Intravacc BV

Primrose Bio’s expertise in engineering high-performance RNA polymerases will aid in enhancing the yield of mRNA synthesis. Credit: Photo-Video Lab/Shutterstock. Primrose Bio has entered a strategic partnership with ExPLoRNA Therapeutics aimed at advancing the development and marketing of mRNA medicines. Primrose Bio brings to the partnership its expertise in engineering high-performance RNA polymerases (Prima RNApols), which enhance the yield of mRNA synthesis. This technology not only reduces the presence of double-stranded RNA (dsRNA) but also lowers production costs, meeting the stringent manufacturing demands for various mRNA applications. ExPLoRNA Therapeutics specialises in mRNA innovations, focusing on new cap analogues that are crucial for successful protein production. Its technology boosts protein production, minimises dsRNA formation and reduces in vitro transcription (IVT) costs, offering notable improvements in therapeutic effectiveness. See Also: RegenxBio touts positive data for rare disease drug RGX-121 Ocaliva approval in Europe withdrawn following data re-assessment Primrose Bio CEO Helge Zieler stated: “We are excited to work with ExPLoRNA to bring industry-leading mRNA cap analogs to the market and pairing them with Primrose Bio’s RNA polymerases. “This partnership will result in broader manufacturing and design options for companies developing mRNA therapeutics and vaccines, facilitating access to the most efficient capping chemistry available.” The collaboration between Primrose Bio and ExPLoRNA will lead to the joint development and offering of RNA polymerases and capping compounds that are co-optimised to improve mRNA quality, manufacturing efficiency and the safety and efficacy of therapies. It intends to offer manufacturing solutions and new design options through advanced capping chemistry to mRNA drug developers. ExPLoRNA Therapeutics CEO Jacek Jemielity said: “Through joining forces, we’ll advance the mRNA as a modality from the first applications to the next generation. “We aim at creating the best synergies between our cap analogs and novel polymerases to surpass current manufacturing process and what is achievable with mRNA today.” In March 2024, Primrose Bio and contract development and manufacturing organisation Intravacc announced a strategic collaboration to enhance conjugate vaccine development and supply. mRNA vaccine coverage on Pharmaceutical Technology (Or Clinical Trials Arena) is supported by Trilink . Editorial content is independently produced and follows the