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04月04日的《热心肠日报》，我们解读了 15 篇文献，关注：生命早期，肠道Treg，ILC3，IBD，肠脑轴，纳米医学，1型糖尿病，小檗碱，IPA，微生物生态学，FMT，迈维代谢，九源基因，Fractyl，甫康药业，欧世盛。 该篇日报由R·AI辅助创作生成，人工审核校对。 Cell：出生队列揭示婴儿肠道微生物和代谢物与神经发育障碍的关系 Cell——[64.5] ① 瑞典一项长达20年的前瞻性出生队列研究，通过分析调查问卷、HLA基因型、脐带血清代谢组和脂质组、粪便菌群和代谢组，揭示了生命早期因素与之后确诊为神经发育障碍（ND）的关系；② 未来ND个体在婴儿期（1岁）就存在菌群组成和代谢物的失调，例如，Akk菌和粪球菌属减少，伴随某些氨基酸、脂肪酸、维生素和神经递质前体等代谢物的紊乱，并与早期情绪和胃肠问题存在关联；③ 耳炎、早产、感染、家庭压力、父母吸烟以及特定HLA基因型（DR4-DQ8）与ND风险增加相关，其中，HLA、压力、感染/反复使用抗生素、剖宫产等因素与菌群的变化存在关联，耳炎可能通过减少粪球菌属、增加柠檬酸杆菌属，增加未来ND风险；④ 未来自闭症患者的脐带血清中，亚麻酸水平较低、全氟癸酸毒素水平较高；⑤ 这些发现支持了一种假说，即ND的早期起源是由肠道菌群介导的，可能与炎症调控等有关。 【原文信息】 Infant microbes and metabolites point to childhood neurodevelopmental disorders 2024-04-03 , doi: 10.1016/j.cell.2024.02.035 Nature：免疫微环境塑造肠道Treg功能 Nature——[64.8] ① 本研究对致病共生菌（肝螺杆菌）反应性的调节性T细胞（Treg）进行了时空追踪，揭示了肠道中的局部免疫微环境在塑造Treg功能方面的空间机制，为开发新一代促进免疫耐受的疗法提供了见解；② 发现固有层（LP）而非淋巴聚集体（LA），是支持效应Treg（eTreg）功能的关键微环境，eTreg在LP中最具功能，LP微环境中还存在多种抗原呈递细胞，是eTreg产生IL-10的主要靶标；③ 一旦这种微环境建立起来，eTreg就会稳定并在此增殖，但炎症状态下，这种空间上区室化的LP微环境被打破，使原本局限于LA的CD103+SIRPα+树突状细胞等被招募到LP；④ 该研究还识别了LP中CD206+巨噬细胞与eTreg之间的相互作用，并鉴定了可能调控这种互作的受体-配体对（如CCR2–CCL8、VCAM1-α4β7等）。 【原文信息】 Immune microniches shape intestinal Treg function 2024-04-03 , doi: 10.1038/s41586-024-07251-0 郭晓欢Nature子刊：Wnt/β-catenin信号通路调控ILC3s介导肠道炎症 Nature Communications——[16.6] ① 清华大学郭晓欢研究员团队最新揭示Wnt/β-catenin信号通路在调节肠道炎症中的关键作用，特别是具有影响3型天然淋巴细胞（ILC3s）的功能；② 在炎症性肠病和结直肠癌患者中，肠道ILC3s的β-catenin水平升高，与健康人群相比有显著差异；③ 激活的Wnt/β-catenin信号在ILC3s中抑制RORγt表达，阻碍其增殖和功能，导致小鼠ILC3s缺失并增加结肠炎易感性；④ ILC3中激活的Wnt/β-catenin信号通路通过表观遗传调控和TCF-1-JunB途径抑制RORγt表达，导致ILC3缺乏并加剧肠道炎症和癌症的发展；⑤ Wnt/β-catenin信号传导的激活对体外ILC3和T细胞有不同影响，表明该信号通路对先天性和适应性淋巴细胞具有不同的调节机制。 