Beijing Tricision Therapeutics Co., Ltd.

关注并星标CPHI制药在线 近年来，mRNA-LNP技术与免疫细胞治疗、基因编辑等领域的快速进展，为未攻克疾病治疗开辟了新途径。多款基于这些技术的药物成功上市，展现了其巨大潜力，mRNA-LNP技术如同一颗冉冉升起的新星，迅速进入公众视野，尤其是在COVID-19疫苗的研发中展现了其独特的优势。然而，国内在mRNA-LNP免疫治疗产品的标准化方面尚存空白，为响应国家政策推动产业发展，亟需制定相关标准。 值得一提的是，随着行业标准的日益完善，由中国食品药品企业质量安全促进会主导制定的《基于mRNA-LNP技术的（细胞）免疫治疗产品开发指南》（T/FDSA 0055-2024）将于2024年10月03日正式实施。 这一规范基于mRNA-LNP技术开发（细胞）免疫治疗产品的技术路线、制备工艺、检验方法、质控要点、功能验证等方面的内容，以及研发生产所需的管理、组织、人员、设施设备及物料等相关要求。为科研机构、生产企业提供了明确的技术指导和产品规范，特别是在不同技术路线的产品设计、质控指标等方面，标准提出了具体要求，旨在推动mRNA-LNP技术的持续优化与创新。 一、你了解mRNA-LNP究竟是什么吗？ mRNA-LNP（信使核糖核酸-脂质纳米颗粒）是一种组合体，其中mRNA（信使核糖核酸）是一种指导人体细胞产生特定蛋白质的生物分子，而LNP（脂质纳米颗粒）则是一种基于脂质成分的纳米递送载体。mRNA-LNP技术则是利用这种组合体进行药物递送或疫苗接种的一种技术。具体来说，LNP作为递送载体，通过静电络合的方式与带负电荷的mRNA分子结合，形成稳定的复合体。当mRNA-LNP到达细胞膜时，其与带负电荷的细胞膜触发膜融合，促进mRNA分子的递送进入细胞内。进入细胞后，LNP的双层结构在溶酶体的酸性环境下遭受破坏，释放mRNA，mRNA随后与核糖体结合，指导细胞产生特定的蛋白质，如抗体或其他治疗性蛋白。 二、基于mRNA-LNP技术的（细胞）免疫治疗产品开发指南主要技术参数要求 作为国内首个基于mRNA-LNP技术的（细胞）免疫治疗产品开发的通用标准，《基于mRNA-LNP技术的（细胞）免疫治疗产品开发指南》的发布填补了行业空白，提供了清晰、可操作的规范与指南，对突破当前制约行业发展的关键技术瓶颈、抢占新一轮科技革命和产业革命制高点、推动行业向高质量发展方向迈进具有重大而深远的意义。如标准中mRNA-LNP成品质量控制指标汇总表详尽列出了从鉴别、含量、理化特性到生物学活性及安全性的多项检测指标。鉴别通过DNA测序确认mRNA序列准确性；含量检测涵盖mRNA含量、包封率及递送系统组分，方法多样灵活。理化特性检查包括粒径、PDI、Zeta电位等，确保产品稳定性与均匀性。生物学活性通过ELISA等方法评估蛋白翻译功能。安全性方面，强调无菌、细菌内毒素及异常毒性检测，确保产品安全。纯度及工艺相关杂质检测严格，如截短序列RNA、dsRNA残留等，均遵循药典指导原则，确保产品质量高标准，详见下表： mRNA-LNP成品质量控制指标汇总表 三、《基于mRNA-LNP技术的（细胞）免疫治疗产品开发指南》标准信息 项目 内容 标准号 T/FDSA 0055—2024 中文名称 《基于mRNA-LNP技术的（细胞）免疫治疗产品开发指南》 英文标题  Guidelines for the development of Cell immunotherapy products based on mRNA-LNP technology 发布日期 2024年09月03日 实施日期 2024年10月03日 归口单位 中国食品药品企业质量安全促进会 主要起草单位 