GITR

点击上方的 行舟Drug ▲ 添加关注前言迄今为止，与传统的抗癌治疗策略相比，免疫治疗被认为是最有前景的全身性肿瘤治疗方法，其中，单克隆抗体因其特异性靶向分子的能力，已成为癌症治疗中一种关键而有效的治疗方式。然而，由于肿瘤复杂的疾病发病机制，针对单一靶点的单克隆抗体往往不足以表现出足够的治疗效果。因此，针对多个靶点的双特异性抗体（bsAbs）应运而生，它的发展改变了肿瘤免疫治疗的领域。目前，人们正在研究越来越多的针对癌症治疗的不同类型的bsAbs。这些类型包括双靶向抑制剂，其作用于不同水平的肿瘤增殖、血管形成和转移；以及双特异性抗体偶联药物、T细胞结合器、双特异性自然杀伤细胞接合器（NKCE）和先天免疫细胞接合器。其他类型还包括双特异性免疫检查点抑制剂（CPI）、共刺激bsAbs和融合蛋白、具有联合检查点抑制和共刺激特征的bsAbs、在肿瘤微环境（TME）中特异性激活的bsAb，以及将过继T细胞治疗和治疗性抗体相结合的新方法。目前，有300多项临床试验涉及200多种不同的双特异性抗体分子，其中约75%用于治疗实体瘤，25%用于治疗血液系统恶性肿瘤。有10种bsAb药物已被批准用于癌症治疗，其中9种在美国和/或欧洲获得批准，cadonilimab在中国获得批准。到目前为止，临床中开发的很大一部分bsAbs已经处于后期阶段（II期和III期）。另外，可以发现，治疗实体瘤的bsAbs主要由免疫调节剂主导，包括双CPI（约45%）和TCE（约33%），其次是靶向双途径、ICEs和ADC的bsAb。bsAb的发展史BsAbs最初的概念是由AlfredNisonof在20世纪60年代首次提出的。他将两个不同的抗原结合位点结合在一个分子中，并从抗牛γ球蛋白和抗卵清蛋白单价片段的混合物中获得了一个具有双重特异性的F(ab’)2分子。1975年，Köhler和Milstein发明了杂交瘤技术，最终解决了生产单克隆抗体的问题，开启了单克隆抗体治疗的新时代。1983年，Milstein和Cuello开创了quadroma技术，该技术基于分泌Abs混合物的两种不同杂交瘤细胞系的体细胞融合，包括具有双重特异性的鼠IgG形式的bsAb。然而，bsAb的低产率以及难以从密切相关的错配副产物中纯化所需的Ab是一个重大问题。1988年，James Huston和他的同事发明了单链抗体片段（scFv），它最大限度地减少了复性问题，例如不正确的结构域配对或聚集。1996年，Genentech的科学家们利用重组DNA技术发明了knob-into-hole技术，克服了Quadrome技术的局限性。通过在人类IgG的CH3结构域之间的界面突变选定的氨基酸，可以减少IgG重链的错配。这种技术利用更有利的蛋白质相互作用，最终可以形成高达90%的正确双特异性重链配对。随后，随着抗体工程和生物学的进展，bsAb的不同概念和结构正在不断演变。靶向双受体抑制的bsAb许多参与细胞信号传导的细胞表面蛋白，如RTK和相关受体，是基于抗体治疗的有效靶点。尽管靶向一个确定的信号受体的抗体治疗是非常有效的，但疾病相关表型通常由不止一种途径触发。这种冗余允许细胞通过使用其他补偿信号通路，从而耐受药物的生长抑制或细胞毒性诱导。同时调节不同疾病相关信号受体或通路的bsAbs可以减少或克服这一限制。Amivantamab（JNJ-61186372）靶向EGFR和肝细胞生长因子受体（MET），两种受体都能触发非小细胞肺癌（NSCLC）的增殖。因此，阻断两种受体比仅阻断一种途径能够更有效地抑制NSCLC的生长。Amivantamab已被FDA批准用于治疗携带EGFR外显子20插入突变的NSCLC亚型。一项随机III期研究的数据显示，在这部分患者中，与单独化疗相比，Amivantamab联合化疗具有显著优越性。