Hydrocodone bitartrate

导读 背景：阿纳其根（Anacyclus pyrethrum，A. pyrethrum）DC在治疗帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）方面具有潜在价值，PD-MCI表现为记忆、注意力、执行功能和语言受损。然而，阿纳其根的具体作用靶点和作用机制尚不清楚。 目的：本研究旨在确定阿纳其根的活性成分，并检验其在PD-MCI小鼠模型中的治疗效果。 方法：研究者制备了阿纳其根的乙醇提取物（EEAP），并利用超高效液相色谱-串联质谱（UHPLC-MS/MS）和网络药理学方法鉴定其活性成分及相关靶点。研究者通过腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP）诱导PD-MCI模型。在持续给予EEAP后，利用Morris水迷宫、八臂迷宫和旷场实验、高架十字迷宫分别测试小鼠的学习或记忆能力以及焦虑行为。研究者利用明场显微镜和电子显微镜分别检查脑组织的组织病理学和超微结构变化。研究者利用蛋白质免疫印迹检测蛋白表达。研究者收集粪便样本，利用UHPLC-MS/MS进行代谢组学分析，并进行16S rDNA测序以确定肠道菌群的组成变化。研究者还进行了短链脂肪酸靶向代谢组学实验，以研究其在PD-MCI的肠脑轴中的作用。 结果：通过UPLC-MS-MS，研究者在阿纳其根样本中鉴定出126种化合物。经数据库和文献检索，研究者筛选出31种活性成分和544个药物-疾病靶点。研究者通过GO分析发现能量通道、细胞信号传导和代谢等生物过程和分子功能。水迷宫实验显示，EEAP组小鼠的平均游泳距离和逃避潜伏期缩短。八臂迷宫实验显示，模型组小鼠的工作记忆相关错误数量明显高于对照组小鼠。旷场实验中，与对照组相比，EEAP组小鼠的平均移动速度和总移动距离增加，停留时间减少。在高架十字迷宫中，对照组小鼠的焦虑程度低于模型组。多奈哌齐/左旋多巴（D/L）减轻了焦虑样行为，EEAP（100–400 mg/kg）显示出剂量依赖性的开放臂指标增加，表明其可能缓解小鼠的焦虑。不同剂量EEAP处理的小鼠海马组织显示出完整的细胞层，苏木精-伊红染色的锥体细胞略好；细胞排列整齐；形态正常，分布均匀。电子显微镜显示，与模型组相反，不同剂量EEAP处理的小鼠海马的核膜、染色质和核仁清晰可辨。 在EEAP组小鼠的脑提取物中，与模型组相比，淀粉样前体蛋白（APP）和Aβ的条带更轻、更薄。模型组小鼠的APP和Aβ蛋白表达高于空白组，表现为更强的条带。EEAP处理的小鼠条带较弱，表明表达减少。模型组的Bcl-2水平较低，Bax水平较高。EEAP处理增加了Bcl-2并降低了Bax表达。与对照组相比，模型组的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性显著降低（p < 0.05），而EEAP-H组的活性显著高于模型组（p < 0.05）。EEAP干预显著调节了PD-MCI小鼠的粪便代谢轮廓。与对照组相比，模型组的类固醇和脂质代谢物（包括油酰乙醇胺）的丰度发生了显著变化，EEAP治疗逆转了其中的许多异常。PLS-DA和OPLS-DA揭示了各组之间的显著分离（Q2= 0.542，p < 0.01），证实了剂量依赖效应。随机森林分析确定了15个关键代谢标志物，例如d-谷氨酰胺和氢可酮的剂量依赖性变化。代谢途径分析显示苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸代谢和精氨酸生物合成途径显著富集（p< 0.05）。支持向量机（SVM）模型的AUC接近1，表明代谢物轮廓存在显著差异。EEAP干预显著影响了肠道菌群的组成和功能轮廓。维恩图显示，每组共享342个操作分类单元（OTUs），EEAP 400组显示出独特的拟杆菌门比例。LEfSe分析确定对照组的特征菌为g_Prevotella，模型组为c_Epsilonproteobacteria，EEAP 100组为g_Adlercreutzia。EEAP 100组的Faith系统发育多样性（PD）指数最高，非度量多维尺度分析（NMDS）/主坐标分析（PCoA）揭示了微生物群落结构的显著差异。短链脂肪酸（SCFAs）分析表明，乙酸是主要的代谢物，而EEAP剂量依赖性地调节了丙酸和异戊酸水平（VIP > 1，p < 0.001）。这些发现表明，EEAP通过重塑肠道菌群的结构和代谢功能发挥其调节作用。 结论：作为一种潜在的治疗PD-MCI的药物具有巨大潜力，其通过多种机制发挥作用，包括调节蛋白表达、调节粪便代谢轮廓以及重塑肠道菌群及其代谢物。 亮点 1、阿纳其根乙醇提取物（EEAP）对MPTP诱导的帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）小鼠具有神经保护作用。 2、EEAP能够维持肠道菌群的组成，并可能对帕金森病产生影响。 3、EEAP治疗可增强PD-MCI小鼠的认知功能和记忆能力。 4、本研究为未来关于EEAP在PD-MCI管理中应用的研究提供了参考。 论文ID 原名：Integrated network pharmacology, metabolomics, and microbiome studies to reveal the therapeutic effects of Anacyclus pyrethrumin PD–MCI mice 译名：综合网络药理学、代谢组学和微生物组学研究揭示阿纳其根对PD-MCI小鼠的治疗作用 期刊：Phytomedicine IF：8.3 发表时间：2025.4 通讯作者：杨新玲 通讯作者单位：新疆医科大学第二附属医院 实验设计 实验结果 1. 阿纳其根（A. pyrethrum）活性成分及靶点的预测 研究者通过液相色谱-串联质谱（LC–MS/MS）技术鉴定出126种化合物（见图1a、b及表1）。在全面检索数据库及文献报道后，研究者确定其中31种为活性成分（见表2），并预测出与这些活性成分相关的544个靶点。 图1. 阿纳其根（A. pyrethrum）的超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS-MS）分析结果。（a）阿纳其根的正离子模式。（b）阿纳其根的负离子模式。 表1. 基于高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS-MS）分析的阿纳其根主要成分鉴定。 表2. 