highest standards of journalistic integrity. Topic sponsors are not involved in the creation of editorial content. Free Whitepaper mRNA capping: low cost, high reward Are you aware of the latest mRNA capping techniques? The success of mRNA-based Covid vaccines has seen the technology boom in popularity – but capping is an essential part of the manufacturing process, and pharmaceutical firms face a range of choices on how to do it. This free whitepaper assesses differences in price, time, complexity and availability for the methods on offer – and provides essential insights on TriLink’s trailblazing CleanCap® approach. Fill in your details to find out more. Thank you. You will receive an email shortly. Please check your inbox to download the Whitepaper. By Trilink Thematic By downloading this Whitepaper, you acknowledge that GlobalData may share your information with Trilink Thematic and that your personal data will be used as described in their Privacy Policy

2024年8月29日，科兴控股生物技术有限公司（以下简称“SINOVAC科兴”）旗下北京科兴生物制品有限公司研制的5人份Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗（Vero细胞）（以下简称"5人份sIPV"）通过世界卫生组织（WHO）预认证（PQ）。与单人份sIPV相比，5人份sIPV可有效降低免疫接种成本，目前已被列为WHO消灭脊灰行动计划的急需品种。SINOVAC科兴5人份sIPV将助力全球消灭脊灰“最后一公里”。 脊髓灰质炎是一种高发于5岁以下婴幼儿的高度传染性疾病。自1988年世界卫生大会启动全球消灭脊髓灰质炎行动（GPEI）以来，全球脊髓灰质炎的发病已经减少了99%以上，有野生型脊髓灰质炎病毒（WPV）所致的脊髓灰质炎流行的国家也从125个减少到了2个（截至2024年8月，数据源自GPEI）。 但由于疫苗可及性原因，使得全球消灭脊灰的行动面临巨大挑战。为此，WHO委托荷兰Intravacc开发减毒株灭活疫苗，向全球合格厂商进行技术转移。SINOVAC科兴作为全球6家厂商之一获得技术转移资格，并于2012年开始sIPV疫苗研制工作。2021年7月，SINOVAC科兴研制的单人份sIPV获得国家药品监督管理局颁发的药品注册批件，并于2022年6月通过WHO预认证。2024年4月，SINOVAC科兴5人份sIPV在国内获批上市。 2024年7月8日，世界卫生组织总干事召集了《国际卫生条例（2005）》下关于脊髓灰质炎病毒国际传播的第39次紧急委员会会议。委员会一致认为，脊髓灰质炎病毒的国际传播风险仍然构成国际关注的突发公共卫生事件（PHEIC），并建议将临时建议延长三个月。同时委员会指出，非洲地区有20个国家尚未在其常规免疫计划中引入第二剂IPV。此外，一些受循环疫苗衍生脊髓灰质炎病毒（cVDPV）疫情影响的国家仍然存在第一剂IPV覆盖率低的问题。必须采取紧急措施，在剩余国家的常规免疫中引入第二剂IPV，并提高首剂IPV的覆盖率，特别是在受疫情影响的国家。 WHO关于脊髓灰质炎的实况报道 截至2024年8月 重要事实： 脊灰（脊髓灰质炎）主要影响五岁以下儿童。 每200例感染病例中会有一例出现不可逆转的瘫痪。在瘫痪病例中，5-10%的患者因呼吸肌麻痹而死亡。 1988年以来，野生脊灰病毒引起的病例数减少了99%以上，从在逾125个流行国家中估计的35万例减至仅剩两个流行国家（截至2024年8月）。 只要还有一名儿童染有脊灰病毒，所有国家的儿童就仍有感染该疾病的危险。如果不能在这些最后剩余的脊灰盘踞点消灭它，就可能导致这种疾病在全球范围内死灰复燃。 在多数国家，全球性工作通过建立有效的监测和免疫系统拓展了能力，从而能对付其它传染病。 概述 1988年，世界卫生大会通过了一项全世界消灭脊灰决议。这标志着由国家政府、世卫组织、国际扶轮社、美国疾病控制和预防中心以及联合国儿童基金会率先发起，后来又有比尔及梅琳达·盖茨基金会和全球疫苗免疫联盟加入的全球消灭脊灰行动（GPEI）正式启动。自那时起，全球脊髓灰质炎发病率已经减少了99%，继1980年天花之后，世界有史以来第二次站在了消灭人类疾病的门槛上。 1988年以来，野生脊灰病毒病例减少了99%以上，从当时在逾125个流行国家中估计的35万例，减至仅剩阿富汗和巴基斯坦两个国家仍有脊灰野病毒流行。 然而，据GPEI数据，2023年全球仍有数十个国家报告了超过500例因循环疫苗衍生脊灰病毒（cVDPV）所致的驰缓性麻痹（AFP）病例。巴勒斯坦卫生部8月16日发表声明说，加沙地带确认一例脊髓灰质炎病例，而该地区已经在25年前根除脊灰野病毒。8月31日，巴勒斯坦加沙地带卫生部门宣布，脊髓灰质炎疫苗接种行动将于9月1日起在加沙地带大范围展开。