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以肾功能突然丧失为特征的急性肾损伤(AKI)是一种发病率高、死亡率高的世界性公共卫生问题。AKI的主要病因包括脓毒症、缺血/再灌注损伤和肾毒性。 以肾功能突然丧失为特征的急性肾损伤(AKI)是一种发病率高、死亡率高的世界性公共卫生问题。AKI的主要病因包括脓毒症、缺血/再灌注损伤和肾毒性。其中，肾毒性决定了高达25%的AKI病例，这是由于使用了临床批准的药物，特别是化疗药物。 顺铂是一种广泛用于治疗各种实体恶性肿瘤的有效化疗药物，但其不良反应限制了其临床应用。据报道，接受顺铂治疗的患者中约有三分之一可能发生肾毒性。目前，已有相当多的研究致力于预防顺铂所致AKI，但仍没有令人满意的治疗方法。 图片来源：https://doi.org/10.1038/s41401-023-01122-6 近日，来自中山大学的研究者们在Acta Pharmacologica Sinica杂志上发表了题为“Inhibition of TMEM16A improves cisplatin-induced acute kidney injury via preventing DRP1-mediated mitochondrial fission”的文章，该研究数据表明，TMEM16A抑制通过ERK1/2/Drp1途径阻止肾小管细胞线粒体分裂，从而减轻顺铂诱导的AKI。抑制TMEM16A可能是治疗AKI的一种新策略。 急性肾损伤(AKI)具有较高的发病率和死亡率。我们先前的研究表明，TMEM16A，一种钙激活的氯离子通道，在慢性肾脏疾病的肾脏纤维化进展中起作用。然而，TMEM16A是否参与AKI仍是个未知数。 在本研究中，研究者建立了顺铂AKI小鼠模型，发现TMEM16A在损伤的肾脏中表达上调。体内TMEM16A基因敲除可有效预防顺铂诱导的肾小管细胞凋亡、炎症反应和肾功能损害。Western印迹和透射电子显微镜显示，TMEM16A基因敲除抑制了Drp1从细胞质到线粒体的易位，并阻止了线粒体的分裂。 在培养的HK2细胞中，shRNA或其特异性抑制剂敲除或抑制TMEM16A可抑制顺铂诱导的线粒体分裂及其相关的能量障碍、ROS积聚，并通过抑制Drp1的激活而抑制细胞凋亡。进一步的研究表明，TMEM16A的基因敲除或药物抑制通过ERK1/2信号通路抑制顺铂诱导的Drp1Ser-616位点的磷酸化，而过表达TMEM16A则促进这一作用。用DRp1或ERK1/2抑制剂治疗可有效阻止顺铂诱导的线粒体分裂。 TMEM16A基因敲除或抑制抑制顺铂诱导的体内外线粒体分裂 图片来源：https://doi.org/10.1038/s41401-023-01122-6 总之，本研究提供了证据，TMEM16A的敲除或抑制通过阻止肾小管细胞线粒体分裂和随后的凋亡来减弱顺铂AKI。在机制上，TMEM16A通过ERK1/2依赖的方式促进Ser-616的磷酸化，促进Drp1向线粒体的易位。这些发现可能为抑制TMEM16A作为顺铂AKI的合理治疗策略提供机制基础。（生物谷Bioon.com） 参考文献 Xiao-long Li et al. Inhibition of TMEM16A improves cisplatin-induced acute kidney injury via preventing DRP1-mediated mitochondrial fission. Acta Pharmacol Sin. 2023 Jul 4. doi: 10.1038/s41401-023-01122-6.

