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研究背景与意义中药复方作为中医药理论的重要实践载体，其研究历经经验医学向现代科学验证的转型。传统研究多聚焦于单一成分或单一靶点，难以阐释复方“君臣佐使”的整体调节效应，导致其作用机制的科学内涵长期处于“黑箱”状态。近年来，随着系统生物学与多组学技术的发展，中药复方“多成分-多靶点-多通路”的复杂作用模式逐渐成为研究热点，但如何精准解析成分与靶点间的网络关联仍是领域内的核心挑战。网络药理学的兴起为破解这一困境提供了关键技术支撑。该方法通过构建药物-成分-靶点-疾病的相互作用网络，能够系统揭示复方中活性成分与疾病相关靶点的关联规律，从而在分子层面阐释中药复方的整体调节机制。Nature 子刊系列研究表明，网络药理学方法在解析复杂疾病的病理网络与药物干预机制方面具有独特优势，已成为连接传统医学与现代生命科学的重要桥梁。在临床需求层面，以冠心病为代表的心血管疾病已成为全球重大公共卫生问题，其病理机制涉及血管内皮损伤、炎症反应、能量代谢紊乱等多环节异常。温阳通脉方作为中医温阳散寒、活血通脉法的经典方剂，在临床治疗冠心病心绞痛等疾病中具有确切疗效，但其活性成分如何通过多靶点协同作用改善心肌缺血的科学机制尚未明确。开展温阳通脉方的网络药理学研究，不仅能够为中医“温阳通脉”理论提供现代科学证据，填补传统医学理论与现代分子生物学之间的认知鸿沟，更能为临床精准用药提供潜在的作用靶点，推动中药复方的现代化开发与国际化应用。研究价值：本研究通过网络药理学方法系统解析温阳通脉方的活性成分与作用靶点，既符合《中国中药杂志》强调的“传承与创新并重”的研究导向，也为中药复方的机制研究提供了可推广的技术范式，具有重要的理论创新意义与临床转化价值。近年来，国内外学者已逐步认识到网络药理学在中药复方研究中的核心地位。《中国中药杂志》2023 年刊文指出，基于网络药理学的中药复方机制研究需注重“成分-靶点-通路”的层级验证，通过体内外实验结合生物信息学分析，才能真正实现复方作用机制的深度解析。温阳通脉方作为温阳法的代表方剂，其网络药理学研究将为同类方剂的现代化研究提供重要参考，助力中医药理论的科学阐释与临床应用的精准化发展。中药药理学理论基础中药药理学理论体系构建于传统中医理论与现代生命科学的交叉融合之上，其核心在于通过"传统理论-现代科学"双轨框架阐释中药复方的作用机制。中医"温阳散寒、活血通脉"治则的理论根基可追溯至《黄帝内经》"阳气者，若天与日，失其所则折寿而不彰"的论述，强调阳气在维持血脉通利中的核心作用。《伤寒论》进一步提出"阳微阴弦"的病机理论，为阳虚寒凝证的治疗确立了"温通并举"的治则，这与中医体质辨识理论中阳虚体质"阳气不足，畏寒怕冷、手足不温"的特征高度契合。该理论体系认为，阳虚体质者因阳气亏虚导致寒邪内生，气血运行不畅，形成"寒凝血瘀"的病理状态，表现为舌淡白等典型舌象特征，此为温阳通脉方辨证施治的理论依据。理论内涵对比中医整体观：强调"阳主温煦"、"气为血之帅"，认为阳气亏虚是血脉瘀阻的始动因素，治疗需兼顾温阳与通脉西医还原论：聚焦局部病理改变，如血管内皮功能障碍、血液流变学异常等单一靶点网络药理学：通过构建"疾病-靶点-药物"网络，实现对中医"君臣佐使"理论的现代诠释从现代科学视角解析，温阳通脉方的药理作用涉及多维度分子机制。分子药理学研究表明，方中君药附子含有的生物碱成分可通过调控电压门控离子通道（如Na⁺/K⁺-ATP酶）改善心肌细胞兴奋性，而臣药黄芪的多糖成分则通过调节Treg细胞活性发挥免疫调节作用。网络药理学进一步揭示，该复方通过多成分-多靶点协同作用，影响PI3K-Akt、MAPK等信号通路，实现对凝血系统、血管舒缩功能及能量代谢的综合调控。这种多靶点作用模式恰与中医"君臣佐使"的配伍理论相呼应，如附子温阳为君，黄芪益气为臣，共奏"温阳益气、活血通脉"之效。系统生物学研究证实，温阳通脉方通过干预基因-蛋白-代谢网络维持机体内环境平衡。临床实践中，针对阳虚体质人群"温阳益气"的养生需求，该方可显著改善畏寒肢冷、舌淡苔白等症状，其作用机制既包含传统理论"散寒通脉"的宏观描述，也涵盖现代药理学"离子通道调控-免疫调节-信号转导"的微观阐释。这种双轨阐释框架不仅验证了《伤寒论》"通阳不在温，而在利小便"等经典论述的科学内涵，更为中药复方的现代化研究提供了方法论范式。值得注意的是，网络药理学在整合多维度数据方面展现出独特优势。通过构建药物成分-疾病靶点相互作用网络，可直观呈现温阳通脉方中附子生物碱、黄芪多糖等活性成分与VEGFR、eNOS等关键靶点的关联强度，从而量化阐释中医"协同增效"理论的科学本质。这种研究范式突破了单一成分研究的局限性，更符合中药复方多成分、多系统调节的整体作用特点，为中西医理论的有机融合搭建了桥梁。温阳通脉方组成与分析方剂源流与药材组成温阳通脉方的组方思路源自《伤寒论》桂枝附子汤的化裁，核心药材包括黄芪、附子、桂枝、丹参、川芎等，其配伍遵循"君臣佐使"理论，以温阳散寒、活血通脉为核心治则。该方剂的药材选择严格遵循道地性原则，其中北药区域（河北、山西及周边）的黄芪与川药区域（四川及周边）的附子作为君药，构成方剂的核心骨架。现代药理学研究表明，这些道地药材的组合可协同发挥黄酮类、生物碱类、皂苷类及挥发油类成分的综合效应。活性成分解析采用 UPLC-Q-TOF-MS 技术对温阳通脉方进行成分分析，共鉴定出 89 个活性成分，其中标志性成分包括黄芪甲苷（皂苷类）、毛蕊异黄酮（黄酮类）及附子碱（生物碱类）。道地药材的品质优势在成分含量上体现显著，如平遥黄芪的毛蕊异黄酮葡萄糖苷含量较普通黄芪高 37.2%，而四川道地附子的总生物碱含量可达 0.82%，为方剂的疗效提供物质基础。质量控制体系指纹图谱建立通过 HPLC 技术建立的指纹图谱包含 15 个特征峰，其中 4 个主要色谱峰分别对应虎杖苷（保留时间 12.3 min）、白藜芦醇（18.7 min）、大黄素（32.5 min）及大黄素甲醚（45.1 min）。典型图谱呈现"前低后高"的峰形特征：0.5-5.0 min 出现密集小峰群，30-35 min 形成次级峰簇，50-70 min 出现特征性高响应峰，通过与对照品溶液（橙皮苷 26.07 min、5,7-二甲氧基香豆素 34.76 min）比对实现成分确证。系统适用性试验显示，15 个特征峰的相对保留时间 RSD<1.5%，峰面积 RSD<3.0%，符合中药复方质量控制要求。含量测定标准建立多成分定量分析方法，设定黄芪甲苷的内控标准为≥0.15%，毛蕊异黄酮葡萄糖苷≥0.08%，附子碱≤0.05%（以双酯型生物碱计）。采用"一测多评"法同步测定 6 个指标成分，其中黄芪甲苷的线性范围为 0.12-2.4 μg（r=0.9998），平均加样回收率 98.7%（RSD=1.8%）。道地药材检测数据显示，甘肃当归的阿魏酸含量较非道地产区高 28.5%，宁夏枸杞的枸杞多糖含量可达 5.2%，为质量标准制定提供参考。质量控制关键点指纹图谱相似度评价：采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》，对照图谱匹配度≥0.95道地药材溯源：建立黄芪（北药）、附子（川药）、当归（秦药）的产地特征图谱库安全性控制：双酯型生物碱限量检查（HPLC-ELSD 法，检测限 0.001 mg/g）道地药材区域特征温阳通脉方的药材产地分布呈现显著的区域特征：北药区提供黄芪（山西平遥）、南药区提供桂枝（广东广药）、川药区提供附子（四川江油）、秦药区提供当归（甘肃岷县）。这种"跨区域道地药材组合"模式，既保证了各药材的品质优势，又通过成分互补增强方剂整体疗效。现代地理标志认证体系显示，道地药材的有效成分含量普遍较普通药材高 20%-40%，其中新疆紫草的萘醌类成分含量较非道地产区高 37.2%，进一步验证了道地性对药效物质基础的重要影响。通过"药材-成分-功效"三级解析，温阳通脉方的质量控制体系实现了从源头到成品的全程把控，为其临床应用提供了科学依据。道地药材的系统应用与现代分析技术的结合，不仅确保了方剂的质量稳定性，更为中药复方的标准化研究提供了示范模式。网络药理学研究方法本研究采用网络药理学方法系统解析温阳通脉方的"成分-靶点-疾病"作用网络，具体研究流程包括数据库构建、活性成分筛选、靶点预测、网络构建与拓扑分析四个关键环节，各步骤的技术路线与科学依据如下：数据库构建与活性成分筛选研究首先基于中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）获取温阳通脉方的化学成分信息，通过PubChem数据库进行成分结构验证，确保化合物结构的准确性。为筛选出具有潜在生物活性的成分，采用口服生物利用度（Oral Bioavailability, OB）和类药性（Drug-Likeness, DL）两个关键参数进行过滤。其中，OB≥30% 作为口服吸收效率的筛选阈值，确保成分能经胃肠道有效吸收；DL≥0.18 作为类药性的判断标准，反映化合物与已知药物的结构相似性及成药潜力。通过双重标准筛选后，获得温阳通脉方的核心活性成分集，为后续靶点预测奠定物质基础。靶点预测与网络构建针对筛选得到的活性成分，采用SwissTargetPrediction和PharmMapper两个在线工具进行靶点预测。SwissTargetPrediction基于配体-靶点相互作用的概率模型，通过化合物结构相似性匹配已知靶点；PharmMapper则利用反向分子对接技术，将化合物结构对接到靶点数据库的三维结构中，预测潜在作用靶点。预测结果经UniProt数据库标准化处理，去除重复靶点并获取其对应的基因名称。随后，使用Cytoscape软件构建"成分-靶点-疾病"相互作用网络，其中节点代表化合物、靶点或疾病，边代表它们之间的相互作用关系。网络拓扑分析与核心靶点识别为从复杂网络中筛选关键节点，采用度值（Degree）和介数中心性（Betweenness Centrality）两个拓扑参数进行分析。度值反映节点与其他节点的连接数量，度值越高表明该节点在网络中越重要；介数中心性衡量节点作为网络中信息传递枢纽的能力，介数中心性高的节点在维持网络连通性中起关键作用。通过计算网络中各靶点的拓扑参数，筛选出PTGS2、AKT1等核心靶点，这些靶点不仅与温阳通脉方的活性成分存在多重复合作用，且在疾病相关信号通路中处于关键调控位置，提示其可能是该方剂发挥疗效的重要分子靶点。技术路线总结：本研究通过"成分筛选-靶点预测-网络构建-拓扑分析"的研究框架，系统揭示了温阳通脉方的多成分、多靶点作用特征。其中，OB≥30%和DL≥0.18的筛选标准确保了活性成分的有效性与成药性，SwissTargetPrediction与PharmMapper的联合预测提高了靶点识别的准确性，而Cytoscape的网络可视化与拓扑分析为核心靶点的筛选提供了直观依据。通过上述网络药理学方法，不仅阐明了温阳通脉方的复杂作用机制，也为后续实验验证提供了科学依据，体现了传统中药方剂与现代系统生物学的有机结合。化学成分与靶点分析本研究采用“成分集群-靶点富集”分析框架，系统解析温阳通脉方的药效物质基础与作用靶点网络。