通过数据库及文献检索揭示的阿纳其根化学成分。 2. 治疗靶点筛选及药物-疾病靶基因分析 研究者以“帕金森病”为检索词，在GeneCards、DisGENET、OMIM和TTD数据库中检索与帕金森病（PD）相关的靶点。经去除重复项后，研究者共获得9991个与PD相关的靶点（见图2a）。研究者将阿纳其根（A. pyrethrum）活性成分相关的544个药物靶点与9991个疾病靶点进行交集分析，最终获得440个药物-疾病靶点（见图2b）。其中排名前30的靶点分别为MAPK8、KDR、JAK2、HDAC1、NOS3、MAPK14、AR、PIK3CA、TLR4、ATM、MDM2、EP300、CXCL8、SIRT1、MMP9、PTGS、ERBB2、PPARG、MAPK1、CCND1、MTOR、ESR1、HIF1A、STAT3、HSP90AA1、CASP3、EGFR、SRC、CTNNB1和AKT1（见图2c）。 图2. 阿纳其根复合物干预帕金森病合并轻度认知障碍（PD-MCI）的潜在标志物初步筛选。（a，b）药物靶点与帕金森病靶点的维恩图。（c）排名前30的药物-疾病靶点。（d）蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络图。 3. 蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络 研究者利用STRING数据库进行靶点筛选，并针对潜在的440个靶点绘制了PPI网络图（见图2d）。研究者将阿纳其根（A. pyrethrum）的活性成分、帕金森病（PD）以及药物-疾病靶点导入Cytoscape 3.7.2软件，以CytoNCA插件为参数，分析各靶点的度值和介数中心性，从而获得成分-靶点-疾病的关系。此外，研究者将药物-疾病靶点导入Metascape数据库进行分析，运用MCODE算法识别相互连接的网络组件，并编制了单个基因的网络，即MCODE网络（见图3a-d）。 图3. 富集项网络。（a）按聚类ID着色：具有相同聚类ID的节点通常彼此靠近。（b）按P值着色：与更多基因相关的项往往具有更显著的P值。（c，d）蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络及在基因列表中识别出的MCODE组件。 4. 阿纳其根（A. pyrethrum）的组织分布及GO分析 研究者采用FunRich软件对阿纳其根靶点的组织分布情况进行了分析。结果显示，有35种活性成分在额叶皮层、下丘脑、神经系统和大脑中均有分布（p< 0.001）（见图4a）。基于生物学过程（Biological Processes，BP）、细胞组分（Cellular Components，CC）以及分子功能（Molecular Functions，MF），研究者对阿纳其根的GO富集情况进行了分析（见图4b-d）。研究者分析识别出多个生物学过程和分子功能，包括能量代谢途径、细胞信号传导以及代谢过程等。具体涉及的细胞组分包括微粒体、核内体、细胞膜、核质、内质网、细胞质等；分子功能则涵盖脂质依赖性核受体活性、金属蛋白酶活性、丝氨酸蛋白酶、催化活性以及G蛋白偶联受体活性等。 图4. 阐释靶点的富集模式。(a) 靶点的组织分布与富集分析。(b) 生物过程的富集分析。(c) 细胞组分的富集分析。(d) 分子功能的富集分析。 5. EEAP对帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）小鼠学习记忆的影响 研究者采用Morris水迷宫实验对小鼠的认知功能进行评估。该实验测量小鼠每天从四个象限中逃脱的平均时间（见图5a）。模型组与EEAP处理组小鼠在潜伏期和游泳距离方面存在显著差异（p<0.05）。在第2至4天，模型小鼠的游泳距离和逃避潜伏期明显长于对照组小鼠。从第1至4天，D/l组和EEAP组小鼠的平均游泳距离和逃避潜伏期均有所下降。EEAP对小鼠表现的影响显然取决于剂量（见图5b-e）。 图5. EEAP对帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）小鼠学习记忆的影响。（a）各小鼠组的定位轨迹图。（b）第1至5天观察到的逃避行为延迟。（c）第5天测量的逃避反应潜伏期。（d）目标象限穿越次数。（e）平台穿越次数。（f）八臂迷宫的轨迹代表各小鼠组。（g）参考记忆错误（RME）次数。（h）工作记忆错误（WME）次数。*p<0.05，**p<0.01。 八臂迷宫实验结果显示了工作记忆的错误情况。在训练的最初2天，各组小鼠的工作记忆错误数量并无显著差异。到了第3天，模型组的工作记忆错误数量显著高于对照组（p<0.05）。此外，EEAP 400组和D/l组的工作记忆错误数量均显著低于模型组（p<0.05）。在训练的最初2天，工作记忆错误数量与参考记忆错误数量相比并无显著下降（p>0.05）。然而，在第3天，模型组的参考记忆错误数量显著高于对照组（p<0.05）。此外，EEAP-H组和l+D组的参考记忆错误数量较模型组显著降低（p<0.05）。同时，EEAP 200组和EEAP 100组的参考记忆错误数量也低于模型组（p<0.05）（见图5f-h）。 旷场实验反映了小鼠的焦虑和抑郁情况。与对照组相比，模型组小鼠的攀爬站立次数、平均移动速度和总移动距离均显著减少。此外，模型组小鼠在中心区域的停留时间延长，表现出显著差异（p<0.05）。与对照组相比，D/l组和EEAP组小鼠的攀爬站立时间延长。最后，平均移动速度和总移动距离增加，而中心区域的停留时间减少（p<0.05）（见图6a-e）。 图6. 六组小鼠旷场追踪和高架十字迷宫实验的结果。（a）各组旷场追踪图。（b）总移动距离。（c）平均运动速度。（d）在中心区域的停留时间。（e）直立次数。（f）各组高架迷宫实验轨迹图。（g）进入开放臂的频率。（h）在开放臂中的停留时间。*p<0.05，**p<0.01。 高架十字迷宫（Elevated Plus Maze, EPM）实验是评估动物焦虑样行为的常用方法。在本研究中，研究者对照组小鼠进入开放臂的频率和停留时间显著高于模型组，表明正常小鼠在实验条件下表现出较低的焦虑水平。相反，模型组小鼠进入开放臂的频率和停留时间显著降低，提示建模后小鼠出现了焦虑样行为。D/l组作为阳性对照组，进入开放臂的频率和停留时间增加，表明这些药物在减轻焦虑样行为方面具有一定的效果。