另外一些针对肿瘤不同第二靶点的EGFR的bsAbs也正在临床开发中。例如，petosemtamab（MCLA-158）靶向EGFR和LGR5，LGR5是一种癌症干细胞相关的细胞表面受体。Petosemtamab目前正在包括晚期头颈部鳞状细胞癌在内的实体瘤患者的I/II期试验中进行评估（NCT03526835）。靶向配体受体抑制的bsAbbsAbs可以同时阻断两种不同的配体，或者是配体和受体的组合。VEGF和血管生成素2（ANG2）的双重靶向作用分别阻断VEGFR和血管生成因子1受体（TIE2）的激活，这两种途径涉及血管生成。vanucizumab，一种靶向VEGFA和ANG2的bsAb，在临床前模型中与化疗联合显示出抗肿瘤、抗血管生成和抗转移作用。BI836880是一种三特异性纳米抗体融合蛋白，由三个靶向VEGFA、ANG2和HSA的纳米抗体组成，后者可延长其血清半衰期。目前正在头颈部鳞状细胞癌、NSCLC和其他实体瘤患者的I期研究中进行评估。此外，靶向VEGF可以进一步设计成联合靶向肿瘤细胞上的PD-L1或T细胞上的PD-1，从而将抗血管生成与肿瘤免疫学方法联系起来。例如靶向PD1和VEGF的ivonescimab（AK112），其目前已在中国获批用于。其他bsAbs靶向PDL1和VEGF，包括PM8002，该药物正在NSCLC患者的II/III期研究（NCT05756972）中进行评估。靶向受体激活的bsAb许多抗肿瘤反应是通过激活细胞表面受体介导的，包括通过诱导细胞凋亡的免疫反应或细胞死亡。其中一种方法是靶向递送受体激活配体，如生长因子、细胞因子和（共）免疫刺激配体，将其融合到抗体或抗体片段中，以诱导局部或组织特异性激动活性，从而诱导细胞反应。越来越多的这种抗体-配体融合蛋白正在进入临床试验。受体激活也可以使用激动性抗体来实现。针对靶抗原和肿瘤坏死因子超家族（TNFRSF）成员的bsAbs已被证明是具有强大活性和肿瘤选择性的激动分子。RG7386（RO6874813）是一种四价bsAb，靶向癌症相关成纤维细胞上的FAPα和DR5，在具有FAPα间质表达的小鼠模型中具有效和选择性的肿瘤细胞杀伤，并已进入临床测试。此外，BI905711，一种靶向DR5和CDH17的四价双特异性IgG-scFv融合蛋白，目前处于I期临床研究中。靶向递送有效载荷的bsAb存在两种概念上不同的方法来利用bsAbs靶向递送有效载荷，如细胞毒性药物或放射性药物。第一种方法，预靶向治疗，使用bsAb的一个臂特异性靶向肿瘤细胞，另一个臂随后捕获有效载荷到肿瘤细胞。GD2 x DOTA是一种识别GD2的bsAb，并捕获放射性有效载荷177Lu-DOTA，其在TME中组装。在没有四聚化的情况下，由于半衰期，它会被迅速从外围清除。然而，到目前为止，临床试验中很少有bsAbs利用这种MoA，这可能是因为放射性预靶向涉及复杂的导流，限制了其普遍适用性。第二种方法通过递送偶联到双特异性抗体上的细胞毒性有效载荷，实现肿瘤细胞的特异性靶向。目前，bsADC已成为肿瘤药物开发的热点，已有多款bsADC进入临床开发，如ZW49、REGN5093、BL-B01D1等。靶向癌症免疫治疗的bsAb癌症免疫疗法中使用的大多数bsAbs通过T细胞驱动的天然或内源性免疫发挥作用，包括免疫检查点抑制（CPIs）效应细胞接合器（包括TCE和ICEs）以及共刺激性bsAb。双免疫检查点抑制许多抑制免疫检查点的单特异性抗体，如CTLA4或PD-1/PDL-1，已被批准用于癌症免疫疗法。将检查点抑制性抗体疗法扩展到bsAbs可以减少不期望的副作用，并增强疗效。大多数双免疫检查点抑制剂靶向PD-1/PD-L1轴和其他免疫抑制分子，如CTLA-4、TIM-3、LAG-3或TIGIT。