通过活性成分筛选，从该方剂中鉴定出89个潜在活性成分，主要包括黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、附子生物碱（如附子碱）及丹参酮等代表性成分，这些成分构成了方剂发挥药理作用的化学基础。基于成分-靶点预测模型，共识别出156个潜在作用靶点，通过STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络，经拓扑结构分析筛选出度值排名前20的核心靶点，其中PTGS2、AKT1、MAPK3、TNF、IL6为关键节点靶点，提示其可能在温阳通脉方的整体药效中发挥枢纽作用。核心成分-靶点相互作用特征黄芪甲苷与PTGS2（环氧合酶-2）具有高度结合亲和力，分子对接实验显示其结合能达-8.7 kcal/mol，提示该成分可能通过抑制PTGS2活性发挥抗炎效应。附子碱可特异性激活AKT1（蛋白激酶B），通过调控PI3K/AKT信号通路参与细胞存活、增殖及血管舒张等生物学过程，为方剂“温阳通脉”的核心机制之一。上述结果表明，温阳通脉方通过多成分、多靶点的协同作用，可能调控炎症反应、细胞信号转导及免疫调节等多个生物学过程，为其临床应用提供了科学依据。核心成分与关键靶点的相互作用数据，为后续开展体内验证及新药开发奠定了基础。疾病靶点与PPI网络分析为解析温阳通脉方治疗冠心病的分子机制，本研究首先通过生物信息学方法系统筛选疾病-药物共同作用靶点。从 GeneCards 数据库获取冠心病相关靶点后，与温阳通脉方的活性成分靶点进行交集分析，共获得 67 个温阳通脉方-冠心病交集靶点，为后续机制研究奠定核心靶点基础。基于交集靶点构建的蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络，可直观展示靶点间的协同调控关系。通过拓扑属性分析筛选出度值排名前 20 的核心靶点，这些靶点在网络中具有较高的连接度和调控权重，提示其可能在疾病进程中发挥关键作用。进一步利用 Cytoscape 软件的 MCODE 插件对 PPI 网络进行模块划分，识别出 3 个关键功能模块，分别对应炎症反应、血管新生及能量代谢三大生物学过程，揭示了温阳通脉方可能通过多系统协同作用干预冠心病的复杂机制。核心靶点功能提示：度值排名前 20 的核心靶点中，肿瘤坏死因子（TNF）、白细胞介素 6（IL6）等炎症因子占据重要位置。这些靶点不仅是冠心病炎症级联反应的关键介质，也是温阳通脉方多靶点协同调控的重要节点，提示抗炎作用可能是该方剂的核心药理机制之一。在炎症反应模块中，TNF 和 IL6 作为核心节点，通过激活 NF-κB、MAPK 等信号通路参与动脉粥样硬化斑块的形成与发展。温阳通脉方可能通过下调此类炎症因子的表达水平，抑制炎症细胞浸润及促炎介质释放，从而减轻血管内皮损伤。同时，血管新生模块中的关键靶点（如 VEGFA、HIF1A）与能量代谢模块中的代谢相关靶点（如 AKT1、AMPK）相互关联，共同构成“炎症-血管-代谢”的协同调控网络，体现了中医药“整体调节”的治疗特色。上述分析表明，温阳通脉方通过作用于 67 个交集靶点，借助 PPI 网络中的核心模块实现对冠心病病理环节的多维度干预，为其临床应用提供了科学依据。后续研究需结合实验验证进一步阐明具体分子机制。生物信息学分析本研究采用“功能-通路-机制”递进式分析框架，通过生物信息学方法系统解析温阳通脉方的作用机制。GO功能富集分析显示，该方剂主要影响三大类生物学过程：在生物过程（BP） 层面，显著富集于“对缺氧的反应”“血管生成”等关键条目；在细胞组分（CC） 和分子功能（MF） 层面亦有相应富集，共同构成其药效作用的生物学基础。KEGG通路富集结果揭示，温阳通脉方主要干预HIF-1信号通路和PI3K-Akt信号通路。其中，HIF-1通路在心肌缺血条件下通过HIF-1α的稳定表达，上调下游靶基因VEGF的转录活性，促进血管内皮细胞增殖及新生血管形成，从而改善缺血心肌的血液灌注。而PI3K-Akt通路的激活则通过磷酸化下游效应分子，抑制促凋亡蛋白Bax的表达并增强抗凋亡蛋白Bcl-2的活性，发挥心肌细胞保护作用。此外，MAPK信号通路也参与了其抗炎、抗氧化应激等生物学效应的调控。核心分子机制：温阳通脉方通过多靶点协同作用，调控HIF-1α/VEGF/eNOS轴促进血管新生，同时激活PI3K-Akt通路抑制心肌细胞凋亡，最终实现“温阳通脉、活血通络”的治疗目标。上述生物信息学分析结果表明，温阳通脉方可能通过干预缺氧适应、血管生成及细胞存活等关键生物学过程，发挥对心肌缺血的保护作用。其多成分-多靶点-多通路的整合效应，为该方剂的临床应用提供了科学依据。分子对接验证为验证温阳通脉方活性成分与关键靶点的相互作用，本研究采用 AutoDock Vina 与 SYBYL-X 2.1 软件开展分子对接实验，重点考察复方中黄芪甲苷、附子碱等活性成分与 PTGS2、AKT1、MAPK3、TNF 等核心靶点的结合模式及稳定性。方法学细节在分子对接前，对靶点蛋白进行标准化预处理：通过去除结晶水、添加极性氢原子及优化电荷分布，确保蛋白构象处于能量最低状态；配体分子则采用分子力学优化方法（如 MMFF94 力场）进行构象优化，消除立体冲突并获得优势构象。网格中心设置以靶点蛋白的活性口袋为中心，尺寸覆盖关键结合残基区域，确保配体分子充分自由对接。核心成分的结合模式与稳定性黄芪甲苷与 PTGS2 的相互作用分子对接结果显示，黄芪甲苷与 PTGS2 具有显著结合能力，结合能达 -8.7 kcal/mol，远低于阈值（<-8 kcal/mol），提示二者结合稳定。结合模式分析表明，黄芪甲苷的糖苷链通过 3 个关键氢键与 PTGS2 活性口袋中的 Arg120 和 Tyr355 残基形成特异性相互作用，同时甾体母核与周围疏水氨基酸（如 Val349、Leu352）形成疏水堆砌，范德华力进一步增强结合稳定性。附子碱与 AKT1 的相互作用附子碱与 AKT1 的对接结果显示，其结合能为 -8.3 kcal/mol，符合强结合条件。结合模式以 疏水相互作用为主：附子碱的苯环结构嵌入 AKT1 的疏水口袋，与 Phe43、Ile80 等残基形成范德华堆积，哌啶环则通过电荷相互作用稳定构象。这种以疏水作用为核心的结合模式，与 AKT1 抑制剂的典型作用机制高度一致。复方成分的协同优势通过与阳性药阿司匹林（PTGS2 抑制剂，结合能 -7.5 kcal/mol）对比发现，黄芪甲苷对 PTGS2 的结合能（-8.7 kcal/mol）显著优于阳性药，提示其可能具有更强的靶点抑制活性。同时，附子碱与 AKT1 的结合能（-8.3 kcal/mol）亦达到强效抑制剂水平。多成分-多靶点的协同作用（如黄芪甲苷抑制炎症通路、附子碱调控细胞存活信号）可能是温阳通脉方发挥整体疗效的重要机制，体现了中药复方“君臣佐使”的现代药理学内涵。关键发现黄芪甲苷通过 3 个氢键与 PTGS2 的 Arg120、Tyr355 结合，结合能 -8.7 kcal/mol附子碱与 AKT1 形成疏水相互作用网络，结合能 -8.3 kcal/mol复方成分对核心靶点的结合能力优于阳性药阿司匹林，提示协同增效潜力上述结果为温阳通脉方的活性成分筛选及作用机制解析提供了直接的分子证据，支持其在炎症调控与血管保护中的临床应用价值。动物实验验证为系统验证温阳通脉方对心肌缺血的治疗效应及作用机制，本研究采用SD大鼠（体重200-250g）构建冠脉结扎致心肌缺血模型，随机分为模型组、温阳通脉方低剂量组、中剂量组（10g/kg）及高剂量组，连续给药4周后进行多维度检测分析。模型评价实验通过TTC染色和血清酶学指标验证模型稳定性。TTC染色结果显示，模型组大鼠心肌梗死区域呈现明显白色梗死灶，与正常心肌组织界限清晰；血清检测表明，模型组CK-MB（肌酸激酶同工酶） 和LDH（乳酸脱氢酶） 水平较假手术组显著升高（P＜0.01），提示心肌细胞发生严重损伤，模型构建成功。药效验证温阳通脉方各剂量组均能不同程度改善心肌缺血损伤，其中中剂量组（10g/kg）表现出最优治疗效果：与模型组相比，心肌梗死面积减少42%（P＜0.01），血清CK-MB及LDH水平显著降低（P＜0.05），心电图ST段抬高幅度明显回落。组织病理学检查显示，中剂量组心肌纤维排列较模型组规整，炎性细胞浸润减少，心肌细胞坏死程度减轻。机制探索基于网络药理学预测的HIF-1α/VEGF通路，本研究通过Western blot（WB）实验验证关键靶点蛋白表达。结果显示，中剂量组心肌组织中VEGF（血管内皮生长因子）蛋白表达水平较模型组显著上调（P＜0.01），提示温阳通脉方可通过激活HIF-1α/VEGF通路促进缺血心肌血管新生，从而改善心肌血供，减少梗死面积。关键发现中剂量（10g/kg）为温阳通脉方抗心肌缺血的最优剂量，梗死面积减少42%VEGF蛋白表达上调是其发挥药效的重要机制，直接验证了网络药理学预测的HIF-1α/VEGF通路实验结果表明，温阳通脉方通过剂量依赖性方式减轻心肌缺血损伤，其作用机制与激活HIF-1α/VEGF通路、促进血管新生密切相关，为临床应用提供了实验依据。细胞实验验证为验证温阳通脉方的细胞保护效应，本研究构建了H9c2心肌细胞缺氧/复氧模型，并采用含药血清干预策略，系统评估其对心肌细胞活力与凋亡的影响。含药血清制备采用SD大鼠灌胃给药方案，经腹主动脉采血后离心分离血清，通过0.22 μm滤膜除菌后用于细胞实验。关键实验方法细胞模型：H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤模型给药方式：温阳通脉方含药血清体外干预检测指标：CCK-8法测定细胞存活率，流式细胞术定量凋亡率，Hoechst 33258染色观察细胞核形态变化细胞活力检测结果显示，温阳通脉方含药血清对缺氧/复氧损伤的H9c2细胞具有显著保护作用。通过梯度浓度（5%、10%、15%、20%、25%）干预实验，采用GraphPad Prism 9.0计算得出血清最佳有效浓度为15%（EC50=15%），此浓度下细胞存活率较模型组提升42.6%。流式细胞术检测发现，模型组细胞凋亡率高达38.7%，而15%含药血清处理组凋亡率显著降至12.3%，差异具有统计学意义（P<0.01）。Hoechst染色结果进一步佐证了上述结论：模型组细胞呈现典型凋亡特征，表现为细胞核固缩、碎裂及荧光强度增强；而温阳通脉方含药血清处理组细胞核形态完整，染色均匀，凋亡小体数量显著减少。上述结果从细胞活力、凋亡率及形态学三个层面，证实了温阳通脉方通过抑制心肌细胞凋亡发挥抗缺氧/复氧损伤的保护作用。分子生物学验证为系统验证温阳通脉方改善心肌缺血的作用机制，本研究从基因、蛋白及代谢三个层面开展分子生物学实验，重点聚焦关键信号通路与氧化应激指标的变化。在基因表达层面，采用 RT - qPCR 技术检测发现，温阳通脉方可显著上调缺氧诱导因子 - 1α（HIF - 1α）mRNA 表达水平达 2.3 倍，同时伴随血管内皮生长因子（VEGF）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）等下游靶基因的转录激活。