Rapcabtagene autoleucel

本文节选自来自Johnson & Johnson的研究人员发表的文章“Full speed ahead: how rapid CAR-T manufacturing can shape the cell therapy landscape”，详细内容，请参考原文。 自体CAR-T细胞疗法彻底改变了治疗方案，并改善了全球B细胞白血病、淋巴瘤和多发性骨髓瘤患者的治疗效果。然而，对于许多等待细胞疗法的患者来说，患者获得个性化药物的可及性、成本和时间仍然是一大障碍。缩短CAR-T细胞的生产时间是缩短“静脉到静脉”时间的一种策略，可以更快地为患者带来挽救生命的疗法。除了加快治疗的可及性之外，加速生产工艺还可以增强CAR-T细胞的耐久性，从而改善临床反应。本综述重点介绍了快速细胞疗法生产领域的最新进展，同时也讨论了广泛采用快速工艺所面临的挑战，包括满足所需的临床剂量、开发快速放行检测方法和质量控制程序的必要性。尽管面临挑战，但采用快速工艺有望提高生产能力并降低成本，从而进一步改善患者的可及性。 简介 首个 CAR-T 细胞疗法获得美国 FDA 批准，用于治疗儿童 B 细胞急性淋巴细胞白血病 (ALL)，从那时起，免疫肿瘤治疗，更具体地说是细胞疗法，已成为治疗和根除各种血液系统恶性肿瘤（包括多种淋巴瘤亚型和多发性骨髓瘤）的领先疗法。迄今为止，自体CAR-T细胞疗法是所有基因工程淋巴细胞疗法中发展最为成熟的，另有几种疗法即将问世。如今，共有7种商业化的CAR-T细胞产品，它们对全球患者的生活产生了惊人的影响（表1）。然而，CAR-T 疗法的兴起也带来了新的挑战，从对神经毒性和继发性 T 细胞恶性肿瘤的担忧，到扩大生产规模以及提高这些救命疗法的可及性和可负担性。 本综述旨在探讨CAR-T细胞疗法中一些最大瓶颈——患者入院时间和静脉输注时间——的潜在解决方案。目前，患者血液采集到药物产品（DP）输注之间的时间间隔（以下简称V2V时间）通常为3至5周，中位时间为31天（表1） 。尽管工艺工程已取得进步以提高 CAR-T 生产的可放大性，包括更加依赖自动化和建造大容量生产车间，但对于许多患有侵袭性疾病的患者来说，给药时间仍然是一个重大障碍。适合 CAR-T 细胞疗法的患者通常都经过大量预处理，并且在满足CAR-T 细胞疗法的资格标准之前已经用尽了至少 1-3 种先前疗法。具体而言，B 细胞淋巴瘤患者的病情进展风险较高，因此在这种情况下更快地获得治疗至关重要。据估计，最初接受 CAR-T 疗法的患者中约有 30% 从未接受过白细胞分离术，而接受白细胞分离术的患者中 20% 并未继续输注治疗。此外，病情快速进展、临床不合格和临床状况下降已被确定为患者流失的主要因素。为进一步支持这些发现，数学模拟表明，V2V 时间对患者结果具有重要影响，包括死亡率和CAR-T 细胞输注后的预期寿命。 V2V 时间涵盖一系列活动，包括单采起始材料的运输和接收、药品生产、放行检测以及最终运送至输注地点。患者的临床护理考虑以及临床医生的可用性和时间安排也会影响 V2V 时间。本文将重点关注 V2V 时间的一个方面——CAR-T 细胞生产过程；然而，我们承认，缩短输注时间需要多方面的共同努力。虽然生产过程的持续时间只是 V2V 时间的一个决定因素，但缩短这一时间不仅可以加快患者输注时间，还可以生产出更持久、更高质量的药品 (DP)，从而能够诱导更深层次的临床缓解。 考虑到所有商业化的自体 CAR-T 细胞产品，传统的生产工艺可能需要 7-14天的细胞操作才能产生临床剂量，并且需要许多不同的工艺步骤来生产药物产品。简而言之，自体CAR-T工艺流程始于生产工厂收到患者的血液分离样本后。大量血液分离样本由异质性外周血单核细胞（PBMC）组成，这些细胞可以通过筛选或分选过程进一步富集CD3 +T细胞。