MEDI5752（PD-1×CTLA-4）抑制PD-1+激活的T细胞中CTLA-4的功能，诱导PD-1的快速内化和降解。与PD-1和CTLA-4单抗联合治疗相比，MEDI5752的活性显著增强。针对其他检查点分子的双功能性抑制剂，包括LAG-3和TIGIT，也正在开发中。效应细胞接合器细胞接合器连接两种不同类型的细胞，主要是肿瘤细胞和T/NK细胞，以诱导肿瘤细胞溶解。细胞接合器由TAA靶向部分和效应细胞识别部分组成，并进一步分为T细胞接受器和NK细胞接受器。T细胞接合器利用TAA和TCR成分（主要是CD3），它们连接肿瘤细胞和T细胞，绕过TCR-MHC-I相互作用。因此，无论抗原特异性如何，T细胞结合器都会触发T细胞活化，产生包括穿孔素和颗粒酶在内的细胞毒性分子，以杀伤肿瘤细胞。BiTE是T细胞结合器的一种形式，通过靶向TAA和CD3的单链抗体将肿瘤细胞和T细胞结合，用于T细胞介导的肿瘤细胞杀伤。靶向CD19和CD3的blinatumomab是临床上典型的BiTE，2014年，blinatumomab成为第一个被FDA批准的BsAb，用于治疗ALL患者，在随后的几年里，blinatumomab的治疗范围进一步拓宽，2018年，FDA批准其用于首次或第二次完全缓解后MRD≥0.1%的pre-B ALL患者群体的治疗。目前，超过60例BiTE形式的双抗正在进行I/II期临床试验。NK细胞接合器将CD16A+NK细胞重定向至肿瘤细胞，诱导NK细胞活化。与BiTE相比，NK细胞接受者表现出较少的不良反应，如细胞因子释放综合征（CRS）和神经毒性。多种细胞毒性受体可激活NK细胞：CD16（FcγRIII）、天然细胞毒性受体（NCR；NKp30、NKp44、NKp46）、C型凝集素样受体NKG2D（CD314）和CD94/NKG2C。最近，抗CD30×CD16A的NK细胞接合器（AFM13）在AACR 2022的报告中展示了不俗的抗肿瘤效果。共刺激bsAbs高效、持久和局部受限的抗肿瘤免疫反应需要共刺激和共抑制信号来严格调节细胞毒性T细胞、自然杀伤细胞和巨噬细胞的激活、分化和维持。TNFRSF家族的成员（如4-1BB、CD40、OX40、GITR、CD27或CD30）以及CD28免疫球蛋白超家族（如CD28、CTLA4、PD-1、ICOS、BTLA)及其相应的配体在介导免疫调节信号中发挥着重要作用。靶向这些免疫调节途径可以增强免疫治疗。PRS-343（cinrebafusp），是一种针对HER2和4-1BB的四价bsAb，在IND研究中其耐受性良好，没有明显和相关的药物相关毒性；在接受有效剂量治疗的患者中（n=33），12%的患者达到ORR，包括1个CR，疾病控制率（DCR）为52%。bsAbs中通过4-1BB进行肿瘤选择性共刺激的其他靶点还包括EGFR、PSMA、CLDN18.2、B7H4、CEACAM5、HER2、PD-L1和FAP。此外，十多种针对PD-L1和4-1BB的不同bsAbs处于I期或II期试验中。bsAb的新概念bsAbs的领域仍在进一步探索和扩展技术和应用，可能提供目前正在开发的bsAb尚未解决的治疗概念。三特异性TCE共刺激信号可以与双特异性TCE组合以促进更加有效的T细胞活化。这样的三特异性TCE目前正在针对TAA和CD3的临床试验中，并且进一步包含抗CD28结合位点。SAR443216是一种针对HER2×CD3×CD28的三特异性抗体，能够强力激活CD4+和CD8+T细胞，诱导T细胞增殖、细胞因子和颗粒酶B的释放，以及T细胞介导的对表达HER2的肿瘤细胞的杀伤，其目前处于I期临床研究中。在类似的方法中，SAR442257是另一种CD38×CD3×CD28的三特异性抗体。前药方法一种新兴的方法是在肿瘤处选择性激活的前药，产生具有高度肿瘤特异性功能的bsAbs。前药转化为功能性bsAbs可以通过环境触发因素如肿瘤相关蛋白酶来实现。