Rogaratinib

喜欢我们，设为星标，接收最新类器官进展与资讯！知识星球搜索“肠道类器官”获取更加专业的培养基配方、标准方案、AI类器官工具和技术手册。 传播科学知识 促进同行交流 推动产业发展 服务国家战略 本公众号由Organoid Agent智能体强力赋能，让您的类器官研究始终站在潮头浪尖！ 推荐语 该研究聚焦 HR+HER2 - 转移性乳腺癌（HR+MBC）在 CDK4/6 抑制剂联合内分泌治疗耐药后的临床困境 —— 当前疗法中位 PFS 仅 4-6 个月，且 FGFR 抑制剂单药或联合疗效有限。其创新性采用 “患者来源类器官（PDOs）预临床研究 + I 期临床试验” 的联合设计，探索 rogaratinib（泛 FGFR 抑制剂）、fulvestrant（ER 抑制剂）与 palbociclib（CDK4/6 抑制剂）三药联合的价值。研究在 66 例筛选患者中，43% 存在 FGFR1/2 扩增或过表达，9 例入组后发现：仅 PIK3CA 与 ESR1 双野生型患者从三药联合中显著获益，中位 PFS 达 9.1 个月（突变型仅 1.9 个月，P=0.005），且毒性可控（无 4 级不良反应）。该研究不仅明确双野生型为关键响应标志物，证实 FISH 与 RNAScope 互补筛选的必要性，更为耐药 HR+MBC 提供精准治疗方向，推动生物标志物驱动的乳腺癌个体化治疗发展。 技术路线图科学背景与研究现状该研究聚焦的激素受体阳性、人表皮生长因子受体 2 阴性乳腺癌（Hormone Receptor-Positive, Human Epidermal Growth Factor Receptor 2-Negative Breast Cancer, HR+HER2- BC），是临床最常见的乳腺癌亚型，约占所有病例的 60%-70%。其中，转移性 HR+HER2 - 乳腺癌（Metastatic HR+HER2- Breast Cancer, mHR+HER2- BC）患者的长期生存仍面临巨大挑战 —— 尽管内分泌治疗是核心方案，但肿瘤易出现耐药，导致治疗失败，因此探索耐药后的有效治疗策略一直是临床研究的核心方向。从治疗进展来看，CDK4/6 抑制剂（Cyclin-Dependent Kinase 4/6 Inhibitors, CDK4/6i）的出现曾为 mHR+HER2- BC 带来革命性突破。在一线治疗中，CDK4/6i（如 palbociclib、ribociclib）联合芳香化酶抑制剂（Aromatase Inhibitors, AIs）可将患者中位无进展生存期（Progression-Free Survival, PFS）从 AI 单药的 10 个月左右延长至 20 个月以上，显著改善患者生存（Finn et al., 2016; Hortobagyi et al., 2016）。这一方案也因此成为 mHR+HER2- BC 一线治疗的标准方案，改变了疾病的治疗格局。然而，临床实践中约 80% 的患者会在 1-2 年内对 CDK4/6i+AI 方案产生耐药，进入二线治疗阶段后，疾病呈现出显著的突变异质性（Mutational Heterogeneity）—— 肿瘤会出现多种驱动耐药的基因突变，如雌激素受体 1（Estrogen Receptor 1, ESR1）激活突变（导致 AI 耐药）、磷脂酰肌醇 3 - 激酶催化亚单位 α（Phosphatidylinositol-3-Kinase Catalytic Subunit Alpha, PIK3CA）突变（激活 PI3K 通路绕过 CDK4/6 抑制）等（Bertucci et al., 2019; Robinson et al., 2013）。这种异质性使得二线治疗效果大打折扣：当前常用的二线方案（如氟维司群单药、mTOR 抑制剂联合内分泌治疗）中位 PFS 仅为 4-6 个月，且缺乏明确的生物标志物指导患者选择，临床亟需更有效的治疗策略和精准筛选方法。在众多耐药机制中，成纤维细胞生长因子受体（Fibroblast Growth Factor Receptor, FGFR）信号通路的异常激活逐渐成为研究热点。