此次大规模疫苗接种对象为从新生儿到10岁的儿童，按计划，将有64万名加沙地带儿童参与接种，每名儿童共接种2次，间隔4周。 症状和风险 脊灰是一种病毒引起的传染性很强的疾病。它侵袭神经系统，可在数小时内造成全面性瘫痪。病毒主要通过粪口途径，或者在不太常见情况下，通过常见方式（如受到污染的水或食物）在人际间传播并在肠道内繁殖。初期症状包括发热、疲乏、头痛、呕吐、颈部僵硬以及四肢疼痛。每200例感染病例中会有1例出现不可逆转的瘫痪（通常是腿部）。在瘫痪病例中，5-10%的患者因呼吸肌麻痹而死亡。 脊灰主要影响五岁以下儿童。然而，没有接种疫苗的任何年龄的人都可能感染这一疾病。 脊灰没有特效药，只能进行预防。多次接种脊灰疫苗，可使儿童获得终身保护。现有两种疫苗可用：口服脊灰疫苗和灭活脊灰疫苗。两种疫苗都安全有效，根据当地的流行病学和免疫规划情况，在世界各地以不同的组合方式使用，以确保能够向民众提供尽可能好的保护。 消灭 消灭脊灰战略在得到充分实施时会发挥作用。世界上大多数国家成功消灭了这一疾病，就清楚地表明了这一点。 《2022-2026年消灭脊灰战略》为确保建设一个没有各种脊灰病毒的持久和可持续的世界制定了路线图，且目前正在开展过渡和脊灰认证后工作，以确保为消灭脊灰而建立的基础设施将在该病消失很长时间后继续为更广泛的公共卫生工作带来裨益。 成功的关键是确保该战略在所有方面都得到充分实施，并获得充足资源。然而，要是不能落实所提战略方法会导致病毒持续传播。在阿富汗和巴基斯坦的一些地区，野生脊灰病毒的地方传播仍在继续。如果不能将脊灰在这些最后剩余地区加以遏制，就可能导致这种疾病在全球范围内死灰复燃。这就是为何必须确保一劳永逸地彻底消灭脊灰。 消灭脊灰后，全世界可庆祝这一重大全球公益产品，所有人无论身处何地都能平等受益。经济学建模发现，消灭脊灰可至少节省400-500亿美元，主要体现在低收入国家。最为重要的是，成功消灭脊灰意味着不会再有儿童经历脊髓灰质炎所致终身麻痹带来的痛苦。 根据《国际卫生条例》，消灭脊灰的全球努力已被宣布为国际关注的公共卫生行动，《国际卫生条例》突发事件委员会向受脊灰炎病毒传播影响或面临该病再次出现的高风险国家发布了临时建议。 脊灰工作继续对更广泛的公共卫生努力提供支持，包括帮助应对自然灾害、人道主义紧急情况、干旱、地震、其他传染病疫情，并为更广泛的公共卫生行动促进疾病监测。全球消灭脊灰行动继续支持应对全球COVID-19大流行，包括帮助开展疾病监测、提高实验室能力以及疫苗采用和推广。 世卫组织的应对 世卫组织与全球消灭脊灰行动各伙伴一道，继续支持仍受脊灰病毒影响或面临再次出现脊灰的高风险国家实施消灭战略，首先侧重于计划免疫和疾病监测。自全球消灭脊灰行动启动以来，病例数量减少了99%以上。 1994年，世卫组织美洲区域被认证为无脊髓灰质炎。随后，2000年世卫组织西太平洋区域以及2002年6月欧洲区域也获得认证。2014年3月27日，世卫组织东南亚区域被认证为无脊灰地区，这意味着野生脊灰病毒的传播在横跨印度尼西亚和印度的这一11个国家群组中已经得到阻断。2020年，非洲成为第五个获得无野生脊灰病毒认证的区域。 当今有2000多万人可以行走，要不然可能就已瘫痪。通过在开展计划免疫活动期间系统性加服维生素A，估计使150万名儿童的死亡得以避免。 来源：世界卫生组织 - 脊髓灰质炎 https://www.who.int/zh/news-room/fact-sheets/detail/poliomyelitis SINOVAC科兴脊灰灭活疫苗大事记 2012年12月，自荷兰Intravacc公司获得sIPV技术转移资格 2015年，启动sIPV临床研究 2020年，启动世界卫生组织预认证申报工作 2021年，接受世界卫生组织的现场检查 2021年7月12日，sIPV成功在国内获批上市 2022年2月，收到WHO-PQ现场检查通过函 2022年6月2日，单人份sIPV通过世界卫生组织预认证 2024年4月9日，5人份sIPV在国内获批上市 2024年8月29日，5人份sIPV通过WHO预认证 关于SINOVAC科兴脊灰灭活疫苗 SINOVAC科兴的sIPV用于婴幼儿及儿童，主要用于2月龄及以上的婴幼儿，预防由脊髓灰质炎病毒Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型导致的脊髓灰质炎。该疫苗基础免疫程序为3剂次，首次免疫从2月龄开始，连续3次，每次间隔至少1个月；18月龄加强免疫一次。Ⅲ期临床研究结果显示，受试者接种该疫苗后0-30天总体不良反应以轻度或中度为主，未见与疫苗接种相关的严重不良事件或罕见不良反应，安全性良好。 SINOVAC科兴自sIPV研发伊始即放眼于全球消灭脊灰行动，应用世界领先技术并使用国际化标准研发和生产疫苗。公司围绕疫苗研发和生产开展的国际合作包括：从世界卫生组织（WHO）获得疫苗病毒毒种和病毒培养细胞种子系，从荷兰Intravacc引进工艺技术，生产用厂房设计，临床血清检测等均与国际专业机构/组织通力合作。sIPV采用SINOVAC科兴国际化标准的质量体系，运用生物反应器搭配微载体技术，与传统工艺相比具有培养规模大、工艺控制更精确、无菌控制风险低等特点。该疫苗不含任何防腐剂和抗生素，从而降低了相关不良反应发生的风险。 关于SINOVAC科兴/产品介绍 科兴控股生物技术有限公司（Sinovac Biotech Ltd.，SINOVAC科兴）是中国领先的生物高新技术企业，以“为人类消除疾病提供疫苗”为使命，致力于人用疫苗及其相关产品的研究、开发、生产和销售，为全球疾病预防控制提供服务。 SINOVAC科兴研制的疫苗主要包括针对病毒性肝炎、流感、肺炎、脊髓灰质炎、水痘、腮腺炎等常见传染病的疫苗以及针对SARS、甲型H5N1高致病性禽流感、甲型H1N1流感大流行、EV71相关手足口病、新型冠状病毒感染等新发、突发传染病的疫苗。公司现有4款疫苗通过世界卫生组织预认证（甲肝灭活疫苗、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗、水痘减毒活疫苗）或列入紧急使用清单（新型冠状病毒灭活疫苗），疫苗质量管理体系获国际组织和多国药监部门认可。 未来，SINOVAC科兴将继续聚焦于生物医药领域的科学创新，通过自主研发以及对外投资、合作等多种方式推动更多高品质生物医药产品更快地实现产业化落地，用于满足全球的疾病防治需求，助力提升全球健康福祉。

