，通过检测细胞裂解液荧光值即可定量反映AP1转录活性强弱，无本底信号干扰，特异性远高于通用型报告载体。质粒双链环状DNA结构稳定性优异，无菌TE缓冲液体系中可长期维持完整环状构象，反复冻融、高温水浴、强酸强碱环境会导致质粒DNA链断裂、发生降解，彻底丧失转染与报告检测功能。 溶解性与理化参数：pAP1-luc质粒核酸水溶性极佳，可直接溶于无菌TE缓冲液、无菌去离子水，无需有机溶剂助溶，完全适配哺乳动物细胞转染体系；不可溶于乙醇、DMSO等有机溶剂，高浓度有机溶剂会造成核酸变性降解。核酸理化参数：OD260/OD230≥2.0，多糖与盐离子残留极低；质粒为双链环状超螺旋结构，超螺旋占比≥90%，转染效率稳定可靠。核酸分子对紫外光照、高温极度敏感，紫外照射会直接造成DNA链损伤，温度高于37℃会加速质粒降解，全程质粒分装、转染操作、储存均需低温避光操作；无需病毒载体辅助，搭配常规脂质体转染试剂即可完成哺乳动物细胞高效转染，操作简便适配高通量通路筛选实验。三、产品简介 pAP1-luc（CAS：RH-01444）是靶向激活蛋白1（AP1）转录通路的专用萤火虫荧光素酶报告基因质粒，依托pGL6优化载体骨架构建，剔除冗余启动子序列，大幅降低基础荧光本底值，提升通路检测灵敏度。AP1是细胞内核心核转录因子，广泛调控细胞增殖、凋亡、炎症应答、肿瘤发生、细胞迁移等生物学过程，该质粒可精准捕获胞内AP1信号激活水平，实现AP1通路活性的定量、动态检测。产品经过无内毒素质粒大提、除菌过滤、核酸纯化工艺制备，无细菌内毒素污染，有效转染剂量下对各类哺乳动物细胞无细胞毒性，适配HEK293T、Hela、巨噬细胞、肿瘤细胞、血管内皮细胞等多种细胞模型。本品仅限体外细胞转染、分子通路基础科研实验使用，严禁用于人体基因治疗、活体动物体内基因递送、临床诊疗以及基因药物研发生产，禁止直接接触人体活体组织与血液。四、主要用途 本品为AP1通路专属荧光素酶报告质粒，仅适用于体外细胞转染实验、转录因子活性定量检测、细胞信号通路机制研究，禁止人体直接接触、体内基因递送及非科研商用载体改造。 AP1转录因子基础活性检测，定量检测不同细胞本底AP1转录活性，构建细胞基础通路活性数据库 上游信号分子调控AP1通路验证实验，探究激酶、细胞因子、小分子药物对AP1转录活性的激活或抑制作用 炎症通路分子机制研究，解析炎症刺激下AP1通路活化规律，关联下游炎症因子转录表达水平变化 肿瘤细胞增殖与凋亡通路研究，检测肿瘤细胞干预前后AP1活性波动，明确AP1介导肿瘤恶性表型的调控机理 小分子化合物高通量筛选，以pAP1-luc荧光信号为读数，筛选靶向AP1通路的激动剂与抑制剂候选药物 AP1上下游信号轴交联分析，联合其他转录因子报告质粒，研究多条细胞通路之间的交叉调控关系 稳定AP1报告细胞株构建，慢病毒包装后构建稳转细胞系，用于长期动态监测细胞体内AP1通路持续变化五、储存条件 质粒干粉长期储存：原装质粒干粉密封避光、真空干燥环境保存，-20℃冷冻存放，隔绝水汽与紫外光照，未开封原装干粉保质期可达24个月； 质粒溶液储存：TE缓冲液复溶后立即分装为单次转染实验用量，杜绝反复冻融造成质粒DNA断裂、转染效率下降；分装后-80℃避光密封可保存6个月，-20℃避光密封可保存2个月，质粒溶液室温放置时长不得超过1小时； 储存禁忌：禁止室温敞口存放、紫外透射仪直射，远离水浴锅、金属加热器等高温热源；严禁与核酸酶、强酸强碱试剂混放；若核酸溶液出现浑浊、荧光本底异常升高，代表质粒已降解失效，需按照实验室生物核酸危废规范统一处理。六、安全注意事项 基础操作防护：质粒溶解、分装、细胞转染全流程建议在生物安全柜内完成；实验人员全程佩戴一次性无尘手套、护目镜及医用口罩，避免核酸溶液气溶胶吸入、质粒溶液直接接触皮肤黏膜。 