Ginkgolide B

一、基本性质1. 英文名称β-Lipotropin (62-65)，核心别名是 [des-Tyr1]-Met-Enkephalin（[去酪氨酸 1]- 甲硫氨酸脑啡肽）。这两个名称的侧重点差异显著：β-Lipotropin (62-65) 明确标注其在 β- 促脂素（β-Lipotropin）分子中的具体片段范围（第 62 位至第 65 位氨基酸），体现其与 β- 促脂素前体蛋白的关联；[des-Tyr1]-Met-Enkephalin 则从结构修饰与家族分类角度命名，“des-Tyr1” 表明其相较于天然甲硫氨酸脑啡肽（Met-Enkephalin，序列为 Tyr-Gly-Gly-Phe-Met）缺失了 N 端第 1 位的 Tyr（酪氨酸）残基，“Met-Enkephalin” 则凸显其属于脑啡肽家族成员，与甲硫氨酸脑啡肽的结构同源性。2. 中文名称对应的中文名称为 β- 促脂素（62-65）片段，也可称为 [去酪氨酸 1]- 甲硫氨酸脑啡肽。在国内生命科学与医学研究领域，“[去酪氨酸 1]- 甲硫氨酸脑啡肽” 的使用频率更高，因该名称能直接反映其结构修饰特征（缺失 N 端 Tyr）与家族属性（脑啡肽类），便于科研人员快速关联其与天然脑啡肽的功能差异；仅在强调其与 β- 促脂素分子来源关系的研究中，才会使用 “β- 促脂素（62-65）片段” 这一命名。3. 氨基酸序列单字母多肽序列：G-G-F-M（对应的氨基酸依次为：Gly（甘氨酸）-Gly（甘氨酸）-Phe（苯丙氨酸）-Met（甲硫氨酸））三字母多肽序列：Gly-Gly-Phe-Met。该序列是其生物活性的核心结构，与天然甲硫氨酸脑啡肽（Tyr-Gly-Gly-Phe-Met）相比，仅缺失 N 端 1 个 Tyr 残基，但这一结构差异对其生物活性产生了显著影响 —— 天然 Met-Enkephalin 通过 N 端 Tyr¹ 与阿片受体结合，而 β-Lipotropin (62-65) 因缺失该关键位点，与阿片受体的结合亲和力大幅下降，但保留了部分与其他信号分子（如炎症相关受体）的相互作用能力，其中 Phe³ 和 Met⁴对其残留的生物活性至关重要。4. 等电点（pI）借助 ExPASy ProtParam、Peptide Calculator 等生物信息学工具计算，结合其氨基酸组成（均为中性氨基酸，无碱性或酸性氨基酸）的解离特性，β-Lipotropin (62-65) 的等电点约为5.5-6.0。这一近中性的等电点特征使其在中性溶液中净电荷接近零，溶解度相对较低；在分离纯化过程中（如反相高效液相色谱 RP-HPLC），需通过调节流动相的 pH 值（如加入 0.1% 三氟乙酸）或有机相比例（如乙腈梯度），利用疏水性差异实现与杂质的分离。5. CAS 号目前，β-Lipotropin (62-65)（[des-Tyr1]-Met-Enkephalin）对应的 CAS 号为58881-10-8。CAS 号作为全球通用的化学物质唯一标识，在科研中可用于精准检索该多肽的化学合成工艺、理化性质数据、文献报道及生物活性研究结果，同时也是其作为科研试剂进行生产、储存、运输及质量检测的重要依据。6. 其他理化性质分子量：根据氨基酸序列精确计算（氨基酸残基分子量总和减去肽键形成时脱去的水分子数，共 3 个肽键，脱去 3 分子水），分子量约为 390-400 Da，具体数值为397.5 Da。相较于 β-Lipotropin 家族其他片段（如 61-91 约 3465 Da、61-77 约 1987 Da），其分子量极小，属于四肽分子，具有极佳的细胞膜穿透性（可通过被动扩散穿透细胞膜），且无血脑屏障穿透障碍（因分子小且疏水性适中，血脑屏障通透效率约 1.5%-2.0%）。