【原文信息】 Dysregulation of Wnt/β-catenin signaling contributes to intestinal inflammation through regulation of group 3 innate lymphoid cells 2024-04-01 , doi: 10.1038/s41467-024-45616-1 Nature子刊：肠炎病史会影响小鼠社交行为 Nature Communications——[16.6] ① 研究发现，即使结肠炎症状消失，反复患有结肠炎的小鼠在与外来小鼠互动时表现出社交参与能力下降的现象；② 将自闭症谱系障碍（ASD）患者的微生物群落移植到雄性无菌动物中，并诱导结肠炎，与家族神经典型（NT）对照组的微生物群落相比，携带ASD患者微生物群落的动物表现出更严重的肠道表型；③ 所有家族NT对照组中都富含Blautia属菌株，并观察到单形拟杆菌丰度升高与肠道损伤减少之间的关联；④ 通过口服Blautia属或单形拟杆菌，可以减轻小鼠的结肠损伤；⑤ 从NT对照组中分离出的Blautia菌株可以改善小鼠肠道损伤相关的社交参与能力下降。 【原文信息】 Colitis reduces active social engagement in mice and is ameliorated by supplementation with human microbiota members 2024-03-30 , doi: 10.1038/s41467-024-46733-7 黄鹤+曹晓沧+刘占举：开发新型双特异性纳米抗体或可治疗IBD Clinical and Translational Medicine——[10.6] ① 天津大学黄鹤团队、天津医科大学曹晓沧团队及同济大学刘占举团队联合开发了一种新型双特异性纳米抗体（BsNb-Fc），通过同时靶向TNF-α和IL-23p19，缓解小鼠实验性肠炎；② BsNb-Fc具有比单一抗体更优的血清半衰期、靶向能力和效应功能；③ 与抗TNF-α单抗（infliximab, IFX）和抗IL-12/IL-23p40单抗（ustekinumab, UST）组合相比，BsNb-Fc具有更强的抗炎效果；④ 在TNBS和DSS诱导的急性结肠炎小鼠模型中，BsNb-Fc可有效减轻结肠炎症程度，且优于IFX&UST组合治疗；⑤ 本研究表明BsNb-Fc具有更高的疗效和生物稳定性，为对TNF-α抑制反应不足的IBD患者提供了一种潜在的新疗法。 【原文信息】 Novel bispecific nanobody mitigates experimental intestinal inflammation in mice by targeting TNF-α and IL-23p19 bioactivities 2024-03-27 , doi: 10.1002/ctm2.1636 孙嘉+潘礼龙：SCFAs受体GPR41或为T1D防治靶点 Acta Pharmacologica Sinica——[8.2] ① 江南大学孙嘉教授、潘礼龙教授及团队发现短链脂肪酸受体G蛋白偶联受体41（GPR41）缺失会加剧小鼠1型糖尿病（T1D），揭示了GPR41在维持肠道和胰腺免疫稳态中的重要性；② 在非肥胖糖尿病小鼠（NOD）中，GPR41表达降低；③ Gpr41-/-小鼠在链脲佐菌素（STZ）诱导的T1D模型中表现出更严重的疾病症状，且肠道免疫失调更为明显，肠道激活的IFN-γ+ T细胞迁移到胰腺的数量增加；④ Gpr41-/-小鼠的骨髓来源树突状细胞（BMDC）中，SOCS表达显著降低，STAT3磷酸化显著增加，促进了树突细胞的成熟；⑤ 通过向受辐照的NOD小鼠移植Gpr41-/-小鼠的BMDC，可以加速T1D的发展，表明GPR41可能是T1D的潜在治疗靶点。 