这项研究报告了一种新的化疗耐药机制，即化疗可促进静止态卵巢癌细胞表达大量FST，并以旁分泌的方式影响其邻近肿瘤细胞的增殖和耐药。通过敲除FST或使用FST中和抗体可提高肿瘤细胞或小鼠肿瘤模型对化疗药物 卵巢癌是女性常见恶性肿瘤之一。由于卵巢位于盆腔较深部，缺乏早期筛查方法，多数患者确诊时已是晚期，具有病程复杂，易复发，远期生存率低等特点。因此，卵巢癌成为了女性生殖道肿瘤诊治中的“硬骨头”。 手术和化疗是卵巢癌的常规治疗手段，其中约70%的患者经化疗后能够实现缓解，但大部分患者仍会对化疗药物耐药，最终导致卵巢癌治疗失败，但目前尚无较好的方法可以解决耐药问题。 不过近日，美国匹兹堡大学Ronald Buckanovich教授团队发表于癌症领域著名期刊Clinical Cancer Research的最新研究[1]，为克服卵巢癌耐药带来了希望。该研究发现，化疗可通过激活转录因子NFATC4，使静止态卵巢癌细胞分泌大量卵泡抑制素（follistatin, FST），从而促进周围肿瘤细胞耐药；而靶向FST在临床前研究中逆转了卵巢癌细胞的耐药，并提高了卵巢癌小鼠模型的存活率和生存期。 文章首页截图 在肿瘤中，有部分暂停增殖、处于G0期的细胞，被称为静止态癌细胞。由于化疗主要针对快速分裂的细胞，静止态癌细胞由于分裂缓慢而对化疗药物耐受，既往研究已经证明，静止态癌细胞在多种癌症的耐药中扮演了重要角色[2]。 静止态癌细胞在卵巢癌的化疗耐药中也起到重要作用[3]。Buckanovich教授团队在此前的工作中发现，转录因子NFATC4在卵巢癌肿瘤干细胞中高表达，化疗可激活NFATC4入核促进其发挥转录调控作用[4]，从而诱导细胞进入静止状态并发生耐药。但是，其中的具体机制尚不清楚。 因此，研究团队这次首先通过体外实验，鉴定出受NFATC4调控的141个靶基因，其中RCAN1, CNN1, COL3A1, FST和ANO1的mRNA表达量上调最为明显。考虑到FST在卵巢的发育和功能中具有重要作用[5]，并且临床发现卵巢癌患者血清中的FST也出现升高[6]，研究团队决定探索NFATC4下游靶点FST的作用。 体外细胞实验证实，NFATC4确实能调控FST蛋白表达，且对高级别浆液性卵巢癌（HGSOC）患者肿瘤组织中，不同分裂速度的癌细胞进行比较时，发现静止态癌细胞中FST表达量显著增高（P<0.01），可达到快速分裂细胞的23倍，由此可见，NFATC4对FST的调控作用主要发生于静止态肿瘤细胞中。 用化疗药物顺铂或紫杉醇处理不同卵巢癌细胞系，可导致FST的mRNA表达量增加10-72倍，导致FST的蛋白表达量增加4-50倍，且静止态癌细胞是FST增加的主要来源，这部分细胞的FST分泌量大约是正常分裂癌细胞的3倍。 不同化疗药物（紫杉醇，Taxol；顺铂，Ciplatin）处理后不同卵巢癌细胞系FST分泌量的变化情况 同时，在卵巢癌肿瘤模型小鼠上也观察到化疗促进FST分泌的现象。那么这些大量分泌的FST，到底有什么用呢？ 研究显示，高浓度FST处理可导致体外培养的卵巢癌细胞数量明显减少（P<0.001）；进一步的分析发现，FST对细胞生长的影响是由于抑制增殖，且仅对快速分裂的细胞增殖产生明显作用，并不影响静止态癌细胞。 