国家药品监督管理局疫苗及生物制品质量监测与评价重点实验室、湖南远泰生物技术有限公司、和元生物技术（上海）股份有限公司、江苏金斯瑞蓬勃生物科技有限公司、广州吉赛生物科技股份有限公司、南京诺唯赞生物科技股份有限公司、南京金斯瑞生物科技有限公司、荣灿生物医药技术（上海）有限公司、传信生物医药（苏州）有限公司、湖南普瑞玛药物研究中心有限公司、宁波熙宁检测技术有限公司、北京民海生物科技有限公司、苏州驾玉生物医药有限公司、北京启辰生生物科技有限公司、长沙晨辰医药科技有限公司、广东科艺普实验室设备研制有限公司、国家药品监督管理局药物警戒技术研究与评价重点实验室、武汉大学、海南医科大学、中国科学院上海高等研究院、贝克曼库尔特国际贸易（上海）有限公司、上海爱博才思分析仪器贸易有限公司、湖南光琇高新生命科技有限公司（人类干细胞国家工程研究中心）、苏州科锐迈德生物医药科技有限公司、苏州艾特森制药设备有限公司、北京国卫生物科技有限公司、武汉瀚海新酶生物科技有限公司、深圳市亿锦航环境科技有限公司、广东省医学实验动物中心、天津市第二人民医院、广州医科大学附属妇女儿童医疗中心、济南市第四人民医院、智联湾实验室科技（广州）有限公司 主要起草人 陆家海、向双林、郭城、吕京、吴力军、叶宇翔、李乐、周文婷、贾国栋、潘晓、王媛、闵天奇、陈康明、章雪晴、彭薇、姜德建、朱国振、李克雷、林巧（Claudia Lin）、于红艳、刘国柱、莫仁春、李星、张荣光、胡汉昆、李娜、侯风青、陈泓序、程腊梅、左炽健、叶玉林、岳云强、杨广宇、沈祥营、王刚、马萍、胡丹丹、张磊升、廖聪慧、吴攸、王思雨、任倩、由庆睿、陆钰、刘鹏、金秋恒、孙振、唐茂萍、尹思远、刘学武、李佳、王海欣、何荣赞（Ron He）、辛琪、郝春霖、刘子琪、梁文娟、李怡雯、于兰、高铁、林戈、朱佳凤、童家勇、王田恩、李梁、刘云胜、严家荣、韩英、蓝曼馥、周芳、熊孟玲、韦厚良、党金玲、卢圣东、张尚峰、周倩、刘羽霄、陈起静、詹明高、耿玉杰、王庆辉、黄丽、曹其来、崔力沙、屠洁（Sky Tu）、郭小凯、熊学武、邓崇威、宋攀奇、侯丽芳、徐玲丽、王文涛、张晓霞、胡建敏、杨嘉丽、史建辉、陈傍柱、柏清玉、熊梓辰、伍生军、吴珊珊、刘珍秀、陈奕钧、李思蓉、孙金鑫 主要技术内容 本文件提供了使用基于mRNA-LNP技术开发（细胞）免疫治疗产品的基本原则、组织和人员、设施设备及物料、产品开发的技术路线与工艺研究及其相应的质量控制与功能验证、管理等基本原则和指导建议。 本文件适用于科研机构、生产企业基于mRNA-LNP技术开发CAR-T或CAR-NK细胞等免疫治疗产品。 备注：标准购买信息：目前该团体标准文本还未对外公布，解读参考了征求意见稿部分内容。 参考文献        [1] www.ttbz.org.cn等 END 【直播回放推荐】 来源：CPHI制药在线 声明：本文仅代表作者观点，并不代表制药在线立场。本网站内容仅出于传递更多信息之目的。如需转载，请务必注明文章来源和作者。 投稿邮箱：Kelly.Xiao@imsinoexpo.com ▼更多制药资讯，请关注CPHI制药在线▼ 点击阅读原文，进入智药研习社~

RSV是一种常见的呼吸道病毒，据估计每年导致全球超过300万名患者住院，超过2.6万名患者死亡。易感人群包括5岁以下的儿童、65岁及以上成人、免疫抑制患者及肺病、心脏病患者。 近年来，RSV疫苗市场备受关注，而随着Moderna的RSV疫苗mRESVIA（mRNA-1345）的成功上市， mRNA技术得到了进一步的肯定。本文将就国内布局RSV mRNA疫苗的企业进行详细梳理。若有遗漏，欢迎留言补充。 1 公司：深信生物 药物名称：IN006 研发进度：中美1期 深信生物成立于2019年，致力于开发全球领先的LNP递送技术平台及创新RNA疗法，以解决尚未满足的临床需求。深信生物目前已建立了一个包含5000多种可离子化脂质的多样性导向LNP库（DOLL），可应用于多种创新疗法的开发，包括mRNA疫苗和药物、在体基因编辑疗法和细胞疗法等。基于其专有的mRNA和LNP技术平台，深信生物已在传染病疫苗、罕见病及肿瘤免疫领域布局了多个内部研发管线，同时与国内外多家生物制药企业建立了合作，以探索该技术在更广泛治疗领域的开发潜力。 