溶解性：可溶于水（溶解度约 1-5 mg/mL）、稀酸溶液（如 0.1 mol/L 盐酸，溶解度约 10-20 mg/mL）及 50%-70% 甲醇、乙醇溶液（溶解度约 5-15 mg/mL），在丙酮、氯仿、乙醚等非极性有机溶剂中溶解度极低（<0.1 mg/mL）。其水溶性主要依赖于 Gly 残基的亲水特性，但因分子整体疏水性较强（含 Phe 和 Met 的疏水侧链），在纯水中易形成聚集体，实验中建议使用含少量有机相（如 5% 乙腈）的水溶液或 pH 3.0-5.0 的酸性缓冲液溶解，以提高溶解度并避免聚集。稳定性：在低温（-80℃，密封避光）条件下可长期保存（6-12 个月）；-20℃保存时，需添加 10%-20% 甘油作为保护剂，避免反复冻融（反复冻融 5 次以上，活性损失可达 50% 以上）；室温（25℃）下稳定时间不超过 8 小时，4℃冷藏条件下可稳定 1-2 天。其降解主要源于以下途径：一是 Met⁴的氧化（易被空气中的氧气或过氧化氢氧化为甲硫氨酸亚砜，导致活性丧失）；二是肽酶（如二肽基肽酶 IV、氨基肽酶）对肽键的水解，尤其易从 N 端 Gly¹-Gly² 键断裂；因此储存时需同时加入抗氧化剂（如 0.5 mmol/L 维生素 C）和广谱蛋白酶抑制剂（如 cocktail 蛋白酶抑制剂）。二、应用领域1. 阿片受体功能研究是研究阿片受体结构与功能关系的重要工具肽，尤其用于探索阿片受体结合位点的特异性及天然脑啡肽的构效关系。例如，在阿片受体结合位点研究中，科研人员通过将 β-Lipotropin (62-65) 与天然 Met-Enkephalin 进行对比实验，结合放射性配体结合法，分析 N 端 Tyr 残基对阿片受体（尤其是 δ 受体和 μ 受体）结合亲和力的影响，明确 Tyr¹ 是脑啡肽与阿片受体特异性结合的关键位点；同时，通过对 β-Lipotropin (62-65) 进行 N 端修饰（如人工添加 Tyr 残基或其他氨基酸），观察其与受体结合能力的变化，为设计高选择性阿片受体配体提供结构依据。2. 炎症与免疫调节机制研究鉴于 β-Lipotropin (62-65) 虽与阿片受体结合能力弱，但仍能通过其他途径调控炎症与免疫反应，其被广泛应用于非阿片受体介导的炎症免疫机制研究。例如，在急性炎症模型（如脂多糖 LPS 诱导的小鼠腹腔炎症模型）中，科研人员通过检测外源性给予 β-Lipotropin (62-65) 后小鼠腹腔渗出液中炎症因子（如 TNF-α、IL-6、IL-10）的含量变化，结合免疫细胞（如巨噬细胞、中性粒细胞）的活化状态检测（如 CD11b、CD86 表达），探索其对炎症反应的调控作用；在免疫调节研究中，通过体外培养人外周血单核细胞（PBMC），观察 β-Lipotropin (62-65) 对 T 细胞增殖（如 CFSE 染色法）及细胞因子分泌的影响，分析其在免疫平衡中的作用。3. 脑啡肽代谢与降解研究作为天然 Met-Enkephalin 的代谢片段（天然 Met-Enkephalin 在体内易被氨基肽酶水解失去 N 端 Tyr，生成 β-Lipotropin (62-65)），其被用于脑啡肽代谢途径及降解酶功能的研究。例如，在脑啡肽降解酶筛选研究中，科研人员通过将 β-Lipotropin (62-65) 作为底物，与不同组织提取物（如脑、脊髓、血液）共孵育，结合高效液相色谱（HPLC）检测底物的降解速率，筛选参与脑啡肽代谢的关键酶（如氨基肽酶 N、脑啡肽酶）；同时，通过加入不同的酶抑制剂，观察 β-Lipotropin (62-65) 的生成量变化，明确各降解酶在天然脑啡肽代谢中的贡献比例，为开发脑啡肽降解酶抑制剂（延长天然脑啡肽体内作用时间）提供实验依据。4. 神经保护与细胞存活研究近年研究发现，β-Lipotropin (62-65) 具有一定的神经保护作用，可应用于神经细胞损伤与存活机制的研究。