已有研究证实，FGFR1 或 FGFR2 的扩增（Amplification）或过表达（Overexpression）在 HR+BC 中较为常见 —— 早期 HR+BC 中发生率约 10%-25%，而在 CDK4/6i 耐药的转移性患者中可升至 40% 左右（Turner et al., 2010; Mouron et al., 2021）。更关键的是，FGFR 异常与内分泌治疗、CDK4/6i 耐药直接相关：FGFR 信号可通过激活下游通路（如 RAS-MAPK）维持肿瘤细胞增殖，即使在 ER 或 CDK4/6 被抑制的情况下仍能驱动疾病进展（Formisano et al., 2019）。这一发现让 FGFR 成为耐药 HR+BC 的潜在治疗靶点，理论上 FGFR 抑制剂（FGFR Inhibitors, FGFRi）可逆转耐药。但遗憾的是，既往 FGFR 靶向治疗的临床探索并不顺利。第一代多激酶 FGFRi（如 dovitinib）因靶点选择性差，在联合内分泌治疗时虽显示出一定活性，但伴随严重的胃肠道毒性和疲劳，患者耐受性差（Andre et al., 2013; Musolino et al., 2017）；新一代选择性 FGFRi（如 AZD4547）虽毒性降低，但单药或联合内分泌治疗的客观缓解率仍不足 20%，且未明确获益人群（Chae et al., 2020; Coombes et al., 2022）。这些结果提示，单纯抑制 FGFR 可能不足以克服耐药，且缺乏精准的生物标志物来筛选最可能获益的患者，这成为 FGFR 靶向治疗发展的核心瓶颈。进一步的预临床研究提出了新的思路：FGFR 扩增的 HR+BC 细胞需要同时抑制 ER、CDK4/6 和 FGFR 三个靶点，才能完全阻断 RB 蛋白磷酸化（细胞周期进展的关键步骤），单一或双靶点抑制均无法实现持续的细胞周期停滞（Mouron et al., 2021）。这一理论为 “三药联合”（ER 抑制剂 + CDK4/6i+FGFRi）提供了生物学基础，但该方案的临床疗效、安全性以及获益人群特征均未得到验证 —— 比如，PIK3CA、ESR1 等常见突变是否会影响三药联合的响应？如何通过精准筛选确保患者能从治疗中获益？这些问题尚未有答案。此外，传统临床研究还面临 “转化效率低” 的挑战：临床前研究多依赖肿瘤细胞系或动物模型，这些模型难以完全复现人类肿瘤的基因突变特征和微环境，导致很多在模型中有效的方案在临床试验中失败；而直接开展临床试验则存在周期长、成本高、患者筛选盲目等问题。因此，如何建立更贴近临床的预临床模型，实现 “临床 - 实验室” 的快速转化，成为推动耐药乳腺癌治疗研究的重要需求。正是在这样的背景下，该研究的开展具有显著的必要性和创新性。它针对 mHR+HER2- BC 一线耐药后的治疗困境，聚焦 FGFR 异常这一关键耐药机制，采用 “患者来源类器官（Patient-Derived Organoids, PDOs）预临床研究 + 临床 I 期试验” 的联合临床试验设计（Co-clinical Trial Design）——PDOs 是由患者肿瘤组织直接培养的三维模型，能完整保留患者肿瘤的基因突变谱和病理特征，其药物响应与临床疗效的相关性远高于传统细胞系（Dekkers et al., 2021）。通过 PDOs 先验证三药联合（rogaratinib+fulvestrant+palbociclib）的有效性和生物标志物，再指导临床试验患者筛选，不仅能提高研究的转化效率，还能精准定位获益人群，解决既往 FGFR 靶向治疗 “疗效有限、人群不明” 的核心问题。从研究价值来看，该研究不仅探索了一种新的联合治疗方案，更关键的是试图明确 “哪些患者能从该方案中获益”—— 这对于耐药 HR+BC 的精准治疗至关重要。同时，它还验证了 FISH（检测 FGFR 扩增）与 RNAScope（检测 FGFR 过表达）的互补性，为临床筛选 FGFR 异常患者提供了更全面的方法。这些探索若能成功，将为 mHR+HER2- BC 耐药后的治疗提供新的标准，也为其他靶点的联合治疗研究提供 “生物标志物驱动 + 联合试验设计” 的参考范式，最终推动乳腺癌个体化治疗的发展。