皮肤接触应急处理：质粒溶液沾染皮肤后，立即使用流动清水冲洗污染部位5分钟以上，擦拭干燥后观察皮肤状态，若出现轻微刺激泛红，及时清洁并做好后续观察。 眼部接触应急处理：质粒溶液不慎溅入眼部，立刻使用大量无菌生理盐水冲洗结膜囊15分钟以上，保持眼睑张开充分冲洗，后续及时前往眼科进行专业检查。 实验废弃物处理：沾染质粒的枪头、离心管、细胞培养板、转染耗材均归类为生物危险废物，按照实验室生物废弃物管理要求高压灭菌后统一回收，严禁直接排入下水道。 其他操作规范：质粒复溶后轻柔吹打混匀，禁止剧烈震荡剪切核酸链；试剂取用完毕立即密封管口，快速放回低温避光储存环境；实验结束后使用核酸清除剂全面清洁操作台，避免质粒残留造成实验交叉污染。pARE-luc试剂（CAS：RH-01437）简洁文档一、基础信息 中文名称 pARE-luc 中文别名 ARE荧光素酶报告质粒、抗氧化反应元件报告基因质粒、Nrf2通路荧光报告载体、萤火虫荧光素酶ARE报告质粒、氧化应激通路报告质粒 英文名称 pARE-luc 英文别名 ARE luciferase reporter plasmid, Antioxidant response element reporter vector, Nrf2 pathway luciferase reporter plasmid, Firefly luciferase ARE reporter plasmid, pARE-luciferase CAS编号 RH-01437 载体骨架 pGL6优化基础质粒骨架 插入元件 ARE抗氧化反应元件保守结合序列+萤火虫luc2荧光素酶报告基因 质粒浓度与纯度 质粒浓度≥1μg/μL，OD260/OD280=1.80±0.05，OD260/OD230≥2.0；无基因组DNA污染、无RNA残留、无内毒素、无核酸酶污染；测序全长100%匹配，无碱基突变、无片段缺失，超螺旋质粒占比≥90% 产品规格 原装质粒干粉、无菌TE缓冲液预制质粒溶液两种规格，可定制不同浓度无菌转染工作液，适配细胞瞬时转染、稳定报告细胞株构建、氧化应激通路高通量筛选实验 产品级别 氧化应激通路报告实验级、转录因子活性检测级、荧光素酶检测专用级、体外细胞基因转染科研级二、理化性质 外观：常温常压下质粒干粉为白色疏松絮状粉末，质地轻盈不易扬尘；TE缓冲液复溶后为无色澄清透明核酸水溶液，无浑浊悬浮物、无肉眼可见沉淀，核酸溶液均一性优异，长期低温静置不会出现核酸析出。该载体为靶向Nrf2/ARE抗氧化通路的专用荧光素酶报告质粒，载体上游串联多拷贝保守ARE抗氧化反应元件序列，下游搭载优化版萤火虫luc2荧光素酶基因，本底荧光信号极低，检测灵敏度大幅提升。胞内Nrf2转录因子激活后可特异性结合质粒上游ARE元件，启动下游荧光素酶基因转录翻译，细胞裂解液荧光强度可直接定量表征Nrf2通路活化水平，无交叉通路干扰，适配各类氧化应激相关细胞模型。质粒为双链环状超螺旋DNA结构，核酸整体稳定性良好，无菌TE缓冲液储存体系可有效保护DNA完整构象；反复冻融、高温水浴、紫外直射、强酸强碱环境均会造成DNA双链断裂、核酸降解，直接丧失转染能力与荧光报告功能。 溶解性与理化参数：pARE-luc质粒水溶性极佳，可直接完全溶解于无菌TE缓冲液、无酶去离子纯水，无需任何有机溶剂助溶，完全适配哺乳动物细胞无血清/完全培养基转染体系；不可溶于DMSO、乙醇等有机溶剂，有机溶剂会直接导致核酸变性、链结构破坏。核酸整体片段长度5622bp，理化指标达标无杂质残留；核酸分子对紫外光照、高温环境高度敏感，紫外透射仪短时间照射即可损伤DNA链，温度高于37℃会加速核酸自发降解，质粒分装、细胞转染、全程储存操作均要求低温避光。无需慢病毒等病毒载体辅助，搭配常规脂质体转染试剂即可实现多种哺乳动物细胞高效转染，操作流程简单，兼容高通量药物筛选实验。