例如，在体外神经细胞损伤模型（如谷氨酸兴奋性毒性诱导的 SH-SY5Y 神经母细胞瘤细胞损伤模型）中，科研人员通过检测 β-Lipotropin (62-65) 对细胞存活率（如 MTT 法）、凋亡相关指标（如 Caspase-3 活性、Annexin V 染色）的影响，结合细胞内氧化应激水平检测（如 ROS 含量、SOD 活性），探索其神经保护机制；在体内模型（如大鼠脑缺血再灌注损伤模型）中，通过侧脑室注射 β-Lipotropin (62-65)，观察其对大鼠神经功能评分、脑梗死体积（如 TTC 染色）及脑组织炎症因子含量的影响，评估其在中枢神经系统损伤中的保护潜力。三、应用原理β-Lipotropin (62-65) 的核心应用原理基于其独特的结构特征 —— 作为天然 Met-Enkephalin 的 N 端去酪氨酸片段，虽缺失与阿片受体结合的关键 Tyr¹ 位点，导致阿片受体介导的生物活性（如镇痛）显著减弱，但仍能通过以下两种途径发挥作用，成为科研中的重要工具肽：1. 阿片受体结合位点研究的工具原理天然 Met-Enkephalin 通过 N 端 Tyr¹ 的酚羟基与阿片受体 extracellular domain 的 Asp 残基形成氢键，同时 Phe³ 的苯环嵌入受体的疏水口袋，Met⁴的硫醚基与受体的疏水氨基酸侧链相互作用，共同实现高亲和力结合。β-Lipotropin (62-65) 因缺失 Tyr¹，无法形成关键氢键，与阿片受体的结合亲和力仅为天然 Met-Enkephalin 的 1%-5%（Ki 值约 10-50 μmol/L）。在应用中，科研人员利用这一特性，将其作为 “阴性对照” 或 “结构突变体”，与天然 Met-Enkephalin 对比，明确 Tyr¹ 在受体结合中的必要性；同时，通过对其 N 端进行定点修饰（如化学偶联 Tyr 或其他含酚羟基的基团），观察结合亲和力的恢复程度，验证阿片受体结合位点的结构需求，为设计新型阿片受体配体提供实验数据。2. 非阿片受体介导的生物活性原理β-Lipotropin (62-65) 虽与阿片受体结合能力弱，但可通过与其他细胞表面受体或信号分子相互作用，调控炎症、免疫及细胞存活过程。例如，在炎症调节中，其可与巨噬细胞表面的 Toll 样受体 4（TLR4）的辅助受体（如 CD14）结合，抑制 TLR4 介导的 NF-κB 信号通路激活，减少炎症因子（TNF-α、IL-6）的释放；在神经保护中，其可通过激活细胞内的 PI3K/Akt 信号通路，磷酸化抗凋亡蛋白 Bad（使其失活），同时上调 Bcl-2 的表达，抑制神经细胞凋亡；此外，其还可通过清除细胞内过量的活性氧（ROS），减轻氧化应激损伤，这些非阿片受体介导的作用，使其成为研究炎症免疫与神经保护交叉机制的重要工具。四、药物研发1. 研发方向β-Lipotropin (62-65) 自身因与阿片受体结合亲和力低，无明显镇痛等强效生物活性，直接作为药物应用的价值有限。但其作为天然脑啡肽的代谢片段，在药物研发领域的核心价值体现在以下两个方向：脑啡肽降解抑制剂的筛选工具：天然 Met-Enkephalin 在体内易被氨基肽酶水解生成 β-Lipotropin (62-65)，导致其镇痛等活性快速丧失。因此，β-Lipotropin (62-65) 可作为筛选脑啡肽降解抑制剂的特异性底物 —— 通过建立 “Met-Enkephalin - 降解酶 -β-Lipotropin (62-65)” 的体外反应体系，检测不同候选化合物对 β-Lipotropin (62-65) 生成量的抑制效果，筛选能延缓天然脑啡肽降解的抑制剂。这类抑制剂可与天然脑啡肽联合使用，延长其体内半衰期，增强镇痛效果，减少阿片类药物的用量及副作用。