摘要:外膜囊泡（OMVs）是许多革兰氏阴性细菌在生长过程中自发释放的，是细菌的重要毒力因子，帮助它们在恶劣的环境条件下生存。天然OMVs是细菌自然释放的，其产量对于疫苗制造来说太低，需要化学处理（去污剂提取）或遗传操作，从而产生膜抗原的通用模块（GMMAs）。多年来，OMVs的特性和属性使它们成为疫苗开发的可行平台。目前已有几种OMV疫苗获得许可，主要用于预防由B型脑膜炎奈瑟菌（MenB）和b型流感嗜血杆菌（Hib）引起的脑膜炎。还有几种针对其他革兰氏阴性细菌的OMV候选疫苗处于临床开发阶段，这些细菌是OMVs的来源，但也针对异源靶标，在这些靶标中OMVs被用作载体（例如2019年冠状病毒病[COVID-19]）。将OMVs用于非自身来源靶标的开发是OMV技术的重大进步，通过能够递送蛋白质或多糖抗原，提高了其多功能性。其他进展包括可以进行的一系列遗传修饰，以提高其安全性，减少反应原性，并增加免疫原性和保护效果。然而，仍然存在重大挑战，例如识别用于在OMV表面高含量表达异源蛋白的通用工具。在这里，我们概述了迄今为止OMV疫苗的进展，特别讨论了已获许可的基于OMV的疫苗和处于临床开发的候选疫苗。本文还描述了临床前研究的最新趋势，主要集中在遗传操作和化学偶联方面，以将OMVs用作异源蛋白质和多糖抗原的载体。还讨论了使用OMVs的剩余挑战和未来研究的方向。 关键点 外膜囊泡（OMVs）是疫苗开发的一种可行平台，目前已有一些基于OMV的疫苗获得许可并处于临床使用中。OMVs在使用上有着悠久而丰富的历史，特别是在针对脑膜炎奈瑟菌和b型流感嗜血杆菌的疫苗中，并且已经产生了大量支持使用这一平台来对抗许多其他病原体的临床前数据。最近的趋势是将OMVs用作异源蛋白质和多糖抗原的载体，支持多组分疫苗的开发。 1. 引言 外膜囊泡（OMVs）是许多革兰氏阴性细菌在生长过程中自发释放的，可能是由于细胞生长和外膜生物合成之间的不平衡，导致多余的膜材料以OMVs的形式释放。已有多项研究报告了OMVs在增强细菌在恶劣环境中的存活能力以及向宿主细胞传递毒力因子和DNA方面的作用。OMVs似乎参与了细菌的致病过程，帮助生物膜形成，并在宿主中或土壤中增加存活率。此外，OMVs支持细菌抵抗抗生素，并促进细菌之间抗生素抗性的转移。 OMVs模仿细菌的外部，类似于一种没有致病能力的病原体，并含有多种表面暴露的抗原。OMVs还含有与病原体相关的分子模式（PAMPs），如脂多糖（LPS）、肽聚糖、脂蛋白和鞭毛，这些成分具有自我佐剂性。此外，OMVs的粒径有助于被抗原呈递细胞（APCs）摄取，有助于向相应的T细胞呈递，并由滤泡树突细胞（FDCs）激活特定抗原的B细胞，从而诱导适应性免疫反应。基于这些原因，过去几年中，OMVs一直被视为疫苗开发的一种多功能平台。 细菌自然释放的OMVs被称为天然OMVs（nOMVs），但对于许多细菌来说，这种释放水平对于疫苗制造来说太低。为了提高产量，已使用去污剂（例如脱氧胆酸）从整个细菌中化学提取OMVs，结果产生了称为去污剂提取的OMVs（dOMVs）的类囊泡聚集体，这些聚集体是不溶性外膜蛋白。通常丢弃含有自发囊泡的发酵上清液，然后进行OMV的提取。可以引入超声步骤以获得更小且更均匀大小的dOMVs，也简化了无菌过滤。使用去污剂大大减少了LPS和脂蛋白的含量，从而降低了反应原性并提高了OMV的耐受性。然而，这种方法也导致了重要的保护性脂蛋白抗原的丢失，并损害了囊泡的完整性，并使得最终制剂被胞质蛋白污染。 可以通过遗传操作改变细菌的OMV特性（例如产量、内毒素性、蛋白质含量），并将其归类为突变衍生的OMVs（mdOMVs）或膜抗原的通用模块（GMMAs）。通常引入突变以破坏外膜与内膜以及周质中的肽聚糖层之间的联系。为了实现这一目的，已经采取了不同的策略。一种常见的方法是删除大多数革兰氏阴性细菌中存在的Tol-Pal系统的tolR基因。在大肠杆菌中使用nlpI的删除改变了肽聚糖动态；在流感嗜血杆菌、霍乱弧菌和大肠杆菌中破坏VacJ/Yersinia复发ABC（ATP结合盒）运输系统，导致磷脂在体外膜的外层积累。删除lpp、mltA（gna33）、rmpM、ompT、pagL、大肠杆菌共同抗原、degP和virk也会导致细菌外膜过度脱落。 由于天然释放的OMVs中LPS含量很高，因此引入了额外的突变以减少内毒素性。这通常是通过修改脂质A结构来实现的，特别是减少脂质A的酰链和磷酸基团的数量，影响其识别/触发Toll样受体（TLR）4的能力，并减少与脂质A相关的炎症反应。在大肠杆菌、志贺氏菌和沙门氏菌中使用了MsbB（lpxM）、HtrB（lpxL）和PagP（分别向脂质A添加肉豆蔻酰、月桂酰或棕榈酰链）的酰基转移酶的删除；在脑膜炎奈瑟菌中使用了lpxL1和lpxL2的删除。 与dOMVs相比，nOMVs和GMMAs的纯化更简单，所需的步骤更少。OMVs可以通过首先进行切向流过滤（TFF）与整个细菌分离，第二个TFF保留OMVs，同时去除可溶性蛋白质和其他低分子量杂质。 在这篇综述中，我们提供了OMVs及其遗传修改版本GMMAs作为疫苗平台的概述，以呈现蛋白质或糖抗原，临床水平的关键成就，临床前研究中出现的趋势，以及该领域的未来展望。 2.已获许可的基于外膜囊泡（OMV）的疫苗 目前有几种基于OMV的疫苗已获许可并在使用中。这些疫苗针对脑膜炎奈瑟菌，针对B型脑膜炎奈瑟菌（MenB）和b型流感嗜血杆菌（Hib）感染（表1）。 Bexsero（Bexsero是GSK集团拥有或许可使用的商标）中包含三种重组蛋白，从N. meningitidis（NZ98/254菌株）提取的OMV去污剂被指示用于预防由N. meningitidis B型引起的脑膜炎和脑膜炎球菌血症。