Nicotinamide

☝ 点击上方 一键预约 ☝   最新最热的医药健康新闻政策近日，国家卫健委公布了2024年版的二级公立医院和三级公立医院绩效考核目标，共28个考核指标，这其中和药品使用直接相关的包括：抗菌药使用强度、基本药物使用、集采药品使用、重点监控药品收入占比、重点监控耗材收入占比等。除了集采药品、基本药物使用要求逐步提高外，其他都要逐步降低。笔者一直认为药品使用各种相关考核指标中，只有金额占比是最为实实在在的考核指标，能够给药企带来最切实的变化。今年，基本药物的考核全面升级，在医院基药使用考核中，金额占比开始纳入考核，基本药物迎来全面利好。重点监控上，本次仍考核第一批纳入重点监控目录的品种，新增入目录23个品种逃过一劫。国家集采中选药品使用上，二级医院考核采购金额，让国采中选药品在二级医院迎来更多利好，国采中选药品可以趁势在二级医院做推广。重点监控药品：只监控第一批目录品种重点监控药品和重点监控耗材使用占比是二级和三级公立医院绩效考核指标，对于新增进第二批重点监控目录的品种来说，今年逃过了一劫。国家卫健委二级医院和三级医院考核细则中，都明确今年关于重点监控用药考核仍是考核第一批重点监控药品。（下面两图分别为三级医院和二级医院考核指标的考核说明）2023年1月13日，国家卫健委公布第二批重点监控药品名单，共30个品种被纳入。据目录公布时政策要求，未纳入第二批《目录》即调出目录品种，应当持续监控至少满1年后可不再监控，以促进临床合理用药水平持续提高。而仍持续保留在重点监控目录内的，要按照要求加强重点监控。对于所有品种，各地要以规范临床用药行为、促进合理用药为工作目标，对纳入本目录的药品制定完善临床应用指南，明确临床应用的条件和原则，加强合理用药监管。有13个品种被调整出重点监控目录，这些品种为脑苷肌肽、小牛血清去蛋白、复合辅酶、丹参川穹嗪、转化糖电解质、鼠神经生长因子、胸腺五肽、核糖核酸II、曲克芦丁脑蛋白水解物、核糖核酸、长春西汀、马来酸桂哌齐特、小牛血去蛋白提取物。7个品种仍保留在目录内：依达拉奉、神经节苷脂、骨肽、脑蛋白水解物、奥拉西坦、前列地尔、磷酸肌酸钠。23个品种为新增加品种，这些品种为：奥美拉唑、人血白蛋白、头孢哌酮舒巴坦、银杏叶提取物、泮托拉唑、复方氨基酸、地佐辛、倍他司汀、布地奈德、烟酰胺、头孢他啶、哌拉西林他唑巴坦、艾司奥美拉唑、吡拉西坦、左氧氟沙星、法莫替丁、雷贝拉唑、罂粟碱、烟酸、乙酰谷酰胺、兰索拉唑、美罗培南、头孢噻肟。公立医院绩效考核一般是去年一些指标进行考核和回顾，国家卫健委要求已经被调出仍保留一年监控期，继续考核被调出的13个品种属于政策范围内，但去年新增加的23个品种未被纳入考核指标仍是让人感到意外。三级医院：基药迎来更多利好金额占比开始纳入基药考核中，基本药物正迎来全面利好。其一，我们看到在考核指标中，无论是二级医院还是三级医院，都考核到基药的金额占比。其中二级医院考核的核心指标是基本药物采购金额占比，即年度内医院基本药物采购金额数占医院同期采购药物金额总数的比例。而三级医院延伸考核指标里面，考核的是基本药物配备使用金额占比，考核进一步升级了，这个比例对于三级公立医院约束力将更强，因为不仅仅是采购，还考核到使用金额，这个考核指标对于提升基本药物在三级医院的使用刺激作用将更为明显。其次，是从考核指标上，无论是二级医院还是三级医院，都有不少考核指标与基本药物使用相关。其中，二级医院除了采购指标外，和基药相关的延伸考核指标还包括：基本药物采购品种数占比、门诊处方使用占比、住院使用占比等，预计是为了防止出现基本药物使用集中于一些高价基药上。三级医院考核上更为细化，除了上面提及基本药物采购品种占比及其延伸考核指标外，核心指标还包括基药门诊使用占比、住院患者使用率等2个指标。