双重肿瘤靶向的另一种前药方法依赖于来自两个具有分裂CD3ε结合部分的肿瘤特异性组装。这些分子需要被设计为非活性的独立实体并在循环中，使得它们仅在肿瘤抗原结合和随后的原位组装时被激活。PROTAC bsAbs另一个新兴概念和新的MoA利用bsAbs通过靶向降解来抑制增殖相关过程。类似于双特异性或多特异性小分子蛋白水解靶向嵌合体（PROTACs），bsAbs可被设计为触发参与癌症发展或进展的表面蛋白的内化和随后的降解。这样的bsAbs同时与靶向降解的蛋白质和降解的因子结合，并触发内化，如膜上的E3泛素连接酶或转铁蛋白受体。目前，抗体-PROTAC概念仍处于早期开发阶段，迄今为止还没有进入临床研究。bsAb递送bsAb开发中另一个重要的新兴概念是bsAb的局部产生和随后的局部递送，如通过脂质纳米颗粒介导的mRNA递送的CLDN6 TCE、溶瘤病毒或包括CAR-T细胞在内的基因治疗方法。细胞因子模拟抗体最后，bsAbs也可以作为细胞因子模拟物或所谓的合成细胞因子激动剂。scFvs或基于单域抗体VHH的方法可以通过模拟IL-2或IL-15、IL-18、I型干扰素和IL-10来有效地触发细胞因子信号传导。这种基于抗体的细胞因子模拟物可能在癌症免疫疗法中具有各种应用。小结bsAbs领域最近取得了实质性进展，到2023年底，已有十几种bsAbs获得批准，许多不同的方法正在临床上进行测试。尽管如此，由于癌症的异质性和适应性，这些方法中的任何一种都不太可能成为普遍的癌症免疫疗法。相反，抗体需要针对某些应用量身定制，并将依赖于与其他方法的结合，以最大限度地提高其疗效和安全性。在不久的将来，多特异性抗体疗法的发展可能会在以下四个领域出现增长：针对具有明确依赖性的肿瘤相关RTK的bsAbs；用于以增加的选择性靶向肿瘤的bsADC；用于靶向降解适用于各种途径的细胞表面蛋白的双特异性PROTAC；以及用于癌症免疫疗法的多特异性抗体。与其他治疗癌症的药物一样，通过改进的诊断方法和新的开发模式，将bsAbs和多特异性抗体疗法应用于早期患者，对于实现治愈癌症患者的目标至关重要。参考文献：1. The present and future of bispecific antibodies for cancer therapy. Nat Rev Drug Discov.2024 Mar 6.2. Development of Bispecific Antibody for CancerImmunotherapy: Focus on T Cell Engaging Antibody. Immune Netw. 2022 Feb; 22(1): e4.文章信息源于公众号小药说药，登载该文章目的为更广泛的传递行业信息，不代表赞同其观点或对其真实性负责。文章版权归原作者及原出处所有，文章内容仅供参考。本网拥有对此声明的最终解释权，若无意侵犯版权，请联系小编删除。学如逆水行舟，不进则退；心似平原走马，易放难收。行舟Drug每日更新 欢迎订阅+医药大数据|行业动态|政策解读

【前言】瘤内浸润的Treg细胞亚群复杂，通过不同途径促进免疫抑制微环境的塑造，是肿瘤。也因此，很多已上市的抗体疗法都和Treg作用相关，也有希望特异性影响Treg的疗法在开发中。Front. Immunol.