该疫苗通过刺激产生识别疫苗抗原（NHBA、NadA、fHbp）和PorA的杀菌抗体而发挥作用，PorA是OMV的主要成分。Muzzi等人对脑膜炎抗原分型系统（MATS）的综述表明，该疫苗覆盖了81%至84%的MenB分离株。在几项临床试验中进行了测试，显示出良好的免疫反应，通过人体补体血清杀菌活性（hSBA）测量。在婴儿研究中，当OMV组分增加而重组蛋白保持不变时，免疫反应相应增加，以hSBA ≥5的比例和几何平均滴度（GMTs）衡量，这以剂量依赖性方式增加，在接受Bexsero中OMV全剂量的婴儿中最低（即25μg），在接受全剂量OMV的婴儿中最高。然而，系统反应原性的类似趋势并没有观察到，在接受四分之一、一半和全剂量OMV的接受者中观察到类似的反应原性概况。对于局部反应，含有OMV的四组分MenB疫苗接受者比接受不含OMV疫苗的个体有更高的发生率。此外，与单独的重组蛋白相比，含有OMV的疫苗在引起发热的频率上要高得多。该疫苗于2013年获得许可，适用于从2个月大的个体开始主动免疫，以预防由MenB引起的侵袭性脑膜炎（IMD）。已在17项研究中评估了疫苗的安全性，包括10项随机对照临床试验，涉及婴儿、儿童、青少年和成人，当与常规疫苗联合使用时（69-79%的对象），发热的频率更高，与仅接受常规疫苗接种的对象相比（44-59%），尽管大多数事件的严重程度轻至中度且持续时间短（大约1天）。尽管疫苗是使用免疫原性终点获得许可的，但在Bexsero引入英国后3年内，疫苗合格婴儿的MenB IMD病例减少了75%。 相同的OMVs单独配方在新西兰MenB疫苗中，用于对抗该国由N. meningitidis B型引起的脑膜炎暴发。OMV疫苗在几项临床试验中进行了测试，显示出可接受的安全性概况，在接种三剂疫苗后显示出强烈的免疫反应。疫苗接种计划在2004年至2006年间在新西兰的不同地区分阶段进行，用于不同年龄组的婴儿常规疫苗接种，直到2008年。据估计，该疫苗的有效性为77%，预防了2004年7月至2008年12月期间估计210例MenB IMD及其后遗症。类似地，在挪威，1983年开发的dOMV疫苗用于对抗MenB，用于控制MenB疾病的暴发。该疫苗在1988年至1991年期间用于171,800名青少年，估计在10个月后有效性为87%，之后迅速下降，与血清细菌活性的降低相一致。该疫苗还在2006年至2009年期间用于控制法国诺曼底由相同B14:P1.7,16菌株引起的暴发，病例发病率从2006年的31.6/10万下降到2009年的5.9/10万。另一种基于dOMV的疫苗（VA-MENGOC-BC，古巴Finlay Institute）于1987年在古巴获得许可用于对抗MenB（VA-MENGOC-BC是古巴Finlay疫苗研究所的注册商标），在接下来的20年中成功将MenB疾病的发病率降低了93-98%，最终使MenB不再成为古巴的公共卫生问题。2014年，该疫苗被Abivax收购，用于在亚洲和拉丁美洲国家的古巴以外地区分销。 Hib-OMPC是第一个被广泛许可的基于OMV的疫苗。它是一种高度纯化的b型流感嗜血杆菌（H. influenzae type b）荚膜多糖（多核糖核糖醇磷酸[PRP]），通过从B型脑膜炎奈瑟菌（N. meningitidis serogroup B）B11菌株的OMVs中用去污剂提取，与外膜蛋白复合物（OMPC）共价结合。在关键试验中，Hib-OMPC在3486名纳瓦霍婴儿（一个特别高风险的疾病人群）中显示出93-100%的效力，这些婴儿在2个月和4个月大时接种了疫苗。作为PedvaxHib（PedvaxHIB是默克夏普和多姆公司的注册商标）许可的疫苗，在接种第一剂后的1-3个月内，88%的婴儿诱导了抗PRP水平>0.15 μg/mL，在52%的婴儿中诱导了>1.0 μg/mL，几何平均滴度（GMT）为0.95 μg/mL；在第二剂和第三剂后分别上升到91%和60%。 PRP-OMPC在早期有Hib感染高风险的儿童中，在一剂后刺激强烈的免疫反应。然而，美国免疫实践咨询委员会（ACIP）建议，之前未接种疫苗的2-6个月大的婴儿应接受至少相隔2个月的两次PRP-OMPC剂量，以确保保护的持久性。他们还根据儿童的年龄推荐一剂或两剂给未接种疫苗的儿童。 最终，PedvaxHib与乙型肝炎表面抗原（HbsAg）结合，并作为Comvax（在欧盟为Procomvax）许可。这种组合导致抗PRP抗体水平低于之前独立疫苗（Procomvax-EU/Comvax-US）报告的水平。Procomvax和Comvax是默克公司/MSD在欧洲的注册商标。 在五项临床研究中，对1602名6周至15个月大的婴儿和儿童进行了Comvax（7.5 μg H. influenzae type b PRP，5 μg HBsAg）的免疫原性评估。在这些研究中，Comvax的免疫反应与使用单价疫苗PedvaxHib（7.5 μg PRP）和RECOMBIVAX HB（5 μg HBsAg）在不同部位接种，无论是同时还是相隔1个月进行比较。在之前未接种Hib或乙肝疫苗的婴儿中，Comvax的抗体反应在第二剂后显示出抗PRP水平>1.0 μg/mL的比例，与接受单价疫苗的受试者（72.4%）相似。该疫苗适用于由HbsAg阴性女性所生的婴儿，用于预防侵袭性Hib疾病和HBV感染，接种三剂，分别在2、4和12-15个月大时（MMR每周，CDC）。Procomvax于2009年由制造商退出欧洲市场，出于商业原因选择不更新市场授权。该决定与安全问题无关。 单价疫苗还与白喉和破伤风类毒素、百日咳抗原、HbsAg和灭活脊髓灰质炎病毒结合，作为六价儿童疫苗（VAXELIS）。VAXELIS是MSP疫苗公司的注册商标。这种组合适用于6周大的婴儿和幼儿的初次疫苗接种和加强疫苗接种，主要疫苗接种时间表为两到三剂，每剂至少间隔1个月。该疫苗的安全性概况与相同适应症的其他多价疫苗相当；然而，与肺炎球菌疫苗（Prevnar 13）的联合加强研究显示，两种疫苗的接受者中有高达52.5%的发热频率，尽管发热的强度轻至中等且持续时间短（<48小时）。