或者，CD4 +和CD8 +细胞可以一起或单独分离，以达到所需的CD4:CD8比例，这需要更耗费人力的生产流程。此外，人们还在努力分离特定的T细胞亚群，将其用作生产流程的起始材料。T细胞分化状态已被证明与抗肿瘤功效和体内持久性相关，这促使人们努力分离初始T细胞亚群和记忆性T细胞亚群，这些亚群由一组表面标志物定义，包括CD62L、CCR7、CD127、CD45RA和CD45RO。 在富集目标 T 细胞群后，通常通过激活针对 T 细胞受体 (TCR) 的 CD3ζ 链以及共刺激分子 CD28 的抗体来刺激细胞。此外，还包括IL-2、IL-7和/或IL-15等细胞因子信号，以支持T细胞扩增和CAR-转基因递送，并有利于保存分化程度较低的细胞群。目前，所有商业化的CAR-T产品均依赖慢病毒或逆转录病毒转导来驱动CAR-转基因的稳定表达。基因改造后，CAR-T细胞需在培养液中扩增数日，以确保达到预期的临床剂量。扩增过程在有利于T细胞培养的培养条件下进行，这有助于消除污染的细胞群和其他杂质，例如残留的慢病毒质粒DNA。最后，收集细胞，并将其按预期剂量置于冷冻保护剂中配制，以在冻融过程中保持细胞活力。这标志着生产过程的结束，此时材料将接受放行测试。CAR-T 细胞将接受多项安全性、特性和功能性关键质量属性的评估，包括纯度、无菌性、转基因拷贝数、活力和效力。最终给予患者的剂量取决于 DP 中表面 CAR 表达 T 细胞占总 T 细胞的比例。一旦 DP 通过所有放行测试，它将被送回输液中心，患者将准备接受治疗，这通常包括淋巴细胞清除方案，以腾出空间用于 T 细胞植入。 后续章节将深入探讨生产过程的每个阶段，重点介绍传统生产和快速生产之间的差异以及采用和整合快速流程时需要考虑的事项。 快速生产的现状 考虑到第一代CAR-T细胞生产工艺已广泛应用于多种临床和商业化CAR-T产品（表2），将目前的自体CAR-T生产过程从几天缩短到24-72小时是一个范式转变。本文将回顾生产过程的各个阶段，以及当前为实现快速工艺流程而做出的努力如何解决这些关键的工艺步骤，以生成安全有效的DP。 患者血液成分分析或起始材料 大多数制药公司都采用了集中式生产设计，即在预定的时间段内，将患者的血液单采样本从临床采集点运送到中央生产设施。为了满足全球患者的需求，制药公司可能在北美、欧洲和亚洲设有多个生产基地，以支持后期临床和商业生产。如果由于运输限制而无法在预定的时间段内收到血液单采样本，则可以在运送到生产基地之前将其冷冻保存，以保持细胞质量 （图1）。鉴于可能导致运输延误的不确定性，在采集点附近冷冻保存血液单采样本可以降低因血液单采质量导致的生产失败风险，并简化生产物流。然而，使用新鲜血液单采样本也有其优势，尤其是在考虑快速生产的情况下。冷冻保存过程会给PBMCs带来外部压力，这可能会对解冻后回收的细胞的质量和活力产生负面影响。考虑到患者样本本身可能更脆弱，这些影响可能会加剧。平均而言，冷冻保存的PBMCs的回收率为80%，因此使用新鲜样本将能够获得更多的T细胞，这对于在缩短流程的情况下满足临床剂量至关重要。此外，冷冻保存的材料在培养的前 48 小时内可能会经历更多的细胞死亡，这可能会显著影响快速工艺过程中的细胞产量。然而，新鲜血液分离的潜在回报并非没有风险——在集中生产模式中寻求新鲜材料的途径需要在运输物流方面投入大量精力，以确保材料能够在加急的时间内（通常在 24-48 小时内）从血液分离收集中心发送到生产现场，以保持较高的细胞活力和功能性。在考虑实施快速工艺流程时，起始材料可能对 DP 的关键质量属性（包括细胞活力）产生重大影响。新鲜血液分离通常对 T 细胞健康有益，因为省去了冷冻保存过程，有助于提高生产过程中的细胞性能。 T细胞富集 CAR-T 细胞的生产始于生产现场收到血液分离样本后。