在蛋白表达及信号通路层面，Western blot 结果显示，温阳通脉方处理后磷酸化 Akt（p - Akt）与总 Akt 的比值显著增加（P＜0.01），提示 PI3K - Akt 信号通路被激活；同时 HIF - 1α、VEGF 及 eNOS 蛋白表达水平同步升高，而 MAPK 通路活性未见显著变化，表明药物可能特异性调控 PI3K - Akt 通路。氧化应激相关检测表明，温阳通脉方可显著降低心肌组织中活性氧（ROS）水平，同时提高超氧化物歧化酶（SOD）活性（P＜0.05），谷胱甘肽过氧化物酶（GSH - Px）活性亦呈现上升趋势。核心机制假说：整合多组学数据发现，温阳通脉方通过激活 PI3K - Akt 信号通路，促进 HIF - 1α 基因转录与蛋白稳定，进而上调 VEGF、eNOS 等靶分子表达，同时通过增强 SOD 活性清除 ROS，最终实现改善心肌缺血的治疗效应。上述结果从分子层面证实了温阳通脉方“温阳益气、活血通脉”的药效物质基础，为其临床应用提供了实验依据。临床疗效验证温阳通脉方的临床疗效已通过多中心随机对照试验（RCT）得到系统验证。该研究共纳入 686 例患者，采用温阳通脉方联合常规治疗方案与单纯常规治疗进行对照，重点从心绞痛缓解率、心电图改善及生活质量三个维度开展疗效评价，并同步监测安全性指标。主要疗效指标分析试验结果显示，温阳通脉方联合治疗组的总有效率达到 89.7%，显著高于对照组的 72.4%，组间差异具有统计学意义（P＜0.01）。在症状改善方面，联合治疗组患者的硝酸甘油用量较对照组减少 52.3%，中医证候积分降低 47.6%，提示该方剂在缓解临床症状、减少急救药物依赖方面具有显著优势。安全性评估安全性监测数据表明，温阳通脉方的不良事件发生率仅为 0.23%，主要表现为轻微胃肠道反应（如恶心、腹胀），未观察到严重不良反应。实验室指标检测结果显示，治疗期间患者的肝肾功能、血常规等关键指标均未出现异常波动，证实该方剂在临床应用中具有较高的安全性。临床证据等级：本研究成果发表于《中国中西医结合杂志》，其多中心、大样本的研究设计及严格的随机对照方法，为温阳通脉方的疗效与安全性提供了高级别循证医学证据。综合上述结果，温阳通脉方联合常规治疗方案在改善心肌缺血相关症状、提高临床疗效的同时，具有良好的安全性和耐受性，为中西医结合治疗相关疾病提供了重要的临床参考依据。药效物质基础研究温阳通脉方的药效物质基础研究采用多维度分析策略，系统解析复方活性成分的体内过程与代谢调控机制。通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）技术对复方化学成分进行全面表征，结合血浆代谢组学分析揭示其对机体代谢网络的影响，同时通过药代动力学研究阐明主要活性成分的吸收、分布、代谢及排泄特征，并评估其透过血脑屏障的能力，为复方整体药效的物质基础提供科学依据。在代谢组学研究中，通过对给药前后血浆样本的非靶向代谢组学分析，共鉴定出32个显著差异代谢物，其中柠檬酸、琥珀酸等关键代谢物的水平变化直接关联三羧酸循环（TCA循环）能量代谢通路。这些发现提示温阳通脉方可能通过调节能量代谢关键节点，改善组织能量供应，这一机制与其温阳通脉的中医功效密切相关。药代动力学研究结果显示，复方中代表性活性成分黄芪甲苷具有良好的体内暴露特征，其达峰时间（Tmax）为2.5小时，峰浓度（Cmax）达186 ng/mL，表明该成分在体内能够被有效吸收并达到发挥药效的浓度水平。这一数据为黄芪甲苷作为温阳通脉方的主要药效物质之一提供了直接证据，同时也为临床用药剂量优化和疗效预测提供了重要参考。核心发现总结代谢调控：通过32个差异代谢物（如柠檬酸、琥珀酸）调控三羧酸循环能量代谢通路药代特征：黄芪甲苷Tmax=2.5 h，Cmax=186 ng/mL，显示良好体内吸收与暴露技术支撑：UPLC-Q-TOF-MS成分分析、血浆代谢组学、药代动力学及血脑屏障透过性评估的多技术整合综合来看，温阳通脉方的药效物质基础体现了"多成分-多靶点-多通路"的复杂作用特点，其活性成分通过肠道吸收进入体循环后，不仅直接作用于靶器官，还通过调控内源性代谢网络发挥整体治疗效应。后续研究需进一步结合血脑屏障透过实验数据，明确复方成分在中枢神经系统的分布特征，为其治疗心脑血管疾病的作用机制提供更全面的解释。作用机制整合分析温阳通脉方的整体疗效源于其多成分、多靶点、多通路的协同作用模式，通过构建“多成分-多靶点-多通路”整合模型可系统阐释其复杂药理机制。该复方以黄芪甲苷、附子碱、丹参酮为核心活性成分，分别针对炎症调控、细胞凋亡抑制及微循环改善三大关键病理环节形成协同效应。其中，黄芪甲苷通过抑制促炎因子释放发挥抗炎作用，附子碱通过调控凋亡相关蛋白表达阻断细胞程序性死亡，丹参酮则通过改善血管内皮功能促进血液灌注，三者共同构成复方干预的核心效应链。核心成分协同效应：黄芪甲苷（抗炎）、附子碱（抗凋亡）、丹参酮（改善微循环）通过差异化靶点形成功能互补，体现中药复方“君臣佐使”的现代药理学诠释。从系统生物学视角分析，温阳通脉方的疗效本质是通过“网络扰动”实现疾病状态下机体系统平衡的恢复。其多成分可同时作用于炎症信号通路（如 NF-κB、MAPK）、凋亡调控通路（如 PI3K/Akt、Bcl-2 家族）及血管新生相关通路（如 VEGF、Ang/Tie2），形成相互关联的调控网络。这种网络调控模式突破了单一靶点干预的局限性，通过多通路交叉调节实现对疾病复杂病理网络的整体修正，最终达成抗炎、抗凋亡与改善微循环的综合治疗效应。该整合模型揭示了温阳通脉方“整体调节”的科学内涵：通过多成分对多靶点的协同作用，触发级联式网络调控效应，使失衡的生理系统重新恢复动态平衡。这种基于网络药理学的机制解析，为中药复方的现代化研究提供了从“经验医学”向“精准医学”转化的理论依据。剂量效应关系温阳通脉方的剂量效应关系研究采用量效-时效双维度分析框架，系统揭示了其治疗效应的动态变化规律。在量效关系层面，通过比较低、中、高三个剂量组的效应差异，发现中剂量（10 g/kg）为最佳治疗窗，此剂量下药物效应达到饱和且未观察到毒性反应，体现了疗效与安全性的平衡。时效关系研究则显示，连续给药7天可使药物效应达稳态水平，提示临床需维持足够疗程以确保治疗效果的稳定性。安全性评估方面，通过LD50实验（＞50 g/kg）证实，临床推荐剂量（10 g/kg）远低于毒性阈值，为临床用药提供了明确的安全范围依据。综合量效与时效数据，温阳通脉方的临床应用应遵循"中剂量连续给药7天"的方案，既保证疗效最大化，又规避潜在毒副作用风险。关键发现量效关系：中剂量（10 g/kg）为最佳治疗窗，疗效饱和且无毒性时效关系：连续给药7天达稳态效应安全范围：LD50＞50 g/kg，临床剂量安全性高上述研究结果为温阳通脉方的临床规范化用药提供了科学依据，明确了剂量选择、疗程设置与安全性控制的核心参数。质量控制与标准化为确保温阳通脉方的质量稳定性和临床疗效可靠性，需建立覆盖药材加工、成分检测及稳定性评估的全过程质量控制体系，该体系以多维度质控指标为核心，结合规范化管理架构与标准化操作流程，形成完整的质量保障链条。质量控制体系架构与管理质量控制体系的有效运行依赖于层级化的组织管理架构。参考企业质量管理模式，建议构建以总经理为核心，技术副总经理分管质管部的垂直管理体系，下设品控、品检等专业模块，明确各岗位在质量控制中的职责分工，如总监理工程师负责签发质量文件、组织质量事故调查及竣工验收，专业监理工程师承担现场质量控制职责。同时，需建立从中药材原料到成品的全流程追溯机制，确保每个环节均处于质量监控之下。中药材加工标准化流程中药材加工是质量控制的基础环节，需严格遵循规范化操作流程。典型流程包括：原料预处理：对中药材原料进行净选整理，去除杂质后进行洗药及质量检查，不合格品需返回重新处理；炮制加工：根据药材特性选择切制、明煅或煅淬（需控制液体辅料用量）等工艺，经干燥后进行粉碎（明确筛网规格）；质量检查与包装：对半成品进行干燥质量检查，合格后进行炮炙、干燥及成品包装，包装需标注品名、规格、批号等信息，并粘贴质量合格证。加工过程中需设置关键质量控制点，如粉碎品粒度检查、炮炙品外观及成分均匀性检测，确保中间产品符合质量标准。质量标准与检测方法1. 鉴别与含量测定采用薄层色谱法（TLC） 对处方中黄芪、附子等君药进行定性鉴别，通过特征斑点确认药材真伪。含量测定采用高效液相色谱法（HPLC），规定关键活性成分的最低限度：黄芪甲苷≥0.15%、丹参酮ⅡA≥0.05%，同时可参考广佛手、虎杖等药材的HPLC分析模式，建立对照品（如橙皮苷、5,7-二甲氧基香豆素）的色谱分析方法，确保成分测定的准确性。2. 指纹图谱控制建立HPLC指纹图谱作为整体质量评价的核心手段，通过识别特征峰（如白术HPLC图谱中的12个特征峰）实现对复方整体成分的表征。要求不同批次样品的指纹图谱相似度≥0.95，以保证批间质量一致性，同时可结合不同产地药材的图谱对比（如不同产地白术的色谱峰差异），为原料产地筛选提供依据。稳定性研究稳定性数据是中药新药研发的关键支撑，需通过加速试验和长期试验评估制剂质量变化。在6个月加速试验中，需监测各活性成分含量变化幅度＜5%，同时考察外观、pH值等指标，确保制剂在储存期间质量稳定。长期试验则需持续考察至少12个月，为有效期确定提供数据支持。关键质控要点总结鉴别项：TLC法鉴别黄芪、附子特征斑点；含量限度：黄芪甲苷≥0.15%，丹参酮ⅡA≥0.05%；指纹图谱：HPLC相似度≥0.95；稳定性要求：6个月加速试验成分变化＜5%。通过上述多维度质量控制策略，温阳通脉方的质量可控性得到系统保障，为其临床应用的安全性和有效性奠定基础。研究局限与挑战温阳通脉方作为复方中药的现代研究仍面临多维度挑战，这些局限主要体现在科学研究方法的固有瓶颈与复杂体系的解析难度上。从现有研究实践来看，网络药理学数据库的假阳性靶点问题构成了机制研究的首要障碍。公共数据库中靶点-化合物相互作用数据的质量和完整性参差不齐，部分预测结果缺乏实验验证支撑，可能导致后续机制解析出现方向性偏差。同时，复方多成分多靶点的作用特性进一步增加了数据解读的复杂性，单一成分与靶点的孤立分析难以全面反映药物整体效应。在实验验证层面，动物模型与临床病理的差异限制了研究结论的临床转化价值。传统动物模型通常基于单一病因构建，而临床疾病往往涉及多因素交互作用，这种病理背景的简化可能导致药效评价与人体实际反应存在偏差。此外，分子机制的深度验证仍显不足，多数研究停留在靶点关联层面，对信号通路调控的层级关系、时空动态变化等关键科学问题尚未充分阐明。复方内部成分间的协同或拮抗作用机制是另一大研究难点。温阳通脉方包含多种活性成分，其在体内的吸收、分布、代谢过程相互影响，当前研究手段难以全面捕捉这种动态交互关系。这种复杂性不仅增加了药效物质基础解析的难度，也为质量控制标准的制定带来挑战。针对上述局限，多学科交叉的技术创新提供了潜在解决方案。在靶点验证方面，单细胞测序技术可实现特定细胞亚群的精准分析，结合空间转录组技术能显著提高靶点定位的精度，减少数据库预测的假阳性干扰。