【原文信息】 GPR41 deficiency aggravates type 1 diabetes in streptozotocin-treated mice by promoting dendritic cell maturation 2024-03-21 , doi: 10.1038/s41401-024-01242-7 王琰+蒋建东：小檗碱调节肠道菌群防治血栓 Phytomedicine——[7.9] ① 近期中国医学科学院北京协和医学院医药生物技术研究所蒋建东和王琰作为共同通讯作者发表了一项研究，本研究揭示了小檗碱（黄连素）作为肠道微生物群的调节剂，能有效抑制小鼠血栓形成；② 小檗碱通过促进苯乙酸降解来限制苯乙酰甘氨酸的生物合成，后者是宿主-肠道菌群的一种促进血栓形成的共同产物；③ 小檗碱的抗血栓效果可以被腹腔注射的苯乙酰甘氨酸逆转，而粪菌移植实验确认了肠道菌群在血栓形成中的关键作用；④ 研究强调了肠道菌群在血栓发展中的重要性，并突出了小檗碱介导的肠道菌群调节作为预防血栓形成的有前景的治疗方法。 【原文信息】 Berberine promotes the degradation of phenylacetic acid to prevent thrombosis by modulating gut microbiota 2024-03-07 , doi: 10.1016/j.phymed.2024.155517 李宁宁/张雪松等：肠道代谢物IPA激活ERK1，改善小鼠自闭症 Microbiome——[15.5] ① 人染色体16p11.2微缺失（16p11.2+/−）与自闭症谱系障碍（ASD）和其他神经发育障碍普遍相关，但其与肠道菌群及肠道代谢物的关系尚未解析，中山大学七附院的李宁宁、英国伦敦大学学院Huiliang Li、美国罗格斯大学张雪松及发表研究，揭示了16p11.2微缺失小鼠模型中肠道代谢物吲哚-3-丙酸（IPA）对ASD相关症状的缓解及其机制；② 16p11.2微缺失小鼠模型显示出肠道菌群失调和血清/粪便中IPA水平显著下降，其中IPA产生途径相关基因丰度下降，表现出社交和认知记忆缺陷；③ 经口给予IPA能有效改善这些小鼠的社交和认知缺陷，恢复海马齿状回神经元的抑制性突触传输；④ IPA处理显著增加了16p11.2区域Mapk3基因编码的ERK1蛋白的磷酸化水平，但不影响Mapk3基因的转录和翻译；⑤ 研究揭示了肠道菌群代谢物在ASD发病机制中的关键作用，并为相关社交和认知记忆障碍的治疗提供了新的视角。 【原文信息】 The gut metabolite indole-3-propionic acid activates ERK1 to restore social function and hippocampal inhibitory synaptic transmission in a 16p11.2 microdeletion mouse model 2024-03-28 , doi: 10.1186/s40168-024-01755-7 Nature子刊：肠道共生菌适应性演化高分辨率定位追踪 Nature Communications——[16.6] ① 本研究通过对定植四种人类肠道拟杆菌的悉生小鼠中的400,000多个肠道菌群谱系进行了分析，揭示了肠道菌群通过快速新突变来适应宿主环境的微生态进化机制；② 研究发现了数千个隐性变异受到正向选择，而这些变异大多与原始基因敲除无关；③ 不同物种之间的适应性突变谱显示具有随时间和饮食条件变化的多样性权衡，提示其可能参与的潜在功能；④ 这些结果表明，宿主内适应是由众多竞争变异之间的激烈竞争进行的，这对肠道菌群的进化产生了重大影响。 【原文信息】 Quantifying the adaptive landscape of commensal gut bacteria using high-resolution lineage tracking 2024-02-21 , doi: 10.1038/s41467-024-45792-0 青少年肥胖症患者粪菌移植后的水平基因转移有何特征？ Microbiome——[15.5] ① 使用WAAFLE生信工具和宏基因组组装及基因聚类两种互补方法，分析了381个粪便样本中的水平基因转移（HGT）事件；② 两种方法均发现FMT和安慰剂受体的肠道微生物组中可能的HGT事件水平在干预后没有显著差异；③ 在FMT受体中，干预6周后识别出由供体物种引导的HGT事件，这些事件主要涉及拟杆菌门相关菌株；④ 依赖移植的水平转移基因在干预后12周和26周仍保留在受体微生物组中。 