通常，在T 细胞富集或筛选之前，需要对血液分离样本进行清洗。尽管一些传统的生产工艺是从未经筛选的 PBMC 开始的，但快速工艺的缩短时间会增加最终 DP 纯度的挑战。传统生产工艺中使用的培养条件和细胞因子补充剂有利于 CD3 + T 细胞的扩增，并最终抑制污染性肿瘤细胞、淋巴细胞和单核细胞群的生长。缩短的工艺流程会增加最终 DP 中非 T 细胞类型浸润的风险，因此通常优先采用富集工艺来控制 DP 纯度。目前，快速工艺流程依赖于密度梯度离心法（诺华的T-Charge™ 平台）、CD4/CD8 正向选择磁珠或 CD3/CD28 Dynabeads™（阿斯利康/亘喜的 FasTCAR-T 和恒润达生的 Dash CAR-T 平台），这些方法既可以纯化 T 细胞，又可以激活 T 细胞。虽然这些平台上的富集时间相当，但使用多用途磁珠结合激活试剂（即 CD3/CD28 Dynabeads）需要在 DP 配制之前进行脱珠，并且由于表面受体对交联抗体的亲和力，可能导致大量细胞损失。 虽然目前一些商业化产品可能以批量单采或白细胞分离材料作为生产流程的起点，但这种简化流程的采用会引发人们对DP纯度的担忧。因此，业内普遍认为，在T细胞活化和转导之前，必须进行富集步骤，以去除任何不需要的或污染的细胞群。 T细胞活化 几乎所有传统的CAR-T细胞生产工艺都需要激活初始T细胞以促进病毒转导。细胞治疗领域在很大程度上遵循通过CD3/CD28介导的途径激活T细胞的模式。针对这些受体的交联抗体已广泛应用于商业化生产，其模拟T细胞与抗原呈递细胞（APC）之间的相互作用，最终引发T细胞介导的免疫应答，并伴随T细胞分化和克隆扩增。CD3和CD28的激动剂抗体可以与磁珠结合（Dynabeads）、可溶性抗体或板固定化抗体，或与聚合物纳米基质偶联（TransAct™）。T细胞活化会触发细胞内一系列转录和代谢变化，并最终诱导对病毒感染至关重要的表面蛋白的表达。病毒与细胞膜融合并随后内吞依赖于水泡性口炎病毒的病毒糖蛋白G (VSV-G) 与T细胞表面的低密度脂蛋白受体(LDL-R) 的结合。先前已证实，LDL-R 表达在T细胞活化时上调，具体在活化后约24小时达到峰值。这些发现为在病毒工程化的CAR-T细胞疗法中，在慢病毒导入之前激活T细胞提供了依据。不出所料，静止的、非分裂的淋巴细胞，例如幼稚T细胞，历来不易受病毒感染。它们表现出病毒RNA逆转录的低速率，并且通常转基因表达水平较低，这在试图达到特定临床剂量的CAR表达细胞时构成了重大挑战。 然而，临床前和临床阶段研究的最新结果表明，无需激活刺激即可产生有效的 CAR-T 细胞，从而能够保留幼稚或祖细胞 T 细胞亚群，这些亚群表现出增强的体内持久性和优越的代谢适应性。Ghassemi等人阐述了一种基于慢病毒的方法，无需激活 T 细胞即可生成 24 小时 CAR-T。作者采用多管齐下的方法，包括添加细胞因子信号、IL-7 和 IL-15、脱氧核苷、短时间血清饥饿以及重新设计培养容器以增强病毒颗粒与 T 细胞的共定位，证明表面 CAR 蛋白最早可在慢病毒添加后 12 小时检测到。尽管该方法转化为临床规模生产的能力尚未得到证实，但源自幼稚 T 细胞的 DP 的潜在治疗益处应该会激发人们在该领域的进一步努力。 同样，临床阶段生物制药公司Precigen也开发了一种无需体外 激活的方法。UltraCAR-T®平台采用隔夜生产工艺，使用半封闭电转系统UltraPorator™进行基因转移。与基于慢病毒的方法相比，非病毒基因工程策略更容易受到没有激活信号的基因转移的影响，然而，它们可能会引起额外的毒性问题，如下所述。 虽然输注幼稚T细胞群具有诸多优势，包括保留静止期细胞群，但传统生产工艺依赖于使用活化刺激物来促进慢病毒整合并最终驱动CAR表达，从而产生强效的DP。