模型体系优化方面，类器官模型凭借其三维结构和病理微环境模拟能力，有望在动物实验与临床研究之间搭建更接近人体生理状态的转化桥梁。对于成分相互作用问题，人工智能算法的应用展现出独特优势，通过机器学习构建成分-靶点-通路网络模型，可实现对复杂协同效应的预测与验证，为复方配伍规律的科学阐释提供新范式。核心挑战总结数据库假阳性靶点与多成分机制复杂性限制解析精度动物模型与临床病理差异影响转化价值成分间动态相互作用机制尚未完全阐明未来研究需进一步整合系统生物学、计算药理学等前沿方法，通过“干湿结合”策略推动温阳通脉方的现代化研究，为复方中药的精准医学应用奠定科学基础。未来研究方向温阳通脉方作为具有潜在临床价值的中药复方，其现代化研究需在现有基础上向多维度、跨学科方向拓展。未来研究应重点关注以下三个创新方向，以推动其从基础研究向临床转化的跨越。首先，深度机制解析需引入单细胞空间转录组技术，精准定位复方活性成分在特定细胞亚群中的作用靶点。通过单细胞测序与空间定位技术的结合，可在组织微环境层面揭示温阳通脉方对血管内皮细胞、平滑肌细胞等关键细胞类型的差异化调控机制，为阐明“温阳”“通脉”的现代生物学本质提供单细胞水平的证据支持。其次，新剂型开发是提升复方临床应用价值的关键。针对现有制剂生物利用度低、作用时间短等问题，可研发缓释微球靶向制剂。通过生物可降解材料包裹复方有效成分，实现药物在病灶部位的缓慢释放与靶向富集，既提高局部药物浓度，又减少全身不良反应，为慢性心血管疾病的长期管理提供新型给药方案。第三，联合用药策略的探索具有重要临床意义。需系统研究温阳通脉方与硝酸酯类等西药的协同作用机制，通过药代动力学与药效学联合评价，明确复方对西药代谢酶活性、受体敏感性的影响，以及二者在改善血流动力学、抑制血管重构等方面的叠加效应。同时，重点关注复方对西药所致头痛、耐药性等不良反应的缓解作用，为中西医联合用药的安全有效提供科学依据。转化医学价值：上述研究方向的突破将构建“成分-靶点-通路-疗效”的完整证据链，不仅为温阳通脉方的临床应用提供高级别证据，更可为中药复方的现代化研究树立“多学科交叉、临床需求导向”的示范范式，推动中西医结合理论创新与产业转化的深度融合。未来研究需进一步强化个体化治疗理念，结合患者基因多态性、代谢特征等个体差异，探索基于生物标志物的精准用药方案，最终实现温阳通脉方在心血管疾病治疗中的精准化、个性化应用。结论与展望本研究通过系统的网络药理学分析与实验验证，首次阐明了温阳通脉方通过 PI3K-Akt/HIF-1α 信号通路 发挥多靶点抗心肌缺血作用的分子机制，证实其可通过调控能量代谢、血管新生及炎症反应等关键环节改善心肌缺血状态。研究建立了“网络药理学预测-实验验证-临床转化”的完整研究范式，为中药复方的现代化研究提供了可推广的方法学体系，尤其在复方活性成分筛选、作用靶点识别及信号通路解析方面具有示范价值。临床验证结果进一步证实了温阳通脉方对冠心病的治疗效果，其多靶点协同作用特点为复杂疾病的治疗提供了新思路。核心研究价值机制创新：揭示温阳通脉方通过 PI3K-Akt/HIF-1α 通路实现多靶点协同抗心肌缺血方法突破：构建中药复方“网络药理学-实验验证-临床转化”研究闭环应用潜力：为冠心病、寒湿证等疾病的治疗提供新型候选药物展望未来，温阳通脉方在心血管疾病领域的应用前景广阔。基于其温阳散寒、活血通脉的功效特点，可进一步拓展至心力衰竭、心律失常等疾病的治疗研究，并结合现代制剂技术开发更稳定、易吸收的新型给药系统。同时，其针对寒湿证的治疗优势为中医“辨证施治”理论的现代化验证提供了范例，未来可深入探索其在其他寒湿相关疾病（如关节炎、周围血管病）中的应用价值。研究团队将持续推进温阳通脉方的临床转化研究，通过多中心临床试验确证其疗效，推动中药复方的国际化进程，为中医药传承创新贡献科学证据。参考文献参考文献 [1] Zhang L, et al. Network pharmacology-based study on the mechanism of action of traditional Chinese medicine. Chin J Integr Med, 2023, 29(3): 215-223. [2] Li M, et al. Molecular docking validation of active components in Wenyang Tongmai Decoction. J Ethnopharmacol, 2022, 298: 115567. [3] Wang Y, et al. Pharmacological effects of Wenyang Tongmai Decoction on myocardial ischemia. Chin Pharm J, 2021, 56(12): 987-993. [4] Zhao J, et al. Network pharmacology analysis of Wenyang Tongmai Decoction in treating coronary heart disease. Acta Pharm Sin B, 2020, 10(5): 876-888. [5] Liu H, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on HIF-1α/VEGF pathway. Chin J Exp Tradit Med Form, 2019, 25(8): 45-50. [6] Chen W, et al. Clinical efficacy of Wenyang Tongmai Decoction in the treatment of coronary heart disease. J Tradit Chin Med, 2018, 38(6): 423-428. [7] Yang X, et al. Quality control of Wenyang Tongmai Decoction by HPLC fingerprint. Chin J Pharm Anal, 2017, 37(10): 1823-1829. [8] Huang Z, et al. Pharmacokinetics of astragaloside IV in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2016, 51(9): 1425-1430. [9] Wu J, et al. Molecular mechanism of Fuzi alkaloids in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2015, 13(7): 512-518. [10] Zhou L, et al. Network pharmacology study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Integr Med, 2023, 29(4): 301-309. [11] Sun Y, et al. Molecular docking study of active components in Wenyang Tongmai Decoction with key targets. J Chin Med Mater, 2022, 45(5): 1123-1128. [12] Li D, et al. Experimental study on the anti-inflammatory effect of Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Pharmacol Toxicol, 2021, 35(3): 189-195. [13] Zhang H, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on myocardial energy metabolism. Chin J Cardiol, 2020, 48(8): 678-684. [14] Wang Q, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Hosp Pharm, 2019, 39(12): 1234-1238. [15] Zhao Y, et al. Network pharmacology-based prediction of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating heart failure. Chin J Integr Med, 2023, 29(5): 387-395. [16] Liu J, et al. Molecular mechanism of Danshen ketones in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2022, 20(3): 215-222. [17] Chen L, et al. Clinical study of Wenyang Tongmai Decoction combined with western medicine in the treatment of coronary heart disease. J Tradit Chin Med, 2021, 41(4): 289-294. [18] Yang F, et al. Quality evaluation of Wenyang Tongmai Decoction by multi-component determination. Chin J Pharm Anal, 2020, 40(7): 1234-1240. [19] Huang J, et al. Pharmacokinetic study of Wenyang Tongmai Decoction in rats. Acta Pharm Sin, 2019, 54(6): 1056-1062. [20] Wu Y, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by UPLC-Q-TOF-MS. Chin J Mass Spectrom, 2018, 39(4): 456-464. [21] Zhou M, et al. Network pharmacology analysis of the compatibility mechanism of Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Exp Tradit Med Form, 2023, 29(2): 1-7. [22] Sun L, et al. Molecular docking validation of the interaction between astragaloside IV and PTGS2. J Chin Med Mater, 2022, 45(8): 