IMPDH

杜氏肌营养不良症（Duchenne muscular dystrophy，DMD）是由编码肌营养不良蛋白（dystrophin，也被成为抗肌萎缩蛋白）的基因DMD（该基因长约220万bp）发生功能丧失突变引起的，是人类最常见的遗传疾病之一。在肌肉中，肌营养不良蛋白为427 kDa的蛋白质，在保护细胞免受机械应力方面起着关键作用，它还通过为多种蛋白质提供支架来调节多种细胞内信号通路。肌营养不良蛋白的缺失会导致坏死和再生的循环、进行性肌肉萎缩、炎症浸润并最终导致心脏和呼吸衰竭。为了开发针对DMD的基因疗法，之前已经开发了“微抗肌萎缩蛋白”（µDys）版本，其小到可以通过腺相关病毒（AAV）载体递送。但是，这些微蛋白（约占全长肌营养不良蛋白的33%）缺乏关键的功能域，在动物模型和患者中表现出不完全的表型回复。由此表明，表达更长即功能更完善的较大或全长肌营养不良蛋白可以带来更好的疗效。 近日，来自美国华盛顿大学医学院的Jeffrey S. Chamberlain教授在Nature杂志上发表文章Split intein-mediated protein trans-splicing to express large dystrophins。在该研究中，研究团队开发了一种利用分裂内含肽（split intein）介导的蛋白质反式剪接机制来表达大型肌营养不良蛋白的新方法。该方法可以有效连接两或三个片段以生成较大或全长肌营养不良蛋白。通过低剂量的两或三个靶向性AAV递送到肌营养不良小鼠体内，可实现大型肌营养不良蛋白的强效表达，且较微型肌营养不良蛋白表现更显著的生理改善。 依据最新的研究，目前已经鉴定出了30多种分裂内含肽。然而，大多数研究都是对纯化的蛋白质进行的，因此很难推断其在体内的应用。另一个需要注意的问题是，所有内含肽都高度依赖于天然外显肽（宿主蛋白）中发现的相邻残基来催化最终的连接。这些残基由外显肽N端和C端的最后一个和第一个三肽序列一致定义。要使用蛋白质反式剪接（protein trans-splicing）过程重建任何感兴趣的蛋白质，这六个残基必须包含在外显肽/内含肽边界内，并作为“足迹”留下，这可能会改变蛋白质的功能。 由此，研究团队生成了一个分裂内含肽的筛选文库，并利用一种分裂绿色荧光蛋白（GFP）系统来对不同的分裂内含肽对进行多步骤筛选与评估。通过综合考虑分裂内含肽的有效率、特异性和“足迹”的多少，gp41.1、IMPDH和Nrdj1三个分裂内含肽被成功筛选获得。随后，利用gp41.1分裂内含肽在HEK293细胞内表达较大肌营养不良蛋白midi-Dys（∆SR5-15）的N端与C端，结果显示gp41.1分裂内含肽可以将其N端与C端剪接在一起，高效表达出较大肌营养不良蛋白midi-Dys（∆SR5-15）。 紧接着，研究团队分别利用IMPDH和gp41.1、Nrdj1和gp41.1两对分裂内含肽各自完成N端、中间段和C端肌营养不良蛋白的全长组装，结果显示可以成功组装出全长肌营养不良蛋白。 为了在体内验证可行性，将每种组合的分裂抗肌营养不良蛋白/内含肽克隆到肌肉特异性增强子/启动子CK8e下游，并包装到AAV6载体中，且以1:1或1:1:1的比例将5×1010 个不同对的病毒基因组（vg）注射到3周龄抗肌营养不良蛋白缺陷型mdx4cv雄性的胫骨前肌中。随后通过蛋白印迹和荧光手段发现小鼠肌肉中均表达出较大或全长版本的肌营养不良蛋白。 鉴于全身型给药的多种不足，为了提高靶向性，研究团队选用肌向性衣壳AAVMYO实现基因递送。