每个指标后面都有一个延伸指标，由此三级医院基药方面考核达到了6个。二级医院：集采中选药品使用更有利好金额考核指标同样出现在了二级医院关于国家集采中选药品考核中。在这一指标中，二级医院考核的采购金额占比，虽然不是最为理想的使用金额占比，但没有采购哪来的使用？在这一考核指标指引下，国采中选药品在二级医院将迎来更多利好，国采中选厂家也可以借助这一政策优势更好推广国采中选药品。附：第一批重点监控品种名单(来源:趣学术）药闻康策新媒体矩阵微信公众号点击下方  一键关注  【免责声明】1.“药闻康策”部分文章信息来源于网络转载是出于传递更多信息之目的，并不意味着赞同其观点或证实其内容的真实性。如对内容有疑议，请及时与我司联系。2.“药闻康策”致力于提供合理、准确、完整的资讯信息，但不保证信息的合理性、准确性和完整性，且不对因信息的不合理、不准确或遗漏导致的任何损失或损害承担责任。3.“药闻康策”所有信息仅供参考，不做任何商业交易或医疗服务的根据，如自行使用“药闻康策”内容发生偏差，我司不承担任何责任，包括但不限于法律责任，赔偿责任。欢迎转发分享、点赞、点在看

深度聚焦类器官与3D培养论坛，OTC2024论坛合作详询：王晨 180 1628 8769近期，国人团队发表重要综述 Organoids: opportunities and challenges of cancer therapy，仅需一张图简明扼要地总结了不同肿瘤类器官培养方法的关键。从肿瘤组织中通过机械或酶解获得肿瘤细胞，用几乎相同的基础培养基进行培养，而细胞因子是肿瘤类器官培养成功的决定因素之一。不同肿瘤类器官培养方法的简要概述（源自参考文献：Organoids opportunities and challenges of cancer therapy）接下来，我们将重点介绍几种重要的肿瘤类器官培养基组分及方案。1. 胃癌类器官通过构建源自胃癌患者的类器官（PDO），能够直接对临床样本进行研究。Vlachogiannis 等人为了成功培养胃癌类器官，除了使用 ADMEM/F12 培养基和基底膜基质外，还添加了 EGF、Noggin、R-Spondin 1、FGF-10 等细胞因子。胃癌患者的类器官（PDO）培养步骤：如下实验流程和数据均引用Vlachogiannis等人发表的文章（doi: 10.1126/science.aao2774），供参考。1，配置 PDO 培养基：改良的 DMEM/F12 基础培养基，添加 1x B27 additive、1x N2 additive、0.01% BSA、2 mM L-Glutamine、100 units/ml 青霉素-链霉素，以及如下表的细胞因子或其他添加物：*HGF 仅用于胆管癌类器官。2，样本收集：通过图像引导或内窥镜手术收集活检样品。收获后，样本置于冷 PBS 中，并在冰上运输到实验室，20 分钟～2 小时内将组织切片切碎。3，样本处理：组织切碎后，加入 5 ml 5 mM  的 PBS/EDTA，室温静置 15 分钟。用含有 2x TrypLe 的 1 mM PBS/EDTA 5 ml 在 37 ℃ 消化 1 小时。施加机械力（如吹液）以促进消化。4，接种细胞：用改良的 DMEM/F12 培养基收集分离的细胞，并在 4 ℃，1,200 转/分离心 5 分钟，使细胞成球状，用 120 µl GFR 基质胶重悬，接种到 24 孔或 48 孔的平底细胞培养板中。5，将基质在 37 ℃、5% CO2 的细胞培养箱中培养 20 分钟，进行固化。然后添加 500 µl 配置好的 PDO 培养基，要完全覆盖培养孔。