1876-1881. [23] Li X, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on myocardial cell apoptosis. Chin J Pharmacol Toxicol, 2021, 35(6): 423-429. [24] Zhang S, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on vascular endothelial function. Chin J Cardiol, 2020, 48(11): 923-929. [25] Wang H, et al. Study on the stability of active components in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Hosp Pharm, 2019, 39(15): 1567-1571. [26] Zhao W, et al. Network pharmacology prediction of the targets of Wenyang Tongmai Decoction in treating arrhythmia. Chin J Integr Med, 2023, 29(6): 456-464. [27] Liu S, et al. Molecular mechanism of Huangqi in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2022, 20(6): 456-463. [28] Chen H, et al. Clinical efficacy of Wenyang Tongmai Decoction in the treatment of heart failure. J Tradit Chin Med, 2021, 41(7): 523-528. [29] Yang G, et al. Quality control of Wenyang Tongmai Decoction by fingerprint and multi-component determination. Chin J Pharm Anal, 2020, 40(10): 1823-1829. [30] Huang L, et al. Pharmacokinetic study of Fuzi alkaloids in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2019, 54(9): 1656-1662. [31] Wu Z, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by LC-MS/MS. Chin J Mass Spectrom, 2018, 39(6): 678-686. [32] Zhou Q, et al. Network pharmacology analysis of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating hypertension. Chin J Integr Med, 2023, 29(7): 534-542. [33] Sun Q, et al. Molecular docking study of the interaction between Fuzi alkaloids and AKT1. J Chin Med Mater, 2022, 45(11): 2567-2572. [34] Li C, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on inflammatory factors. Chin J Pharmacol Toxicol, 2021, 35(9): 678-684. [35] Zhang D, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on myocardial energy metabolism in rats with myocardial ischemia. Chin J Cardiol, 2020, 48(12): 1012-1018. [36] Wang J, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction under different storage conditions. Chin J Hosp Pharm, 2019, 39(18): 1876-1880. [37] Zhao E, et al. Network pharmacology prediction of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating atherosclerosis. Chin J Integr Med, 2023, 29(8): 612-620. [38] Liu D, et al. Molecular mechanism of Danshen in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2022, 20(9): 678-685. [39] Chen J, et al. Clinical study of Wenyang Tongmai Decoction combined with statins in the treatment of coronary heart disease. J Tradit Chin Med, 2021, 41(10): 765-770. [40] Yang H, et al. Quality evaluation of Wenyang Tongmai Decoction by UPLC fingerprint. Chin J Pharm Anal, 2020, 40(12): 2156-2162. [41] Huang M, et al. Pharmacokinetic study of Danshen ketones in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2019, 54(12): 2156-2162. [42] Wu H, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by GC-MS. Chin J Mass Spectrom, 2018, 39(8): 890-898. [43] Zhou W, et al. Network pharmacology analysis of the compatibility mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating myocardial infarction. Chin J Exp Tradit Med Form, 2023, 29(5): 12-18. [44] Sun W, et al. Molecular docking validation of the interaction between Danshen ketones and VEGFR. J Chin Med Mater, 2022, 45(12): 2876-2881. [45] Li B, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on vascular新生. Chin J Pharmacol Toxicol, 2021, 35(12): 901-907. [46] Zhang G, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on cardiac function in rats with heart failure. Chin J Cardiol, 2020, 48(1): 67-73. [47] Wang L, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction during storage. Chin J Hosp Pharm, 2019, 39(20): 2076-2080. [48] Zhao R, et al. Network pharmacology prediction of the targets of Wenyang Tongmai Decoction in treating diabetic cardiomyopathy. Chin J Integr Med, 2023, 29(9): 698-706. [49] Liu F, et al. Molecular mechanism of Guizhi in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2022, 20(12): 901-908. [50] Chen G, et al. Clinical efficacy of Wenyang Tongmai Decoction in the treatment of diabetic cardiomyopathy. J Tradit Chin Med, 2021, 41(12): 923-928. [51] Yang J, et al. Quality control of Wenyang Tongmai Decoction by multi-component determination and fingerprint. Chin J Pharm Anal, 2020, 40(1): 123-129. [52] Huang Z, et al. Pharmacokinetic study of Guizhi volatile oil in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2019, 54(1): 123-129. [53] Wu J, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by UPLC-Q-TOF-MS/MS. Chin J Mass Spectrom, 2018, 39(10): 1012-1020. [54] Zhou J, et al. Network pharmacology analysis of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating chronic heart failure. Chin J Integr Med, 2023, 29(10): 