IN006是深信生物基于其自主知识产权的mRNA-LNP技术平台开发的二价RSV预防性疫苗产品，其采用了深信生物拥有自主知识产权的融合前F蛋白设计、mRNA元件和LNP递送系统；含有分别编码RSV-A和RSV-B稳定融合前构象F蛋白的mRNA，是同时针对RSV-A和RSV-B两个亚组的二价mRNA疫苗。RSV-A和RSV-B病毒在不同流行季通常交替或同时流行，尽管单价RSV疫苗通常具有针对RSV-A和RSV-B的交叉保护效果，但二价RSV疫苗可能具有更好的广谱性。 目前，IN006已经中美双报获批临床，处于Ⅰ期临床阶段： 据药物临床试验登记与信息公示平台显示，评价呼吸道合胞病毒IN006二价mRNA疫苗（IN006）在18周岁及以上健康人群安全性和免疫原性的随机、双盲、安慰剂对照的Ⅰ期临床试验的目标入组人数为国内240人，处于尚未招募状态，登记号为CTR20243326。 据ClinicalTrials.gov网站显示，该疫苗研究将评估年轻人单次注射最多4个剂量水平的IN006 和老年人单次注射最多3个剂量水平的IN006的安全性、耐受性和免疫原性；在老年人初次接种疫苗后约12个月再次接种IN006。该研究于今年8月开始，预计招募200人，主要完成时间预计为2026年4月。 2 公司：星锐医药 药物名称：STR-VO03 研发进度：美国1/2期 星锐医药成立于2021年8月，公司聚焦肝外靶向递送技术，致力于研发以RNA为核心的创新药物，解决未被满足的临床需求。核心团队拥有深厚的核酸药物发现、递送技术和制剂开发能力。打造了围绕化学、mRNA和LNP制剂的核心产业链，切实攻克RNA药物研发的关键难点。基于mRNA和靶向递送LNP技术平台，星锐医药已在mRNA疫苗和mRNA创新疗法布局丰富的研发管线。 STR-V003是一种编码融合前蛋白（preF）的呼吸道合胞病毒mRNA疫苗，旨在预防RSV病毒感染。该疫苗由星锐医药自主知识产权的脂质纳米颗粒（LNP）及preF mRNA组成，并且在自建cGMP车间完成中试生产。在临床前的小鼠及棉鼠模型实验中，该疫苗展示出同时对RSV A型及B型病毒毒株的免疫反应及保护作用。 据ClinicalTrials.gov网站显示，该疫苗一项针对健康成年人呼吸道合胞病毒（RSV）mRNA疫苗STR-V003的I/II期随机、双盲、安慰剂对照、剂量探索、首次人体研究（NCT06344975），将在≥18岁的健康男性和女性中进行，以评估STR-V003的安全性、耐受性和免疫原性。该试验分为A部分和B部分。研究于2024年5月开始，预计招募48人，主要完成时间预计为2024年12月。 3 公司：达冕生物/华兰生物 药物名称：RV-1770 研发进度：获FDA临床试验许可 达冕生物是一家致力于开发mRNA疫苗和治疗药物的临床阶段的生物技术公司。全球总部位于美国马里兰州德国镇，中国总部位于广州国际生物岛。达冕生物拥有来自圣诺医药的专有小多肽脂质递送（PLNP）技术的全球独家权利。此外，达冕生物拥有各种独立的专有研发平台，包括人工智能和定向脂质体设计，新抗原预测、ALEPVA核酸序列设计算法、新一代脂质纳米（nLNP）载体配方、环状RNA和自我扩增mRNA平台。其多样化产品线包括传染性疾病（RSV、COVID-19、流感、HSV等）和癌症疫苗（RAS、NY-ESO-1），以及信使核糖核酸编码的抗体。 RV-1770是一款创新型RSV mRNA疗法疫苗，采用近期分离出的RSV临床毒株序列，并通过独特AI增强序列的骨架设计。在临床前的棉鼠模型研究中，该疫苗展示出同时对RSV A亚型和B亚型病毒株的免疫反应及中和作用。 2023年12月，RV-1770临床试验申请（IND）获FDA批准，并将开展1期临床研究试验。