实验技术方法这项研究的关键实验技术围绕 “患者来源类器官（PDOs）研究” 和 “临床样本分子检测” 两大核心展开，其中 PDOs 相关技术是重点 —— 从组织分离到功能验证全程衔接临床需求，同时搭配 FGFR 状态检测、基因组测序等方法确保结果可靠，具体细节如下：一、患者来源类器官（PDOs）的分离、培养与检测PDOs 是研究的核心预临床模型，用于模拟耐药肿瘤的药物响应，从组织处理到活力检测的每一步都严格把控以保留肿瘤原特征，关键流程和试剂如下：1. PDOs 的分离与原代培养研究人员首先从 4 例 “CDK4/6 抑制剂 + 内分泌治疗耐药” 的 HR+MBC 患者体内获取新鲜肿瘤活检样本（3 例来自乳腺病灶，1 例来自肝转移灶，1 例来自胸膜转移灶），具体处理步骤：样本预处理：新鲜活检组织立即放入 10 mL 无菌冰冷基液中（基液配方：Advanced DMEM-F12 培养基（Gibco，货号 12634010）+5% 胎牛血清（FBS，Biowest，货号 S1810）+1× 青霉素 - 链霉素双抗（Pen-Strep，Gibco，货号 15140-122）+10 mM HEPES 缓冲液（Gibco，货号 15630056）），全程冰上保存以防组织变质，且要求样本从手术取出到处理不超过 2 小时，避免影响类器官生成效率。组织消化：将样本用 ADF+++ 培养基（Advanced DMEM-F12+1×Glutamax（Gibco，35050061）+10 mM HEPES+1×Pen-Strep）清洗后，手动切成 1-3 mm³ 的小块，再加入 1.5 mg/mL 的溶组织梭菌胶原酶（Sigma，货号 C9407），放入 37℃摇床消化 90 分钟，期间每 15 分钟涡旋一次，确保组织块充分解离成单细胞或小细胞团。细胞纯化：消化后的混悬液用 100 μm 细胞筛过滤，去除未消化的组织碎片，然后 350×g 室温离心 5 分钟；若离心后出现红色沉淀（红细胞），则加入 2 mL 红细胞裂解液（Invitrogen，货号 00-4333-57）室温孵育 5 分钟，再补加 10 mL ADF+++ 培养基终止裂解，再次 350×g 离心 5 分钟收集细胞 pellet。Matrigel 包埋与培养：将细胞 pellet 用 100% 冰冷 Matrigel（Cultrex，货号 RND3533-010-02）重悬，然后在预温的 24 孔板（Corning，货号 3524）中每孔滴加 45 μL Matrigel 细胞悬液，放入 37℃培养箱 30 分钟让 Matrigel 凝固；凝固后每孔加入 530 μL 预温的 “类器官完全培养基”，放入 37℃、5% CO₂的 humidified 孵箱培养，每 4 天更换一次培养基，15-30 天传代一次。这里要科普一下：患者来源类器官（PDOs）是从患者肿瘤组织直接分离培养的三维细胞团，能完整保留原肿瘤的基因突变谱、病理特征（如 Luminal-A/B 分型）和药物响应模式 —— 比如研究中 3 例 FGFR 扩增的 PDOs，分别携带 PIK3CA 突变、ESR1 突变和双野生型，这和临床患者的突变异质性一致。相比传统二维肿瘤细胞系（常丢失原肿瘤特征），PDOs 的药物响应结果对临床更有参考价值，是连接 “实验室” 和 “病床” 的关键模型。“类器官完全培养基” 的配方也很关键，包含多种维持肿瘤干细胞特性和生长的因子：10% R-Spondin 3（Peprotech，120-44）、5 nM Neuregulin 1（Peprotech，100-03）、5 ng/mL FGF7（Peprotech，100-19）、20 ng/mL FGF10（Peprotech，100-26）、5 ng/mL EGF（Stemcell，78006.1）、100 ng/mL Noggin（Stemcell，78060）、500 nM A83-01（Biogen，2939）、5 μM Y-27632（Biogen，TO1254）、1.2 μM SB202190（Sigma-Aldrich，S7067）、1×B27 补充剂（Gibco，17504-44）、1.25 mM N - 乙酰半胱氨酸（Merck，A9165）、5 mM 烟酰胺（Merck，N0636）、50 μg/mL Primocin（InvivoGen，ant-pm-1），均溶于 ADF+++ 培养基中。