fibrin

血液制品（Blood Products）指源自人类血液或血浆的治疗产品，如人血白蛋白、人免疫球蛋白和人凝血因子等，是由健康人的血浆或特异免疫人血浆分离、提纯制成的治疗产品，用于诊断、治疗或被动免疫预防。血液制品的发展历程011900-1902年人类发现了ABO 血型系统。021914年开始使用枸橼酸钠和葡萄糖作抗凝剂，从而临床上实现了常规输血，但是全血不易大量储备和运输，其有效组分也未得到分离使用。03第二次世界大战第二次世界大战期间，美军在海外作战，急需运输、贮存和使用方便的"血浆代用品"抢救伤员，美国哈佛大学E.J Cohn教授与他的研究组在1941年建立了低温乙醇血浆蛋白分段分离法（简称Cohn法），制出了白蛋白并进行了临床观察，1942年Cutter等药厂用 Cohn 法大量生产白蛋白供应美军。041942-1943年期间免疫球蛋白、纤维蛋白原制剂、抗血友病球蛋白（即现在的人凝血因子VIII）以及凝血酶原复合物也相继投产，自此拉开了白蛋白及其他血浆蛋白组分的生产新纪元。051946年Cohn 教授领衔发表了人血白蛋白制备工艺，即经典的 Cohn 6 法。061949年E.J.Cohn教授又研制成功了用于分离制备丙种球蛋白的Cohn 9法。Cohn6+ 9法形成了工业化生产血液制品的完整体系，之后的数十年被美洲大多数血制制品生产单位采用。071962年苏黎世大学有机化学副教授Nitschmann与瑞士红十字会输血服务中心Kistler教授发明了一种对Cohn6+9法进行大胆改造的方法，有效地缩短了生产、提高了产量，这即所谓的Nitschmann-Kistler法，这种革新的方法随后被欧洲的血液制品生产厂家所使用。0820世纪50年代20世纪50年代出现的硫酸铵盐析法和利凡诺沉淀法用于从胎盘血中提取白蛋白和免疫球蛋白，由于原料短缺和稳定性不足等问题逐渐从大规模生产中退出。0920世纪60年代20世纪60年代逐步发展起来的凝胶过滤（分子筛层析）、离子交换层析、亲和层析等层析法成为各类活性蛋白成分、微量蛋白成分的主要分离方法。1020世纪70年代随着凝胶过滤、离子交换层析、亲和层析技术的发展，层析法被越来越多的应用于血液制品的生产。虽然至今还不能作为血液制品生产的主要工艺，但层析法和低温乙醇法的联合使用已在多种血液制品的生产中发挥着重要的作用。1120世纪80年代基因工程技术取得了前所未有的进展，开始出现了以基因工程技术制备的重组血浆蛋白制品，临床上具有和人源性血浆蛋白制品相似的治疗作用。👇随着血液制品种类日益丰富，生产工艺日趋复杂，使用环境不断变化，加强血液制品管理，保证血液制品的质量就显得愈加重要。由于血液制品的生产原料直接来源于人体，通过血浆和纯化血浆制品传播血源性病毒仍然被认为对使用者构成风险。因此，血液制品病毒安全性控制尤为重要。2002年至今，指导我国血液制品病毒去除/灭活工作的主要依据为《血液制品去除/灭活病毒技术方法及验证指导原则》（国药监注[2002]160号）（以下简称《指导原则》）。去除/灭活病毒方法的选择1    《指导原则》中对不同类血液制品选择的去除/灭活病毒方法侧重点提出大致要求。由于不同类血液制品潜在的污染病毒的可能性不同，为此选择病毒去除/灭活方法的侧重点也应有所不同：01凝血因子类制品生产过程中应有特定的能去除/灭活脂包膜和非脂包膜病毒的方法，可采用一种或多种方法联合去除/灭活病毒。02免疫球蛋白类制品对于免疫球蛋白类制品（包括静脉注射用人免疫球蛋白、人免疫球蛋白和特异性人免疫球蛋白）生产过程中应有特定的灭活脂包膜病毒方法。