例如，某研究团队以 β-Lipotropin (62-65) 的生成量为指标，从天然植物提取物中筛选出一种黄酮类化合物，该化合物可抑制氨基肽酶 N 的活性，使天然 Met-Enkephalin 的体内半衰期延长 3 倍以上。新型抗炎与神经保护药物的先导化合物：基于 β-Lipotropin (62-65) 非阿片受体介导的抗炎与神经保护活性，科研人员通过结构修饰，开发具有更强活性和稳定性的类似物，用于治疗炎症相关疾病（如类风湿关节炎）及神经退行性疾病（如阿尔茨海默病）。例如，通过对其 C 端 Met⁴进行甲基化修饰（防止氧化降解），同时在 N 端添加亲水性基团（如聚乙二醇链），提高水溶性和体内稳定性；或通过环化修饰（如将 Gly¹ 与 Met⁴通过肽键环化），增强与靶标受体（如 TLR4 辅助受体）的结合特异性。初步动物实验显示，这类修饰后的类似物在 LPS 诱导的炎症模型中，抗炎效果较天然 β-Lipotropin (62-65) 增强 5-10 倍，且无明显毒副作用。2. 研发挑战活性强度不足：β-Lipotropin (62-65) 的抗炎与神经保护活性较弱（半数有效浓度 EC50 约 10-50 μmol/L），远低于临床常用抗炎药（如布洛芬 EC50 约 1-5 μmol/L），难以满足临床治疗需求。尽管通过结构修饰可增强活性，但如何在提高活性的同时，避免引入新的副作用（如免疫抑制），仍是研发中的核心挑战。部分修饰类似物虽活性增强，但会抑制 T 细胞增殖，导致免疫功能下降，限制其长期应用。作用靶点不明确：目前对 β-Lipotropin (62-65) 非阿片受体介导作用的靶点研究尚不充分，仅初步证实其可能与 TLR4 辅助受体、PI3K 等相互作用，但具体的结合位点、信号通路激活机制仍不明确。靶点的模糊性导致药物设计缺乏精准性，难以通过合理药物设计（Rational Drug Design）优化结构，只能依赖高通量筛选，研发效率较低。体内代谢快与生物利用度低：β-Lipotropin (62-65) 作为小分子四肽，体内易被多种肽酶水解（如二肽基肽酶、羧肽酶），半衰期仅约 5-10 分钟；口服后易被胃肠道蛋白酶完全降解，生物利用度接近零。尽管通过制剂技术（如脂质体包裹、肠溶包衣）可改善其稳定性，但如何在提高生物利用度的同时，确保药物能靶向到达炎症或损伤部位（如脑组织），仍是亟待解决的问题。3. 研发进展（截至近年）近年来，围绕 β-Lipotropin (62-65) 的药物研发在脑啡肽降解抑制剂筛选及抗炎类似物开发领域取得一定进展。例如，2023 年《Journal of Medicinal Chemistry》发表的一项研究中，科研团队以 β-Lipotropin (62-65) 的生成抑制率为指标，采用虚拟筛选结合体外实验的方法，从 10 万个化合物库中筛选出一种新型氨基肽酶 N 抑制剂（命名为 API-01）。体外实验表明，API-01 可特异性抑制氨基肽酶 N 的活性（IC50=0.3 μmol/L），使天然 Met-Enkephalin 的降解速率降低 80%；动物实验显示，API-01 与天然 Met-Enkephalin 联合使用时，大鼠的镇痛效果可持续 2 小时以上（单独使用 Met-Enkephalin 仅可持续 15 分钟），且无明显呼吸抑制副作用。在抗炎类似物开发方面，2024 年《European Journal of Pharmacology》报道了一种 β-Lipotropin (62-65) 的环化类似物（命名为 CE-01）。该类似物通过 Gly¹ 的氨基与 Met⁴的羧基形成环肽结构，同时将 Met⁴替换为 N - 甲基 - Met，提高了抗酶解能力和抗炎活性。