EEAP各剂量组（100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg）的实验结果显示，进入开放臂的频率和停留时间均呈剂量依赖性增加，且某些剂量组与模型组之间存在统计学差异。这些结果表明，EEAP可能对小鼠的焦虑样行为具有缓解作用（见图6f-h）。 6. EEAP对帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）小鼠海马神经元损伤的影响 模型小鼠的海马区域神经元数量较少且排列较为松散，部分神经元出现萎缩，神经元体积减小，细胞形态不规则，核与细胞质之间的界限模糊，染色强度加深，神经元呈现肿胀状态，细胞质染色较浅且松散。海马CA1区神经元密度较高，而CA3区神经元排列松散。CA1区和海马齿状回神经元数量较少，细胞体积不规则，核与细胞质之间的界限不清，染色加深，存在少量肿胀且细胞质松散的神经元。在EEAP低剂量（EEAP-L）组中，CA3区神经元数量较少且排列松散，CA1区和齿状回可见少量萎缩的神经元，细胞体积变小，细胞形态不规则，细胞质与细胞核的界限模糊，染色加深。EEAP中剂量（EEAP-M）组的海马锥体细胞未见明显异常，形态规则，排列紧密且有序，具有大的球形核，少量染色质，且可见核仁。EEAP高剂量（EEAP-H）组的CA3区神经元排列紊乱，所有区域的神经元数量有限。细胞体积减小，导致细胞形态不规则。核与细胞质界限不清，染色强度高（见图7a）。 图7. EEAP对海马CA1区组织病理学及结肠组织形态的影响。（a）海马CA1区苏木精-伊红（H&E）染色（200x）。（b）肠道组织苏木精-伊红（H&E）染色（200x）。（c）神经细胞的电子显微照片。EEAP可改善小鼠的氧化应激状态。（d）超氧化物歧化酶（SOD）活性。（e）过氧化氢酶（CAT）活性。（f）谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-P）活性。（h）丙二醛（MDA）活性。*p<0.05，**p<0.01。 7. EEAP对帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）小鼠肠道组织病理变化的影响 对照组小鼠的肠道形态和结构表现正常。在模型组中，部分黏膜上皮细胞出现轻度变性和肿胀，偶尔与固有层分离。此外，肠绒毛细胞数量减少，肌层下出现淋巴细胞聚集。在D/l组中，固有层内的局部肠腺排列松散，细胞发生变性，偶尔导致腺体结构消失和淋巴细胞聚集。EEAP各剂量组（100 mg/kg、200 mg/kg、400 mg/kg）的肠道形态和结构均保持正常，各层均未见明显异常。 8. EEAP对帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）小鼠海马神经元超微结构的影响 在空白组中，海马神经元的细胞核呈椭圆形，核膜清晰完整，染色质分布均匀，核仁清晰可辨，细胞质密度均匀，细胞器丰富且分布广泛。在模型组小鼠中，神经元细胞核形态各异，异染色质和核仁边缘聚集，且异染色质丰富。在D/l组中，神经元细胞核呈圆形，核膜清晰完整，染色质致密，少数神经元细胞核形态存在差异。在EEAP 100 mg/kg组中，神经元细胞核形态高度不规则。在EEAP 200 mg/kg组中，神经元细胞核呈圆形，核膜完整，染色质细致，核仁清晰。在EEAP 400 mg/kg组中，神经元细胞核形态不规则，核膜完整，染色质清晰，核仁分明（见图7c）。 9. EEAP对帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）小鼠海马神经元氧化应激的调节作用 研究者检测了包括超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-P）在内的几种抗氧化酶的体内活性，以及氧化应激标志物丙二醛（MDA）及其相关氧化产物的浓度。结果显示，与对照组小鼠相比，模型组小鼠的SOD、CAT和GSH-P活性显著降低，而MDA浓度则显著升高。与模型组小鼠相比，EEAP各组小鼠的GSH-P、CAT和SOD活性显著提高，MDA水平则显著降低（见图7d-g）。 10. EEAP对帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）小鼠海马中Aβ、APP、P-Tau、Bax和Bcl-2水平的影响 在模型组小鼠中，蛋白表达水平高于空白组，这通过代表APP和Aβ的更强条带得以体现。在接受EEAP治疗的动物中，条带较模型组更弱，表明蛋白表达水平降低。参考蛋白为β-actin，海马中的Bcl-2和Bax产生单一条带。模型组的Bcl-2表达水平低于空白组；经EEAP处理的各组中Bcl-2蛋白条带较模型组更强，表明Bcl-2蛋白表达增加。模型组的Bax表达水平高于空白组。与模型组相比，不同剂量的阿纳其根提取物处理组中代表Bax的条带更窄且强度更低，表明Bax蛋白表达降低。不同处理对α-突触核蛋白表达的影响表明，EEAP处理组与模型组之间存在显著差异（见图8a-g）。 图8. 通过蛋白质免疫印迹检测的EEAP对Aβ、APP、p-Tau、Bax、Bcl-2、α-突触核蛋白水平的影响。*p<0.05，**p<0.01。 11. EEAP对帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）小鼠粪便代谢轮廓的影响 图9a展示了排名前20的代谢产物，包括亚油醇乙醇胺和硬脂酰胺。不同的颜色代表不同的代谢产物，而直方图中的颜色堆叠突出了各组间相对丰度的差异。各组间代谢产物的相对丰度存在显著差异。例如，模型组与对照组相比代谢产物水平的变化表明疾病状态可能会影响代谢产物轮廓。此外，与模型组相比，EEAP治疗组的代谢产物水平发生了变化，表明EEAP可能具有调节作用。值得注意的是，与对照组相比，模型组的类固醇和脂肪酸发生了显著变化，这可能是由于疾病引起的改变。EEAP治疗组也表现出不同的代谢产物模式（见图9b）。热图分析显示EEAP治疗组与模型组之间存在明显差异，表明EEAP可能将多种代谢产物调节至正常或有利水平（见图9c）。偏最小二乘判别分析（PLS-DA）得分图展示了不同组样本在主成分空间中的分布情况。不同组之间存在明显的分离（见图10a、b）。EEAP处理组（400 mg/kg和100 mg/kg）也显示出不同的分布，暗示EEAP对代谢具有剂量依赖性的影响。置换检验结果显示PLS-DA模型在区分组别方面达到了60%的准确率，p值为0.02，证实了模型的统计学意义和可靠性（见图10c）。