（一）通过表面蛋白特异性耗竭Treg进入临床阶段的疗法包括：靶点药物/管线名称其他CD25daclizumab人源IgG1单抗basiliximabADCT-301ADCRO7296682IL-2非阻断抗体RM-1995近红外光免疫疗法Denileukin diftitox重组免疫毒素CTLA-4Ipilimumab人源化IgG1单抗ADU-1604NurulimabTicilimumab人源化IgG2单抗XMAB20717CTLA-4/PD-1双特异性单抗XMAB22841CTLA-4/LAG-3双特异性单抗ATOR-1015CTLA-4/OX40双特异性单抗OX40MEDI6383人OX40L-IgG4 Fc融合蛋白PF-04518600激动型单抗BMS 986178BGB-A445MEDI6469MOXR0916MEDI0562GITRMEDI1873激动型六价GITR配体融合蛋白TRX518人源化、非耗竭性、琼脂糖基IgG1单抗MK-1248人源化IgG4单抗BMS-986156人源IgG1单抗GWN323ICOSJTX-2011激动型人源化IgG1单抗KY1044MEDI-570Fc段糖基化人源化单抗GSK3359609XMAB23104ICOS/PD-1双特异性单抗肿瘤浸润Treg抑制相关的表面分子表达包括：CD25、CTLA-4、PD-1、ICOS、LAG-3和TIGIT；TNF受体超家族GITR、4-1BB和OX-40；趋化因子受体CCR4、CCR5和CCR10。Treg细胞还可以通过释放IL-10、TGF-β和IL-35等抗炎细胞因子来抑制TME的免疫反应。几种CTLA-4单克隆抗体还可以通过ADCC效应杀伤Ti-Tregs。然而，一些临床研究表明，在CTLA-4抗体给药后，肿瘤内的Tregs数量不会减少，反而促进了Ti-Tregs的CD28依赖性扩增。此外，由于微环境中的其他免疫细胞也表达CTLA-4，因此非选择性靶向CTLA-4可能会无意中减少抗肿瘤免疫细胞。许多研究已经探索了以CD25为靶点的抗肿瘤策略，或者将IL-2与细胞毒分子或CD25 ADC结合以耗尽Treg细胞。然而，这些方法在不同的背景下表现出不同的有效性。（二）减少Tregs募集：抑制趋化因子信号通路进入临床阶段的疗法包括：靶点药物/管线名称特征CCR4MogamulizumabFc段糖基化人源化单抗FLX475口服特异性激动剂CCR8GS-1811Fc段糖基化人源化单抗BAY3375968BMS-986340S-531011通过抑制趋化因子信号通路，Tregs在肿瘤中的积聚可以得到缓解(肿瘤浸润Treg的趋化和代谢特征)。很早就有在小鼠实验中实验CCR10或CCR5单抗，显示能显著延缓肿瘤生长。CCR4单抗还能通过ADCC效应特异性地清除Treg。（三）减弱Tregs相关细胞间信号进入临床阶段的疗法包括：靶点药物/管线名称特征PI3K8Parsaclisib小分子抑制剂IOA-244AZD8186LCKDasatinib多靶点TKIImatinibTreg细胞通过高表达CD39和CD73来适应微环境，最终将瘤内的ATP转化为腺苷。CD39：当ATP作用于Treg的P2XR时，可以诱导Treg的凋亡并抑制Treg的功能(172,173)。CD39可降低TME中的ATP水平，间接保护Treg细胞免受ATP诱导的细胞凋亡。CD73：提高了微环境中的腺苷浓度。腺苷与效应T细胞膜上的A2aR和A2bR结合，从而抑制其活性。IDO：作为一种色氨酸消耗酶，可导致TME内色氨酸水平降低，从而影响T细胞的激活及其抗肿瘤能力。值得注意的是，给予免疫检查点抑制剂后，TME中过表达IDO，同样导致Tonvs功能障碍，Tregs和MDSCs激活和增殖水平提高，建立了免疫抑制环境。不过，尽管Epacadostat在内的几种口服IDO1抑制剂在过去几年中已进入人体临床试验，没有出现重大安全问题，但其单药试验并未达到客观疗效。（四）靶向Treg代谢进入临床阶段的疗法包括：靶点药物/管线名称特征CD36VT1021多为抑制剂MCT1AZD3965IDOEpacadostatNLG802GDC-0919CD73LY3475070小分子酶抑制剂CPI-006MEDI9447Sym024CD39TTX-030SRF617肿瘤细胞与TI-Tregs有一些共同的代谢特征。