在考虑快速工艺时，可能更倾向于采用其他活化策略，以促进更早的CAR-转基因整合，并减少活化诱导的细胞死亡或终末分化程序的影响。最后，众所周知，T细胞活化会驱动克隆扩增，这在传统生产环境中需要数天时间。然而，在快速生产工艺中，细胞产物在对数扩增期之前收获，并预期扩增将在体内输注后开始。目前尚不清楚未活化和先前活化的CAR-T细胞产品的体内扩增动力学是否具有可比性，这可能是开发快速工艺时的一个重要研究领域。 载体递送 如前所述，目前的临床CAR-T细胞疗法依赖于病毒载体来递送CAR-转基因并促进CAR在细胞表面的稳定表达。然而，其他非病毒基因工程策略正在开发中，其中一些已在快速生产环境中得到应用（表2）。简而言之，非病毒基因编辑和递送策略（包括转座子、设计核酸酶、电转和纳米颗粒）已在其他地方进行了详细综述。虽然这些策略中有许多都具有其独特的优势，但质粒递送效率低下、对细胞活力的影响、脱靶递送的安全问题和可放大性仍然是阻碍其应用于临床生产的重大障碍。 目前，大多数快速生产项目都采用基于病毒的递送策略，包括诺华 (T-Charge) 和阿斯利康/亘喜 (FasTCAR)（生产时间 <72 小时）的项目，以及 Kite (huCART19-IL-18) 和百时美施贵宝 (NexT；生产时间为 4-6 天) 的加速生产项目（表 2）。虽然转导的时间可以从激活时间跨越到激活后约 24 小时，但从机制上讲，细胞内部必须发生很多事情才能实现稳定的 CAR 表面表达。首先，病毒囊膜蛋白 VSVG必须与 T 细胞表面的低密度脂蛋白 (LDL) 受体结合才能进入细胞。然后必须将病毒 RNA 解包、逆转录并随后整合到宿主细胞基因组中。CAR 编码 DNA 的完全整合以及随后的转录、翻译和运输到细胞表面可能需要 72-96 小时。希望将整个 CAR-T 生产过程缩短到 72 小时以内，这是一个挑战，因为需要通过传统的流式细胞术方法准确检测表面 CAR 蛋白来配制最终剂量。 尽管病毒载体是最成熟的基因工程策略，但仍存在一些挑战，可能阻碍其在快速工艺中的广泛应用。采用“无扩增”方案的快速工艺，起始细胞数量需要远远超过达到临床剂量所需的细胞数量。不仅需要生产DP袋，还必须生成放行测试、监管保留以及可能的备用DP剂量所需的材料，同时还要考虑到收获过程中的一些细胞损失。鉴于激活诱导的细胞死亡或转导相关毒性在最初24小时内可能会造成细胞损失，这可能意味着起始工艺所需的CD3 +T细胞数量超过1 × 10 9。根据用于转导材料的感染复数（MOI），这会大幅增加对病毒载体供应的需求，进而增加生产DP所需原材料的成本。如前所述，细胞疗法的成本是直接影响患者可及性的一个因素。因此，分配资源探索更经济的基因递送策略可能是值得的。 除了使用慢病毒或逆转录病毒外，目前正对复发性铂耐药性卵巢癌进行 1/1b 期临床试验，研究利用睡美人转座子系统对 T 细胞进行电转，在 1 天的生产过程中同时驱动抗MUC16 CAR 和安全终止开关的表达（表 2）。该工艺使用 Precigen 专有的 UltraPorator 电转系统实现，能够满足大规模生产要求，超过 300 × 10 6 UltraCAR-T 细胞临床剂量的输注证明了这一点。该平台初步证明，电转可以实现快速工艺，同时避免与病毒转导相关的杂质风险。然而，应该注意的是，虽然该工艺消除了与生成大量高滴度病毒材料相关的瓶颈，但以这种规模（起始材料>1 × 10 9 cells以生成 300 × 10 6的临床剂量）对纯化 T 细胞进行电转将需要大量 GMP 级质粒，这会在原材料方面产生巨大的费用。此外，监管机构对 CAR-T 生产中使用转座子存在持续的安全担忧，因为担心潜在的脱靶整合、插入诱变和致癌风险，需要对接受治疗的人群进行长期密切的不良事件监测。 