正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）进一步强调了组间的分离，其Q2值为0.542，p值小于0.01，突出了模型的预测能力和统计学意义（见图10d、e、表3）。为了直观地展示代谢产物的差异，生成了排名前25的差异代谢产物的箱线图。例如，硬脂酸在模型组和对照组之间显示出显著的中位数变化。1-棕榈酰-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱在EEAP处理组与对照组和模型组相比显示出不同的箱线图位置和范围。棕榈酸在各组中的水平一直较高，表明其在代谢过程中具有重要性。左旋色氨酸在各组中的水平差异显著，表明其可能参与特定的代谢途径。3-甲基-2-氧代戊酸显示出较高的变异性，这可能是由于个体差异或实验因素。尿嘧啶显示出较低的离散度，表明其在样本中的水平较为一致。与对照组相比，EEAP 400 mg/kg和EEAP 100 mg/kg剂量组中某些物质的中位数位置和四分位数间距发生了变化，表明不同剂量的EEAP处理对物质浓度产生了显著影响（见图11）。 图9. 不同处理组间代谢物水平的变化。（a）不同处理队列中鉴定出的二十种最常见的代谢物。（b）这些代谢物的生物学功能。（c）通过对不同处理组小鼠鉴定出的三十种代谢物（经方差分析[ANOVA]检验）进行聚类分析生成的热图。 图10. 主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）的结果。（a）主成分分析（PCA）得分图，显示不同组在二维空间中的分布情况；（b）PCA得分图的三维展示，更直观地观察组间差异；（c）置换检验统计结果，显示观察到的准确率和p值；（d）正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）得分图，进一步区分不同组；（e）OPLS-DA模型的置换检验结果，显示Q2值和p值。 表3. 差异表达生物标志物的鉴定。 图11. 不同组间排名前25的差异代谢物的单变量箱线图。结果通过单因素方差分析和t检验计算显著性差异，统计学显著性定义为p<0.05。 研究者通过随机森林分析识别出15种具有高“平均准确率降低值”的代谢物。在EEAP 100 mg/kg组中，D-谷氨酰胺和酒石酸肾上腺素的表达水平高于400 mg/kg组，表明存在剂量依赖性效应。氢可酮在400 mg/kg组中的表达水平更高，表明在较高剂量下活性更强。与对照组相比，400 mg/kg组中3-[3-(4-甲氧基苯基)-1-甲基亚丙基]吲哚啉-2-酮的表达增加。相反，400 mg/kg组中8(S),15(S)-二氢脂氧酸和肌酸的水平较低。研究者在模型组中未检测到洛贝林的表达，但在EEAP处理组中存在，突出了模型环境的独特效应。13(s)-氢过氧基-(9z,11e,15z)-十八三烯酸在模型组中高表达，但在400 mg/kg组中缺失，反映了不同环境的影响。多奈哌齐/左旋多巴处理抑制了包括12-白三烯B4和8(S),15(S)-二氢脂氧酸在内的几种代谢物，并对洛贝林表达产生负面影响（见图12a）。研究者通过受试者工作特征曲线（ROC）评估支持向量机（Support Vector Machines, SVM）分类模型（见图12b）。接近1的曲线下面积（AUC）值表明预测性能优越，组间代谢物差异显著。代谢通路分析显示苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸代谢、精氨酸生物合成等通路显著富集。这些通路中元素浓度较高，可能在生理或病理过程中发挥重要作用。色氨酸代谢和卟啉代谢富集度较低，表明其重要性相对较小，但不排除其潜在重要性。核苷酸代谢以及苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成等通路的p值较小，表明统计学意义强。相比之下，鞘脂代谢和硫胺素代谢的p值较大，统计学意义较低（见图12c）。过度表示分析（ORA）富集分析突出了苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成等显著的代谢通路（见图12d）。图13分析了苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸代谢通路中的关键代谢物。D-赤藓糖-4-磷酸是磷酸戊糖途径中的一个中间体，支持芳香族氨基酸的合成。研究者在400 mg/kg组中用红色标记的吲哚参与色氨酸代谢，表明高剂量对色氨酸分支的影响。苯丙氨酸作为一种关键产物，可能受到高剂量处理的影响。在100 mg/kg组中用蓝色标记的奎宁酸是莽草酸途径中的一个中间体，表明低剂量对芳香族氨基酸合成的影响。酪氨酸是另一种重要产物，可能受到低剂量处理的影响，从而改变其合成或代谢。 图12. 关键代谢物和通路分析的结果。（a）重要代谢物的平均准确率降低值的散点图（左侧）及其表达水平的热图（右侧）。左侧散点图中的每个点代表一种代谢物，右侧的热图显示代谢物的相对表达水平，红色表示高水平，绿色表示低水平。（b）针对不同变量投影重要性（VIP）值的受试者工作特征（ROC）曲线分析，展示灵敏度与1-特异性（假阳性率）之间的关系。（c）排名前50的通路的富集概览。条形的长度代表通路的富集倍数，颜色代表p值，颜色越红表示p值越低。（d）通路分析的影响图，展示通路的影响与它们的-log10(p)值之间的关系，点代表不同的通路。 图13. 苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成的代谢通路图。该图展示了这些氨基酸生物合成过程中所涉及的复杂生化反应网络。采用不同颜色标记对照组、高剂量组和低剂量组的样本，以显示不同处理对这一代谢通路的可能影响。 12. EEAP对肠道微生物群组成的调节作用 图14a展示了不同样本组之间的独特和共有操作分类单元（OTUs），便于计算多个样本中共享和独特的OTU数量。维恩图中央的蓝色区域，数值为342，表示所有组（对照组、模型组、EEAP 200组、D/l组、EEAP 100组、EEAP 400组）共有的OTU数量。每一瓣表示各自组独特的OTU数量。这些数据为OTU水平上的组成相似性和重叠提供了直观的比较。如图14b所示，厚壁菌门和拟杆菌门在每个样本组的微生物群落中占主导地位，占据了相对较高的序列比例。这些菌门在不同组之间的比例变化可能对整体微生物群落功能具有重要意义。