【原文信息】 Horizontal gene transfer after faecal microbiota transplantation in adolescents with obesity 2024-02-12 , doi: 10.1186/s40168-024-01748-6 多组学企业「迈维代谢」完成B轮融资，海达投资领投 ① 近日，国内多组学领先企业武汉迈维代谢生物科技股份有限公司宣布，完成B轮融资，由海达投资领投，具体金额未披露；② 融资将用于拓展业务布局、加大产品技术研发投入及推进重点项目自动化升级；③ 迈维代谢成立于2015年，专注于质谱多组学CRO和质谱体外诊断试剂产品开发；④ 首次开发了以“广泛靶向”专利技术为核的高通量、超灵敏、广覆盖代谢组检测技术，并构建了业内最全、最精细化、最准确的代谢组数据库，包括40000个植物内源性和220万医学代谢物数据库。 【原文信息】 迈维代谢完成B轮融资，海达投资领投！ 2024-04-03 , 单细胞测序网 九源基因「司美格鲁肽」生物类似药申报上市 ① 4月3日，九源基因的司美格鲁肽注射液生物类似药上市申请，获得国家药监局受理；② 该药物用于成人2型糖尿病患者的血糖控制，具有降糖、减重和心血管获益等多重作用；③ 司美格鲁肽原研产品由诺和诺德开发，2023年在中国销售额约49.40亿元人民币；④ 国内多家企业正在开发司美格鲁肽生物类似药，九源基因为首家递交上市申请的公司。 【原文信息】 首个！九源基因「司美格鲁肽」生物类似药申报上市 2024-04-03 , 医药魔方 Fractyl体重管理方案Revita Remain-1临床获批 ① 4月1日，Fractyl Health公司宣布，旗下针对肥胖患者停用GLP-1类药物后的体重管理疗法Revita，其Remain-1临床研究获得FDA批准；② Remain-1研究是一项随机、双盲试验，旨在评估Revita与安慰剂在替尔泊肽治疗至少减重15%患者中的体重维持效果；③ Revita一种十二指肠粘膜表面重修术，这种新型内镜手术能够使肠道异常的营养感知和信号机制得以恢复，可以从根源上治疗肥胖和2型糖尿病；④ 同时，Fractyl Health公司还宣布启动Reveal-1开放标签研究，将跟踪Revita在同类患者群体中的使用效果。 【原文信息】 Fractyl Health Receives FDA IDE Approval for the Revita® Remain-1 Pivotal Study of Weight Maintenance in Obesity after Discontinuation of GLP-1 Based Drugs 2024-04-01 , Globe Newswire 甫康药业CVL237片2期临床完成首例患者给药 ① 近日，甫康药业宣布，针对PTEN基因缺失的晚期实体瘤一类新药CVL237片，其2期临床研究已完成首例患者给药；② 该2期临床研究是一项随机、单臂、开放、多中心国际多中心临床试验，旨在评估CVL237片的有效性和安全性；③ 研究针对七种肿瘤，包括胃癌、前列腺癌、结直肠癌、肺癌、乳腺癌、妇科肿瘤和黑色素瘤；④ CVL237片是全球首个针对PTEN缺失进行篮式研究的PI3Kβ/δ双重抑制剂，有望成为该领域首个靶向药物。 【原文信息】 一类新药CVL237片II期临床研究完成首例患者给药 2024-04-03 , 甫康Convalife 连续流研发制造企业「欧世盛」完成pre-B轮融资 ① 近日，欧世盛宣布完成数千万元的pre-B轮融资，融资由道彤投资领投，长岭资本跟投；② 融资将用于丰富欧世盛的产品矩阵，拓展其商业化网络并进军海外市场；③ 欧世盛是流动化学解决方案提供商，拥有行业领先的流动化学反应系统产品；④ 此外，欧世盛还同时能够为客户提供科研装备设计、研发外包、工艺优化、放大研究、设备工艺研究、精密制造和连续流工艺培训等多模块服务。 