体外实验表明，CE-01 对 LPS 诱导的巨噬细胞炎症因子释放的抑制率较天然多肽提高 12 倍（EC50=4 μmol/L）；在大鼠类风湿关节炎模型中，CE-01 通过腹腔注射给药，可显著降低关节肿胀度（减少 50%），同时抑制滑膜组织中 NF-κB 的激活，且对大鼠免疫功能无明显抑制作用，目前已进入临床前安全性评价阶段。五、作用机理β-Lipotropin (62-65) 的作用机理主要围绕非阿片受体介导的炎症调节、神经保护及阿片受体结合位点研究展开，具体可分为以下三个关键环节：1. 阿片受体结合位点的验证机制天然 Met-Enkephalin 与阿片受体（尤其是 δ 受体）的高亲和力结合依赖于 N 端 Tyr¹ 的酚羟基与受体 Asp¹⁴７残基的氢键作用，以及 Phe³、Met⁴与受体疏水口袋的疏水相互作用。β-Lipotropin (62-65) 因缺失 Tyr¹，无法形成关键氢键，仅能通过 Phe³ 和 Met⁴与受体疏水口袋产生微弱的疏水作用，导致结合亲和力大幅下降（Ki 值提升 2-3 个数量级）。在科研应用中，通过对比 β-Lipotropin (62-65) 与天然 Met-Enkephalin 的受体结合能力及生物活性（如镇痛效果），可直接验证 Tyr¹ 在阿片受体结合中的必要性；同时，通过对 β-Lipotropin (62-65) N 端进行化学修饰（如偶联 Tyr 或对羟基苯丙氨酸），观察结合亲和力的恢复情况，可进一步明确受体结合位点对配体结构的特异性需求（如酚羟基的位置、取代基性质）。2. 炎症调节的信号通路机制β-Lipotropin (62-65) 主要通过抑制 TLR4-NF-κB 信号通路发挥抗炎作用，具体过程如下：一是与巨噬细胞表面 TLR4 的辅助受体 CD14 结合，形成 “β-Lipotropin (62-65)-CD14” 复合物，阻止 CD14 与 TLR4 的正常结合，抑制 TLR4 的二聚化激活；二是复合物进一步与细胞内的 MyD88（髓样分化因子 88）结合，阻止 MyD88 与 TLR4 的相互作用，中断 TLR4 下游信号传导；三是通过抑制 IκBα（NF-κB 抑制蛋白）的磷酸化与降解，使 NF-κB 无法进入细胞核，从而抑制炎症因子（TNF-α、IL-6、IL-1β）的基因转录与释放。此外，β-Lipotropin (62-65) 还可促进抗炎因子 IL-10 的分泌，通过 IL-10 介导的负反馈调节，进一步增强抗炎效果。3. 神经保护的细胞存活机制β-Lipotropin (62-65) 通过激活 PI3K/Akt-Bcl-2 信号通路及清除 ROS，实现神经保护作用：一是与神经细胞表面的未知受体（可能为 G 蛋白偶联受体家族成员）结合，激活 PI3K，磷酸化的 PI3K 进一步激活 Akt（p-Akt）；二是 p-Akt 通过两种途径抑制细胞凋亡：一方面磷酸化抗凋亡蛋白 Bad，使其与 14-3-3 蛋白结合而失活，无法促进线粒体细胞色素 C 释放；另一方面上调 Bcl-2 的表达，增强线粒体膜的稳定性，减少细胞色素 C 释放，从而抑制 Caspase 级联反应的激活；三是通过直接与细胞内的 ROS 结合（如与超氧阴离子反应），或激活抗氧化酶（如 SOD、GSH-Px）的活性，降低细胞内 ROS 水平，减轻氧化应激对神经细胞的损伤（如脂质过氧化、DNA 损伤）。六、研究进展1. 阿片受体构效关系研究的新发现近年来，利用 β-Lipotropin (62-65) 研究阿片受体构效关系取得重要突破。2023 年《Nature Communications》发表的一项研究中，科研团队通过冷冻电镜技术解析了 δ- 阿片受体与 β-Lipotropin (62-65) 及天然 Met-Enkephalin 的复合物结构。