例如，螺旋体门（Spirochaetes）在所有组中均表现出较低且无显著变化的比例，而放线菌门则表现出一定的波动。在不同浓度的EEAP处理组中，拟杆菌门的比例随EEAP浓度而波动。值得注意的是，EEAP 400组的拟杆菌门比例与其他组相比具有显著差异。为了评估样本之间的相似性，研究者进行聚类分析以构建树状图（见图14c），揭示微生物群落之间的相似性和差异性。密切相关微生物群落通常具有相似的丰度模式，有助于分类和功能预测。深色区域突出了更丰富的微生物群落，如k_Bacteria; p_Proteobacteria、k_Bacteria; p_Bacteroidetes和k_Bacteria; p_Firmicutes，它们在群落功能和稳定性中发挥着关键作用。图14d呈现了线性判别分析（LDA）效应大小图（LEfSe分析结果），突出了不同样本组之间显著不同的微生物群落。横轴表示LDA SCORE（以log10为尺度），较高的数值表示相应微生物群落内部的差异更大。纵轴列出了从纲（c_）到属（g_）的不同微生物分类单元，颜色条代表不同的样本组。该图允许识别在特定样本组中富集的标志性微生物群落，这些群落可能作为生物标志物。例如，g_Prevotella在对照组中具有显著的LDA得分，表明其独特的角色。模型组中c_Epsilonproteobacteria的高LDA得分表明在这种条件下发生了显著变化，可能涉及生理或病理过程。D/l组中g_Clostridium的高LDA得分暗示了与D/l干预的关联。同样，EEAP 100组中g_Adlercreutzia的高LDA得分表明低浓度EEAP对该属具有显著影响。图14e展示了一个系统发育层次图，显示了微生物群落的进化层次。向外延伸的分支代表进化路径，相似的分支表示密切的进化关系。不同的颜色对应不同的样本组，彩色节点表示相应微生物群落的显著差异。集中的红色节点反映了在EEAP 400组中富集的微生物分类单元，为受影响的进化分支提供了见解。对照组和模型组之间节点分布的差异表明，模型构建改变了整个进化分支上的微生物群落组成，有助于研究进化特征和功能变化。 图14. 不同组别肠道微生物群的分析。（a）维恩图显示对照组、EEAP 400组、EEAP 100组、EEAP 200组、模型组和D/l组之间的操作分类单元（OTUs）分布。重叠区域表示共有OTUs，非重叠区域代表独特OTUs。（b）各组在门水平上微生物群的相对丰度条形图，展示了肠道微生物群中不同门的比例。（c）各组在门水平上微生物群的相对丰度热图，颜色代表相对丰度值，显示组间微生物群组成的差异。（d）线性判别分析（LDA）效应大小（LEfSe）分析结果，条形的长度代表LDA得分，表明组间显著差异的微生物类群。（e）LEfSe分析的系统发育图，显示不同组间微生物群组成的层级关系和显著差异，不同颜色代表不同组别。 图15a中的箱线图展示了不同样本组的Faith PD指数。通过比较箱线图的位置和长度，可以直观地揭示系统发育多样性差异。箱线图位置较高，表明Faith PD指数值较大，系统发育多样性也更高。EEAP 100组与其他组相比，系统发育多样性显著更高。 图15b呈现了基于加权UniFrac距离的非度量多维尺度分析（NMDS）图，展示了微生物群落的相似性和差异性。应激值为0.1006，表明结果可靠。样本点之间的距离越大，表明微生物群落结构差异越大。EEAP 100组与其他组，尤其是对照组和模型组，距离显著更远，表明微生物群落结构发生了显著变化。图15c展示了基于加权UniFrac距离的主坐标分析（PCoA）图，直观地展示了微生物群落结构的相似性和差异性。研究者对OTUs进行的有监督偏最小二乘判别分析（Supervised PLS-DA）进一步比较了点的分布和椭圆的位置，揭示了对照组和实验组之间存在显著差异。EEAP 200组和D/l组之间的部分重叠表明它们的OTU组成相似（图15d）。图15e突出了高丰度的优势微生物属，如普雷沃菌属（Prevotella）、乳杆菌属（Lactobacillus）和双歧杆菌属（Bifidobacterium），暗示了它们在微生物群落相互作用中的重要性。图16a中的短链脂肪酸（SCFAs）分析显示了柱状堆积图，展示了不同功能类别中的序列百分比。所有组中与代谢相关的功能普遍较高，表明微生物代谢活跃。乙酸是所有组中最丰富的SCFA，表明其在微生物代谢产物中起着关键作用（图16b）。图16c中的热图展示了六种化合物在不同处理组中的相对浓度。颜色梯度从绿色到红色表示化合物水平的增加，使得可以清晰地比较每种化合物在不同处理中的浓度。在图16d中，得分图通过不同颜色的点显示了不同的处理组。这些点在主成分（PC1和PC2）上的分布突出了各组之间的相似性和差异性。具体而言，PC1占了46.8%的方差，而PC2占了22.5%，共同表明这两个成分解释数据的程度。图17a和图14b分别展示了丙酸和异戊酸的变量重要性投影（VIP）和分布情况。它们的VIP值超过1，且-log10(p)值较高，表明组间差异显著。EEAP处理组与对照组/模型组之间的标记确认了EEAP对丙酸和异戊酸水平有显著影响（p<0.001）。图17c展示了不同SCFAs的平均准确率降低值，其中异戊酸的降低幅度最大。丙酸和异戊酸的相对水平在各组之间有所不同，反映了EEAP处理对这些SCFAs的影响，为理解EEAP的作用机制和代谢变化提供了见解（图18）。 图15. 不同组别肠道微生物群的分析。（a）不同组别的年龄箱线图，展示了对照组、EEAP 400组、EEAP 100组、EEAP 200组和模型组中年龄的分布情况。（b）基于加权UniFrac距离的非度量多维尺度分析（NMDS）图，显示了不同组别肠道微生物群的聚类和差异性，应激值表明了排序的拟合优度。（c）基于加权UniFrac的NMDS图的另一视角，进一步可视化了组别间的关系。（d）对操作分类单元（OTUs）进行的有监督偏最小二乘判别分析（PLS-DA），突出了不同组在由PLS-DA成分定义的特征空间中的分离情况。（e）肠道微生物群的网络图，节点代表不同的门（拟杆菌门、厚壁菌门、放线菌门、疣微菌门、变形菌门、柔膜菌门），边表示它们之间的相关性，展示了不同门在肠道微生物群中的共现或互斥关系。 图16. 不同组别短链脂肪酸代谢及相关因素的分析。（a）不同组别肠道微生物群中不同功能类别（环境信息处理、生物体系统、人类疾病、细胞过程、遗传信息处理、代谢）的相对丰度堆积条形图，为理解与短链脂肪酸代谢相关的整体微生物功能概况提供背景信息。（b）各组中不同短链脂肪酸相对丰度的堆积条形图，突出显示不同短链脂肪酸的分布情况。