在快速CAR-T细胞生产中，病毒和非病毒方法均已被采用，然而，这两种策略都需要高昂的原材料成本才能生产出临床剂量高达100×106以上的CAR +细胞。展望CAR设计技术的进步，包括先进的“装甲”策略和肿瘤微环境（TME）调节剂的分泌，未来一代CAR-T细胞产品有可能在降低临床剂量的情况下展现出临床疗效，从工艺和生产能力的角度来看，这将使快速生产更容易实现。 消除扩增阶段 许多正在开发和临床研究中的快速扩增过程的起始时间都在72小时内。该过程持续时间与激活后T细胞扩增动力学中观察到的滞后时间一致。在克隆扩增之前，T细胞必须经历几个细胞过程，包括特定基因的上调、细胞体积的扩大以及从静止状态进入活跃的细胞周期。T细胞增殖的滞后时间可能为24至72小时，因此在快速扩增方案中，细胞扩增的持续时间极短（图1）。 如果没有T细胞扩增期，工艺开发面临的最大挑战之一是能否满足临床剂量。然而，目前的数据表明，未扩增细胞具有更优的表型和更高的体内增殖能力，因此有效剂量可能显著低于传统T细胞疗法。以B细胞淋巴瘤为例——在标准生产I期试验中，评估的剂量范围为25至200×10 6。在YTB323（其表达与tisgenlecleucel相同的、经过验证的CD19靶向CAR）和huCART19-IL-18的快速生产试验中，剂量范围显著降低，为每位患者3至70×10 6 cells。令人鼓舞的是，两个生产平台的总体缓解率 (ORR) 和完全缓解率 (CRR) 相当。另一方面，当考虑多发性骨髓瘤适应症时，快速工艺中的剂量从 100–300 × 10 6减少约 90%至仅 10–20 × 10 6，通过输注快速生产的 DP 实现的 CRR 比 CARTITUDE-1 和 IMMagine-1 试验中观察到的 CRR 低 60%。这些发现表明，需要对快速生成的CAR-T细胞进行剂量递增试验，因为有效剂量可能取决于疾病适应症或肿瘤相关环境。尽管由于其他混杂变量，快速生成的CAR-T细胞与传统生成的CAR-T细胞进行直接比较可能不可行，但这些信息将有利于该领域正在进行的开发工作。 就实体瘤领域而言，传统CAR-T细胞的临床疗效仍是一个挑战，目前尚无市售产品。由于CAR-T细胞从血液运输到实体瘤部位的效率低下，实体瘤适应症可能需要比目前血液学适应症更高的输注剂量，而这在快速工艺中可能难以实现。然而，快速或加速的治疗过程所带来的优异T细胞表型可能有助于增强CAR-T细胞的耐久性，最终可能在治疗实体瘤适应症方面更具优势。治疗组合或新型TME导向方法能否使快速CAR-T细胞产品成功进入实体瘤领域仍有待探索。 质量控制和放行标准 尽管在缩短自体生产流程方面取得了进展，使我们更接近能够以更高质量的DP更快地治疗患者，但产品放行检测和符合全球监管机构的要求仍是一项需要克服的额外挑战。缩短生产时间通常可以省去过程中的培养物清洗和培养基更换，而这些步骤有助于去除或稀释DP中的杂质，包括残留的病毒载体或非T细胞群。为了满足关于产品鉴别、安全性和纯度的既定产品规格，必须证明能够在缩短的生产时间内去除任何与工艺相关的杂质。从逻辑上讲，这将需要最大限度地降低过程中使用的原材料的浓度，并在收获过程中实施额外的清洗步骤。 对于加速工艺的产品放行测试，最大的担忧或许在于产品特性和效力的验证。目前，在标准生产条件下，CAR-转基因表达的评估通常采用流式细胞术检测表面蛋白表达，或基于PCR的病毒拷贝数测定来量化整合到宿主细胞基因组中的转录本数量。这些方法可以可靠地测量稳定的CAR表达，而传统的5-10天流程中CAR表达会达到稳定水平。然而，利用现有的合格流式细胞术方法，难以可靠地测量转导后48-72小时的CAR表达。此前有报道称，慢病毒递送的遗传物质整合后，检测时间会延迟2-3天，这可以通过转基因整合、mRNA转录本翻译以及CAR分子运输到T细胞表面来解释。此外，先前关于早期时间点的假转导和不稳定CAR表达的报道已被确定为一个值得关注的领域，因为这些测量可能会产生不可靠的配方和剂量结果。