在人源卵巢癌、结肠癌和黑色素瘤的小鼠模型中，ROS可诱导Tregs的凋亡。此外，特定浓度的乳酸为TI-Tregs提供碳源以产生磷酸烯醇式丙酮酸(糖酵解的中间体)。然而，目前尚不清楚在TME中限制Treg代谢最终对免疫有利还是有害。正面作用的靶点包括CD36，例如在黑色素瘤移植小鼠模型中，CD36拮抗剂破坏脂质代谢，从而选择性地耗尽Ti-Tregs，恢复抗体对PD-1的效力，而不会产生严重的自身免疫反应。PI3K-AKT-mTOR通路作为协调糖酵解的枢纽，也是Treg代谢靶点之一。黑色素瘤小鼠模型中，雷帕霉素和GO-Y030(mTOR抑制剂)可通过限制葡萄糖摄取和糖酵解，来限制Tregs的数量和功能。此外，当Poly-G3和ssRNA40在体外与人卵巢癌细胞共同培养时，可以刺激TLR8信号，干扰mTOR-HIF-1α诱导的葡萄糖代谢，降低Treg的功能。在胃癌临床前模型中，PI3K-β抑制剂GSK2636771减少了Tregs中游离FA的产生、脂肪的吸收和代谢，抑制了它们的迁移和功能。此类药物还通过信号传递、表观遗传调节和翻译后修饰对Treg产生影响。例如，idelalisib(第一种用于人类慢性淋巴细胞白血病的PI3K-δ抑制剂)可选择性地阻止T细胞分化为Treg细胞和后续分泌IL-10的能力。脂质代谢：主要依赖脂肪酸合成(FAS)和FAO来扰乱肿瘤浸润Treg细胞的代谢适应性。在小鼠黑色素瘤模型中，CD36等脂质代谢靶点比CTLA-4和OX40等传统靶点显示出更好的特异性，阻止了功能性Tregs的积累，而不会系统性地耗竭全身Tregs。抗CD36和抗PD-1阻断的联合治疗可防止小鼠在治疗后出现严重的自身免疫。氨基酸代谢：通过吲哚胺2，3-双加氧酶(IDO)靶向犬尿氨酸途径有可能消除小鼠胶质母细胞瘤模型中的Tregs。不过几种IDO1抑制剂目前尚无较好数据，也少有进入临床阶段的管线。（五）靶向TME进入临床阶段的疗法包括：靶点药物/管线名称特征VEGFBevacizumabRamucirumabVEGFR2单抗Sorafenib多靶点小分子抑制剂TGF-βGalunisertibTGFR1抑制剂M7824PD-1/TGFβTrapTreg在肿瘤微环境中对血管新生具有极大的促进作用。小结：Treg细胞的特征分子和代谢途径并不是它们自己独有，而是与效应T细胞和外周Tregs共享靶点。因此，全身给药方法可能导致消除或抑制肿瘤外的非肿瘤Tregs以及其他效应细胞，不仅抑制pTreg功能，破坏免疫动态平衡，引发自身免疫性炎症，而且还减弱抗肿瘤效率。也就是说，要么找到表达水平具有足够特异性的单一靶点，要么采用复合靶点以改善这种表达差异。参考文献：1.Qin D, Zhang Y, Shu P, Lei Y, Li X and Wang Y (2024) Targeting tumor-infiltrating tregs for improved antitumor responses. Front. Immunol. 15:1325946. doi: 10.3389/fimmu.2024.13259462.Wang Y, Huang T, Gu J, Lu L. Targeting the metabolism of tumor-infiltrating regulatory T cells. Trends Immunol. 2023 Aug;44(8):598-612. doi: 10.1016/j.it.2023.06.001. 3.Christopher Tay, Atsushi Tanaka, Shimon Sakaguchi,Tumor-infiltrating regulatory T cells as targets of cancer immunotherapy,Cancer Cell,Volume 41, Issue 3,2023.doi:10.1016/j.ccell.2023.02.014.