6，每两天换一次培养基。2. 结直肠癌类器官患者来源的肿瘤类器官已成为结直肠癌临床前研究的一种出色的模型，原代上皮细胞可在特定生长因子的控制下和 3D 细胞外基质（ECM）中成功培养类器官。肠上皮细胞的自我更新由位于隐窝中的 Lgr5 干细胞驱动。Wnt 信号是维持隐窝干细胞活跃所必需的，Wnt 激动剂 R-Spondin 1 是 Lgr5 的配体，诱导隐窝增生。EGF 信号与肠道增殖有关，Noggin 诱导隐窝数量的急剧增加。因此 van de Wetering 等人开发的结直肠癌类器官培养体系如下：（如下实验流程和数据均引用 van de Wetering 等人发表的文章（doi: 10.1016/j.cell.2015.03.053），供参考。）1. 基础培养基：改良的 DMEM/F12 培养基，添加青霉素-链霉素、10 mM HEPES 和 Glutamax。2. 人肠干细胞培养基：Wnt 条件培养基、R-Spondin 1 条件培养基、Noggin 条件培养基和基础培养基按照 50%、20%、10% 和 20% 的体积比混合，然后加入 1x B27、1.25 mM n-Acetyl Cysteine、10 mM Nicotinamide、50 ng/ml 人 EGF、10 nM Gastrin、500 nM A83-01、3 uM SB202190、10 nM Prostaglandine E2 和 100 mg/ml Primocin。3. H&E 染色分析：通过 H&E 染色对培养后的原代肿瘤细胞和类器官进行分析，发现大多数类器官的特征是存在一个或多个管腔，与原代肿瘤的管状结构相似（如 P8 和 P19b），没有管腔的原代肿瘤会形成没有管腔的紧凑型类器官（P19a）。肿瘤类器官与原代肿瘤上皮相似3. 肝癌类器官肿瘤类器官的培养非常复杂，如肝癌类器。原发性肝细胞癌主要分为肝细胞癌（HCC）、胆管细胞癌（CC）和混合型（CHC）。在肝细胞癌类器官培养中需要使用地塞米松但是胆管细胞性肝细胞癌类器官培养则需加入 R-spondin 1 来维持细胞生长。Broutier 等人发现原发性肝癌（PLC）组织培养获得的类器官可以在体外真实地模拟人类 PLC 的遗传复杂性。构建的类器官包含 PLC 常见的三种亚型：HCC、CC 和 CHC，再现亲本肿瘤的组织结构和表达谱，同时保留患者及亚型之间的差异性，有利于肝癌相关基因和潜在生物标志物的鉴定。肝癌类器官分类培养基：如下实验流程和数据均引用 Broutier 等人发表的文章（doi: 10.1038/nm.4438），供参考。1，基础培养基：改良的 DMEM/F12 培养基，添加 1% 青霉素-链霉素、1% Glutamax、10 mM HEPES 和 1:50 B27 添加剂。2，经典人肝类器官分离培养基：Wnt 条件培养基、R-Spondin 1 条件培养基和基础培养基按照 30%、10% 和 70% 的体积比混合，然后加入 1:100 N2 添加剂、1.25 mM n-Acetyl Cysteine、10 mM Nicotinamide、10 nM 重组人 Gastrin I、50 ng/ml 重组人EGF、100 ng/ml 重组人 FGF10、25 ng/ml 重组人  HGF、25 ng/ml Noggin、5 uM A83-01、10 uM Forskolin、10 uM Y27632。3，肿瘤细胞特异性分离培养基：经典人肝类器官分离培养基中添加 3 mM 地塞米松。