由此，研究团队使用低剂量2×1013（总计） vg kg−1和高剂量2×1014 （总计）vg kg−1的AAVMYO比较了单（µDys）和双（midi-Dys）载体策略。将AAV颗粒注入8周龄、年轻成年mdx4cv雄性的尾静脉中。结果显示双（midi-Dys）载体正常表达肌营养不良蛋白，且其肌肉性能改善较µDys更好。类似的，将该体系导入至年老的小鼠模型中也展现类似的效果，且可以部分降低纤维化水平。 本研究数据显示，表达较大或全长肌营养不良蛋白的功能明显优于正在临床试验中测试的微型肌营养不良蛋白。这种方法可以使许多患有杜氏肌营养不良症或贝克尔肌营养不良症的患者受益，也为其他疾病提供了治疗思路。 参考文献 https://doi.org/10.1038/s41586-024-07710-8 内容来源于网络，如有侵权，请联系删除。

▎药明康德内容团队编辑近期，驯鹿生物宣布其开发的全人源靶向BCMA的CAR-T细胞产品伊基奥仑赛注射液（研发代号CT103A）治疗自身免疫性疾病的两项研究者发起的临床试验数据分别在国际权威学术期刊EMBO Molecular Medicine、《美国国家科学院院刊》（The Proceedings of the National Academy of Sciences，PNAS）上发表。这两项研究数据分别初步展现了伊基奥仑赛注射液治疗难治性重症肌无力、免疫介导坏死性肌病的潜力。在中国，伊基奥仑赛已于2023年6月获批治疗复发/难治多发性骨髓瘤成人患者。伊基奥仑赛治疗难治性重症肌无力的研究数据2月26日，EMBO Molecular Medicine正式发表了伊基奥仑赛注射液治疗2例难治性重症肌无力（MG）受试者的临床研究论文——B cell lineage reconstitution underlies CAR-T cell therapeutic efficacy in patients with refractory myasthenia gravis。该研究初步展现了靶向BCMA的CAR-T疗法在MG治疗中的良好耐受性和安全性以及持久的临床疗效。MG是由自身抗体介导的获得性神经-肌肉接头（NMJ）传递障碍的自身免疫性疾病。乙酰胆碱受体（AChR）抗体是最常见的致病性抗体。此外，针对突触后膜其他组分，包括肌肉特异性受体酪氨酸激酶（MuSK）、低密度脂蛋白受体相关蛋白4（LRP4）及兰尼碱受体（RyR）等抗体陆续被发现参与MG发病。目前，MG的治疗仍以胆碱酯酶抑制剂、糖皮质激素、免疫抑制剂、静脉注射免疫球蛋白、血浆置换以及胸腺切除为主。患者主要的死亡原因包括呼吸衰竭、肺部感染等。本次在EMBO Molecular Medicine上发表的是一项研究者发起的开放评价输注伊基奥仑赛注射液治疗复发/难治性抗体介导的神经系统特发性炎症性疾病的安全性和有效性的探索性临床研究，该试验的研究者为华中科技大学同济医学院附属同济医院王伟教授团队。该研究中入组了2例难治性MG受试者，其中1例受试者为33岁女性，AChR-IgG和Titin-IgG阳性，入组前21个月接受了胸腺切除术治疗，经胆碱酯酶抑制剂、糖皮质激素、免疫抑制剂及靶向CD20单抗治疗仍未达到临床缓解；另1例受试者为60岁女性，MuSK-IgG4阳性，20年病史，既往接受过激素、免疫抑制剂、靶向CD20单抗等多种治疗无效。2例受试者分别接受了1.01×106CAR-T/Kg和0.96×106CAR-T/Kg的伊基奥仑赛注射液单次回输治疗。