调控B细胞产生抗体的Tfh细胞数量异常增加会导致自身免疫性疾病，因此同时存在一种抑制性细胞群：滤泡调节T(follicular regulatory T cell,Tfr)细胞来维持正常免疫耐受。滤泡调节T细胞：起源、功能、定位随着对Tfr细胞的进一步了解，小鼠模型和人体内Tfr亚群表征、活性和免疫调节功能的差异认识也逐渐细化。chapter1：亚群分类和表征人和小鼠Tfr细胞中，按照来源均可分为nTfr、iTfr和cTfr亚群。自然Treg细胞的称为nTfr细胞；来源于Th细胞形成的外周Treg(pTreg)也能在免疫后几天内形成一部分iTfr；cTfr细胞则指在体内长期存活的记忆样循环中的Tfr细胞。（1）根据CD25分类的nTfrnTfr小鼠人表达CD25- Tfr亚群下调FoxP3、Helios、CD103、GITR和Blimp1，上调Bcl6、CXCR5和PD-1。CD25- Tfr亚群表达Helios+ BCL6hi CXCR5hi PD-1hi，表达水平与小鼠相似。CD25high Foxp3high亚群则表达额外的Treg效应分子如Entpd1、CTLA4、Icos和GZMB，并上调IL-10和CCR5的表达。CD25high Foxp3high亚群表达高水平的FOXP3、Entpd1、TIGIT、OX40、GITR、HELIOS、BLIMP1、CTLA4和IL-17RACD25+ nTfr细胞一般表达中等水平的CXCR5和PD1。分布CD25− nTfr亚群更多地分布在GCs内。在CXCR5和PD1高表达的基础上，人CD25− TfR细胞可能与小鼠CD25− Tfr一样定位于GC内。CD25- Tfr细胞在人扁桃体中的出现频率明显低于小鼠。CD25+ nTfr亚群则主要分布在GCs周围的滤泡中。CD25+ nTfr亚群主要定位在卵泡中。细胞因子Prdm1和IL-10主要由CD25+ nTfr细胞产生CD25+ nTfr亚群也表达IL-10，但不是产生比例最高的亚群。转化在GC应答的早期阶段：IL-2可能是通过触发Blimp1转录因子，从而抵消Bcl6介导的nTfr细胞CXCR5和PD-1的上调传导，从而阻断CD25+ nTfr细胞转化和移动。目前还不清楚是什么因素促使Tfh细胞转变为CD25hi Tfh细胞和iTfr细胞，可能是IL-2通过低亲和力的IL-2受体IL-2Rβ被Tfh细胞感知。在GC应答的后期阶段：IL-2下降，使得部分CD25+ nTfr→CD25- nTfr细胞，↑Bcl6+ CXCR5high PD-1high，同时转移到GC内分布。部分Tfr细胞上调Foxp3表达，下调IL-21产生相关的基因，从而进一步分化为iTfr细胞。International Immunology（2）iTfr细胞iTfr小鼠人来源在GC应答晚期，还有一部分CD25- Foxp3+ CD4+ T细胞积累，即Tfh来源的FoxP3+GC驻留T细胞，又称诱导的iTfr细胞。类似小鼠表达均为FOXP3+ AIOLOS+ LAG3+ CD127−，表达KLRB1和CD3 8的水平高于其他滤泡T细胞亚群。分布在CXCR5和PD-1高表达的基础上，iTfr细胞在GCs中更丰富。大多数Tfr细胞是nTfr细胞。 iTfr亚群平均数量高于nTfr亚群。在儿童扁桃体中，iTfr克隆的数量大约是nTfr克隆的两倍。细胞因子下调IL-21表达高表达IL-21和IL-10这部分细胞因子表达功能主要由nTfr产生。