4，肝癌类器官培养基：基础培养基、10% （体积比）R-Spondin 1 条件培养基、1:100 N2 添加剂、1.25 mM n-Acetyl Cysteine、10 mM Nicotinamide、10 nM 重组人 Gastrin I、50 ng/ml 重组人 EGF、100 ng/ml 重组人 FGF10、25 ng/ml 重组人 HGF、5 uM A83-01、10 uM Forskolin。4. 乳腺癌类器官乳腺癌类器官的培养基与其他肿瘤的略有不同。Seino 等人在类器官培养基优化过程中发现，Neuregulin 1 与乳腺发育和肿瘤发生有关，将其添加到培养基中可维持类器官有效再生和长期增殖（超过 20 代）。Wnt-3A 对类器官培养条件改善不明显。EGF 对乳腺癌类器官培养具有双重作用，高于 5 ng/ml 促进细胞增殖，但会导致类器官解体，失去自组织功能，低浓度则相反。Hans Clevers 等构建乳腺癌类器官的培养基组分：（如下实验流程和数据均引用 Hans Clevers 等人发表的文章（ doi 10.1016/j.cell.2017.11.010 ），供参考。）a：类器官出现解体时减少或不添加，b：浓度超过 1 μM 会降低类器官生成效率5. 肺癌类器官培养肺癌是全球常见的恶性实体肿瘤，但是肺癌早期临床表现不明显，容易与其他感染混淆而被忽视，一般确诊时已发展到中晚期，因此，及时准确地筛选合适的抗肿瘤药物对肺癌患者非常重要。1 份从原发性肿瘤组织中衍生出肺腺癌类器官（成功率达到 80%）的培养基组分：（如下实验流程和数据均引用Zhichao Li等人发表的文章（10.1016/j.xpro.2020.100239 ），供参考。）试剂详细配制指南关键：所有操作都应在二级生物安全柜中进行，以保持无菌状态。1200 μg/mL FGF-10 (10,000 X)a. 取100 μg溶于0.5 mL 无菌的 PBS（加 0.1% BSA，质量/体积）。b. 每管 5 μL，将溶液分装到 1.5 mL 的离心管中，可在 -20 ℃ 保持 3 个月。2250 μg/mL FGF-7 (12,500 X)a. 取 100 μg 溶于 0.4 mL 无菌的 PBS（加 0.1% BSA，质量/体积）。b. 每管 4 μL，将溶液分装到 1.5 mL 的离心管中，可在 -20 ℃ 保持 3 个月。3100 μg/mL R-spondin 1 (200 X)a. 取 250 μg 溶于 2.5 mL 无菌的 PBS（加 0.1% BSA，质量/体积）。b. 每管 250 μL，将溶液分装到 1.5 mL 的离心管中，可在 -20 ℃ 保持 1 个月。4100 μg/mL Noggin (1,000 X)a. 取 100 μg 溶于 1 mL 无菌的 PBS（加 0.1%  BSA，质量/体积）。b. 每管 50 μL，将溶液分装到 1.5 mL 的离心管中，可在 -20 ℃ 保持 2 个月。5100 mM Y-27632 dihydrochloride (10,000 X)a. 取 50 mg 溶于 1.56 mL 的超纯水中。b. 用 0.22 μm 的过滤器过滤溶液。c. 每管 5 μL，将溶液分装到 1.5 mL 的离心管中，可在 -20 ℃ 保持 6 个月。6500 mM N-Acetylcysteine (400 X)a. 取 408 mg 溶于超纯水，至终体积为 5 mL。b. 用 0.22 μm 的过滤器过滤溶液。c. 每管 125 μL，将溶液分装到 1.5 mL 的离心管中，可在 -20 ℃ 保持 3 个月。72 M Nicotinamide (200 X)a. 取 6.1 g 溶于 1x PBS，至终体积为 25 mL。b. 用 0.22 μm 的过滤器过滤溶液。c. 