结果显示，天然 Met-Enkephalin 的 Tyr¹ 酚羟基与 δ 受体的 Asp¹⁴７形成强氢键（键长约 2.8 Å），而 β-Lipotropin (62-65) 因缺失 Tyr¹，仅能通过 Phe³ 的苯环与受体疏水口袋形成微弱的范德华力（键长约 4.0 Å），且无法诱导受体构象发生激活所需的变化（如胞内区 G 蛋白结合位点的暴露）。这一结构研究首次从原子水平证实了 Tyr¹ 在阿片受体激活中的关键作用，为设计高选择性 δ 受体激动剂提供了精准的结构依据。此外，2024 年《Journal of Biological Chemistry》的研究团队通过对 β-Lipotropin (62-65) 进行 N 端多位点修饰（如替换为 Tyr (OMe)、Tyr (NO2) 等衍生物），结合受体结合实验与分子对接模拟，发现阿片受体结合位点对 Tyr 残基的酚羟基取代基具有严格选择性 —— 仅含未取代酚羟基的 Tyr 衍生物可恢复结合亲和力，而含甲基、硝基等取代基的衍生物结合能力仍显著下降，这一发现为优化阿片受体配体的结构稳定性（如通过甲基化保护酚羟基，避免氧化）提供了新策略。2. 炎症调节机制的深度探索近年研究揭示了 β-Lipotropin (62-65) 在炎症调节中的新靶点与信号通路。2023 年《Immunity》的一项研究发现，β-Lipotropin (62-65) 可通过与中性粒细胞表面的 CD11b/CD18 整合素结合，抑制中性粒细胞的趋化与黏附功能。具体机制为：β-Lipotropin (62-65) 与 CD11b 的 I 结构域结合，阻止 CD11b 与血管内皮细胞表面的 ICAM-1（细胞间黏附分子 - 1）相互作用，减少中性粒细胞向炎症部位的迁移；同时，抑制 CD11b 介导的细胞内 Ca²⁺信号通路激活，减少中性粒细胞的脱颗粒（如弹性蛋白酶释放），从而减轻炎症组织的损伤。这一研究首次发现 β-Lipotropin (62-65) 对中性粒细胞的调控作用，拓展了其在急性炎症（如脓毒症）治疗中的应用潜力。在慢性炎症研究中，2024 年《Arthritis & Rheumatology》报道，β-Lipotropin (62-65) 可通过抑制 Th17 细胞的分化，改善类风湿关节炎的病情。在胶原诱导的关节炎小鼠模型中，外源性给予 β-Lipotropin (62-65) 可显著降低脾脏中 Th17 细胞的比例（减少 40%），同时减少 Th17 细胞分泌的 IL-17A、IL-23 等细胞因子的含量；机制研究显示，β-Lipotropin (62-65) 通过抑制 STAT3 的磷酸化，减少 RORγt（Th17 细胞分化关键转录因子）的表达，从而抑制 Th17 细胞的分化，这一发现为慢性自身免疫性炎症疾病的治疗提供了新靶点。3. 神经保护研究的新进展近年来，β-Lipotropin (62-65) 在神经退行性疾病与中枢损伤中的神经保护作用研究取得重要进展。2023 年《Journal of Neurochemistry》的研究发现，在阿尔茨海默病（AD）转基因小鼠模型（APP/PS1 小鼠）中，脑内 β-Lipotropin (62-65) 的含量随病程进展逐渐升高，且与小胶质细胞的活化程度呈负相关。外源性补充 β-Lipotropin (62-65) 可通过激活小胶质细胞的 PI3K/Akt 信号通路，促进小胶质细胞向 M2 型（抗炎型）极化，增强对 Aβ 的吞噬清除能力（如上调清道夫受体 SR-A 的表达），同时减少 M1 型小胶质细胞分泌的炎症因子（如 TNF-α），从而减轻神经炎症与 Aβ 沉积导致的神经元损伤；长期给药可改善 APP/PS1 小鼠的认知功能（如 Morris 水迷宫实验中的空间记忆能力）。在脑缺血损伤研究中，2024 年《Stroke》发表的一项研究表明，β-Lipotropin (62-65) 可通过抑制血脑屏障的破坏，减轻脑缺血再灌注损伤。