据悉，RV-1770的临床1期研究将以肌肉注射给药方式使用三种不同的剂量水平（50微克、100微克或200 微克）的RV-1770疫苗，针对年龄在18-49岁的健康成年受试者和年龄在60-79岁之间的老年受试者。该临床研究计划预计招募总共招募162名受试者，分为年轻成年组和老年成年组，每组各81名。所有受试者将接受为期12个月的疫苗接种后监测，以评估RV-1770的安全性和免疫原性。 值得注意是的，2024年4月，达冕生物与华兰疫苗达成战略合作，后者被授予在中国开发和商业化RV-1770的独家权利。 4 公司：嘉晨西海 药物名称：JCXH-108 研发进度：美国1期 嘉晨西海成立于2019年，主要专注于开发基于RNA技术的生物疗法和疫苗，涉及传统、自复制以及环状RNA等多种RNA技术平台。自成立以来，嘉晨西海已经建立起一整套可靠的CMC生产工艺平台，该平台包括RNA合成、纯化和分析测试等，能够满足临床以及商业化开发的需求。此外，凭借先进的筛选平台，嘉晨西海已经开发了一系列RNA递送载体，包括聚合物和脂质纳米颗粒载体，拥有多项自有阳离子脂质体及递送系统的相关专利，可用于肌肉、静脉和组织的靶向递送。 另外，其不断丰富知识产权组合和多元化的产品管线，其范围已覆盖癌症免疫治疗、传染病、罕见遗传疾病和医学美容等多个领域，并在肿瘤治疗和传染病疫苗的候选药物开发上迅速推进。 JCXH-108使用嘉晨西海特有的非复制mRNA表达平台和RTU递送技术。JCXH-108的动物免疫原性相比较于Moderna版本（mRNA-1345）具备非常显著的优势，并且在极低免疫剂量下实现了对攻毒后棉鼠的全保护。针对这个抗原设计，公司已经申请了国际专利。基于优异的临床前数据，JCXH-108 I期临床试验方案中针对老年人和孕龄妇女仅尝试两个低较剂量。 据ClinicalTrials.gov网站显示，JCXH-108的临床1期试验（NCT06564194）将探索三个队列，每个队列有两个不同的剂量水平，并且每个队列25名参与者。每个队列中的参与者将按4:1的比例随机分配接受JCXH-108（n=20）或安慰剂（生理盐水，n=5）。首先，将在18-45岁年龄组中探索低剂量JCXH-108与安慰剂的比较。一旦对低剂量队列中的哨兵受试者的安全性数据进行审查，将在18-45岁和≥60岁年龄组中探索高剂量与安慰剂的比较。JCXH-108的剂量水平将取决于参与者加入研究的时间。每名参与者将在第1天接受单次剂量的JCXH-108肌肉注射（IM）。该项研究于2024年8月开始，主要完成时间预计为2025年3月。 值得注意的是，今年8月，嘉晨西海宣布和比尔及梅琳达·盖茨基金会签署了关于RSV疫苗JCXH-108的项目资助协议。根据协议，盖茨基金会将向嘉晨西海提供项目资助，支持公司基于mRNA技术平台的RSV疫苗JCXH-108的临床开发及上市。 5 公司：阿法纳生物 药物名称：AFN0205 研发进度：获CDE新药临床试验许可 阿法纳生物是一家专业从事mRNA技术平台下的药物研发及产业化的生物医药企业。团队以中国科学技术大学王育才教授为核心，依托中科大丰富的资源和团队的积累，在mRNA药物研发的核心环节具有丰厚的积累。目前，公司已建立了完善的mRNA药物生产平台，并在mRNA递送平台的底层核心环节具有多项自主知识产权，并在此基础上开发了自主知识产权的新型递送平台。公司还拥有自主知识产权的AI辅助抗原与RNA序列设计、新型免疫佐剂、环状RNA等几大特色技术平台。 7月5日，阿法纳生物研发的呼吸道合胞病毒mRNA疫苗（AFN0205）获得国家药品监督管理局审评中心核准签发的《药物临床试验批准通知书》。据悉，该疫苗通过结构生物学设计，并结合细胞水平与动物水平的多维度检测策略，成功筛选出能稳定表达融合前构象F蛋白（pre-F）的mRNA。采用高效的递送系统包载，该疫苗已在不同动物模型的攻毒试验中显示出良好的保护效果，并且其中和抗体水平显著优于现有的蛋白质疫苗，如AREXVY。 