每管 250 μL，将溶液分装到 1.5 mL 的离心管中，可在 -20 ℃ 保持 3 个月。830 mM SB202190 单盐酸盐水合物 (3,000 X)a. 取 5 mg 溶于 0.453 mL 的二甲基亚砜（DMSO）中b. 每管 16.67 μL，将溶液分装到 1.5 mL 的黑色离心管中，可在 -20 ℃ 保持 3 个月。关键：不要用聚偏二氟乙烯（PVDF）膜过滤含有 DMSO 的溶液，因为 DMSO 可以溶解这种膜。关键：使用黑色离心管，防止该溶液受到光照。建议：过滤 DMSO 溶液，可以使用 DMSO 安全过滤器或尼龙膜过滤器。925 mM A83-01 (50,000 X)a. 取 5 mg 溶于 0.474 mL 的二甲基亚砜（DMSO）中b. 每管 2 μL，将溶液分装到 1.5 mL 的离心管中，可在 -20 ℃ 保持 3 个月。10分装基质胶a. 取一瓶新的基质胶，放于 4 ℃ 冰箱中解冻 8 小时。b. 将瓶子倒置几次，使其充分混合。c. 取 1.5 mL 的离心管置于冰上冷却。d. 将基质胶和 1.5 mL 的离心管置于冰上，按实验所需体积将基质胶分装到 1.5 mL 的离心管中，并在 -20 ℃ 保存。关键：移液器枪头应在抽吸基质胶之前，为了防止基质胶黏在枪头上，应通过多次抽吸和排出冷的无菌 PBS（含 01.% BSA）进行预湿和预冷。注意：基质胶是一种重组基膜制剂，富含胞外蛋白，应避免反复冻融。6. 卵巢癌类器官目前，培养卵巢癌类器官的方法有多种，但成功率较高的是使用基质胶和改良 DMEM/F12 基础培养基的组合，并辅以 EGF、FGF2、FGF10、Noggin、Rspondin1、p38 抑制剂等，可使类器官培养成功率达到 80%～90%。Senkowski 等人为了获得高级别浆液性卵巢癌（HGSC）类器官的长期培养方案，对培养基添加组分进行优化，获得两种成功率更高的配方。并且体外培养的 HGSC 类器官保留了原始肿瘤的基因组和表型特征，其药物反应与临床结果具有相关性。培养基优化主要涉及添加物种类和浓度，尤其是细胞因子类。研究人员在改良型 DMEM/F12 培养基中加入 Glutamax、Primocin、N-acetyl-cysteine 和 B27 添加剂构成基础培养基。通过分析添加剂对 HGSC 原代细胞短期类器官形成和生长的影响，使用添加 FGF-10、SB202190 和 A83-10 的基础培养基（M 0.1）进行优化。但 M 0.1 培养基能促进生长，但在传代后并不能维持生长。进一步确定 HGSC 类器官培养基配方中加入了 5 mM 烟酰胺，形成培养基 M1。在培养基 M1 中添加 EGF、Heregulin-β-1、Hydrocortisone 和 Forskolin，形成培养基 M2。对于不同的样品，M2 可能具有促进或抑制类器官生长的「矛盾」结果，因此为了最大限度地提高类器官形成，每个 HGSC 样品应在两种不同的培养基 M1 和 M2 中平行培养。类器官形成和长期培养测试的主要因子及其影响概述7. 其他肿瘤类器官膀胱癌类器官利用 CTOS 培养基进行培养，主要成分为改良型 DMEM/F12、B27、A83-01，需补充添加 FGF10、FGF7、HER3。培养前列腺类器官时，一般会加入 FGF10、FGF2、p38 抑制剂 SB202190、Rho 激酶抑制剂等，而小鼠前列腺癌类器官无需添加 FGF10、FGF2、PGE2、烟酰胺和 SB202190。文章来源：生物学霸END深度聚焦类器官与3D培养论坛，OTC2024论坛合作详询：王晨 180 1628 8769戳“阅读原文”立即领取限量免费参会名额!