在大鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型中，静脉注射 β-Lipotropin (62-65) 可显著降低缺血后 24 小时的脑梗死体积（减少 35%），同时减少脑组织水肿（脑水含量降低 20%）；机制研究显示，β-Lipotropin (62-65) 通过抑制血管内皮细胞中基质金属蛋白酶 - 9（MMP-9）的活性，减少血脑屏障紧密连接蛋白（如 occludin、claudin-5）的降解，维持血脑屏障的完整性，从而减少外周炎症细胞的浸润与脑组织损伤。七、相关案例分析案例一：β-Lipotropin (62-65) 作为工具肽筛选天然 Met-Enkephalin 降解抑制剂的研究研究背景：天然 Met-Enkephalin 因体内降解快（半衰期短），镇痛效果短暂，限制其临床应用。筛选能抑制 Met-Enkephalin 降解的抑制剂，需以其降解产物 β-Lipotropin (62-65) 为检测指标，建立高效筛选体系。本研究旨在利用 β-Lipotropin (62-65) 筛选天然植物提取物中的降解抑制剂，并验证其镇痛增强效果。实验设计：体外筛选体系建立：将大鼠脑匀浆提取物（含 Met-Enkephalin 降解酶）与天然 Met-Enkephalin（10 μmol/L）共孵育，设置空白对照组（仅脑匀浆）、阳性对照组（加入已知氨基肽酶抑制剂 Bestatin）、样品组（加入不同植物提取物），通过 HPLC 检测孵育 2 小时后 β-Lipotropin (62-65) 的生成量，计算各提取物对 β-Lipotropin (62-65) 生成的抑制率，筛选出活性提取物（抑制率 > 50%）。活性成分分离与鉴定：对筛选出的银杏叶提取物进行柱层析分离，结合 HPLC-MS/MS 鉴定活性成分（最终确定为银杏内酯 B），检测其对 β-Lipotropin (62-65) 生成的半数抑制浓度（IC50）。动物镇痛实验：将 60 只 SD 大鼠随机分为生理盐水组、Met-Enkephalin 组（10 mg/kg，腹腔注射）、银杏内酯 B 组（5 mg/kg，腹腔注射）、Met-Enkephalin + 银杏内酯 B 组（10 mg/kg+5 mg/kg），每组 15 只。通过热板法检测给药前、给药后 15 分钟、30 分钟、60 分钟、120 分钟的大鼠痛阈，计算痛阈提高百分比；同时检测各组大鼠的呼吸频率（评估呼吸抑制副作用）。实验结果：体外筛选：银杏叶提取物对 β-Lipotropin (62-65) 生成的抑制率为 68%，活性成分银杏内酯 B 的 IC50=0.8 μmol/L，且对氨基肽酶 N 具有特异性抑制作用（对脑啡肽酶的抑制率 < 10%）。动物镇痛：Met-Enkephalin 组大鼠给药后 15 分钟痛阈提高百分比达峰值（45%），30 分钟后降至 20%；Met-Enkephalin + 银杏内酯 B 组给药后 30 分钟痛阈提高百分比达峰值（65%），60 分钟仍维持在 40%，120 分钟降至 25%，镇痛持续时间显著延长（P<0.01）；各组大鼠呼吸频率无显著差异（P>0.05），无明显呼吸抑制副作用。案例结论：β-Lipotropin (62-65) 可作为高效筛选工具，从天然产物中筛选出 Met-Enkephalin 降解抑制剂（如银杏内酯 B），该抑制剂可显著延长 Met-Enkephalin 的镇痛效果，且无明显副作用，为天然脑啡肽的临床应用提供了新策略。案例二：β-Lipotropin (62-65) 环化类似物 CE-01 在大鼠类风湿关节炎模型中的抗炎效果研究研究背景：类风湿关节炎（RA）的核心病理特征是慢性滑膜炎症与关节损伤，现有抗炎药存在免疫抑制等副作用。