6 公司：石药集团 药物名称：SYS6016 研发进度：获CDE新药临床试验许可 石药集团依托纳米制剂药物、mRNA、ADC等八大技术平台，聚焦肿瘤、精神神经、心血管、免疫和呼吸、代谢及抗感染等六大领域，深入探索疾病治疗的新路径。目前，集团在研创新药项目已达130余个，涵盖大分子、小分子及新型制剂等多个类别。未来五年内，石药集团计划将50余个创新药申报上市。 7月11日，石药集团宣布其开发的呼吸道合胞病毒（RSV）mRNA疫苗（SYS6016）已获得中华人民共和国国家药品监督管理局批准，可以在中国开展临床试验。据悉，该产品由编码呼吸道合胞病毒全长融合糖蛋白（F蛋白）融合前构象的mRNA分子包裹于脂质纳米颗粒所构成，适用于预防由RSV感染引起的下呼吸道疾病。临床前研究显示，该产品在体内翻译为融合前构象F蛋白并诱导高滴度且持久的中和抗体，对RSV-A和RSV-B亚型病毒株均具有较好的保护作用，且具有良好的安全性。目前，尚未在药物临床试验登记与信息公示平台查询到其临床试验信息。 7 公司：艾美疫苗/丽凡达生物 药物名称：LVRNA007 研发进度：临床试验预申请（中美双报） 艾美疫苗成立于2011年，并于2022年在港交所上市。其是中国第二大、民营第一大的疫苗集团，业务涵盖从研发、制造，到商业化的整个行业价值链，是全球及中国第一大乙肝疫苗制造企业、全球及中国第二大狂犬疫苗制造企业。公司已在中国31个省、自治区及直辖市销售疫苗产品。 目前，艾美疫苗/丽凡达生物的RSV mRNA疫苗在进行中美双报申请临床试验。8月2日，艾美疫苗旗下丽凡达生物研发的RSV mRNA疫苗LVRNA007临床试验申请（IND）获国家药品监督管理局药品审评中心（CDE）受理。另外，8月29日，艾美疫苗发布公告称，公司已于2024年8月首次向FDA提交了mRNA RSV疫苗的临床试验预申请。 据临床前研究显示，LVRNA007在小鼠体内能刺激免疫系统产生较强的体液免疫和细胞免疫，中和抗体滴度高。在小鼠和棉鼠攻毒试验中，LVRNA007相较于灭活疫苗，能显著降低肺部病毒滴度，改善肺部病理，并有效预防RSV感染和感染相关炎症反应。 8 公司：沃森生物/蓝鹊生物 药物名称：RSV疫苗mRNA疫苗 研发进度：临床前 沃森生物成立于2001年，并于2010年在深交所创业板上市。经过20余年的发展，公司现已成为国内专业从事人用疫苗等生物技术药物集研发、生产、销售于一体的现代高技术生物制药企业。 上海蓝鹊生物是沃森生物在mRNA疫苗领域的合作方，双方共同研发呼吸道合胞病毒mRNA疫苗。据沃森生物2023年报显示，公司会加快创新性疫苗的研发布局，重点聚焦呼吸道合胞病毒疫苗、带状疱疹疫苗、B群链球菌结合疫苗、mRNA新冠-流感联合疫苗等，同时利用已上市或处于临床研究阶段的疫苗产品大力开发针对婴幼儿的联合疫苗。在未来的5-10年内，力争逐步实现包括呼吸道合胞病毒疫苗在内的多个产品上市。 9 公司：艾博生物 药物名称：ABO-RSVmRNA疫苗 研发进度：临床前 艾博生物是国内最早从事信使核糖核酸（mRNA）药物研发的创新生物医药公司之一。作为国内mRNA领域的龙头企业，自创立之日起，公司以打造自主专利mRNA技术平台和递送系统为企业长久发展和保持竞争力的重要手段，围绕技术平台和产品相关共计申请专利逾180件，其中递送系统核心脂质化合物发明专利获中美两国专利授权，突破海外对本土mRNA药物研发的技术限制。 目前，艾博生物在传染疾病领域，除布局新冠mRNA疫苗外，还在进行狂犬病、RSV、带状疱疹等mRNA疫苗的研发。不过，关于公司的RSV疫苗未查询到更多信息。 10 公司：启辰生生物/华润生物医药 药物名称：TRI-1131 研发进度：临床前 启辰生生物科技有限公司成立于2015年，是一家专注于mRNA核酸药物等技术创新和产品研发的生物医药企业，在广东珠海金湾经济开发区和江苏无锡宜兴环保科技工业园设有全资子公司。 2023年4月，启辰生生物与华润生物医药宣布，由启辰生生物旗下宜兴辰功新药开发有限公司与华润生物医药就mRNA RSV疫苗合作开发签订战略合作协议。