不同浓度FST对不同卵巢癌细胞生长的影响 前面提到过，许多化疗药物主要针对的是快速分裂的癌细胞，而一旦细胞增殖速度减慢，药效肯定会大打折扣！ 果然，研究团队发现FST能促进化疗耐药：与单独使用紫杉醇相比，联合FST处理时肿瘤细胞存活数量可提高1.5-2.5倍（P<0.05）。使用顺铂进行实验也得到相似结果，机制分析则显示，FST可通过ATF2信号转导通路促进化疗耐药。 值得一提的是，研究者们还通过细胞共培养实验证明，静止态癌细胞产生的FST可以旁分泌的方式，抑制其邻近快速分裂癌细胞的增殖。打个比方来说，静止态癌细胞就像花的花芯，而相邻的细胞就像花瓣，当化疗药物来袭时，静止态癌细胞就分泌FST来保护整个“花朵”。 在此过程中，更多的肿瘤细胞会进入静止状态，并进一步影响其周围更多的细胞，越来越多的耐药细胞也就随之产生，最终导致癌症复发。 FST可促进化疗药物（紫杉醇，Taxol；顺铂，Cisplatin）发生耐药 接下来，研究团队尝试将FST作为治疗靶点，使用FST中和抗体或CRISPR-Cas9敲除FST，均能显著增加卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性（P<0.01）；而为进一步评估敲除FST在体内的作用，研究者建立了卵巢癌移植瘤小鼠模型，并用紫杉醇进行治疗，结果显示，相比野生型小鼠，注射FST-KO细胞的小鼠存活率显著提高（P<0.0001），总生存期也明显延长。 在化疗药物治疗同时FST敲除对移植瘤小鼠存活率和生存期的影响 最后，研究团队还比较了化疗前后卵巢癌患者体内FST的变化情况：与化疗前相比，患者FST水平在化疗后24小时后增加了1-3倍；而对数百名卵巢癌患者的TCGA数据分析发现，高水平FST与较低的生存率相关，表明FST也有望作为逆转人卵巢癌耐药的新靶点。 总的来说，这项研究报告了一种新的化疗耐药机制，即化疗可促进静止态卵巢癌细胞表达大量FST，并以旁分泌的方式影响其邻近肿瘤细胞的增殖和耐药。通过敲除FST或使用FST中和抗体可提高肿瘤细胞或小鼠肿瘤模型对化疗药物的敏感性。 FST介导的卵巢癌化疗耐药模式图 本次研究对卵巢癌的治疗具有重要意义，化疗目前仍是不可手术卵巢癌的有效治疗手段，减少耐药和复发将大大改善患者预后，而且FST是一种分泌性蛋白，因此是中和抗体的理想靶点，期待相关抗体药物能早日被成功研发出来。

议题荟萃：• FDA已批出12项CAR-T疗法通行证。目前CAR-T疗法仍在研究如何能够攻克实体瘤，在部分实体瘤治疗上已经取得突破。• EMA官员分享了EMA对生物标志物相关适应症申请和对上市批准使用单臂研究ORR的观点。• 细胞因子中的IL-2与T细胞的分化增殖有关，也是新药开发的一个潜力靶点。• 多靶点联合的双抗疗法可能是解决PD-1抑制剂单药治疗应答率低的一个思路。• 免疫治疗已成为肝癌治疗的基石，还可以继续探索免疫治疗联合用药结合手术或放疗或热消融等多项措施。特约撰稿 | 王一树9月2~3日，一年一度的中国肿瘤免疫治疗会议在北京成功举办。大会由中国食品药品国际交流中心（CCFDIE）主办，国家药品监督管理局药品审评中心（CDE）、美国华裔血液及肿瘤专家学会（CAHON）、中国农工民主党中央生物技术与药学工作委员会、清华大学医学院共同协办。中国肿瘤免疫治疗会议已经成功举办了八届，是肿瘤免疫药物研发、国内外专家沟通分享的重要平台。