总体而言，Hib PRP-OMPC疫苗的安全性与其他Hib疫苗相当，它们之间没有临床上显著的差异。 3.临床开发中的OMV疫苗 外膜囊泡（OMVs）在呈现多种天然构型的抗原以及自我佐剂性方面具有优势，因此有许多基于OMV的疫苗正在进行临床开发，以对抗它们所衍生的病原体（表1）。 GMMAs在其表面自然展示O-多糖（图1），并且已被用作疫苗候选物，用于预防非伤寒沙门氏菌和志贺氏菌，目前正在进行临床试验。 图1 展示在OMVs或GMMAs上的主要策略 GMMAs 膜抗原的通用模块，LPS 脂多糖，OMVs 外膜囊泡 在小鼠中，显示在沙门氏菌鼠伤寒菌和沙门氏菌肠炎菌GMMAs上的O-多糖已被证明可以引发强烈的抗O-多糖免疫球蛋白（Ig）G抗体反应，水平与相应的CRM197结合物配制的铝佐剂所诱导的反应相当。有趣的是，GMMAs增强了IgG抗体亚型轮廓，并与蛋白质结合物相比，导致更大的血清杀菌活性。现在正在对欧洲成人进行一项I期试验（NCT05480800），测试S. typhimurium和S. enteritidis GMMAs的双价配方吸附在Alhydrogel上。这种配方还与一种针对S. typhi的糖结合疫苗（Typhibev）结合，后者的I期临床试验也已经启动（NCT 05480800）。 第一个在临床试验中测试的基于GMMAs的疫苗是1790 GAHB的志贺氏菌宋内菌GMMA疫苗。GMMAs从一种基因工程改造的S. sonnei菌株中纯化，该菌株增加了脱落（ΔtolR），产生较少的反应原性五酰基化脂A（ΔhtrB），并稳定表达编码O-多糖的毒力质粒。S. sonnei GMMAs吸附在Alhydrogel上，在两项I期临床试验、一项扩展增强试验、一项IIa期临床试验中进行了测试，并最终在一项IIb期人类挑战感染模型（CHIM）试验中进行了测试。基于O-多糖的S. sonnei GMMAs已被证明在健康成人和疾病流行国家中耐受性良好且具有免疫原性，接种一剂疫苗后引发杀菌抗O-多糖IgG反应。值得注意的是，与初次免疫相隔3年的复种显示了疫苗诱导强大的记忆反应的能力。 1790GAHB在CHIM试验中未能显示临床效力，可能由于测试的O-多糖剂量低导致的免疫反应不足。然而，基于这些结果，已经开发了一种新的S. sonnei构建物，允许增加10倍的O-多糖剂量。这样的GMMAs已与志贺氏菌flexneri 1b、2a和3a GMMAs结合在一种4组分配方中，目前正在进行一项I/II期试验（NCT05073003）。 还有流行病学证据表明，B型脑膜炎奈瑟菌OMV疫苗对淋病奈瑟菌有中等程度的效力，导致人们建议基于OMV的疫苗可能适合预防淋菌感染，既可以通过针对脑膜炎球菌B的疫苗（NCT04297436和NCT04415424），也可以与特定的N. gonorrhoeae GMMAs结合，正在进行临床试验（NCT05630859）。 疫苗具有异源靶标，其中OMVs与另一种抗原结合，也在早期临床开发中，例如Intravacc BV开发的通过鼻内途径给药的针对2019年冠状病毒病（COVID-19；Avacc 10）的疫苗（NCT05604690）。 4.临床前研究中出现的趋势 传统上，OMVs被提出用于对抗它们所衍生的病原体引起的疾病，其中一些已获得许可或正在进行临床开发，还有许多处于临床前阶段。免疫反应可以针对LPS而不是蛋白质成分，正如早期对自然释放的V. cholerae OMVs的研究所显示的那样，这些研究通过粘膜免疫引发了抗体反应，保护小鼠后代免受口服V. cholerae的挑战，并确保对两种流行病学上最相关的O1血清型的Inaba或Ogawa变体的交叉保护。OMVs未能与O139交叉反应。 最近的研究已经展示了如何轻松进行遗传操作，以进一步提高OMV的安全性、免疫原性和保护效率。例如，已经显示破坏小的非编码RNA可以改善OMVs对小鼠模型中幽门螺杆菌感染的保护效率。使用鞭毛蛋白缺陷的S. typhimurium OMVs进行鼻内和腹腔免疫，有效地保护了异源S. choleraesuis和S. enteritidis的挑战，使用主要外膜蛋白缺陷的S. typhimurium突变体的OMVs进行免疫，增强了交叉保护。 最近，OMVs也被提出作为异源抗原的递送系统。事实上，OMVs可以被修改以显示来自不同（甚至是系统发育上距离很远的）病原体（病毒、细菌、寄生虫）的蛋白质或多糖。 4.1.作为异源蛋白载体的OMVs 特别是，由大肠杆菌菌株产生的OMVs已被用作重组蛋白的递送系统。通过将抗原融合到分泌信号或周质蛋白上，已用于在囊泡腔中表达重组抗原（图1）。通过双精氨酸（Tat）信号序列，GFP在大肠杆菌OMVs的腔中表达。通过与丰富的外膜蛋白OmpA的周质侧融合，在大肠杆菌OMVs的腔中表达腔隙，已针对A组链球菌（例如，Slo，SpyCEP，SpyAD）、B组链球菌（例如，SAM_1372）和沙眼衣原体蛋白抗原进行了测试。肺炎链球菌表面粘附素A（PspA）通过与N末端β-内酰胺酶信号序列的融合，在鼠伤寒沙门氏菌OMVs的腔中表达。 然而，为了更强的免疫反应，蛋白质定位在OMV表面应该更受青睐。只有少数研究报告了在OMV表面或囊泡腔中呈现相同抗原的直接比较。在V. cholerae OMVs中加载的大肠杆菌碱性磷酸酶PhoA，在小鼠鼻内免疫后引发了低免疫反应，可能因为酶位于OMV腔中的位置与表面相反。在Fantappiè等人的研究中，OMVs针对加载在大肠杆菌OMVs腔中的GAS和GBS蛋白诱导了高功能性抗体滴度，并且用Slo-OMV-和SpyCEP-OMV免疫的小鼠对GAS致死挑战有保护作用。同样，用PspA在鼠伤寒沙门氏菌OMVs腔中鼻内免疫的小鼠发展了抗原特异性血清抗体反应，而等剂量的重组PspA没有发展出可检测的反应。用重组OMV免疫的小鼠对肺炎链球菌挑战有保护作用。然而，建议进行额外的研究，以评估是否通过将抗原定位在OMV表面可以增强抗PspA免疫反应。