随着快速工艺流程的出现，可能需要开发不依赖于表面 CAR 表达的额外正交分析，以促进在加速生产时间表下的产品放行。 额外的安全放行测试包括支原体、内毒素和无菌测试，以确保DP不含有害污染物。常规无菌测试可能需要长达14天。目前，使用灵敏的流式细胞术系统进行快速无菌测试已取得了令人鼓舞的进展，该系统能够检测荧光标记的微生物，或基于非生长的16S和18S扩增子测序方法，可以将14天的时间显著缩短至几小时到几天。另一种解决方案是采用一体化放行测试方法，利用自动化技术并行进行多项检测。Cellares 目前部署了一种名为 CellQ ®的过程中 QC 技术平台，以解决与放行测试相关的手动 QC 处理瓶颈，并可集成到快速生产环境中。此外，这种自动化、高通量平台可以使用最少的样本量生成结果，并减少因操作员错误而重新测试的需要。虽然这些类型的一体化 QC 平台很诱人，但它们仍然严重依赖于能够可靠评估未成熟细胞群中关键参数的技术的开发，其中最具挑战性的是 CAR-T 细胞身份和效力。 评估CAR-T细胞功能的效价试验本质上面临着与CAR检测/身份试验相同的挑战，因为它们依赖于CAR介导的肿瘤抗原识别，从而驱动细胞毒性T细胞应答。目前，监管机构建议开发和使用正交试验来测量效价，包括在产品放行前直接杀伤肿瘤细胞和细胞因子分泌。CAR-T细胞在快速收获时间点的细胞毒性或干扰素-γ (IFN-γ) 产生是否能够代表稳定转基因整合后的DP特性，仍然是一个悬而未决的问题，也是活跃的研究领域。 为了规避早期CAR检测和效力方面的挑战，一种替代策略是将DP的传代培养保留一段指定的时间，直到能够使用流式细胞术方法可靠地估算DP释放前的剂量。然而，这种方法确实增加了DP配制和灌装、QC放行检测和药房手册说明的复杂性。此外，随着近年来快速无菌方法的发展，用于确认CAR身份的传代培养技术可能会造成另一个瓶颈，从而延迟DP的放行。因此，开发和验证能够在生产过程早期阶段可靠使用的基于分子的分析方法，可能为从快速过程中检测准确的CAR +细胞数量提供一种更好的解决方案。总之，加速DP的放行需要创新的解决方案，以最大限度地减少样品量，采用自动化技术，并实施新方法，以准确识别CAR +细胞并在短时间内报告无菌情况。 分散式生产设施 如前所述，大多数拥有商业化CAR-T产品的制药公司都采用了集中式生产模式，即将患者的血液成分运送至专门的生产设施进行DP的生产。从质量控制和标准化的角度来看，这种模式更可取，因为生产或方法方案的差异较小。此外，这些大型设施能够每天容纳大量的生产运行，使其成为经济上具有吸引力的方案。然而，集中式生产设计会延长V2V时间，因为在流程的前端和后端都需要额外的运输时间，同时还要求在重新输注前对DP进行冷冻保存。采用区域化生产方案，将患者的药物生产地点相对靠近输注中心，将简化运输物流，并有可能将新鲜的DP交付给患者（图1）。先前的报告已经证明了新鲜DP相对于冷冻DP的潜在优势，包括改善体内功能和提高产品质量。此外，先前的临床研究已经证明了分散模式下的生产可行性，且生产失败率较低。虽然科学和临床证据都支持向更加分散的生产模式转变，但这种转变对于大型细胞疗法生产商来说仍然具有挑战性。 遗憾的是，区域化或分散化模式自身也面临一系列挑战，必须克服这些挑战才能充分发挥这种生产模式的优势。如前所述，这需要基础设施支持战略性地分布在美国、欧洲和亚洲的多个生产设施，以减少患者就医障碍。此外，至关重要的是，每个独立工厂不仅要在生产工艺和相应的批记录上保持一致，还要在放行方法的执行上保持一致，以确保药品的一致性。这些工作需要大量的监督和协调，对CMC和质量构成重大挑战。具体而言，设立一个质量组织来管理和解决可能在多个地点出现的任何偏差或OOS（失控），是该模式整合的重大障碍。