但从进一步提高这类制品安全性考虑，提倡生产过程中加入特定的针对非脂包膜病毒的去除/灭活方法。03白蛋白采用低温乙醇生产工艺和特定的去除/灭活病毒方法，如巴斯德消毒法等。常用去除/灭活病毒的方法2《指导原则》中主要提供了5种常用的灭活/去除病毒方法，包括巴氏消毒法、干热法、有机溶剂/去污剂处理法、膜过滤法和低pH孵放法等，并对每种方法的参数、技术要点有明确要求，具体见表1。     其中，膜过滤法是《指导原则》中唯一的病毒去除的方法，该方法的主要作用机制是粒径排阻分子筛和吸附。在生产过程中企业常采用35～50 nm孔径的膜去除病毒，随着制品生产过程中纯化水平的提高，目前15～20 nm孔径的膜也常有应用。该方法可去除大部分病毒，尤其对细小病毒B19可有效去除。该方法可串联、针对性强、下游污染少、蛋白回收率高，便于整合到工艺过程的多个工段。但由于过滤器滤膜只能一次性使用，成本较高。随着人们对滤膜研究的深入了解，不同滤膜生产企业的滤膜性能存在差异，预过滤层和精密截留层应考虑不同品牌滤膜和不同批次过滤器滤膜性能的一致性和适用性。《WHO指南》中对公认的病毒去除/灭活方法进行了比较详尽的综述，分为病毒灭活和病毒去除两部分，并在病毒灭活方法部分增加蒸汽加热法，在病毒去除方法部分增加沉淀法和色谱法，并对每种方法在优点、注意事项和需记录的关键参数方面进行了详细汇总。见表2、表3。研发中的新型去除/灭活病毒方法       随着科学技术的进步，一些新的去除/灭活病毒技术也在血液制品生产中有所应用，例如采用补骨脂素S-59 联合使用A波段紫外线（Ultra-violet A，UVA）处理，可灭活血浆中的病毒；254 nm波长紫外照射（Ultra-violet C，UVC）在人血白蛋白和人免疫球蛋白灭活病毒中的应用；60Coγ射线辐照；碘浓度为1.05 mg·mL-1的淀粉结合碘导致模型脂质包膜和非包膜病毒失活7 logs以上等方法。在许多情况下，这些方法几乎没有临床验证，故在实际血液制品生产中的使用意义不大。因此，我国《指导原则》中未具体提及这些方法。参考资料：1国家药品监督管理局法规网2徐宏山,岳广智,杨立宏等.我国与WHO血液制品去除/灭活病毒技术方法与验证指导原则的比较研究[J].中国药事,2023,37(04):367-375.识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

近日，有机电子与信息显示国家重点实验室和生物智能材料与诊疗技术国家级重点实验室培育建设点汪联辉教授、晁洁教授和高宇副教授带领科研团队开发了一种智能DNA溶栓纳米机器，可在血管内复杂病生理环境下识别血栓的生物标志物凝血酶，并通过针对凝血酶浓度的逻辑运算区分血栓和伤口凝块，实现靶向血栓的精准给药，相关工作以“An intelligent DNA nanodevice for precision thrombolysis”为题发表在Nature Materials期刊。汪联辉教授、晁洁教授、高宇副教授为论文的共同通讯作者，博士生印珏、王思雨、王嘉辉为论文共同第一作者。由血栓造成的血管阻塞性疾病已超越癌症成为全球致死率最高的疾病，是危及人类的头号杀手。溶栓治疗是当前临床针对中风、心梗、肺栓塞等急性血栓的首选治疗方案，以组织纤溶酶原激活剂tPA为代表的溶栓药物可激活体内纤溶酶，从而溶解血栓的主要成分纤维蛋白。然而溶栓药物是一把双刃剑，过度激活的纤溶酶会无差别溶解纤维蛋白导致机体凝血功能异常，造成严重的出血并发症而危及生命。因此，实现只针对血栓的精准给药是未来溶栓治疗的发展方向，为更多血栓患者的治疗和康复带来希望。