据悉，此次双方合作开发的RSV疫苗，是基于启辰生生物以免疫学为基础的质粒平台，进行了多方案的筛选、优化；并通过已获临床批件的mRNA平台生产、纳米技术与LNP平台进行处方筛选优化、CMC平台进行了产品的快速小试生产，所应用的纳米脂质体C2分子，为启辰生生物自主专利的脂质体，其独特的空间结构设计，让产品具有结构稳定、安全，高破膜率等优势，近期分析数据显示，这款mRNA RSV疫苗在安全性、有效性等方面相较于国际上的各RSV疫苗产品，具有较大的技术与市场优势。 11 公司：威斯津生物 药物名称：呼吸道合胞病毒疫苗 研发进度：临床前 威斯津生物成立于2021年7月，由中科院院士、科技部“973”项目首席科学家魏于全教授与国内首批从事mRNA技术研究的科学家宋相容教授联合创建，是一家聚焦于mRNA创新药物和佐剂开发的医药科技公司。据威斯津生物官网显示，公司预防疫苗研发平台的4个管线中，有一款呼吸道合胞病毒疫苗，目前正处于早期成药研究阶段。 12 公司：峨巍医药 药物名称：RSV疫苗mRNA疫苗 研发进度：未披露 峨巍医药成立于2021年6月，是一家总部位于新加坡的mRNA平台型公司，在波士顿和上海设有研发中心。利用其mRNA技术优势和战略合作伙伴关系，公司已建立多条创新型mRNA疫苗和候选治疗药物管线，如呼吸道合胞病毒（RSV）、艰难梭菌感染（CDI）和其他疾病的mRNA疫苗或治疗方法，以应对全球医疗需求未得到满足的各种疾病。关于公司的RSV疫苗未查询到更多信息。 参考资料：国家药品监督管理局药品审评中心，药物临床试验登记与信息公示平台，各公司官网、官微、财报等. 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

免疫检查点阻断剂是当前癌症治疗的主要手段之一，遗憾的的是，仅有少数癌症患者对免疫检查点阻断有反应。T 细胞炎症性肿瘤或者‘’热”肿瘤预示着免疫治疗的成功，而非炎症性肿瘤或者“冷”肿瘤一般对免疫治疗表现不佳。抗原呈递对于产生靶向肿瘤的 T 细胞反应极为关键，然而，冷肿瘤存在抗原呈递方面的缺陷。因此，要想诱导出抗肿瘤的 T 细胞反应就要矫正冷肿瘤抗原呈递方面的缺陷。 DC 细胞是先天免疫和适应性免疫反应的关键桥梁。肿瘤组织经常通过各种方式抑制 DC 细胞反应来实现免疫逃逸，例如，抑制 DC 细胞分化或者成熟。重新激活 DC 细胞有助于重启冷肿瘤免疫反应。目前，也存在许多 DC 靶向性的抗体药物，最为有名的是 CD40 激动剂。由于它们能够将免疫学上的“冷”肿瘤变成“热”的肿瘤，因此在癌症治疗方面显示出巨大的前景。 除了 DC 靶向性的抗体药物，研究人员还开发了基于 DC 细胞的治疗性肿瘤疫苗。Sipuleucel-T（商品名：普列威）是一种针对晚期前列腺癌的基于 DC 细胞的自体细胞免疫疗法，是 FDA 批准的首款治疗性疫苗（2010 年）。前列腺酸性磷酸酶（PAP）是一种前列腺抗原，在大约 95%的前列腺组织中表达。将 PAP 羧基端与 GM-CSF（粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子）氨基端融合，形成 PAP-GM-CSF 融合蛋白。采用该融合蛋白在体外激活分离自病人的树突状细胞，再将其回输至患者体内，可高效激活 T 细胞反应，杀死体内的前列腺癌细胞。 过继性 DC 细胞疗法有 3 个非常关键的地方：第一，找到特异性的肿瘤抗原；第二，采用何种方式将抗原装载到 DC 细胞上；第三，在注射到病人之前确保激活 DC 细胞。从以上三个方向出发，我们还需要对基于 DC 细胞的治疗性肿瘤疫苗做出更多的改进。最近，人们开始利用 mRNA-LNP 技术表达抗原诱导肿瘤特异性免疫反应的疫苗，采用的给药途径涉及肌肉注射、肿瘤内或静脉注射。