Salverda等人证明，与具有OspA腔隙表达的构建物相比，在脑膜炎奈瑟菌OMVs表面表达的表面暴露的脂蛋白OspA导致强烈的抗OspA抗体反应，其中没有观察到抗原特异性抗体反应。Necchi等人也获得了类似的结果，他们直接比较了在S. typhimurium GMMAs内或化学连接在GMMA表面的N. meningitidis fHbp。在GMMAs腔中表达的fHbp引发的免疫反应极低，远低于在GMMA表面显示的相同抗原。作者还清楚地表明了需要在GMMAs上拥有fHbp（通过遗传操作或化学偶联），与fHbp与GMMAs物理混合相比，引发更强的杀菌反应。 然而，在OMV表面表达异源蛋白相当具有挑战性，通常以低表达水平为特征，并且取决于抗原。已经提出了不同的表面蛋白表达策略。通常通过蛋白水解处理超出细胞表面的蛋白质可以通过防止蛋白水解来保留在OMV表面。感兴趣的蛋白质可以融合到膜相关蛋白上，例如自转运体的β-桶结构域（例如Hbp，AIDA）。大肠杆菌的自转运体血红蛋白酶（Hbp）被用来在鼠伤寒沙门氏菌OMVs上表达结核分枝杆菌蛋白和沙眼衣原体的主要外膜蛋白MOMP的表位。相同的系统被用来在沙门氏菌OMVs上展示两个肺炎链球菌蛋白抗原的高密度。用得到的OMVs进行鼻内免疫在小鼠肺炎链球菌定植模型中诱导了强大的保护，无需粘膜佐剂。这种抗原展示方法非常高效，但似乎仅限于小蛋白。Kim等人将几种异源蛋白融合到孔形成细胞毒素ClyA的C-末端。工程化的大肠杆菌OMVs显示绿色荧光蛋白（GFP），与ClyA遗传融合，与单独的GFP相比，在免疫小鼠中引发了更强的抗GFP抗体滴度。通过相同的表达系统，表达Acinetobacter baumannii Omp22的大肠杆菌OMVs比用更高剂量的重组Omp22蛋白配制的铝免疫接种诱导了显著更高的Omp22特异性抗体。通过融合到膜锚定的第二脂蛋白fHbp，实现了在脑膜炎奈瑟菌OMVs上的OspA表面表达。 基于严重急性呼吸综合征冠状病毒2（SARS-CoV-2）的重组、六脯氨酸稳定的、D614G刺突蛋白（mC-Spike）与脑膜炎OMVs的LPS结合肽序列mCramp（mC）融合的COVID-19亚单位疫苗，在金黄叙利亚仓鼠模型中，通过鼻内免疫，引发了高水平的中和抗体，并检测到粘膜反应。候选疫苗在仓鼠挑战模型中也具有保护作用。工程化的OMVs，结合来自SARS-CoV-2刺突蛋白的受体结合基序（RBM）的肽，也已经制成，并在小鼠中显示可引发中和抗体。 2009年大流行性流感A病毒（H1N1）株H1型血凝素（HA）与中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）的受体结合域（RBD）的嵌合融合蛋白也已在大肠杆菌DH10ß的OMVs上表达，诱导小鼠产生免疫反应，保护免受流感挑战。 已经提出了其他装饰OMVs表面异源蛋白的方法，其中抗原分别产生并在OMV生产后添加（图1）。在这些策略中，SpyTag-SpyCatcher系统使用链球菌表面蛋白的SpyCatcher结构域，该结构域识别一个相应的13氨基酸肽（SpyTag）。识别后，在SpyCatcher的一个赖氨酸侧链和SpyTag的一个天冬氨酸之间形成了共价异肽键。SpyTag在OMVs上表达，并用于与任何蛋白融合的SpyCatcher偶联。 这种方法最近被用来将带有SpyTag的SARS-CoV2-Spike的RBD域偶联到展示Hbp并用SpyCatcher肽修饰的鼠伤寒沙门氏菌OMVs。候选疫苗在仓鼠模型中具有免疫原性和保护性。 最近，提出了一种基于亲和素的疫苗抗原交联方法，其中生物素化蛋白链接到表面经过生物素结合蛋白重塑的OMVs的外部。在小鼠中测试得到的OMVs，引发了强烈的抗原特异性抗体反应。 此外，化学偶联蛋白到OMVs也已被使用，目的是用异源蛋白抗原装饰OMVs，并有可能产生多组分疫苗。化学偶联是一种快速利用OMVs作为载体的方法，它允许在一定范围内更好地控制显示在囊泡上的抗原量和密度。来自不同病原体（N. meningitidis、Salmonella、Shigella）的OMVs已与不同蛋白（N. meningitidis fHbp、大肠杆菌SslE和FdeC、疟疾蛋白Pfs25、Pfs230和CSP等）链接，显示出OMVs上的抗原引发比单独蛋白抗原更强的功能性抗体反应。化学方法最近已扩展到病毒抗原（例如流感A病毒血凝素和狂犬病糖蛋白），证实了OMVs显著增加抗原特异性体液和细胞反应的能力。 4.2.糖偶联OMVs OMVs也被提出作为多糖的载体，从上述许可的Hib-OMPC结合疫苗开始，最初在动物中诱导抗体反应，并通过与TLR2结合触发细胞因子介导的反应。将Hib多糖偶联到B. pertussis的dOMVs也被证明是一种可行的方式，以诱导对百日咳和H. influenzae的双重反应。 考虑到它们的生产和纯化的便利性，以及增强免疫反应的潜力，最近有许多例子报道了使用GMMAs作为多糖载体。 GMMAs可以作为化学链接多糖的载体，提供将多糖偶联直接到LPS/脂寡糖（LOS）或暴露在囊泡上的蛋白质的可能性（图1）。来自不同病原体（N. meningitidis A和C群、H. influenzae b型、A组链球菌碳水化合物和Salmonella typhi Vi）的各种结构多样的多糖已成功共价结合到GMMAs上，引发动物中强烈的抗多糖免疫反应。所引发的抗体水平和功能性受每个GMMA连接的糖数量的影响不大，尽管较低的糖负荷被证明更好地确保了GMMA暴露蛋白的免疫原性。另一方面，需要针对具体情况优化糖链长度，以获得强大的免疫反应。与蛋白质连接相比，LOS/LPS导向的偶联在诱导对多糖的强大功能性免疫反应方面也同样有效。 OMV和GMMA结合了展示多拷贝碳水化合物的能力，有利于B细胞激活，并以其在天然细菌环境中的呈现。此外，它们的尺寸对免疫刺激是最佳的，并且由于存在如TLR2和4等TLRs，它们促进了内在的佐剂属性。