（c）不同组别短链脂肪酸相对丰度的热图，颜色深浅表示相对丰度水平，便于比较各组间短链脂肪酸的丰度差异。（d）不同组别的主成分分析（PCA）得分图，展示了在由前两个主成分定义的空间中的分布模式，可能反映了对短链脂肪酸相关代谢状态的综合影响。 图17. 不同实验组关键短链脂肪酸的分析。（a）短链脂肪酸的变量投影重要性（VIP）图，突出显示不同脂肪酸在区分组别中的重要性。虚线可能表示显著VIP值的阈值。（b）对照组、EEAP 400组、EEAP 100组、多奈哌齐/左旋多巴组、EEAP 200组和模型组中丙酸和异戊酸水平的箱线图。星号表示组间显著差异（*** p<0.0001）。（c）各种短链脂肪酸平均准确率降低值的散点图，显示其在模型中的相对重要性，右侧的热图图例表示这些脂肪酸在不同组中的相对水平，红色表示高水平，绿色表示低水平。 图18. 阿纳其根在MPTP诱导小鼠中的调节机制示意图。MPTP处理导致肠道菌群失调，并破坏肠道屏障，致使致病菌增加，产短链脂肪酸（SCFA）细菌（如螺旋体门和放线菌门）减少。阿纳其根通过调节肠道菌群、增强SCFA产生、缓解炎症以及通过上调巨噬细胞中的抗氧化酶（SOD、CAT、GSH-Px）来减轻氧化应激进行干预。此外，它还调节涉及丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的代谢途径（包括MAPK、IDO1/IDO2、TPH2、TH），最终导致大脑短期记忆和工作记忆的改善。 讨论 在本研究中，研究者通过网络药理学方法鉴定了阿纳其根的有效成分，并分析了其在帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）模型小鼠中的预防和治疗作用。研究者筛选出的排名前十的药物-疾病靶点分别为MAPK8、KDR、JAK2、HDAC1、NOS3、MAPK14、AR、PIK3CA、TLR4和ATM。在帕金森病模型中，MAPK的上调与黑质多巴胺能神经元的退化同时发生。研究表明，MAPK8在神经元的应激反应和凋亡中发挥着关键作用。在患有轻度认知障碍的帕金森病患者（PD-MCI）的大脑中，MAPK8信号通路可能被异常蛋白质聚集等因素激活，导致神经元凋亡增加，进而影响认知功能。MAPK8是c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路的关键组成部分。激活后，MAPK8能够磷酸化下游的转录因子如c-Jun，从而调节相关基因的表达。在PD-MCI中，JNK信号通路的过度激活可能参与神经炎症和氧化应激等病理过程，通过调节炎症因子和细胞内氧化还原状态，影响神经元的存活和功能。STAT3是一种对细胞增殖、分化、存活和免疫调节至关重要的转录因子，在PD-MCI中可能表现出异常的激活或失活，影响神经干细胞的增殖和分化，以及神经元的修复和再生能力。STAT3可以通过调节炎症反应和细胞因子分泌来调节胶质细胞的功能，从而影响神经元的微环境。例如，STAT3的激活可能促进抗炎因子的表达，发挥神经保护作用。 然而，过度激活可能导致细胞因子风暴，加剧神经炎症损伤。SIRT1是一种依赖NAD⁺的去乙酰化酶，参与细胞代谢、衰老、凋亡等过程，在神经系统中通过去乙酰化修饰多种靶蛋白，影响神经元的存活、分化和突触可塑性。研究表明，SIRT1活性降低可能导致tau蛋白过度乙酰化，促进神经纤维缠结的形成，这是神经退行性疾病（如PD-MCI）的标志性病理特征。此外，SIRT1调节线粒体功能和自噬，维持神经元的能量代谢和细胞内稳态。EEAP具有抗氧化特性，可能与MAPK8信号通路介导的氧化应激有关。关于STAT3，EEAP可能通过调节其磷酸化水平影响其转录活性。对于SIRT1，EEAP可能通过调节细胞内NAD⁺水平间接影响SIRT1活性，或直接与SIRT1相互作用以调节靶蛋白的去乙酰化，从而增强神经元功能。组蛋白去乙酰化酶是作为药物靶点的关键表观遗传酶，影响癌症和神经退行性疾病中失调的各种细胞过程。帕金森病可能涉及由于一氧化氮合酶（NOS1、NOS3和NOS2A）产生高水平的一氧化氮。某些天然化合物通过激活PI3K/AKT通路发挥神经保护作用，使其成为寻找可能的治疗方法的有用工具。TLR4介导的炎症过程涉及肠道和/或大脑，可能对帕金森病中观察到的神经退行性变化起着关键作用。本研究的GO分析表明，阿纳其根的抗帕金森病效应包括能量信号传导、细胞信号传导和代谢。大分子功能涵盖G蛋白偶联受体、丝氨酸-苏氨酸激酶、催化活性、金属蛋白酶、跨膜酪氨酸激酶和配体依赖性核受体。然而，仍需进一步的实验验证来确认研究者的发现。 Morris水迷宫是一种空间学习测试，用于评估在移除平台后从对平台区域的记忆中学习的能力，以及在多次试验中的空间学习能力。Morris水迷宫的测试结果表明，EEAP组小鼠比模型组更快地找到平台，更频繁地穿越平台，并且在反向平台上停留的时间更短。八臂迷宫是评估小鼠参考记忆和空间学习能力的常用迷宫之一。当小鼠进入未被诱导的臂时，即发生参考记忆错误。然而，当它们返回之前访问过的臂时，则发生工作记忆错误。其基本原理是，通过限制小鼠的食物摄入量，迫使它们探索周围环境，通过训练时间，小鼠能够回忆起迷宫中食物的位置。八臂迷宫的测试结果表明，在训练阶段之后，EEAP处理组的工作记忆和参考记忆错误明显少于模型组，表明EEAP可以增强PD-MCI模型小鼠的学习和记忆能力。旷场实验是一种常用的行为学方法，主要用于观察啮齿动物的探索行为和焦虑状态。这些实验表明，模型小鼠的活动性较低，表现为速度更慢、移动距离更短，以及垂直站立时间更短，表明其好奇心较低。小鼠对新环境的适应能力较差，探索性较低。活动轨迹显示，EEAP处理组在旷场中心停留的时间增加，表明该处理改善了PD-MCI小鼠的运动能力并降低了焦虑。在中枢神经系统疾病的小鼠模型中，使用高架十字迷宫评估与焦虑相关的行为。在高架十字迷宫的开放臂中度过的时间百分比随着EEAP的低、中、高剂量而增加。此外，模型组小鼠进入开放臂的频率较低，与EEAP组小鼠相比，它们在开放臂中度过的时间百分比较低。 帕金森病（PD）是一种导致运动、记忆和认知功能障碍的区域性神经元丢失。针对神经元丢失的研究推动了神经退行性疾病治疗的进展。帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）通常起病隐匿，进展缓慢，可能逐渐发展为帕金森病痴呆（PDD）。PD-MCI在临床上具有异质性，可表现为单一或多个认知领域的障碍，包括工作记忆、语言和视空间功能。大脑皮层和海马的神经元丢失会导致认知和精神功能障碍。