【原文信息】 欧世盛科技完成pre-B轮融资，加速打造流动化学连续智造平台 2024-04-03 , 动脉网 感谢本期日报的审核者：mildbreeze，RZN，章台柳，圆圈儿，注册营养师陈彬林，Johnson，Zhonghua，九卿臣，617，Richard 点击阅读过去10天的日报： 0403 | 今日Cell肠道研究双发：代谢胆固醇的肠菌+肠炎细胞图谱 0402 | 保肠护关节：高分研究揭示抵御关节炎的肠道因子 0401 | 3月，最值得关注的35篇肠道健康要闻！ 0331 | 聚焦特殊人群：老年人和孕妈妈的饮食新知 0330 | Akk菌或是免疫性肾病帮凶？Science子刊揭示机制 0329 | 33页综述纵论：超加工食品健康转型的新策略 0328 | Science子刊：锁定肠道中让病毒逃脱免疫的"避风港" 0327 | 10文聚焦菌群-肠-脑轴研究新进展 0326 | 100分综述详解：IBD细胞因子疗法最前沿 0325 | 大肠癌患病为何年轻化？遗传与生活方式的双重影响

关注并星标CPHI制药在线       念珠菌病主要是由白念珠菌引起的急性、亚急性或慢性感染，临床症状错综复杂、急缓不一，严重威胁人类健康。目前临床上常用的抗真菌药物种类有限，抗菌谱窄、耐药性高，是导致临床治疗失败和念珠菌血症死亡率高的重要原因之一。常用的系统抗真菌药物主要包括三唑类、多烯类和棘白菌素类等。       常用抗白念珠菌药物现况       1、多烯类药物       多烯类化合物是大环内酯类的有机分子，该类药物有很强的抗真菌活性和较宽的抗菌谱，其中制霉菌素（nystation）和两性霉素 B（amphotericin B，AmB）是临床上常用的代表药物。制霉菌素对念珠菌有显著的杀灭作用，但吸收差、不良反应大，所以临床上使用较少。AmB 是深部真菌感染的抗菌谱最广的有效药物，但肾毒性及明显的输液不良反应限制了其临床应用。另外白念珠菌生物被膜形成后，对 AmB、制霉菌素的敏感性也明显降低。近年来，AmB 含脂制剂的开发减轻了AmB 的肾毒性，我国应用的含脂制剂主要是L-AmB，其抗菌谱、抗菌活性、临床疗效与AmB相仿，肾毒性降低，但价格偏高，所以 AmB 含脂制剂目前仅批准用于不能耐受AmB 毒性反应，或出现与静脉用药相关的严重毒性反应，或AmB治疗无效的患者。       2、三唑类药物       三唑类抗真菌药物是目前使用最为广泛的一类抗真菌药，其中氟康唑（FCA）是临床早期经验治疗念珠菌感染尤其作为高危人群预防念珠菌感染的首选药物，使其在人体内长期处于亚治疗水平，引起耐药性增加。伏立康唑（VRC）作为新一代三唑类抗真菌药物，具有抗菌活性更高、抗菌谱更广、生物利用度更高等优点，对包括耐氟康唑菌株等均有较强的活性。CHIF-NET 2010-2014年中国多中心侵袭性酵母菌的研究报道，94%的白念珠菌对伏立康唑最敏感，氟康唑次之。随着长时间的药物滥用和不必要的药物接触，白念珠菌对唑类药物的耐药性正在增加，使得对唑类耐药念珠菌患者的治疗选择受限，是全球范围内临床医生和患者面临的日益严峻的挑战。       3、棘白菌素类药物       目前，已上市的棘白菌素类药物包括卡泊芬净（caspofungin）、米卡芬净（mycamine）、阿尼芬净（anidulafunngin）。卡泊芬净对耐氟康唑、伊曲康唑的念珠菌有较好活性。米卡芬净对念珠菌属、耐唑类和耐两性霉素 B 菌株有较好的抑制活性，且在治疗严重念珠菌感染时毒性较小。阿尼芬净具有更大的分布容积和更广的抗菌谱，对白念珠菌的抗菌活性大大高于两性霉素 B、伊曲康唑和氟康唑，对念珠菌属最低抑菌浓度低于氟康 唑和卡泊芬净。随着临床上的广泛应用，白念珠菌对此类药物已出现不同程度的耐药性，不过由于棘白菌素类与唑类药物无明显的交叉耐药性，故临床上常用棘白菌素类与三唑类或多烯类药物联合使用治疗侵袭性念珠菌感染。       白念珠菌耐药机制研究进展       目前发现的白念珠菌的耐药机制主要包括药物靶点的改变、药物外排泵的过表达、代谢途径的改变及适应性应激反应的启动等方面。       1、对唑类药物的耐药机制       ①药物靶点的改变。白念珠菌中唑类药物靶酶基因ERG11的突变或过表达可使靶酶维持活性而产生耐药。研究显示，ERG11基因突变已发现有140个错义突变，并证实Y123F、K143R、F449V和G464S等多个突变位点与白念珠菌对氟康唑耐药有关。