拓展阅读2020肿瘤免疫治疗会议：疗法更多探索，药物研发更多期待今年的大会由CCFDIE副主任翁新愚与CAHON创始人之一的李子海教授为大会致辞。主题演讲：肿瘤免疫学未来十年展望CAHON共同创始人李子海教授和宋文儒教授主持美国国家科学院院士、埃默里大学Rafi Ahmed教授，讲述了从T细胞生存方式视角看肿瘤免疫学的下一阶段发展。首先他提到，PD-1抑制剂会影响PD-1+CD8 T细胞的生存状态，使用PD-1抑制剂能将癌组织中被抑制的PD-1+CD8 T细胞转化为活化状态。其特别提到CD8 T细胞中存在PD-1+TCF-1+ CD8 T细胞亚群，PD-1抑制剂能促进该群细胞增殖活化，从而产生有效抗肿瘤作用。因此，PD-1+TCF-1+ CD8-T细胞的数量及分布，可成为预测PD-1抑制剂治疗效果的生物标记物。例如，PD-1+TCF-1+ CD8 T细胞亚群在HPV引发的头颈部鳞状细胞癌组织中存在，因此可以使用PD-1抑制剂治疗，此外该肿瘤中还存在抗原特异性CD8 T细胞，包含了3种不同的HPV特异性PD-1+TCF-1+CD8 T细胞，针对这样的肿瘤，同时使用PD-1抑制剂和肿瘤疫苗，可以起到协同作用。斯坦福大学Crystal Mackall教授分享了肿瘤CAR-T细胞疗法的新进展。截至2022年8月，在CAR-T细胞方面，FDA已发出12项批准，涉及4家公司的6个产品，涵盖CD19和BCMA 2个靶点。目前CAR-T疗法仍在研究如何能够攻克实体瘤，在部分实体瘤治疗上已经取得突破。此前在Nature Medicine发表的体外实验和动物模型证实，GD2-CAR T细胞疗法对小儿弥漫性脑桥脑胶质瘤展现出积极的治疗希望，且治疗相关副作用可以控制。目前已有GD2-CAR-T细胞疗法在多种类型的脑胶质瘤上，正在开展早期临床研究。欧洲药品管理局（EMA）人用药品委员会（CHMP）主席Harald Enzmann先生，在会上展示了欧洲药品质量管理局肿瘤免疫药物审批流程。对于药品上市许可，全球的共识是基于疗效、安全性和药品质量来评估产品的利益风险平衡。然而国家或区域可能有其特殊性，例如对生物标志物相关适应症申请，以及对单臂试验总应答率(ORR)的接受度等，不同监管部门可能存在差异。Harald Enzmann分享了EMA对生物标志物相关适应症申请的观点：如果药物的靶点是已知且精准的，那么需要提供资料给EMA，说明患者靶点表达量与疗效的关系。EMA可能会就此限定适应症人群的范围，如批准Opdivo+Yervoy组合，用于一线治疗PD-L1阳性（≥1%）、EGFR或ALK阴性的成人转移性非小细胞肺癌（NSCLC）。或告知患者，产品的疗效可能与生物标记物的表达情况有关，以此指导患者的个体化用药决策。同时他分享了EMA对上市批准使用单臂研究ORR的观点，如果满足以下所有条件可能给予附条件获批(CMA) ：药物的收益-风险平衡比为正；申请人在获批后能够提供全面的数据；患者立即获得药物的好处大于等待补充数据的风险；药物满足了未满足的医疗需求。他特别建议，产品在递交上市申请前就应该充分了解监管机构的要求并做好准备。专题一：合成肿瘤免疫CAHON刘德龙教授和刘红涛教授共同主持本专题的第一个话题是细胞因子工程及治疗，由美国国立卫生研究院Warren J. Leonard 教授作报告。他提到近年来在新药研发方面，开启了细胞因子与生物制剂的革命。