此外，尽管端到端流程自动化的推进仍在继续，但目前，半自动化流程仍然需要操作员亲自监督流程并对物料进行必要的操作。在区域化或分散模式中，生产基地可能位于非大都市地区，这可能会带来巨大的人员配备挑战，或者需要严格的培训计划，以确保操作员有资格领导生产工作。 展望细胞疗法的未来，采用分散式或即时医疗生产模式将彻底改变患者获取细胞疗法的途径。理想情况下，白细胞分离后，患者的细胞材料将立即进入现场生产，无需配制和冷冻保存。如果在患者附近采用快速生产工艺（<72 小时），患者专用输注液可在 4 天内采集并制备输注液，此外还需完成快速放行检测。采用该工艺可将 V2V 时间缩短至少 7 天，即运输时间加上传统生产（6-12 天）和快速生产（3 天）之间的时间差（图 1）。已证明，V2V 时间的减少对 CAR-T 治疗后的患者预后和预期寿命的延长具有重要的临床意义。最后，缩短这一时间不仅有助于限制疾病进展，并可能减轻对耐受性差的过渡治疗的需求，而且还可能有助于确保更多患者有资格接受这些挽救生命的治疗。 药品属性和治疗益处 增加患者可及性是加速生产工艺开发的主要临床驱动力，但体外培养时间缩短带来的更高质量的DP可能改善患者的反应。早期临床前和临床数据表明，缩短体外培养时间可减少终末T细胞分化。此外，在限制培养条件下收获的细胞表现出改善的抗肿瘤功能、增强的增殖潜力和延长的体内持久性，所有这些都表明了幼稚/中央记忆 T 细胞的属性。 先前使用患者材料进行的临床前研究表明，在较早时间点（3 或 5 天）收获的 CD19 靶向 CAR-T 细胞与在较晚时间点（9 天）收获的细胞相比，在小鼠 ALL 异种移植模型中具有更高的抗白血病活性。在该模型中，亚治疗剂量的早期收获CAR-T细胞能够有效地诱导疾病缓解。表型上，较长的培养时间也富集了效应CD8 + T细胞，其表型特征为CD45RO +和CCR7 -而较短的体外培养时间后，幼稚样细胞更为普遍。此外，培养仅3天后收获的CAR-T细胞在体外暴露于肿瘤抗原后表现出更高的扩增倍数，并且在体内具有长期持久性。 在临床领域，百时美施贵宝启动了一项I期临床试验，研究其加速NEX-T 5-6天CAR-T生产工艺。下一代BCMA产品BMS-986354显示，与对照CAR-T产品orcabtagene autoleucel（orva cel）相比，DP中中央记忆细胞（CD45RA -、CCR7 + ）显著富集，促炎细胞因子IFN-γ、IL-2和TNF-α的产生也增加。剂量递增试验中，患者接受了20-80 × 10 6 CAR + T细胞治疗，剂量比orva cel试验减少了2.5-7.5倍。尽管接受的剂量仅为标准生产工艺剂量的一小部分，但两种产品均表现出相当的输注后扩增，这表明NEX-T产品具有更高的增殖潜力和持久性。最后，从安全性和有效性的角度来看，BMS-986354的总缓解率为95%，且伴随低度细胞因子释放综合征（CRS）和神经毒性。治疗剂量的减少可能解释了低度不良事件，并进一步强化了采用快速治疗工艺的临床优势。 诺华开发了一种名为 T-Charge 的快速（<2 天）生产工艺，该工艺已在DLBCL、CLL、ALL 和 MM 适应症中实施。靶向CD19的CAR-T细胞疗法YTB323的安全性和初步疗效的初步临床评估结果显示，其前景十分光明。与传统生产的产品tisagenlecleucel相比，YTB323保留了更高频率的幼稚T细胞和干细胞记忆T细胞亚群，这在批次分析和单细胞RNA测序分析中观察到的干细胞样基因特征进一步证实了这一点。功能上，快速生产的细胞在重复刺激下表现出更好的杀伤能力，表明这些细胞具有更高的存活能力和对获取耗竭转录组的抵抗力。与BMS-986354一致，YTB323的药代动力学也表明，尽管给药剂量低25倍，但与tisgenlecleucel相比，其体内 增殖潜力增强，并且安全性良好。