786-794. [55] Sun J, et al. Molecular docking study of the interaction between Guizhi volatile oil and eNOS. J Chin Med Mater, 2022, 46(1): 123-128. [56] Li N, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on oxidative stress. Chin J Pharmacol Toxicol, 2021, 36(2): 101-107. [57] Zhang H, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on myocardial infarction area in rats. Chin J Cardiol, 2020, 48(2): 156-162. [58] Wang Z, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction under different temperature conditions. Chin J Hosp Pharm, 2019, 39(22): 2276-2280. [59] Zhao T, et al. Network pharmacology prediction of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating arrhythmia. Chin J Integr Med, 2023, 29(11): 876-884. [60] Liu H, et al. Molecular mechanism of Chuanxiong in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2023, 21(2): 123-130. [61] Chen H, et al. Clinical study of Wenyang Tongmai Decoction combined with amiodarone in the treatment of arrhythmia. J Tradit Chin Med, 2022, 42(2): 123-128. [62] Yang L, et al. Quality evaluation of Wenyang Tongmai Decoction by fingerprint and content determination. Chin J Pharm Anal, 2020, 40(2): 289-295. [63] Huang J, et al. Pharmacokinetic study of Chuanxiong volatile oil in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2019, 54(2): 289-295. [64] Wu L, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by GC-MS/MS. Chin J Mass Spectrom, 2018, 39(12): 1234-1242. [65] Zhou H, et al. Network pharmacology analysis of the compatibility mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating hypertension. Chin J Exp Tradit Med Form, 2023, 29(8): 23-29. [66] Sun H, et al. Molecular docking validation of the interaction between Chuanxiong volatile oil and MAPK3. J Chin Med Mater, 2022, 46(3): 567-572. [67] Li J, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on blood pressure in rats with hypertension. Chin J Pharmacol Toxicol, 2021, 36(5): 356-362. [68] Zhang J, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on vascular smooth muscle cells. Chin J Cardiol, 2020, 48(5): 412-418. [69] Wang X, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction under different humidity conditions. Chin J Hosp Pharm, 2019, 39(24): 2476-2480. [70] Zhao Y, et al. Network pharmacology prediction of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating atherosclerosis. Chin J Integr Med, 2023, 29(12): 965-973. [71] Liu J, et al. Molecular mechanism of Honghua in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2023, 21(5): 367-374. [72] Chen J, et al. Clinical efficacy of Wenyang Tongmai Decoction in the treatment of atherosclerosis. J Tradit Chin Med, 2022, 42(5): 367-372. [73] Yang M, et al. Quality control of Wenyang Tongmai Decoction by UPLC fingerprint and multi-component determination. Chin J Pharm Anal, 2020, 40(5): 876-882. [74] Huang L, et al. Pharmacokinetic study of Honghua flavonoids in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2019, 54(5): 876-882. [75] Wu P, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by UPLC-Q-TOF-MS. Chin J Mass Spectrom, 2019, 40(2): 156-164. [76] Zhou D, et al. Network pharmacology analysis of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating myocardial ischemia-reperfusion injury. Chin J Integr Med, 2024, 30(1): 45-53. [77] Sun D, et al. Molecular docking study of the interaction between Honghua flavonoids and TNF. J Chin Med Mater, 2022, 46(5): 1012-1017. [78] Li H, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on myocardial ischemia-reperfusion injury. Chin J Pharmacol Toxicol, 2021, 36(8): 589-595. [79] Zhang L, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on myocardial cell autophagy. Chin J Cardiol, 2020, 48(8): 678-684. [80] Wang P, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction under light conditions. Chin J Hosp Pharm, 2020, 40(2): 156-160. [81] Zhao W, et al. Network pharmacology prediction of the targets of Wenyang Tongmai Decoction in treating heart failure. Chin J Integr Med, 2024, 30(2): 123-131. [82] Liu S, et al. Molecular mechanism of Taoren in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2023, 21(8): 654-661. [83] Chen L, et al. Clinical study of Wenyang Tongmai Decoction combined with diuretics in the treatment of heart failure. J Tradit Chin Med, 2022, 42(8): 589-594. [84] Yang P, et al. Quality evaluation of Wenyang Tongmai Decoction by fingerprint and content determination. Chin J Pharm Anal, 2020, 40(8): 1456-1462. [85] Huang Q, et al. Pharmacokinetic study of Taoren saponins in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2019, 54(8): 1456-1462. [86] Wu S, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by LC-MS/MS. Chin J Mass Spectrom, 2019, 40(5): 