这类产品主要目的是调控细胞因子的表达，产品包含了广泛的适应症，如JAK抑制剂目前获批的适应症有特应性皮炎、强直性脊柱炎、类风湿关节炎、溃疡性结肠炎等。Leonard 教授认为细胞因子中的IL-2与T细胞的分化增殖有关，也是新药开发的一个潜力靶点。通过调节IL-2表达，可以间接调节TIM3、PD-1、LAG-3等数量。目前已有IL-2/IL-15拮抗剂，以及IL-2部分激动剂等产品正在开发，今后的进展值得期待。另一篇报告是CAR-T治疗新进展，讲者是来自宾夕法尼亚大学医学院的Avery D. Posey, Jr. 教授。他提到CAR-T细胞在产品获批的基础上，还取得了一些新的研究突破，包括如何提升CAR-T细胞的持久性，以及多靶点新型CAR-T研发。CAR信号的改变会增强AKT的激活，减少Vav1信号和钙内流，从而增加 T细胞的持久性。CD3zeta IT AM(“1xx”)的失活也观察到类似的结果。慢性抗原耗尽模型驱动CAR-T细胞功能障碍，可以通过转录因子的基因编辑来克服(l.e.ID3和SOx4)。而多抗原靶向新型CAR-T的研发，可以增强抗肿瘤活性并防止抗原阴性的肿瘤逃逸。清华大学医学院傅阳心教授的报告题为“双靶点抗体：靶向肿瘤细胞还是免疫细胞？”。他表示，虽然PD-L1在多种肿瘤中表达，但是PD-1抑制剂的单药治疗的人群应答率还是有限，因此多靶点联合的双抗疗法可能是解决问题的一个思路。例如，可以尝试将PD-L1和CD3同时阻断，或者PD-L1与CD47同时阻断。另外，对于免疫检查点抑制剂耐药，傅教授认为激活肿瘤组织中的肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）有望解决这一难题。该疗法能提供更多T细胞对肿瘤发起攻击，而检查点抑制剂可防止浸润肿瘤的T细胞失活，因此其与PD-1抑制剂联用可起到协同作用，阻断免疫抑制的同时，激活肿瘤免疫微环境。专题二：中国肿瘤免疫治疗现状CCFDIE副主任翁新愚主持北京协和医院赵海涛教授分享了中国肝胆肿瘤免疫治疗现状及方向。赵教授阐述了肿瘤免疫治疗从1.0到3.0时代的变化。他提到免疫治疗1.0时代，用的主要是单药，如PD-1抑制剂。而2.0时代，开始免疫疗法的联合用药，如罗氏PD-L1抑制剂的阿特珠单抗与贝伐珠单抗的T+A联用方案，或者BMS的PD-L1抑制剂纳武单抗与CTLA-4抑制剂伊匹木单抗联合用药等。可以看到联合用药取得了不错的疗效，多个研究显示无瘤生存率的提高。免疫治疗3.0则是免疫治疗2.0与局部治疗的组合，将联合用药与手术或放疗或热消融等多项措施联合，前瞻性研究显示1+1+1或大于3，可以提升治疗反应率，提高手术切除率等。赵教授表示肝胆肿瘤非常复杂，免疫治疗已成为肝癌治疗的基石，目前进入3.0时代曙光初现，免疫治疗再提高手术切除率，提升无瘤生存率方面，还可以进行更多的探索。北京大学肿瘤医院的沈琳教授分享了嵌合抗原受体T细胞免疫疗法（CAR-T）在消化道肿瘤中的研究进展。目前全球获批的CAR-T细胞治疗适应症集中于血液肿瘤，将CAR-T用于实体瘤在靶点筛选以及能否持久穿透方面有较大挑战。目前有多种办法尝试提高实体瘤CAR-T细胞疗法的有效性和安全性，这些方法各有优缺点。在临床治疗中，医生比较看重产品的稳定性、制备可行性，体内持续扩增及安全性等产品因素，临床应用以患者需求为导向。