1959年著名物理学家费曼曾预言“可吞下的外科医生”，设想了可注射的微型机器在医学中的应用。DNA纳米技术以人体的四种碱基为基本单元，精确构筑功能模块并通过有序自组装可实现自动执行系列任务的纳米机器。团队研究人员首先基于DNA折纸技术构建了90×60纳米的矩形纳米片，并在其表面实现溶栓药物tPA分子空间和数量上的精准可控装载。随后利用DNA三链结构，设计了可逻辑运算的DNA纳米锁，将矩形纳米片卷曲关闭形成纳米管以保护药物活性。含有凝血酶适配体的DNA纳米锁是溶栓纳米机器的计算核心，按照设定顺序自动执行针对凝血酶的追踪识别、逻辑运算和响应打开的系列任务。针对血栓和伤口凝块中凝血酶浓度的差异，装备有特定凝血酶浓度阈值控制器的DNA纳米溶栓机器首次在动物体内实现针对凝血酶浓度的逻辑运算，可准确区分正常纤维蛋白凝块及血栓，显著降低了溶栓药物造成的凝血异常，实现智能化的精准给药，并在脑中风、肺栓塞、颈动脉及腿静脉血栓动物模型中得到验证。基于DNA纳米技术的智能DNA溶栓纳米机器相较于临床溶栓药物tPA，智能DNA溶栓纳米机器在脑中风及肺栓塞的溶栓效率分别提高了3.7倍和2.1倍；完全溶栓剂量相较于tPA降低了6倍。显著降低了临床溶栓药物导致的凝血异常，从而将脑中风的治疗窗口期从症状发生后的3小时延长到6小时，有望显著提高脑中风患者接受溶栓治疗并获益的人数。DNA溶栓纳米机器由人体的碱基构成，可由人体内酶降解并经肝肾代谢，因此具有优异的生物相容性，临床转化前景好。研究团队计划在未来3至5年内完成智能DNA溶栓纳米机器在大型动物模型中的药效及安全性评估、DNA溶栓纳米机器的成药性研究及规模化生产工艺优化，积极申报临床试验并力争获得临床试验批件。该工作得到了国家基础科学中心、国家自然科学基金和江苏省前沿引领技术基础研究专项等项目支持。论文链接：https://www.nature.com/articles/s41563-024-01826-y原文链接：https://www.njupt.edu.cn/2024/0307/c53a256379/page.htm本文仅用于学术分享，转载请注明出处。若有侵权，请联系微信：bioonSir 删除或修改！

引言肝窦内皮细胞(LSECs)中的NOTCH信号调节肝纤维化，这是慢性肝脏疾病的病理特征。POFUT1是NOTCH信号的重要调节因子。2024年3月6日，西安交通大学王一东、袁祖贻及吴岳共同通讯在Journal of Hepatology（IF 26）在线发表题为“Endothelial POFUT1 controls injury-induced liver fibrosis by repressing fibrinogen synthesis”的研究论文，该研究表明内皮细胞POFUT1通过抑制纤维蛋白原合成来控制损伤性肝纤维化。POFUT1缺失促进损伤诱导的LSECs毛细血管化和HSC活化，导致肝纤维化加重。RNA-seq分析显示，POFUT1缺乏可上调LSECs中纤维蛋白原的表达。与此一致的是，肝硬化患者的LSECs中纤维蛋白原升高。与对照LSECs上清液相比，用Pofut1缺失小鼠LSECs上清液处理的HSCs表现出激活加剧，这种效应通过敲低纤维蛋白原或通过药理抑制纤维蛋白原受体信号传导而减弱，表明LSECs来源的纤维蛋白原诱导了HSCs的激活。在机制上，POFUT1缺失通过增强NOTCH/HES1/STAT3信号通路来增强纤维蛋白原的表达。总之，内皮细胞POFUT1通过抑制纤维蛋白原的表达来预防损伤性肝纤维化，而纤维蛋白原是激活造血干细胞的促纤维化旁分泌信号。