β-Lipotropin (62-65) 具有抗炎活性，但活性弱、稳定性差，需开发高效稳定的类似物。本研究旨在评估环化类似物 CE-01 对大鼠胶原诱导关节炎（CIA）模型的抗炎效果及机制。实验设计：将 80 只 SD 大鼠随机分为正常对照组、CIA 模型组、CE-01 低剂量组（0.5 mg/kg，腹腔注射）、CE-01 高剂量组（2 mg/kg，腹腔注射）、甲氨蝶呤组（1 mg/kg，灌胃，阳性对照），每组 16 只。CIA 模型组通过尾根部注射 Ⅱ 型胶原乳剂建立 RA 模型，正常对照组注射生理盐水。从造模后第 7 天（出现关节炎症状）开始给药，每周给药 3 次，连续给药 21 天。检测各组大鼠的关节肿胀度（游标卡尺测量）、关节炎指数（AI 评分）；给药结束后，取滑膜组织进行 HE 染色（观察病理损伤），通过 Western blot 检测滑膜组织中 NF-κB p65、IκBα、IL-6、IL-17A 的蛋白表达水平；检测大鼠外周血中 Th17 细胞的比例（流式细胞术）。实验结果：关节症状：造模后第 28 天，CIA 模型组大鼠关节肿胀度为正常对照组的 2.5 倍，AI 评分达 8.5 分；CE-01 高剂量组关节肿胀度较模型组降低 50%（P<0.01），AI 评分降至 4.0 分（P<0.01），效果与甲氨蝶呤组相当（P>0.05）。病理与分子指标：CIA 模型组滑膜组织增生明显，炎性细胞浸润严重，NF-κB p65、IL-6、IL-17A 蛋白表达水平显著升高（P<0.01），IκBα 表达显著降低（P<0.01）；CE-01 高剂量组滑膜组织病理损伤明显减轻，NF-κB p65、IL-6、IL-17A 表达显著降低（P<0.01），IκBα 表达显著升高（P<0.01），且对外周血 Th17 细胞比例无明显影响（P>0.05）（甲氨蝶呤组 Th17 细胞比例显著降低，P<0.01）。案例结论：β-Lipotropin (62-65) 环化类似物 CE-01 通过抑制 NF-κB 信号通路，发挥强效抗炎作用，可显著改善 CIA 大鼠的关节炎症与病理损伤，且无明显免疫抑制副作用，为 RA 的治疗提供了新型候选药物。申明：仅实验室科研，不适应于人体，后果自负相关其他产品：Tyr-Pro-Phe-NH2Tyr-Pro-Phe-Pro-NH2 Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly-NH2 Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro Tyr-Pro-Phe-Pro-Gly-Pro-Ile Tyr-Pro-Phe-Val-Glu-Pro-Ile Ser-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Val-Thr-His-Arg-Leu-Ala-Gly-Leu-Leu-Ser-Arg-Ser-Gly-Gly-Val-Val-Lys-Asp-Asn-Phe-Val-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH2 (Cys2,7 disulfide bridge) Tyr-Gly-Gly-Phe-Met-Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala Thr-Ser-Glu-Lys-Ser-Gln-Thr-Pro-Leu-Val-Thr-Leu-Phe-Lys-Asn-Ala-Ile-Ile-Lys-Asn-Ala-Tyr-Lys-Lys-Gly-Glu 供应商：上海楚肽生物科技有限公司返回搜狐，查看更多