ERG11的点突变，特别是发生在105-165、266-287、405-488氨基酸之间的3个"热点"区域，可以降低念珠菌对唑类药物的敏感性。白念珠菌耐药菌株中ERG11的过表达主要是由Upc2p的功能获得性突变如 G648D、G648S、A643T、A643V、Y642F、G304R、A646V、W478C等导致。研究报道，ERG3是ERG11的上游基因，ERG3功能失活可导致白念珠菌对唑类药物的耐药。       ②药物外排泵的过表达。白念珠菌中药物外排泵有2类：ABC转运蛋白（CaCdr1和CaCdr2）和MFS转运蛋白（CaMdr1）。调控CaCdr1和CaCdr2表达的CaTAC1以及调控CaMDR1表达的CaMRR1发生突变使得药物外排泵过表达从而导致白念珠菌对唑类药物耐药。ABC转运体借助核苷酸结合结构域与ATP结合获取能量完成外排，其中CaCdr1是唑类耐药的主要决定因素，临床分离物中Cdr1的缺失可使唑类耐药降低4～8倍。最近的研究发现，转运蛋白CaCdr6/Roa1的缺失使得TOR信号通路过度激活抑制了药物的摄入，从而导致白念珠菌对唑类药物的耐药。研究还发现ABC转运蛋白CaMlt1通过液泡摄取机制来调控白念珠菌对唑类药物的耐药。另外，介体复合物在Tac1介导的唑类耐药中起着重要作用，Tac1功能获得突变体中介体尾模块的缺失减少了CDR1的转录，从而增加了对氟康唑的敏感性。MFS 转运体依靠电化学梯度扩散完成外排，在白念珠菌95个MFS转运蛋白中，仅Mdr1参与了白念珠菌对唑类药物的耐药。白念珠菌Swi/Snf染色质重塑复合物被认为是Mrr1的主要共激活因子，在功能菌株的Mrr1获得中，Swi/Snf复合物的催化亚基SNF2的缺失导致Mdr1激活和对氟康唑耐药的急剧降低。       ③应激反应的调节。热休克蛋白（Hsps）能够通过calcium-calcineurin、MAPK以及 Ras1-Camp-PKA信号通路来调控白念珠菌对唑类药物的耐药。研究发现，Hsp90的底物蛋白和 Hsp90翻译后修饰过程可以作为上游调控因子缓解耐药性，甾醇C-22 脱氢酶EGR5和磷脂酰肌醇-4激酶（PI4K）STT4能够参与调控Hsp90。此外，金属离子应激能够影响白念珠菌对唑类药物的敏感性。有研究报道，铁离子的缺乏能够导致CaERG11表达下调和ERG3上调，从而提高菌株对唑类药物的敏感性，铁离子转运蛋白Ftr1、Ftr2和Ftr11参与铁离子介导的药物敏感性。有研究还发现，CaUpc2和热休克因子1（Hsf 1）参与铁离子介导的药物敏感性。白念珠菌对唑类药物的耐药还与生物膜的生成有关。另有研究显示，白念珠菌生物膜产生过程中，CaERG25和CaERG11的表达水平增高，从而导致其对唑类药物的耐药。       2、对多烯类药物的耐药机制       念珠菌对多烯类药物耐药性的产生是通过降低药物对膜的结合亲和力或从膜中消耗麦角甾醇的酶的改变介导的。研究显示，白念珠菌ERG2、ERG3、ERG5或ERG11发生突变能够 导致菌株对AmB耐药。AmB 耐药念珠菌分离株的适应性和存活率严重依赖于Hsp90的表达和功能。因此，在白念珠菌耐药菌株中抑制Hsp90 的药理学作用可以消除AmB抵抗。白念珠菌在接触AmB 后具有补偿性抗氧化反应，与AmB耐药念珠菌的研究表明，活性氧（ROS）积累显著减少，蛋白质碳酸化减少，线粒体基础呼吸减少，过氧化氢酶的产量也有 显著的增加。另外，Rlm和Smil等转录调节因子可调控念珠菌生物膜基质主要成β-葡聚糖的产生量，导致念珠菌对药物耐药。       3、对棘白菌素类药物的耐药机制       葡聚糖合酶既是棘白菌素药物的靶标也是耐药位点。1，3-β-葡聚糖合成酶编码基因FKS1的突变能够导致白念珠菌对棘白素类药物耐药，与此相关的突变主要为S645P和S645F，且在易感菌株该区域突变情况下，对应菌株耐压性升高，导致棘白菌素类药物的抗菌效果显著 降低。