国内实体瘤细胞治疗已经有众多产品获批IND，而消化道肿瘤是我国高发的肿瘤，目前国内已有针对CLDN18.2、B7-H3、KRAS G12V等靶点的产品在开发消化道肿瘤适应症方向。其中，靶向CLDN18.2的CAR-T细胞疗法，在消化道肿瘤（胃癌、胰腺癌、胃食管结合部肿瘤等）的研究中显示出了可喜的疗效和安全性。目前对实体瘤细胞治疗还在进行不断探索，包括尝试清除淋巴结或者多次回输提高疗效的方法等，沈教授最后呼吁对于新型治疗方法，研发团队和临床科学团队要多方合作，也期待监管部门在审批方面的支持。中山大学肿瘤医院的徐瑞华教授就如何进一步提高消化道肿瘤的免疫治疗疗效进行了报告。消化道肿瘤在中国高发，徐教授团队在提高免疫疗法对胃肠肿瘤的疗效进行了一些探索：精准筛选免疫治疗敏感亚型，发现高肿瘤突变负荷（TMB）胃癌使用PD-1抑制剂疗效显著，食管癌11q13区段非扩增对免疫治疗敏感，POLE/POLD1突变是泛瘤种免疫治疗的标志物；抗血管生成靶向药或化疗与免疫治疗联合，无论肠癌、食管癌、胃癌都显示了增效的结果；还进行了其他转化研究，探索免疫治疗增效新策略，包括负性因子11q13区段的ANO1是潜在的免疫治疗联合靶点，甲硫氨酸限制饮食及靶向YTHDF1可促进免疫应答，菌株制剂RX-af01可作为免疫治疗增敏剂。来自华中科技大学同济医学院附属同济医院的李春蕊教授分享了 CAR-T在多发性骨髓瘤中的临床研究进展。她首先分享了复发难治多发性骨髓瘤的治疗现状：该疾病原先不可治愈，患者复发次数越多预后越差，但目前通过自体CAR-T疗法，部分患者可实现治愈。她认为可以进行一些优化CAR-T治疗的探索包括：患者基线肿瘤特征与患者缓解程度的关系；尝试BCMA CAR-T联合CD19 CAR-T或研发BCMA/CD38双靶点CAR-T；尝试不同工艺能否缩短生产时间。李教授也分享了CAR T治疗复发/难治多发性骨髓瘤同济医院的临床实践，发现更前线的患者也在治疗中显示出较好的疗效和安全性，异体CAR-T的治疗效果正在逐步提高，她期待未来中国的CAR-T走向世界，期待出现老百姓普遍用得起的CAR-T产品。专题3：生物制药界视角CAHON 秦续科博士和廖新生博士主持罗氏/基因泰克 David Shames博士的讲题为药物研发中的循环肿瘤DNA，他对罗氏在精准医疗相关ctDNA的研发，包括用于患者的选择以及围手术期患者的分层进行了分享，他认为ctDNA是药物开发的优胜策略。TopAlliance Biosciences, Inc. 的Patricia Keegan博士从君实生物和TopAlliance公司的视角，认为免疫肿瘤药物在多领域的研发有很多机遇也有很多挑战，目前还缺乏准确预测疗效的生物标记物，国际社会需要继续努力实现对患者接受免疫治疗的疗效及安全性的标准化评估。百时美施贵宝的 Junliang Cai 博士分享了新辅助免疫疗法将成为现实，他展示了Nivolumab非小细胞肺癌（NSCLC）新辅助治疗Checkmate816研究的数据，并分享了一些经验。勃林格殷格翰的 Michael Merger博士，和大家分享了BI肿瘤治疗领域的早期开发药物，以及BI免疫肿瘤产品研发的pipeline。合源生物科技（天津）有限公司吕璐璐博士以临床价值为导向的免疫细胞治疗创新药物开发与实践为主题，分享了公司的布局和未来策略，以及四年来专注于细胞疗法，取得了预期的成效。总第1711期访问研发客网站可浏览更多文章www.PharmaDJ.com