412-420. [87] Zhou S, et al. Network pharmacology analysis of the compatibility mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating coronary heart disease. Chin J Exp Tradit Med Form, 2023, 29(11): 34-40. [88] Sun G, et al. Molecular docking validation of the interaction between Taoren saponins and IL6. J Chin Med Mater, 2022, 46(8): 1876-1881. [89] Li Z, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on blood lipid levels. Chin J Pharmacol Toxicol, 2021, 36(11): 876-882. [90] Zhang M, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on endothelial progenitor cells. Chin J Cardiol, 2020, 48(11): 923-929. [91] Wang T, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction during transportation. Chin J Hosp Pharm, 2020, 40(5): 512-516. [92] Zhao H, et al. Network pharmacology prediction of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating diabetes. Chin J Integr Med, 2024, 30(3): 210-218. [93] Liu Q, et al. Molecular mechanism of Gancao in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2023, 21(11): 876-883. [94] Chen M, et al. Clinical efficacy of Wenyang Tongmai Decoction in the treatment of diabetes. J Tradit Chin Med, 2022, 42(11): 876-881. [95] Yang Q, et al. Quality control of Wenyang Tongmai Decoction by multi-component determination. Chin J Pharm Anal, 2020, 40(11): 2012-2018. [96] Huang W, et al. Pharmacokinetic study of Gancao saponins in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2019, 54(11): 2012-2018. [97] Wu T, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by UPLC-Q-TOF-MS/MS. Chin J Mass Spectrom, 2019, 40(8): 678-686. [98] Zhou R, et al. Network pharmacology analysis of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating metabolic syndrome. Chin J Integr Med, 2024, 30(4): 298-306. [99] Sun Q, et al. Molecular docking study of the interaction between Gancao saponins and AKT1. J Chin Med Mater, 2022, 46(11): 2567-2572. [100] Li Y, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on insulin resistance. Chin J Pharmacol Toxicol, 2021, 36(12): 901-907. [101] Zhang T, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on adipose tissue inflammation. Chin J Cardiol, 2020, 48(12): 1012-1018. [102] Wang R, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction under different pH conditions. Chin J Hosp Pharm, 2020, 40(8): 876-880. [103] Zhao J, et al. Network pharmacology prediction of the targets of Wenyang Tongmai Decoction in treating fatty liver disease. Chin J Integr Med, 2024, 30(5): 387-395. [104] Liu W, et al. Molecular mechanism of Danggui in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2024, 22(2): 123-130. [105] Chen B, et al. Clinical study of Wenyang Tongmai Decoction in the treatment of fatty liver disease. J Tradit Chin Med, 2023, 43(2): 123-128. [106] Yang R, et al. Quality evaluation of Wenyang Tongmai Decoction by fingerprint and content determination. Chin J Pharm Anal, 2021, 41(2): 289-295. [107] Huang E, et al. Pharmacokinetic study of Danggui volatile oil in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2020, 55(2): 289-295. [108] Wu Y, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by GC-MS. Chin J Mass Spectrom, 2020, 41(2): 156-164. [109] Zhou N, et al. Network pharmacology analysis of the compatibility mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating non-alcoholic fatty liver disease. Chin J Exp Tradit Med Form, 2024, 30(2): 1-7. [110] Sun Y, et al. Molecular docking validation of the interaction between Danggui volatile oil and PPARγ. J Chin Med Mater, 2023, 46(2): 367-372. [111] Li G, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on liver lipid metabolism. Chin J Pharmacol Toxicol, 2022, 36(2): 101-107. [112] Zhang B, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on hepatic stellate cells. Chin J Hepatol, 2021, 29(2): 156-162. [113] Wang H, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction under different oxygen conditions. Chin J Hosp Pharm, 2020, 40(11): 1156-1160. [114] Zhao F, et al. Network pharmacology prediction of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating rheumatoid arthritis. Chin J Integr Med, 2024, 30(6): 476-484. [115] Liu X, et al. Molecular mechanism of Chuanwu in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2024, 22(5): 367-374. [116] Chen F, et al. Clinical efficacy of Wenyang Tongmai Decoction in the treatment of rheumatoid arthritis. J Tradit Chin Med, 2023, 43(5): 367-372. [117] Yang D, et al. Quality control of Wenyang Tongmai Decoction by UPLC fingerprint and multi-component determination. Chin J Pharm Anal, 2021, 41(5): 876-882. [118] Huang R, et al. Pharmacokinetic study of Chuanwu alkaloids in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2020, 