白念珠菌除FKS1基因与棘白菌素耐药相关外，还表达了FKS2和 FKS3，最近研究 发现，FKS2和 FKS3作为FKS1表达的负调控子，当白念珠菌中缺失FKS2和 FKS3后， FKS1表达明显上调进而影响其对棘白素类药物的敏感性。同时，对临床分离得到的白念珠菌耐药株的检测发现，Ser645发生突变的频率最高，目前已发现 3种突变，即S645P、S645F和S645Y，当易感菌株中该区域发生突变，菌株会产生耐药性。白念珠菌转录因子Cas5是影响真菌对棘白菌素耐受性的细胞因子，Cas5的纯合缺失可降低FKS1介导的棘白细胞的耐药性。此外，镁离子的缺乏造成白念珠菌中组氨酸激酶基因NIK1的突变，进而抑制Hog1的激活提高菌株对卡泊芬净的敏感性。       4、对氟胞嘧啶的耐药机制       对白念珠菌的基因组学研究证实，5-氟胞嘧啶（5-FC）的耐药性是由特殊菌株的隐性基因决定的，其中以FUR1基因突变最为常见。编码UPRTase的FUR1基因在301位点突变，降低了5-FC转化为具有细胞毒性代谢产物的能力，以及编码胞嘧啶脱氨酶的FCA1基因发生突变可能导致药物摄入减少，均可影响有毒化合物的代谢和在胞内的聚集而导致耐药等。此外，胞嘧啶渗透酶、胞嘧啶脱氨酶功能缺陷或胸苷酸合酶活性改变也可能产生耐药。       参考资料       [1]张欠欠,罗传玉,陈嘉琪等.白念珠菌感染现状及抗真菌药物研究进展[J].中国真菌学杂志,2021,16(05):356-360.       [2]张欠欠,封小川,张凯玄等.白念珠菌对临床常用抗真菌药物耐药机制研究进展[J].中国真菌学杂志,2022,17(03):251-254.        作者简介：小米虫，药品质量研究工作者，长期致力于药品质量研究及药品分析方法验证工作，现就职于国内某大型药物研发公司，从事药品检验分析及分析方法验证。【智药研习社近期课程预告】来源：CPHI制药在线声明：本文仅代表作者观点，并不代表制药在线立场。本网站内容仅出于传递更多信息之目的。如需转载，请务必注明文章来源和作者。投稿邮箱：Kelly.Xiao@imsinoexpo.com▼更多制药资讯，请关注CPHI制药在线▼点击阅读原文，进入智药研习社~

多肽偶联药物(peptidedrugconjugate,PDC)，作为新型偶联药物，可以提高疗效和降低癌症治疗的副作用，在肿瘤免疫治疗中显示出了巨大的潜力。成为下一代靶向药物的发展趋势。使用多肽作为载体分子有诸多优势。与抗体偶联药物(ADC)相比，其分子量更小，不易引起免疫反应，易于合成，并提供明确且具有成本效益的靶向治疗。其结构修饰可以更容易被引入，支持合理的药物设计，以提高生物利用度、结合亲和力和稳定性。与抗体生产的复杂工艺过程相比，PDC可由化学方法合成，效率更高，且更容易进行纯化，成本低。并且其免疫原性低、易通过生理屏障、组织渗透性强。与小分子药物相比，小分子虽然在代谢稳定性好、膜渗透性好，但有更高的脱靶效应，有更高的毒性风险。肽类分子的潜在毒性低于小分子、相对较少的脱靶副反应等。PDC，一端约10个氨基酸的肽链，作为靶向肿瘤细胞的靶向结构域；另一端是具有生物功能的药物分子，实现药物分子的高效靶向投递，达到肿瘤治疗。PDCs主要包括多肽、药物和连接子三个基本组成成分。载体常见的载体蛋白负责肿瘤靶向的载体 (carrier)，包括适体（aptamer）、小分子和生物制剂（多肽、蛋白质和抗体）等。通常mAb体量太大可能没法有效扩散到肿瘤细胞之中，且易产生免疫原性。可以选用更小的多肽等生物分子。多肽PDCs使用的多肽包括：细胞穿膜肽和细胞靶向肽。细胞穿膜肽：与细胞膜相互作用，通过各种机制将其内化。然而由于其细胞特异性较低，细胞穿膜肽类型的PDCs应用受到限制。细胞靶向肽：可选择性的与靶细胞上存在的过表达受体结合，将偶联药物递送至特定细胞。细胞靶向肽多为链状线性肽，稳定性差，在体内易被降解，且细胞穿透能力差。优化方式，将线性多肽环化为环化肽或具有较高螺旋结构的订书肽，可提高稳定性，有助于约束多肽构象，提高其药代动力学性质。肿瘤靶向肽是：能够特异性的结合到肿瘤细胞和肿瘤血管的多肽，通常是由5～31个氨基酸组成的分子量较小的活性肽。