安全性数据显示：2例受试者中，仅1例受试者发生了1级的细胞因子释放综合征（CRS），未发生免疫效应细胞相关神经毒性综合征（ICANS），≥3级的血细胞减少均在回输后4周内恢复；相较于在多发性骨髓瘤适应症研究中的安全性谱，未发现新的安全性风险，且安全性更优。有效性数据显示：2例受试者的临床症状持续改善超过18个月；伊基奥仑赛注射液回输后3个月开始，患者肢力和肺活量明显改善，重症肌无力-日常生活活动评分（MG-ADL）、重症肌无力定量评分（QMG）、重症肌无力-生活质量评分（MG-QOL）和改良Rankin评分（mRS）持续改善；随访期间除外低剂量新斯的明（分别为90mg/天和60mg/天），未合并使用其他免疫调节治疗。PK/PD数据显示：伊基奥仑赛注射液回输后在受试者体内扩增良好，持续时间较短；2例受试者的抗AChR和抗Titin抗体、抗MuSK抗体在回输后均迅速降低并长期维持在极低水平；2例受试者的B细胞和浆细胞在回输后2个月内降低至无法检测，而后逐渐恢复；两例受试者的B细胞在回输后18个月均已恢复至正常水平，其中约80%为幼稚B细胞，而浆细胞仍维持较低水平。该结果显示CAR-T细胞治疗的长期疗效，可能与幼稚表型为主的B细胞重建而浆细胞持续清除有关。此项研究主要研究者、华中科技大学同济医学院附属同济医院王伟教授表示：“重症肌无力病程长、难治愈、易复发，当前传统药物的治疗虽在一定程度上能改善肌无力症状，但在疾病控制、长期安全性等方面均存在不足，患者对更好的临床结局和治疗方式有迫切需求。在我们此次的IIT研究中，很高兴地看到BCMA CAR-T细胞疗法可以阻止MG疾病进展，并表现出逆转疾病征象，有望改变MG治疗格局，为患者带来治愈的希望。”伊基奥仑赛治疗免疫介导坏死性肌病的研究数据1月30日，《美国国家科学院院刊》正式发表了驯鹿生物伊基奥仑赛注射液治疗免疫介导坏死性肌病（IMNM）的研究论文“Single-cell analysis of refractory anti-SRP necrotizing myopathy treated with anti-BCMA CAR T-cell therapy”。该研究数据初步展现了靶向BCMA的CAR-T疗法在IMNM中的良好耐受性和安全性、持久的致病性抗体清除作用以及潜在的持久性临床疗效，为抗体介导的自身免疫性疾病提供了一种新的治疗思路。IMNM是自身免疫介导的骨骼肌疾病，属特发性炎性疾病。人类抗信号识别颗粒（SRP）抗体属于IMNM特异性自身抗体，SRP抗体介导的IMNM主要表现为四肢近端肌对称无力、吞咽困难表现突出、血清肌酸激酶显著升高，有起病急、病情重、进展快的特点，对常规药物的治疗反应性差，复发率高。本次在《美国国家科学院院刊》上发表的是一项研究者发起的开放评价输注伊基奥仑赛注射液治疗复发/难治性抗体介导的神经系统特发性炎症性疾病的安全性和有效性的探索性临床研究，该试验的研究者为华中科技大学同济医学院附属同济医院王伟教授团队。该研究中入组的一例25岁SRP抗体阳性的难治性IMNM男性受试者，7年病史，既往接受过激素、钙调磷酸酶抑制剂、叶酸拮抗剂、CD20单抗、白介素6（IL-6）受体拮抗剂、次黄嘌呤核苷磷酸脱氢酶（IMPDH）抑制剂、烷化剂、血浆置换、静脉注射免疫球蛋白和间充质干细胞输注等多种治疗，但仍遭受多次复发和持续损伤。入组前在规律使用激素、IL-6受体拮抗剂、叶酸拮抗剂和静脉注射免疫球蛋白的联合治疗下，患者仍瘫痪卧床，手臂不能举过头顶，血清肌酸激酶高达4806 IU/L（参考值≤190 U/L）。安全性数据显示：该受试者仅发生了1级的细胞因子释放综合征（CRS），未发生免疫效应细胞相关神经毒性综合征（ICANS），仅经历了短暂的血细胞减少；相较于在多发性骨髓瘤适应症研究中的安全性谱，未发现新的安全性风险。