2. PDOs 的传代当类器官密度达到 80%-90%（约培养 15-30 天）时进行传代：用 1 mL TrypLe Express 酶（Gibco，12604-013）将 Matrigel 中的类器官解离，37℃孵育 5 分钟后，加入 10 mL 冷 ADF+++ 培养基终止反应，350×g、4℃离心 5 分钟；细胞 pellet 用新鲜冰冷 Matrigel 重悬，按 1:1 到 1:6 的比例（根据类器官生长速度调整）接种到新的 24 孔板，重复上述包埋和培养步骤。3. PDOs 的药物敏感性检测（活力 assay）研究用该实验筛选 PDOs 对 “单药 / 双药 / 三药联合” 的响应，核心是检测药物对类器官活细胞数量的影响，步骤如下：细胞制备：将培养 2-4 周的类器官用 1 mL 预温 TrypLe™酶解离，加入 10 mL 冷 ADF+++ 培养基，350×g、4℃离心 5 分钟；细胞 pellet 用完全培养基重悬，在 Neubauer 计数板上计数，确保每孔接种 7500-10000 个单细胞。药物处理：将单细胞与 50% Matrigel 混合后接种到透明底 96 孔板（Corning），37℃孵育 1 小时让 Matrigel 凝固，再加入含不同药物浓度的完全培养基；测试的药物及浓度范围包括：fulvestrant（0.25-10 μM，MedChemExpress，HY-13636）、palbociclib（0.25-10 μM，Selleckchem，S1116）、rogaratinib（0.75-50 μM，MedChemExpress，HY-100019）、alpelisib（0.25-10 μM，MedChemExpress，HY-15244）、camizestrant（0.25-10 μM，MedChemExpress，HY-136255）；三药联合实验中，固定 fulvestrant 和 palbociclib 浓度为 1 μM，仅调整 rogaratinib 浓度。活力检测：药物处理 6 天后，使用 CellTiter-Glo® 发光法试剂盒（Promega，货号 G9683）检测活细胞数量 —— 按试剂盒说明（针对肿瘤球调整体积）加入试剂，室温孵育 30 分钟后，用酶标仪检测发光值（发光强度与活细胞数量正相关）。数据分析：用 GraphPad Prism 5.04 软件拟合 “剂量 - 响应曲线”（sigmoidal 可变斜率模型），计算半数抑制浓度（IC50）——IC50 越低，说明类器官对该药物越敏感；所有实验至少重复 3 次，确保结果可靠。二、FGFR1/2 状态检测（FISH 与 RNAScope）研究需先确认 “患者样本 / PDOs 是否存在 FGFR1/2 扩增或过表达”，才能纳入实验，核心用两种互补技术：1. 荧光原位杂交（FISH）检测 FGFR1/2 扩增FISH 通过荧光探针结合目标基因，判断基因拷贝数是否增加（即扩增），步骤和标准如下：样本准备：取患者 FFPET 组织（或 PDOs）制作 5 μm 厚切片，贴在带正电荷的载玻片（SuperFrost，Thermo Scientific）上，60℃烘烤 2 小时固定。预处理：切片用二甲苯脱蜡（每次 10 分钟，共 3 次），再用梯度乙醇（100%、95%、80%、70%）复水（每次 2 分钟）；然后用 DAKO Histology FISH 辅助试剂盒处理 ——FFPET 组织用 2-[N - 吗啉代] 乙磺酸（MES）缓冲液预处理，PDOs 样本无需预处理；最后用胃蛋白酶溶液（试剂盒自带）37℃消化 20 分钟，去除组织蛋白，便于探针结合。探针杂交：使用 ZytoVision 公司的特异性探针：ZytoLight SPEC FGFR1/CEN8（检测 FGFR1 基因与 8 号染色体着丝粒）、ZytoLight SPEC FGFR2/CEN10（检测 FGFR2 基因与 10 号染色体着丝粒）；将探针与样本在 85℃变性 5 分钟，37℃过夜杂交（16-18 小时）。