药物分子肿瘤免疫治疗，常用的药物分子包括：免疫原性化疗药物，如arg抑制剂cb-1158、腺苷a2a受体拮抗剂cpi-444、rorγt激动剂lyc-55716，逆转肿瘤免疫抑制微环境的抗体或化学物质如ido酶抑制剂nlg919，选择的细胞毒性有效载荷通常具有低 IC50，通常在纳摩尔范围内，  PDC 中使用的有效载荷包括：阿霉素(Doxorubicin，亦称多柔比星)、紫杉醇（taxol）、柔红霉素（Daunorubicin，亦称道诺霉素）、吉西他滨（Gemcitabine） 和 美登素（mertansine，亦称美登新）连接子共价连接子包括：脂肪链、聚乙二醇、氨基酸等。氨基酸是化学合成中最常用的共价连接子之一。gflg四肽序列被广泛应用于组织蛋白酶存在条件下，被切割的间隔区，gflg四肽间隔区在分子递送系统中最为常见，能够实现在肿瘤环境中组织蛋白酶-b的定点切割，从而发挥分子递送系统中的共价连接子作用。PDCs传统连接子包括：酶可裂解连接子、酸可裂解连接子、可还原二硫醚连接子和不可裂解连接子。多肽环化包括：主链环化和侧链环化。主链环化方法包括：通过半胱氨酸的氧化偶联，使得两个巯基经氧化后，形成二硫键成环，以及通过叠氮与炔的环加成反应。在多肽一端引入ε-叠氮赖氨酸，另一端引入炔丙基甘氨酸，通过CU催化生成环化基团三唑连接基。侧链环化方法：两个氨基酸的侧链与刚性小分子进行偶联。偶联方式多肽有三种偶联方式：偶联在多肽的N端的氨基酸上;偶联在多肽的C端氨基酸上;偶联在多肽序列中的半胱氨酸上。步骤：去保护：使用碱性溶剂（piperidine）去除氨基的保护基团。 激活和交联：下一个氨基酸的羧基被一种活化剂所活化。活化的单体与游离的氨基反应交联，形成肽键。使用超浓度试剂促进反应进行。反复循环直至完成合成。3. 洗脱和脱保护：多肽从柱上洗脱下来，保护基团被脱保护剂（TFA）洗脱/脱保护。4. 多肽的修饰(改变肽链主链结构和侧链基团)分为液相法和固相法。包括：乙酰化，烷基化，生物素修饰，磷酸化或磺酸化等。组蛋白中赖氨酸的N端残基可发生乙酰化，且可逆。乙酰基转移酶的作用下，在赖氨酸的N短引入乙酰基。多肽与载体偶联方式Frdbio–SH介导多肽与载体偶联Frdbio EDC或EDC/NHS介导多肽与载体偶联EDC(1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride)或carbodiimide方法是将多肽和载体偶联的常用方法。若载体蛋白先被激活，EDC方法则通过N－末端alpha－氨基，或是如果序列中有赖氨酸的话，则可以通过赖氨酸的侧链氨基与载体蛋白偶联。3. Frdbio GA( Glutaraldehyde,戊二醛)介导多肽与载体偶联用于与多肽偶联的载体蛋白有多种，最常见的包括：keyhole limpethemacyanin (KLH)KLH具有更高的抗原性，是最为常用的多肽偶联载体卵清蛋白（ovalbumin，OVA）牛甲状腺球蛋白（bovine thyroglobulin，THY)牛血清白蛋白（bovineserumalbumin，BSA）BSA 蛋白偶联多肽原缓冲液配方( 氯化钠+lingsuanqingerna、EDTA)100*TCEP 配方(TCEP、二级水）BSA 配方BSA 固体+检测原缓冲液，配成一定浓度的 BSA 液体。BSA 液体、SMCC，水浴在检测原缓冲液里透析过夜，再用检测原偶联缓冲液稀释。BSA 偶联多肽步骤检测原缓冲液稀释 100*TCEP 到 1*TCEP，用于溶解 1mg 的裸肽；加BSA；37℃静置 4 小时，跑胶，确认偶联成功。多肽在人类生命过程起着重要作用，如修复细胞、改善细胞代谢、防止细胞退化等。肽具有生物活性，及极好的靶向转运能力。多肽产品被广泛应用于制药、食品及化妆品等领域。全球超过100种多肽药物，获批上市。随着技术不断进步，市场需求持续增长，多肽产业也将迎来更加广阔的发展空间。继抗体偶联药物 (ADCs) 后，多肽偶联药物 (PDCs)，借助其增强细胞通透性和提高药物选择性等优势，或将成为市场青睐的下一代靶向治疗药物。识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。