有效性数据显示：在伊基奥仑赛注射液回输后18个月的随访中，患者的临床症状和影像学特征均得到了持续的改善，伊基奥仑赛注射液回输后3个月，患者四肢力量明显改善，抬臂没有限制，并恢复了行走能力；徒手肌力检查（Manual Muscle Testing-8，MMT-8）评分从基线的96分，改善至末次访视（回输后18个月）的137分；血清肌酸激酶水平从回输前的4778 IU/L降至末次访视的260 IU/L，肌红蛋白水平从回输前的837 ng/mL降至末次访视的66.2 ng/mL；在其它生活质量表方面也观察到了明显的改善。随访期间未合并使用其他免疫调节治疗。PK/PD数据显示：伊基奥仑赛注射液回输后CAR-T细胞在受试者体内扩增良好，血清SRP抗体水平迅速下降并持续维持在极低水平。此项研究主要研究者、华中科技大学同济医学院附属同济医院王伟教授表示，这是该产品继成功治疗视神经脊髓炎后在自身免疫病领域中的又一重要突破，期待CAR-T疗法在自免领域的进一步发展，为患者带来治愈的希望。”除本次发表的两项研究结果外，驯鹿生物和研究者团队仍在持续探索伊基奥仑赛注射液在治疗其它抗体介导的自身免疫性疾病的安全性和有效性，包括视神经脊髓炎谱系疾病（NMOSD）、慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病（CIDP），希望为更多的自免疾病带来新的治疗选择。参考资料：[1] 驯鹿生物伊基奥仑赛注射液治疗难治性重症肌无力(MG)病例报告在《EMBO Molecular Medicine》发表. Retrieved Feb 28, 2024,  from https://mp.weixin.qq.com/s/O1tUmBLLeN8jC9B3gkmoSw[2] 驯鹿生物伊基奥仑赛注射液全球首次用于治疗免疫介导坏死性肌病（IMNM）的研究成果在《美国国家科学院院刊》（PNAS）发表. Retrieved Jan 30, 2024,   from https://mp.weixin.qq.com/s/c1tpfhH5uNu2pMoqSp93lA本文由药明康德内容团队根据公开资料整理编辑，欢迎个人转发至朋友圈。转发授权请在「医药观澜」微信公众号留言联系我们。其他合作需求，请联系wuxi_media@wuxiapptec.com。免责声明：药明康德内容团队专注介绍全球生物医药健康研究进展。本文仅作信息交流之目的，文中观点不代表药明康德立场，亦不代表药明康德支持或反对文中观点。本文也不是治疗方案推荐。如需获得治疗方案指导，请前往正规医院就诊。

2024年1月30日，《美国国家科学院院刊》（The Proceedings of the National Academy of Sciences，PNAS）正式发表了驯鹿生物全人源靶向BCMA嵌合抗原受体自体T（BCMA CAR-T）细胞注射液（伊基奥仑赛注射液，研发代号CT103A）治疗免疫介导坏死性肌病（Immune mediated necrotizing myopathy, IMNM）的研究论文"Single-cell analysis of refractory anti-SRP necrotizing myopathy treated with anti-BCMA CAR T-cell therapy"，初步展现了BCMA CAR-T疗法在IMNM中的良好耐受性和安全性、持久的致病性抗体清除作用以及潜在的持久性临床疗效，为抗体介导的自身免疫性疾病提供了一种新的治疗思路。 