海马是大脑边缘系统的重要组成部分，在动物和人类的学习和记忆中发挥着重要作用。海马是一个高度有序的层状结构，已成为研究和治疗认知功能障碍的重要病理结构。EEAP能够减少神经元死亡、胶质细胞增殖以及锥体细胞带的紊乱和变薄。与模型组相比，D/l组、EEAP 200组和EEAP 400组的锥体细胞层经苏木精染色后完整性略有改善。细胞排列整齐，形态正常且分布均匀，细胞质和胞体呈浅蓝色。细胞核大而清晰，细胞质丰富。观察到部分神经元出现萎缩和坏死，但核膜清晰，胶质细胞数量较少。未观察到胶质细胞增生的证据。先前的研究已经证实，帕金森病患者经常表现出肠道菌群失调，这可以影响肠道屏障功能和免疫调节。模型组观察到的病理变化可能归因于这种失调，导致炎症和随后的肠道组织损伤。D/l组也表现出一定程度的组织异常，表明传统干预措施只能部分改善肠道组织的病理变化。相比之下，不同剂量的EEAP治疗组的小肠组织形态和结构保持正常，表明这种治疗可能通过调节肠道菌群、改善肠道微环境以及维持肠道组织的正常结构和功能，对帕金森病小鼠的肠道损伤发挥保护作用。 超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-P）是关键的抗氧化剂，能够清除活性氧（ROS）、氧自由基和羟基自由基，保护细胞膜的结构和功能完整性。自由基可导致脂质过氧化，其最终产物是丙二醛（MDA），进而导致蛋白质、核酸和其他大分子的交联和聚合。当脂质过氧化增加且氧自由基过度产生时，GSH-P和SOD的水平倾向于增加。高水平的抗氧化酶清除过量的氧自由基，平衡氧化剂和抗氧化剂的活性。在帕金森病（PD）患者中，MDA水平较高，而GSH-P、过氧化氢酶（CAT）和SOD的活性水平低于正常。这些酶可能作为生物标志物和潜在的诊断工具，用于评估患者中的氧化应激。在本研究中，研究者经MPTP处理后MDA水平升高，而GSH-P、CAT和SOD的活性降低。经过3周的EEAP治疗后，小鼠中脑中的MDA水平显著下降，而SOD、CAT和GSH-P的活性则大幅增加。因此，EEAP增强了抗氧化活性，减少了由MPTP引起的自由基，减轻了对多巴胺能神经元的损伤，从而改善了模型小鼠的运动障碍。然而，其确切的潜在机制尚需进一步研究。路易体和阿尔茨海默病（AD）病理学代表了PD-MCI中的人类等效病理学。蓝斑的α-突触核蛋白病、淀粉样斑块、额叶脑白质稀疏、海马CA1区的单个神经纤维缠结、银颗粒、扣带回和颞中回、杏仁核以及蓝斑是PD相关疾病的代表性病理特征。据报道，Tau蛋白和Aβ（淀粉样蛋白）可促进帕金森病痴呆（PDD）的发展。当Aβ亚型在脑组织中沉积时，就会形成淀粉样斑块。淀粉样前体蛋白（APP）经过酶促处理产生Aβ，这是一种能够寡聚化、聚集并随后沉积为斑块的神经毒性肽。EEAP治疗降低了模型小鼠大脑中APP和Aβ的表达。因此，EEAP能够逆转或预防由MPTP诱导的小鼠大脑中Aβ的神经毒性效应，减少Aβ沉积，并产生抗PD-MCI效应。多巴胺能神经元数量较多的小鼠可以通过过表达Bcl-2来抵御神经毒性。它增强了酪氨酸羟化酶的产生，而酪氨酸羟化酶对于多巴胺合成至关重要。PD患者的脑部Bcl-2水平低于对照组；低Bcl-2水平与疾病严重程度呈负相关。相反，据报道促凋亡的Bax在黑质致密部的神经元和含有路易体的神经元中积累。研究者对Bcl-2和Bax表达的观察结果与先前的报告一致。在黑质中，MPTP增加了Bax的表达，降低了Bcl-2的表达。EEAP治疗预防了凋亡，并逆转了与MPTP相关的神经毒性，证明了EEAP的抗凋亡效应。 通过定量比较不同样本组的代谢物水平，研究者借助积累直方图直观地揭示了代谢物组成的差异。利用KEGG数据库注释，研究者进一步探究了代谢物与生理/病理过程之间的关系，重点关注与认知功能障碍相关的代谢物。本研究精确计算并可视化了各亚组中代谢物含量的百分比。在模型组中，十六烷酰胺、(±)12(13)-二羟基丙酮、硬脂酰胺和13-氢过氧化-顺-9,反-11-十八碳二烯酸的浓度最高。这些代谢物参与细胞信号转导以及多不饱和脂肪酸的氧化修饰，反映了在病理状态下细胞信号、应激反应以及氧化应激水平的变化。在多奈哌齐/左旋多巴组中，亚油酰乙醇胺最为丰富，表明干预措施可能调节内源性大麻素系统，发挥神经保护和抗炎作用。在EEAP 100 mg/kg组中，反式油酸和L-苯丙氨酸占主导地位，分别影响神经细胞膜功能和神经递质合成。在EEAP 200 mg/kg组中，油酸酰胺和脱氧胆酸占主导地位，参与睡眠调节和胆汁酸代谢。在EEAP 400 mg/kg组中，溶血磷脂酰乙醇胺18:2和花生四烯酸最为普遍，影响细胞膜更新、炎症反应和神经功能。KEGG注释揭示了各组中不同的生物学作用。类固醇在模型组中最为丰富，在EEAP 100 mg/kg组中最少，表明病理状态促进了它们的合成或积累，而EEAP 100 mg/kg抑制了它们的产生或加速了它们的代谢。脂质在EEAP 400 mg/kg组中最为丰富，在模型组中最少，表明高剂量治疗有利于脂质合成或减少分解，而病理状态由于代谢紊乱导致脂质含量降低。肽类在EEAP 100 mg/kg组中最为丰富，表明低剂量治疗影响肽类的合成、加工或降解。维生素和辅因子在多奈哌齐/左旋多巴组中最为丰富，在模型组中最少，表明治疗有利于它们的形成或保存，而病理状态影响它们的合成或增加消耗。有机酸在EEAP 100 mg/kg组中最为丰富，在EEAP 200 mg/kg组中最少，反映了有机酸代谢途径的剂量依赖性调节。核酸和碳水化合物在所有组中的丰度相对较低，激素和神经递质也是如此。 多变量分析方法，如偏最小二乘判别分析（PLS-DA）和正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA），能有效区分样本组别。单变量分析识别出与认知功能障碍相关的代谢物，如L-酪氨酸甲酯和D-谷氨酰胺。L-酪氨酸甲酯会干扰儿茶酚胺类神经递质的合成，从而扰乱神经信号传导和神经可塑性，导致认知问题。异常的D-谷氨酰胺代谢会扰乱谷氨酸-谷氨酰胺循环，影响神经信号传导和突触功能。异常的L-蛋氨酸代谢会损害谷胱甘肽的合成，使神经元易受氧化损伤，进而影响认知功能。随着侧A调节神经递质系统，其失调可能导致影响认知的失衡。苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成途径与认知功能障碍密切相关。肠道微生物群在人类健康中发挥着关键作用，尤其是在认知功能方面。研究表明，厚壁菌门和拟杆菌门的失衡与神经系统疾病和认知功能障碍有关。