有趣的是，使用S. sonnei和S. typhimurium的GMMAs作为模型，观察到诱导的免疫反应是由FDC向相应B细胞的抗原呈递介导的。TLR4的参与被看作是诱导强烈抗体产生的关键，而TLR2的激活似乎在GMMA的免疫原性中没有发挥作用。 除了化学偶联外，GMMAs和OMVs也可以被工程化以表达异源糖基，从而产生所谓的糖工程OMV（glyOMV）。不表达聚合O-多糖的大肠杆菌菌株已被基因改造，以在wbbL基因中插入异源多糖的生物合成操纵子，同时保持脂质A核心作为受体的生产。通过这种策略，异源糖基结构在内膜的细胞质侧合成，在天然未脱脂的焦磷酸载体（Und-PP）上组装，并通过内源性fippase Wzx的作用转移到周质侧。最后，内源性O-抗原连接酶‘WaaL’将组装好的多糖整体转移到脂质A-核心结构上。或者，工程化的糖基可以从头开始，一个残基接一个残基地组装，从内膜细胞质侧表达的截断的脂质A-核心的末端糖开始，然后以MsbA依赖的方式翻转到周质中。得到的LPS分子被运输到外膜，并通过Lpt蛋白复合物翻转到细胞外空间，使糖基工程化的脂质A-核心结构被转移到外膜并结合到囊泡中。由于可以在大肠杆菌中结合多种质粒编码的O-多糖生物合成途径，这种方法使OMV成为一个“即插即用”的平台，用于展示来自不同致病细菌的糖表位。 使用这种策略，Chen等人产生了一组包含来自八种致病细菌的O-多糖的糖基工程OMVs（glyOMVs），包括高度致病的弗朗西斯菌属土拉热菌A型Schu S4菌株（创建ft-glyOMVs）。免疫两周后，ft-glyOMVs在小鼠中诱导了与天然ftLPS相比O-多糖特异性IgG水平高出两到三倍。小鼠免受F.tularensis Schu S4的致命挑战，以及与F. tularensis亚种holarctica B型菌株的挑战，这些菌株表现出具有相同结构的O-多糖。Ft-glyOMVs在皮下给药时还引发了保护性的IgA介导的粘膜免疫反应。 Price等人成功地将大肠杆菌OMVs工程化以表达肺炎链球菌的荚膜多糖。GlyOMVs诱导的血清IgG调理吞噬滴度与PCV13中相应的化学结合物相当。大肠杆菌OMVs还被糖基工程化以表达C. jejuni的七糖，显示出在接种的鸡中挑战后细菌定植减少。 Stevenson等人使用大肠杆菌的超囊泡化JC8031菌株，在OMV表面实现了PNAG多糖的高水平表达。在PNAG阳性JC8031细胞中表达S. aureus PNAG去乙酰化酶IcaB（dPNAG-glyOMV），以富含去乙酰化的PNAG的glyOMVs。用两种工程glyOMVs免疫小鼠，结果产生了高水平的PNAG特异性抗体，但只有由dPNAG-OMVs诱导的抗体能够在体外杀死两种不同的PNAG产生细菌物种（即，革兰氏阳性的S. aureus和革兰氏阴性的F. tularensis holoartica）。候选疫苗还在小鼠中诱导了对致命剂量的S. aureus和F. tularensis的保护。 Tian等人在沙门氏菌OMVs中生物合成了S. flexneri 2a O-多糖，研究表明，通过鼻内和腹腔免疫小鼠，OMV疫苗在血清中诱导了显著的特异性抗-志贺氏菌LPS抗体，在阴道分泌物和支气管肺泡灌洗液中诱导了IgA，并提供了对致病性S. flexneri 2a感染的显著保护。 5. 结论 OMVs在使用上有着悠久而丰富的历史，特别是在针对N. meningitidis和b型流感嗜血杆菌的疫苗中。已经产生了大量临床前数据，以对抗许多其他病原体，支持使用OMVs及其遗传修改版本（GMMAs）作为提供同源和异源蛋白和多糖抗原的有前途的、负担得起的平台。 OMVs的纳米尺寸被认为可以增强被APCs的摄取，其激活是通过TLRs识别OMVs上的多种PAMPs而发生的。B细胞激活是通过OMV表面表位的重复和OMVs的尺寸促进的，这允许它们直接进入淋巴系统。T细胞/B细胞合作对于产生高亲和力抗体的浆细胞和记忆B细胞至关重要。对OMV作用方式的更多研究将有助于更好地理解这类疫苗的免疫是如何诱导的，并有助于阐明所确定的机制是与平台相关的还是病原体特定的。 COVID-19大流行以及抗生素抗性的出现，正在催化基于新型囊泡的候选疫苗进入临床开发（表1）。同源脑膜炎奈瑟菌OMVs包含在许可的疫苗中，并且正在对源自它们的同源病原体进行GMMAs的临床研究。当前试验的数据，无论是安全性还是免疫原性，将关键地进一步支持使用该平台进行新型疫苗开发。 该领域的当前进展集中在OMVs和GMMAs作为异源蛋白和多糖抗原的载体（图1）。使用这种技术开发的COVID-19疫苗（Avacc 10）正在进行临床测试。通过不同的新技术，包括化学偶联、分子工程和Spy-tag/Spy-capture，已经证明生成这种多组分囊泡是可行的。这些新方法将有助于简化针对各种不同病原体机制或甚至不同病原体的疫苗。我们预计，未来这类疫苗将取得显著进展，并将有更多的基于囊泡的疫苗可用，以帮助对抗新兴疾病和未满足的医疗需求。 为了推动人用及兽用疫苗行业交流，共同探讨该领域的最新研发进展、产业化现状及未来发展趋势，生物制品圈联合四叶草会展将于2024年8月16日-17日在苏州共同举办“第三届新型疫苗研发峰会”。诚邀全国相关领域专家、学者和企业家共享学术盛会。现将有关事宜通知如下。 名称：2024第三届新型疫苗研发峰会 时间：2024年8月16-17日（周五-周六） 地点：苏州（酒店定向通知） 主办单位：四叶草会展、生物制品圈 媒体支持：药时空、抗体圈、细胞基因研究圈 会议费用：点击二维码即可查询。 报名方式：扫描下方二维码→ 填写表格 → 报名成功（报名志愿者，免交报名费，承担一定工作任务）！ 转发分享福利：疫苗研发企业、科研院校和监管机构人员，前30位报名人员转发分享会议信息可免费参会（不含餐饮）报名后，扫描下方二维码加工作人员微信后，发送截图即可。 组委会获得报名信息后，根据报名信息进行初筛，并进一步与报名者沟通确认，实现精准邀请，最终有机会进入大会微信群（严格审核通过）。 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