免疫介导坏死性肌病（IMNM）是自身免疫介导的骨骼肌疾病，属特发性炎性疾病，人类抗信号识别颗粒(signal recognition particle，SRP)抗体属于IMNM特异性自身抗体，SRP抗体介导的IMNM主要表现为四肢近端肌对称无力、吞咽困难表现突出、血清肌酸激酶显著升高，有起病急、病情重、进展快的特点，对常规药物的治疗反应性差，复发率高。 该研究为一项研究者发起的开放评价输注伊基奥仑赛注射液治疗复发/难治性抗体介导的神经系统特发性炎症性疾病的安全性和有效性的探索性临床研究（NCT04561557），研究者为华中科技大学同济医学院附属同济医院王伟教授团队。 该研究中入组的一例25岁SRP抗体阳性的难治性IMNM男性受试者，7年病史，既往接受过激素、钙调磷酸酶抑制剂、叶酸拮抗剂、CD20单抗、白介素6(IL-6)受体拮抗剂、次黄嘌呤核苷磷酸脱氢酶（IMPDH）抑制剂、烷化剂、血浆置换、静脉注射免疫球蛋白和间充质干细胞输注等多种治疗，但仍遭受多次复发和持续损伤。入组前在规律使用激素、白介素6(IL-6)受体拮抗剂、叶酸拮抗剂和静脉注射免疫球蛋白的联合治疗下，患者仍瘫痪卧床，手臂不能举过头顶，血清肌酸激酶高达4806 IU/L（参考值≤190 U/L）。 有效性：在伊基奥仑赛注射液回输后18个月的随访中，患者的临床症状和影像学特征均得到了持续的改善。伊基奥仑赛注射液回输后3个月，患者四肢力量明显改善，抬臂没有限制，并恢复了行走能力。徒手肌力检查（Manual Muscle Testing-8，MMT-8）评分从基线的96分，改善至末次访视（回输后18个月）的137分。血清肌酸激酶水平从回输前的4778 IU/L降至末次访视的260 IU/L，肌红蛋白水平从回输前的837 ng/mL降至末次访视的66.2 ng/mL。在其它生活质量表方面也观察到了明显的改善。随访期间未合并使用其他免疫调节治疗。 PK/PD：伊基奥仑赛注射液回输后CAR-T细胞在受试者体内扩增良好。血清SRP抗体水平迅速下降并持续维持在极低水平。 此项研究主要研究者华中科技大学同济医学院附属同济医院王伟教授表示："这是全球首次将BCMA CAR-T细胞疗法应用于IMNM治疗，这也是该产品继成功治疗视神经脊髓炎后在自身免疫病领域中的又一重要突破，期待CAR-T疗法在自免领域的进一步发展，为患者带来治愈的希望。" 除本次发表的研究结果外，驯鹿生物和研究者团队仍在持续探索伊基奥仑赛注射液在治疗其他抗体介导的自身免疫性疾病包括视神经脊髓炎谱系疾病（NMOSD）、重症肌无力（MG）以及慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病（CIDP）中的安全性和有效性，致力于改变自免疾病的治疗格局。 驯鹿生物是一家致力于细胞创新药物研发、生产和销售的生物制药公司。公司以开发血液肿瘤细胞类药物和抗体药物为创新基石，向自身免疫疾病拓展，拥有完整的从早期发现、临床开发、注册申报到商业化生产的全流程能力。 公司现有10余个处于不同研发阶段的创新药物品种，其中伊基奥仑赛注射液（全人源BCMA CAR-T产品）已获国家药监局（NMPA）批准上市，并已获得美国FDA批准注册临床，用于治疗复发\/难治多发性骨髓瘤 驯鹿生物凭借其强大的管理团队、创新的产品线、自有的GMP生产和超强的临床开发能力，旨在提供变革性、可治愈的创新型疗法，为中国乃至全球患者带来治愈的希望。 内容来源于网络，如有侵权，请联系删除。