信号检测：杂交后用试剂盒清洗液去除未结合探针，滴加含 DAPI 的荧光封片剂（染细胞核），在荧光显微镜（配 Photometrics SenSys CCD 相机和 Zytovision 图像分析系统）下观察；至少计数 200 个细胞核的 “目标基因信号数 / 着丝粒信号数”，计算比值：比值 < 1.8：无扩增（阴性）；比值 > 2.2：扩增（阳性）；1.8-2.2：不确定（equivocal）。科普一下：FISH 是检测基因扩增的 “金标准” 之一，优势是能在细胞原位观察基因拷贝数，避免了 DNA 提取过程中可能的污染或误差；比如研究中 12/29 例 FGFR 阳性患者是 “FGFR1 扩增 + FGFR1 过表达”，就是通过 FISH 确认的扩增状态。2. RNAScope 检测 FGFR1/2 mRNA 过表达RNAScope 是高灵敏的原位杂交技术，用于检测目标 mRNA 的表达水平（过表达与否），步骤如下：样本准备：患者 FFPET 组织切片（4 μm 厚）贴在 SuperFrost®Plus 载玻片上，60℃烘烤过夜，二甲苯脱蜡、梯度乙醇复水。抗原修复与阻断：在 Ventana Discovery ULTRA 自动化免疫染色平台（Roche）上进行：先用 RNAScope VS 通用样本处理试剂 V2（ACD，货号 323740）做抗原修复，再用 3% 过氧化氢阻断内源性过氧化物酶，避免干扰后续显色。探针杂交与信号放大：加入特异性 RNA 探针 ——FGFR1 用 Hs-FGFR1 探针（ACD，货号 310079）、FGFR2 用 Hs-FGFR2 探针（ACD，货号 311179），37℃杂交 2 小时；然后用 RNAScope VS 通用 HRP 检测试剂（ACD，货号 323210）进行信号放大（通过辣根过氧化物酶（HRP）级联反应增强信号）。显色与评分：用 DAB 检测试剂盒（Ventana，Roche，货号 760-224）显色（阳性信号为棕褐色斑点），苏木素 II 复染细胞核；用 Zeiss AxioScan.Z1 系统扫描切片，ZEN 2.3 lite 软件分析，按 “斑点数量 / 细胞” 评分：0 分：无染色或 < 1 个斑点 / 10 个细胞；1 分：1-3 个斑点 / 细胞；2 分：4-9 个斑点 / 细胞（无或极少簇状）；3 分：10-15 个斑点 / 细胞（<10% 为簇状）；4 分：>15 个斑点 / 细胞（>10% 为簇状）；3-4 分判定为 “FGFR mRNA 过表达（阳性）”。科普一下：RNAScope 比传统原位杂交（ISH）更灵敏，因为它用 “双探针设计”—— 只有当两个探针同时结合到 mRNA 上，才能启动信号放大，避免了单探针的非特异性结合；研究中发现 FISH（扩增）和 RNAScope（过表达）的一致性并非 100%（部分患者仅一项阳性），因此两者结合能更全面地筛选 FGFR 异常患者。三、基因组 DNA 提取与测序（WES 与 cfDNA 分析）研究通过测序明确 “PDOs / 患者样本的基因突变谱”（如 PIK3CA、ESR1 突变），为药物响应差异找原因，关键技术如下：1. 基因组 DNA（gDNA）提取FFPET 组织 DNA：取 8-10 张 FFPET 切片（5 μm 厚），用 High Pure FFPET DNA 分离试剂盒（Roche，货号 06650767001）提取：二甲苯脱蜡后，用乙醇清洗；加入裂解缓冲液和蛋白酶 K，56℃孵育 60 分钟裂解组织，90℃灭活蛋白酶 K；将裂解液加入带滤膜的离心管，加 DNA 结合缓冲液和异丙醇，离心让 DNA 结合到滤膜上；用试剂盒清洗缓冲液 I、II 洗去杂质，最后用洗脱缓冲液收集 DNA。PDOs 细胞 DNA：用 DNeasy Blood & Tissue 试剂盒（Qiagen，货号 69504）提取：收集 PDOs 细胞，加入裂解缓冲液和蛋白酶 K，56℃孵育 30 分钟；加乙醇调整 DNA 结合条件，上柱离心；用试剂盒清洗液洗柱，洗脱缓冲液收集 DNA。2. 