三、产品简介 pARE-luc（CAS：RH-01437）是靶向Nrf2-ARE抗氧化应激信号通路的专用萤火虫荧光素酶报告质粒，基于pGL6优化载体骨架改造，剔除无关冗余序列，最大程度压低基础荧光本底，精准捕捉细胞内微弱的Nrf2通路激活信号。Nrf2是机体核心抗氧化应激转录因子，主导细胞抗氧化损伤、解毒代谢、炎症调控、细胞凋亡等关键生理过程，该质粒可实现Nrf2转录活性的动态定量检测，是氧化应激机制研究的核心工具载体。产品采用无内毒素质粒大提工艺制备，经过除菌过滤、核酸纯化、内毒素去除多重处理，有效转染剂量下无细胞毒性，适配HEK293T、HepG2、血管内皮细胞、神经细胞、肝细胞等多种氧化应激常用细胞模型。本品仅限体外细胞转染、分子通路基础科研实验使用，严禁用于人体基因治疗、活体动物体内原位基因递送、临床基因诊断以及基因药物研发生产，禁止直接接触人体血液、创面及活体组织。四、主要用途 本品为Nrf2/ARE抗氧化通路专属荧光素酶报告质粒，仅适用于体外细胞转染实验、转录因子活性定量检测、氧化应激信号通路机制研究，禁止人体直接接触、体内基因递送及非科研商用载体改造与扩增。 细胞本底Nrf2转录活性检测，测定不同细胞株基础抗氧化通路活性，构建细胞氧化应激本底数据库 抗氧化小分子药物筛选实验，以荧光读数为检测指标，高通量筛选靶向激活Nrf2通路的抗氧化候选化合物 氧化应激损伤保护机制研究，构建H₂O₂等诱导的细胞氧化损伤模型，验证药物干预后Nrf2通路活化水平变化 上游调控因子对Nrf2通路的调控验证，探究激酶、microRNA、信号蛋白对Nrf2转录活性的激活或抑制效应 炎症与氧化应激交叉通路研究，关联Nrf2抗氧化通路与NF-κB炎症通路，解析细胞应激状态下多条通路互作机制 抗氧化药物作用靶点验证，明确候选药物是否通过激活ARE元件进而调控下游抗氧化靶基因表达 稳定Nrf2报告细胞株构建，可配合慢病毒包装构建稳转细胞系，实现长期连续监测细胞氧化应激水平变化五、储存条件 质粒干粉长期储存：原装质粒干粉密封避光、真空干燥环境保存，-20℃恒温冷冻存放，隔绝水汽、灰尘及紫外光照，未开封原装干粉保质期可达24个月； 质粒溶液储存：TE缓冲液复溶后立即分装为单次转染实验用量，坚决避免反复冻融剪切DNA链、降低转染效率与荧光信号；分装后-80℃避光密封可保存6个月，-20℃避光密封可保存2个月，质粒溶液室温放置时长不得超过1小时； 储存禁忌：禁止室温敞口放置、紫外仪器直射，远离水浴锅、加热模块等各类高温热源；严禁与核酸酶试剂、强酸强碱、强氧化剂共同存放；若核酸溶液出现浑浊、荧光本底异常升高、转染后荧光信号大幅下降，代表质粒已降解失效，需按照实验室生物核酸危废规范统一处理。六、安全注意事项 基础操作防护：质粒复溶、分装、细胞转染全流程均需在生物安全柜内完成；实验人员全程佩戴无尘一次性手套、护目镜及医用口罩，防范核酸气溶胶吸入、质粒溶液直接接触皮肤及眼结膜。 皮肤接触应急处理：质粒溶液意外沾染皮肤后，即刻使用流动清水持续冲洗污染部位5分钟以上，擦干后观察皮肤状态，若出现轻微泛红、刺激不适感，持续清洁并随访观察即可。 眼部接触应急处理：质粒溶液不慎溅入眼部，立刻使用大量无菌生理盐水冲洗结膜囊15分钟以上，全程保持眼睑充分张开保证冲洗彻底，冲洗完成后及时前往眼科完成专业检查。 实验废弃物处理：沾染质粒的枪头、离心管、细胞培养板、转染试剂盒耗材均归类为生物危险废物，经高压灭菌彻底灭活核酸后统一合规回收，严禁直接排入实验室下水道。 其他操作规范：质粒复溶时轻柔低速吹打混匀，严禁剧烈震荡破坏核酸超螺旋结构；试剂取用完毕立刻密封管口，快速放回低温避光储存区域；实验结束后使用专用核酸清除剂消杀操作台与生物安全柜，杜绝质粒残留引发实验交叉污染。