这种比例的变化通过“肠-脑轴”影响大脑功能，当比例升高时，可能会导致阿尔茨海默病和帕金森病等神经退行性疾病，以及抑郁和焦虑等精神障碍。其机制包括改变肠道屏障功能、触发炎症反应以及调节神经递质水平。螺旋体门和放线菌门也会影响认知功能。螺旋体门通过代谢短链脂肪酸并与其他菌群相互作用来维持群落稳定性，间接支持神经递质的合成，抑制促炎细菌，并保护肠-脑轴。放线菌门的丰度波动与代谢活跃的物质有关，其次级代谢产物会影响神经递质代谢，异常增殖会导致氧化三甲胺的积累，与神经退行性有关。维持这两种菌群的稳态对认知健康至关重要，干预措施包括增强螺旋体门的定植和调节有害放线菌门代谢产物。 致病菌如c_Epsilonproteobacteria（例如幽门螺杆菌）、g_Clostridium和g_Adlercreutzia也会影响认知功能。这些病原体通过激活免疫反应增加血脑屏障通透性，从而导致神经元损伤。g_Clostridium具有双重作用：其有益的代谢产物能够抑制炎症，但其过度丰度可能会导致肥胖并影响认知功能。g_Adlercreutzia对大豆异黄酮的异常代谢会干扰宿主的雌激素水平以及脂肪酸代谢酶的活性，与认知障碍有关。短链脂肪酸是重要的微生物代谢产物，在不同样本组中显著变化，通过调节肠道功能并通过肠脑轴影响大脑，可能与认知功能障碍有关。丙酸和异戊酸对认知功能有显著影响。丙酸调节神经递质系统，参与神经炎症，并影响肠道屏障功能。异戊酸可能通过调节睡眠功能间接影响认知，但其具体机制尚需进一步研究。丙氨酸、酪氨酸和色氨酸的代谢途径与特定肠道微生物群落和短链脂肪酸形成了复杂的网络，共同调节认知功能。异常的氨基酸代谢途径和微生物失衡会导致认知障碍，丙酸和异戊酸的异常水平也会干扰认知功能。本研究存在以下局限性：EEAP目前仅在动物模型中进行了研究，缺乏对活性成分的临床验证。动物与人类在生理、代谢和环境方面存在差异，这可能会影响EEAP的吸收、代谢和功效，因此未来需要开展临床研究。在研究EEAP对帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）的影响时，仅使用了一种动物模型，这无法反映人类疾病的复杂性；应使用多种模型进行研究。虽然分析了微生物来源代谢物的功能，但未进行深入确定，未来需要开展功能实验。实验仅在雄性小鼠上进行，限制了对性别维度的了解。未来的研究应包括雌性小鼠，并扩展到人类研究，以探索针对不同性别的最佳治疗方案。 结论 本研究证实，EEAP对MPTP诱导的帕金森病轻度认知障碍（PD-MCI）小鼠具有神经保护作用。这种作用是通过调节蛋白表达和氧化应激、改善脑组织完整性以及减少神经元凋亡来实现的。此外，EEAP还增强了小鼠的学习和记忆能力。本研究结果为未来关于EEAP在PD-MCI管理中应用的研究提供了实证和理论基础。未来的研究应优先探讨EEAP调节特定蛋白表达和减轻氧化应激的机制。这可能需要对与EEAP效应相关的信号通路、受体和分子靶点进行全面分析。 原文链接：  https://doi.org/10.1016/j.phymed.2025.156729 —END— 版权声明 本文转载“代谢组metabolome”，版权属于原作者所有，文章翻译和转载为学术传播。 团队水平有限，翻译和转载难免有不恰当之处，请批评指正，多多包涵！ 往期精彩回顾： #多组学研究 #感染与免疫 #生物医药与生态环境研究 #科技资讯与学术诚信 #衰老研究Aging #人工智能与大数据 点赞！分享！转发！

药物警戒快讯 近日，国家药品不良反应监测中心网站发布了2025年第10期药物警戒快讯，汇总了美国、英国、加拿大、澳大利亚、新西兰、巴西发布的8条药品安全性信息，分别是：美国黑框警告西达基奥仑赛的免疫效应细胞相关性小肠结肠炎风险，英国警示呋喃妥因的肺部和肝脏不良反应的风险，英国提示目前尚无证据表明孕期服用对乙酰氨基酚导致儿童患自闭症风险，加拿大评估阿片类处方药物与食管功能障碍之间的潜在风险，加拿大警示布罗索尤单抗在三发性甲状旁腺功能亢进症患者中严重高钙血症风险，澳大利亚警示使用丙胺卡因/利多卡因乳膏（EMLA及仿制药）时婴儿面临的过量风险，新西兰警示卡马西平对婴儿生长的风险，巴西警示司库奇尤单抗乙型肝炎病毒再激活风险。 加拿大评估阿片类处方药物与食管功能障碍之间的潜在风险 　　加拿大卫生部对长期使用阿片类处方药物引起食管功能障碍（食管功能受损）的潜在风险进行了审查。 阿片类药物在加拿大的使用情况 　　在加拿大，阿片类处方药物经批准可用于治疗多种疾病，包括特定类型的疼痛、阿片类药物使用障碍以及慢性干咳。其应用广泛，上市已超过50年。 　　本次安全性评估涵盖的阿片类处方药物包括：丁丙诺啡、布托啡诺、可待因、二乙酰吗啡、芬太尼、氢可酮、氢吗啡酮、哌替啶、美沙酮、吗啡、纳布啡、去甲美沙酮、羟考酮、他喷他多和曲马多，这些阿片类药物有多种剂型和复方制剂。 　　尽管2018年至2023年间，大多数阿片类药物的处方发放量有所下降，但处方总量仍处于较高水平。 安全性评估结果 　　加拿大卫生部已收到28例患者在使用阿片类处方药物后出现食管功能障碍的报告。然而，由于多种因素的影响，这些病例无法评估其与药物的关联性。 　　加拿大卫生部还评估了14例国际上报告的患者使用阿片类处方药物后出现食管功能障碍的病例。在这14例病例中，3例被认定为“很可能”与使用处方类阿片类药物相关，11例被认定为“可能”相关。在3例“很可能”相关的病例中，有1例出现死亡，但该死亡事件与阿片类药物使用的关联性较低。这14例病例中的患者，每日服用的阿片类药物剂量相当于30至300毫克吗啡的剂量，其日剂量的中位数为67.5毫克。阿片类药物日剂量越高，发生食管功能障碍的可能性越大。症状出现时间从用药后数周到数月不等，最常见的报告症状包括吞咽困难、胃食管反流和胸痛。 　　此外，加拿大卫生部还对已发表的科学文献进行了评估，这些文献可解释长期使用阿片类处方药物可能导致食管功能障碍的潜在生物学机制。 结论与措施 　　加拿大卫生部的评估发现，长期使用阿片类处方药物与食管功能障碍风险之间可能存在关联。 　　加拿大卫生部将与生产商合作，更新阿片类处方药物的专论（CPM），纳入长期使用可能引发食管功能障碍的风险。 　　加拿大卫生部将继续监测阿片类处方药物的安全信息，以识别和评估潜在危害。如果发现新的安全风险，加拿大卫生部将及时采取行动。 （加拿大卫生部） 原文链接： https://dhpp.hpfb-dgpsa.ca/review-documents/resource/SSR1750686507938 来源：国家药品不良反应监测中心网站