针对POFUT1/NOTCH/HES1/STAT3/纤维蛋白原轴的治疗为预防和治疗纤维化性肝病提供了一种有希望的策略。肝纤维化是一种细胞病理过程，以细胞外基质蛋白(主要包括胶原蛋白)的过度积累为特征，在大多数慢性肝病中均有发生。不受控制的肝纤维化可发展为肝硬化，导致门脉高压和肝衰竭，通常需要肝移植。肝星状细胞是肝脏中产生胶原的肌成纤维细胞的主要细胞来源。在对损伤的反应中，局部的、静止的HSC在一个被称为HSC激活的过程中变得增殖和纤维化，这被认为是肝纤维化的主要驱动因素。静止的HSC被来自肝脏内邻近细胞的旁分泌信号激活，包括免疫细胞、肝细胞、胆道上皮细胞和肝窦内皮细胞(LSECs)。识别这些HSC激活信号可能为治疗纤维化肝疾病提供新的靶点。LSECs是高度特化的内皮细胞，排列在肝的窦状毛细血管上，是最丰富的非实质肝细胞群。与其他器官的一般毛细血管不同，LSECs的膜上有小孔，缺乏有组织的基底膜。这些特征促进了膜的通透性，使肝细胞与动脉和门静脉血流之间的物质直接交换成为可能。LSECs在维持肝脏稳态中发挥多种功能，包括调节血管张力、抗原呈递、抗原清除，调节肝内凝固，以及维持HSC处于静止状态。此外，LSECs产生促再生血管分泌信号，包括WNT2、WNT9和HGF，以支持肝细胞增殖促进肝脏再生。在急性或慢性损伤的反应中，LSECs经历了一种被称为毛细血管化的表型开关，并对邻近细胞产生负面影响，包括肝细胞增殖的衰减和HSC的激活，导致肝纤维化。模式图（Credit: Journal of Hepatology）蛋白O-岩藻糖基转移酶1((POFUT1)是一种酶，负责通过与表皮生长因子-样(EGF-like)重复序列中的丝氨酸或苏氨酸残基的O连锁将焦点添加到蛋白。O键的焦点可以被其他糖进一步修饰，这些修饰对蛋白质功能是必不可少的。大约100种人类蛋白质含有EGF-like重复序列，其一致序列为O-聚焦。其中，NOTCH 受体(NOTCH1-4)比数据库中的其他蛋白含有更多的EGF-Like重复序列。研究表明，在黑胃果蝇和小鼠中，由于在血管发生、心脏发生、躯体发生和神经发生方面存在严重缺陷，POFUT1的缺失会导致胚胎死亡，这些表型与NOTCH基因敲除时所见的表型相似。Pofut1和Notch1突变体之间的这种表型相似性表明Notch1可能是Pofut1的靶点。事实上，NOTCH受体的O-聚焦化对于NOTCH配体的正确结合以及下游NOTCH信号的启动至关重要。该研究使用内皮特异性缺失POFUT1的小鼠系研究了POFUT1在损伤性肝纤维化中的功能。研究结果显示，POFUT1的缺失加重了四氯化碳(CCl4)或胆管结扎(BDL) 手术引起的肝纤维化。在机制上，POFUT1缺失导致NOTCH信号升高，随后STAT3通路激活，进而诱导LSECs中的纤维蛋白原表达。与小鼠研究的观察结果一致，发现肝硬化患者LSECs中纤维蛋白原水平上调。此外，LSECs来源的纤维蛋白原促进HSC活化，从而导致肝纤维化加重。总之，该研究结果确定纤维蛋白原是LSECs产生的一种新的促纤维化旁分泌信号，可以靶向治疗纤维化性肝病。原文链接https://doi.org/10.1016/j.jhep.2024.02.032责编|探索君排版|探索君文章来源|“iNature”End往期精选围观一文读透细胞死亡(Cell Death) | 24年Cell重磅综述（长文收藏版）热文Nature | 破除传统：为何我们需要重新思考肿瘤的命名方式热文Nature | 2024年值得关注的七项技术热文Nature | 自身免疫性疾病能被治愈吗？科学家们终于看到了希望热文CRISPR技术进化史 | 24年Cell综述