iTfr细胞则同时表达PRDM1和IL-10，并且与人nTfr细胞相比，再次刺激后产生IL-10的细胞比例更高。International Immunology（3）cTfr细胞cTfr小鼠人表达CXCR5+ ICOSint FoxP3+CD45RA− CXCR5+ FOXP3+，大多数cTfr细胞是HELIOS+ CD25+ CD127low与非滤泡Treg细胞相比，CD38在cTfr细胞上的表达有所上调。由于人iTfr细胞也上调CD38，所以猜测cTfr细胞很可能包括记忆性iTfr细胞和nTfr细胞。分布cTfr细胞可在二次免疫激活时被招募到SLO卵泡和GC中。International Immunologychapter2：功能活性功能活性小鼠人①Th/Tfh细胞增殖和细胞因子产生的调控Tfr细胞抑制Th细胞的激活及其增殖。Tfr细胞促进了共培养的B细胞和Tfh细胞的长期表观遗传变化，改变了它们的代谢调节，并减少了Glut1的表达。加入IL-21可以逆转Tfr介导的Glut1表达减少。类似小鼠②抑制B细胞反应与PC的形成TFR细胞可以在GC反应的高峰期直接抑制GC B细胞。该作用依赖于GC B细胞产生CCL3和Tfr对CCL3分泌细胞的趋化作用。人cTfr细胞能够抑制Tfh细胞体外激活的B细胞和PC的形成，其效果与nTreg细胞相似。nTfr细胞可能有助于限制GC B细胞以直接接触依赖的方式产生抗体分泌细胞。Tfr细胞产生高度保守的神经素，可被GC B细胞直接摄取。人Tfr细胞也产生神经素，类似小鼠Treg细胞，从而直接作用于GC B细胞。但其具体产生神经蛋白的亚群尚不明确。③转铁蛋白受体细胞与自身免疫性疾病的关系多种缺陷小鼠模型中都显示，Tfr缺陷小鼠会导致形成抗dsDNA抗体和系统性红斑狼疮(SLE)等自身免疫性疾病症状加重。在TFR细胞消融后，小鼠体内多种自身抗体上调。不同疾病中，Tfr水平和疾病关系相反。一种假设是，Tfr细胞对GC表现出普遍的非特异性抑制，限制了从扩增和分化为效应细胞的B细胞克隆的选择，从而保留更多非外来抗原性B细胞。负相关：在RA和SLE中，cTfr的频率都有增加和减少的报道。MS患者和重症肌无力患者的TFR细胞频率降低，重症肌无力患者的Tfr细胞与疾病的严重程度呈负相关。正相关：干燥综合征和强直性脊柱炎中，cTfr细胞频率增加与抗SSA/Ro、抗SSA/Ro自身抗体和轻微SGS的淋巴细胞浸润呈正相关。④外源抗原特异性B细胞的正向调节对免疫和感染的最佳B细胞反应需要Tfr细胞。人CD38+ iTfr细胞与GC B细胞共培养时，比CD38- nTfr亚群在体外实验中产生的IgG和IgA显著增加。人cTfr细胞不支持B细胞在细胞培养中存活和产生抗体。目前仅确认IL-10对于GC B细胞循环和亲和力成熟是重要的。IL-10介导的小鼠TfR细胞对GC B细胞的调节可能是非常不同的，因为表达IL-10的IL-25+nTfr细胞主要是自身抗原特异性的。⑤调节IgE反应Tfr细胞在调节IgE反应中可能扮演着相反的角色。通过调节IL-10的产生；通过神经素的直接调控。负向调节：可能是通过转铁蛋白受体介导的抑制IL-13的表达，进而B细胞向IgE的转换；以及通过nTfr细胞表达的神经素肽直接作用于B细胞。例如，儿童血清中的IgE滴度与扁桃体CD25+ Tfh细胞呈负相关，与人类扁桃体中Tfr细胞的总体频率呈正相关。同时，变应性鼻炎患者的cTfr细胞数量减少，经变应原免疫治疗后cTfr/cTfh比值恢复。正向调节：当GCs参与IgE PB反应时，IL-10可能支持GC B细胞在亮区和暗区之间的循环；同时支持变应原特异性B细胞的亲和力成熟来增强对外来抗原的IgG1和IgE应答。所有研究都表明Tfr缺陷伴随着总IgE的显著增加。本周好文推荐如需转载请联系佰傲谷并在醒目位置注明出处·····