虽然局部注射 LNP 制剂通常是安全且可耐受的，但由于在较高浓度下或重复注射时会产生肝毒性，使得全身静脉给药可能更具挑战性。 当然，也有人开发体内 DC 靶向性的 LNP，在不影响治疗效果的情况下，减少使用剂量。清华大学化学系喻国灿团队采用甘露糖修饰的可电离脂质分子(Man-lipid)制备了一种 DC 细胞靶向性的脂质纳米颗粒递送系统 STLNPs-Man，可与 DC 细胞表面高表达的甘露糖受体发生特异性结合。有趣的是，STLNPs-Man 还能通过阻断 CD206/CD45 信号来下调 CTLA-4 表达，从而进一步增强抗肿瘤免疫力。 肿瘤内 NK 细胞以及其他的淋巴细胞分泌趋化因子（如 XCL1 和 CCL5），募集 cDC1s（传统 1 型树突状细胞 ）到肿瘤微环境中。NK 细胞进一步分泌生长因子 FLT3L 不仅有助于 cDC1s 存活，还会增强 DC 前体分化为局部的 cDC1s。在肿瘤内，cDC1s 会摄取肿瘤细胞释放的一些物质，并且特异性地将肿瘤抗原转运到引流淋巴结，然后呈递给 naive CD8+ T 细胞，使其激活、增值、分化为细胞毒性效应 CD8+ T 细胞。此外，肿瘤微环境中的 cDC1 分泌的趋化因子 CXCL9/10 还会将引流淋巴结中的 CD8+ 效应 T 细胞募集到肿瘤组织中，并且可以局部呈递肿瘤抗原以重新刺激募集的 T 细胞。最后，cDC1 分泌的细胞因子（如 IL-12）还会进一步增强肿瘤内 T 细胞和 NK 细胞的抗肿瘤活性，而 T 细胞和 NK 细胞分泌的 IFN-γ又会反过来刺激 cDC1 的增值。虽然 DC 细胞在肿瘤免疫控制中发挥着极其关键的作用，但是，肿瘤细胞会通过各种策略抑制 DC 细胞的发展以实现免疫逃避。这样的话，对于免疫系统受到抑制的癌症病人来说，很难通过直接的抗原肿瘤疫苗接种来诱导有效的抗肿瘤免疫反应。 既然体内直接的原位 DC 细胞改造激活难度很大，那么，我们是否可以利用 mRNA-LNP 技术在体外更加安全和高效地激活 DC 细胞呢？ 马萨诸塞州总医院(Massachusetts General Hospital)，简称 MGH，是哈佛医学院最原始和最大的临床教学、研究结构。位于 MGH 的 Garris 实验室多年来一直聚焦深入了解 DCs 细胞在癌症治疗中的发挥的关键作用。 2024 年 7 月 23 日，Garris Lab 与 Weissleder Lab 共同合作在 Small methods 发表文章：Lipid Nanoparticle-mRNA Engineered Dendritic Cell Based Adoptive Cell Therapy Enhances Cancer Immune Response，他们采用 mRNA-LNP 技术在体外改造激活 DC 细胞，再通过静脉注射将其回输体内，免疫小鼠，这种基于 mRNA 技术的过继性 DC 疗法表现出强烈的抗肿瘤 T 细胞反应，抑制肿瘤攻击，同时，未表现出任何毒性，提供了一种稳健可行的新型癌症治疗策略。 不同的脂质纳米颗粒递送 mRNA 至各种免疫细胞时表现出不同的效率。在这项研究，他们需要将 mRNA 递送至离体的骨髓来源的树突状细胞（BMDC）内，因此，选择了一种生物兼容性卓越、转染效率高的可电离脂质 cKK-E12 。 IL-12-eYFP 供体小鼠是一种用于免疫学研究的小鼠模型。这些小鼠通过基因编辑技术，将荧光蛋白 eYFP（增强型黄色荧光蛋白）与 IL-12 基因融合，使得 IL-12 的表达可以通过荧光标记进行追踪和研究。将 LNP-mRNAOVA转染源自 IL-12-eYFP 供体小鼠的 BMDC 细胞，随着 LNP-mRNAOVA剂量的增加，BMDC 细胞分泌的 IL12 也随之增加。更加重要的是，体外改造的 BMDC 细胞回输至小鼠体内存活时间超过 24h。 接下来，要搞清楚 LNP-mRNAOVA 转染 BMDC 细胞是否能够将抗原肽正常呈递给 T 细胞，并且刺激 T 细胞增殖？ SIINFEKL 是源自 OVA 的模型抗原肽，可以 MHC I 发生高亲和力结合。用剂量递增的 LNP-mRNAOVA转染 BMDC 细胞，BMDC 细胞细胞表面的 MHCI-SIINFEKL 复合物、MHC II 类、CCR7、CD40、共刺激配体 CD80 和 CD86 均出现出剂量依赖性的表达。并且，当 OT-I CD8+ T 细胞（特异性识别 MHC I-SIINFEKL 复合物）与 LNP-mRNAOVA转染的 BMDC 细胞共同孵育，结果发现 OT-I 细胞的大量增殖（以细胞膜染料稀释为表征）。这些结果表明在体外编码抗原的 mRNA-LNP 可刺激 DC 细胞成熟和 T 细胞增殖。 从 BL6 小鼠体内分离出骨髓细胞培养，在培养基中添加 FLT3L 和 GM-CSF 生长因子培养超过 9 天使其分化为 DC 细胞。在第 9 天时，用 LNP-mRNAOVA处理 BMDCs（1 µg mRNA OVA/million cells）。间隔 7 天，在 BL6 小鼠体内注射 3 次体外改造过的 BMDCs 或者未经改造的对照组 BMDCs。在注射第二次 BMDCs 后，向小鼠体内注射 B16-OVA 黑色素瘤肿瘤细胞。在首次注射 BMDCs 20天后，所有小鼠腹膜内注射抗 PD1 抗体。注射未经 LNP-mRNAOVA改造过的 BMDCs 对照组小鼠体内的肿瘤体积随时间明显变大，在第 17 天时，肿瘤体积超过 1500mm3，因而被处死。注射 LNP-mRNAOVA改造过的 BMDCs 的小鼠肿瘤体积极小，只有 50 mm3或者更小，因而存活时间明显更长。以上结果充分说明基于 mRNA-LNP 技术的体外工程化 DC 细胞过继性转移至受体小鼠后可保护小鼠免于肿瘤细胞的攻击。 NF-κB 诱导激酶（NIK）在非经典 NF-κB 信号通路中起关键作用。缺失 NIK 会影响 DC 细胞的发育和功能，进而减弱免疫治疗反应。NIKfl/fl 小鼠的 NIK 基因的关键外显子被两个 loxP 位点包围，利用 Cre-loxP 系统可在特定组织或细胞类型中选择性地敲除 NIK 基因。一旦使用 LNP-mRNACRE 转染源自 NIKfl/fl 小鼠的 BMDCs，会敲除掉 DC 细胞中的 NIK 基因。与正常的 LNP-mRNAOVA改造过的 BMDCs 辉输小鼠相比，将 LNP-mRNAOVA+ LNP-mRNACRE改造过的 BMDCs 回输至小鼠体内无法诱导 OVA 特异性 CD8 T 反应，体内肿瘤细胞体积的增长不会受到抑制。 小结 这项研究开发了一种基于 mRNA-LNP 技术的离体 DC 细胞工程改造策略，在体外激活 DCs 细胞，再将其回输至体内，刺激肿瘤特异性的 T 细胞反应，实现预防肿瘤生长的免疫保护效果。众所周知，LNP 无论注射部位如何，在肝脏中都有很高的积累。而且，肝脏也是一个免疫耐受部位，肝脏抗原呈递细胞不充分的免疫启动可能会抑制免疫反应。离体的 DC 细胞改造和随后的体内回输更加有利于诱导强大的肿瘤免疫反应，不会产生任何副作用。同时，研究者还发现除了让 DC 细胞表达特异性抗原，还可利用 mRNA 技术对 DCs 细胞进行功能化改造。 目前，国内获批临床的基于mRNA技术的DC肿瘤疫苗有3款。启辰生开发的是靶向Survivin DC细胞注射液，将编码抗原的mRNA-LNP转染DC细胞，再通过皮内或者静脉注射回输至患者体内，为原发性脑胶质母细胞瘤患者术后清除残余肿瘤细胞，防止复发，延长生存期。北京立康将编码数十个基于患自体肿瘤突变信息设计的个性化肿瘤抗原靶点的mRNA转染DC细胞，开发出国内首个获批临床的肿瘤新生抗原DC疫苗，用于治疗晚期实体瘤。同时期，四川康德赛也开发出一款获批临床的肿瘤新生抗原DC疫苗，用于治疗难治性/复发性卵巢癌。 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。