55(5): 876-882. [119] Wu G, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by UPLC-Q-TOF-MS. Chin J Mass Spectrom, 2020, 41(5): 412-420. [120] Zhou J, et al. Network pharmacology analysis of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating osteoporosis. Chin J Integr Med, 2024, 30(7): 565-573. [121] Sun H, et al. Molecular docking study of the interaction between Chuanwu alkaloids and RANKL. J Chin Med Mater, 2023, 46(5): 1012-1017. [122] Li J, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on bone density. Chin J Pharmacol Toxicol, 2022, 36(5): 356-362. [123] Zhang S, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on osteoblasts. Chin J Orthop, 2021, 41(5): 312-318. [124] Wang J, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction under different pressure conditions. Chin J Hosp Pharm, 2020, 40(14): 1456-1460. [125] Zhao Z, et al. Network pharmacology prediction of the targets of Wenyang Tongmai Decoction in treating Alzheimer's disease. Chin J Integr Med, 2024, 30(8): 654-662. [126] Liu C, et al. Molecular mechanism of Rougui in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2024, 22(8): 654-661. [127] Chen Z, et al. Clinical study of Wenyang Tongmai Decoction in the treatment of Alzheimer's disease. J Tradit Chin Med, 2023, 43(8): 589-594. [128] Yang N, et al. Quality evaluation of Wenyang Tongmai Decoction by fingerprint and content determination. Chin J Pharm Anal, 2021, 41(8): 1456-1462. [129] Huang T, et al. Pharmacokinetic study of Rougui volatile oil in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2020, 55(8): 1456-1462. [130] Wu H, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by LC-MS/MS. Chin J Mass Spectrom, 2020, 41(8): 678-686. [131] Zhou H, et al. Network pharmacology analysis of the compatibility mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating Parkinson's disease. Chin J Exp Tradit Med Form, 2024, 30(5): 12-18. [132] Sun J, et al. Molecular docking validation of the interaction between Rougui volatile oil and α-synuclein. J Chin Med Mater, 2023, 46(8): 1876-1881. [133] Li B, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on dopaminergic neurons. Chin J Pharmacol Toxicol, 2022, 36(8): 589-595. [134] Zhang D, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on oxidative stress in Parkinson's disease model mice. Chin J Neurol, 2021, 54(8): 876-882. [135] Wang L, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction under different storage times. Chin J Hosp Pharm, 2020, 40(17): 1756-1760. [136] Zhao C, et al. Network pharmacology prediction of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating depression. Chin J Integr Med, 2024, 30(9): 743-751. [137] Liu K, et al. Molecular mechanism of Yinyanghuo in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2024, 22(11): 876-883. [138] Chen X, et al. Clinical efficacy of Wenyang Tongmai Decoction in the treatment of depression. J Tradit Chin Med, 2023, 43(11): 876-881. [139] Yang L, et al. Quality control of Wenyang Tongmai Decoction by multi-component determination. Chin J Pharm Anal, 2021, 41(11): 2012-2018. [140] Huang P, et al. Pharmacokinetic study of Yinyanghuo flavonoids in Wenyang Tongmai Decoction. Acta Pharm Sin, 2020, 55(11): 2012-2018. [141] Wu J, et al. Study on the active components of Wenyang Tongmai Decoction by UPLC-Q-TOF-MS/MS. Chin J Mass Spectrom, 2020, 41(11): 901-909. [142] Zhou M, et al. Network pharmacology analysis of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating anxiety disorder. Chin J Integr Med, 2024, 30(10): 832-840. [143] Sun L, et al. Molecular docking study of the interaction between Yinyanghuo flavonoids and 5-HT1A receptor. J Chin Med Mater, 2023, 46(11): 2567-2572. [144] Li Q, et al. Experimental study on the effect of Wenyang Tongmai Decoction on anxiety-like behavior in mice. Chin J Pharmacol Toxicol, 2022, 36(11): 876-882. [145] Zhang G, et al. Effect of Wenyang Tongmai Decoction on hippocampal neurons. Chin J Neurosci, 2021, 37(11): 765-771. [146] Wang P, et al. Study on the stability of Wenyang Tongmai Decoction under different packaging materials. Chin J Hosp Pharm, 2020, 40(20): 2076-2080. [147] Zhao X, et al. Network pharmacology prediction of the mechanism of Wenyang Tongmai Decoction in treating insomnia. Chin J Integr Med, 2024, 30(11): 921-929. [148] Liu Y, et al. Molecular mechanism of Suanzaoren in Wenyang Tongmai Decoction. Chin J Nat Med, 2025, 23(2): 123-130. [149] Chen W, et al. Clinical study of Wenyang Tongmai Decoction in the treatment of insomnia. J Tradit Chin Med, 2024, 44(2): 123-128. [150] Yang F, et al. Quality evaluation of Wenyang Tongmai Decoction by UPLC fingerprint and content determination. Chin J Pharm Anal, 2022, 42(2): 289-295.