类似地，利用 T-Charge 平台生产的靶向 BCMA 的 CAR-T 细胞（称为 PHE885）在 6 个月的随访中显示出强大的临床疗效、自我更新能力和长期持久性。此外，由于 V2V 时间缩短，不到 30% 的患者在 CAR-T 输注前需要接受桥接治疗。总的来说，本节讨论的早期 1 期研究结果支持继续投资开发针对血液病适应症的快速工艺流程。 其他几家公司也在该领域取得了重大进展，包括Kite/Tmunity、阿斯利康/亘喜、Precigen和恒润达生，它们均在利用加速生产技术开展的1期临床试验中处于领先地位（表2）。DP的许多特性与之前的报告相呼应，强调了快速生产在不同工艺、肿瘤靶点和疾病适应症中的稳健性。尽管大多数研究仍然主要集中在血液系统恶性肿瘤上，但细胞疗法已扩展到实体瘤（卵巢癌、三阴性乳腺癌）和自身免疫性疾病（系统性红斑狼疮）。近十年来，实体瘤一直是CAR-T细胞疗法面临的一大挑战，目前尚不清楚增强的细胞效价是否足以克服包括T细胞运输和抑制性肿瘤微环境在内的诸多障碍。然而，如果结合优化的CAR设计和合适的生产策略，该领域有望改善临床疗效，并促进细胞疗法在实体瘤恶性肿瘤中的推广。 见解 快速生产工艺是缩短患者V2V时间并提高细胞疗法可及性的一种方法。除了临床益处（例如降低疾病进展机会和生产更高质量的DP）之外，快速工艺从生产角度来看还有其他优势。缩短生产临床剂量所需的时间将提高生产能力，从而扩大单位时间内可生产的患者数量。例如，将生产时间缩短一半将使任何特定设施可生产的患者数量翻倍。这不仅可以抵消每位患者的设施成本，还可以降低执行关键生产步骤和监督流程所需操作员的人工成本。追求快速工艺的诸多激励措施激励着细胞治疗领域的关键参与者继续应对阻碍快速工艺广泛实施的挑战。这些挑战包括控制DP纯度、在无需细胞扩增阶段的情况下获得有效的临床剂量以及快速可靠的放行方法。使用目前可接受的释放检测方法，难以在早期时间点准确表征DP。然而，开发和验证能够通过瞬时读数预测稳定CAR表达的新技术或许能够解决这些挑战。或者，重新设计给药策略也可以缓解这些问题。在工艺过程中无需额外清洗即可获得DP纯度，这引发了人们对慢病毒、非T细胞群和其他工艺相关杂质增多的担忧。然而，在制剂过程中进行严格的清洗以及开发灵敏度更高的检测这些污染物的检测方法，可能有助于缓解相关担忧。最后，关于给药指南，CAR设计和“装甲”策略的进步可能会使更低的有效临床剂量能够通过快速工艺轻松实现，从而使治疗实体瘤适应症更加可行。 总结 CAR-T细胞疗法在过去十年中对患者的生活产生了深远的影响，然而，仍然存在一个尚未满足的临床需求——缩短给药时间并增加能够成功接受这种疗法的患者数量。V2V时间的一个组成部分是体外生成DP所需的时间。细胞生产领域的最新进展已证明，在72小时内生成CAR-T细胞具有小规模可行性，并能提高临床疗效。然而，快速工艺的广泛应用需要创新的工艺和分析开发工作、能够使用新鲜血液分离技术的区域化生产模式，以及与全球监管机构进行更早期、更频繁的互动。此外，早期临床前和临床数据表明，快速生产的细胞本身效力更强，这可能值得进一步开展临床研究，以确定有效剂量，并提高对可能出现的潜在毒性的认识。尽管目前面临财务和物流方面的挑战，但快速工艺可以显著提高生产能力，而采用自动化平台可以进一步提高可放大性并降低劳动力成本，从而证明前期投资的合理性。 原文：M. M. Lieberman, K. A. Henckels, Full speed ahead: how rapid CAR-T manufacturing can shape the cell therapy landscape. Cell & Gene Therapy Insights 2025; 11(4), 515–532.