全外显子测序（WES）用于检测 PDOs 和患者肿瘤的全外显子突变（如 PIK3CA、ESR1、TP53 等），步骤如下：文库构建：用 Qubit 4 荧光计（ThermoFisher Scientific）和 LabChip GX Touch（Revvity）分别定量 DNA 浓度和评估完整性；使用 Illumina DNA Prep with Enrichment v.2.5 试剂盒构建文库，并用 Twist Bioscience for Illumina Exome 2.5 Panel 捕获全外显子区域；将文库按 12 重池（12-plex）混合，再次定量和验证文库大小。测序：在 Illumina NovaSeq6000 测序仪上进行双端 150 bp 测序，加载浓度 150 pM，使用 10B Flowcell；用 Illumina BCLConvert 软件将原始测序数据（BCL 文件）转换为 FASTQ 文件。数据分析：用 Varca pipeline（https://github.com/cnio-bu/varca）处理 FASTQ 文件：Trimmomatic 0.36 去除适配器和低质量碱基（参数：ILLUMINACLIP:TruSeq3-PE2.fa:2:30:10:2:True；LEADING:3；TRAILING:3；SLIDINGWINDOW:4:15；MINLEN:36），fastp 0.23.4 修剪多聚核苷酸末端；用 BWA-MEM2 2.2.1 将处理后的数据比对到人类参考基因组 GRCh38；用 GATK 4.4.0.0 的 HaplotypeCaller 和 MuTect2 进行变异检测；用 Ensembl VEP 109 注释变异，最终保留 “人群频率 < 1%、影响主要转录本、中高影响” 的体细胞变异。3. 循环游离 DNA（cfDNA）分析用于检测患者血浆中的循环肿瘤 DNA（ctDNA）突变，辅助确认肿瘤突变谱，步骤如下：cfDNA 提取：取 5 mL 患者血浆，用 QIAamp Circulating Nucleic Acid Kit（Qiagen）提取总循环游离核酸，再用 Agencourt® AMPure® XP 磁珠（Beckman Coulter）纯化小片段 DNA（cfDNA 多为 160-180 bp）。测序与分析：用 Agilent TapeStation 的 Cell-free DNA ScreenTape Assay 定量 cfDNA 并评估质量；使用 Oncomine Pan-Cancer Cell-Free Assay（ThermoFisher Scientific）进行靶向测序 —— 该试剂盒覆盖 52 个癌症相关基因的热点区域（如 PIK3CA、ESR1、FGFR1/2），可检测 SNV、Indel 和 CNV；手动构建文库，用 Ion Chef System 制备芯片模板，在 Ion S5™系统上测序；用 Torrent Suite 5.20 将数据比对到 hg19 基因组，Ion Reporter 5.20 进行变异检测和注释；测序深度要求≥20000×，检测限（LOD）≥0.1%（20-50 ng cfDNA 时），热点突变检测灵敏度 > 80%、特异性 > 98%。四、统计分析方法研究用统计方法验证 “药物响应差异” 和 “PFS 差异”，核心工具是 Python 3.8 及相关统计包：PDOs 药物响应：通过三次重复实验的 IC50 值计算均值和标准误，用 t 检验比较不同 PDOs 的 IC50 差异。临床 PFS 分析：用 Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，log-rank 检验比较 “PIK3CA/ESR1 双野生型” 和 “突变型” 患者的 PFS 差异，设定 P<0.005 为差异有统计学意义；中位 PFS 及 95% 置信区间（95% CI）通过生存分析软件计算。关键结果图表该研究围绕的核心研究问题是：激素受体阳性、人表皮生长因子受体 2 阴性（HR+HER2-）晚期乳腺癌患者在接受内分泌治疗联合 CDK4/6 抑制剂（CDK4/6i）一线治疗进展后，因肿瘤突变异质性导致后续治疗疗效有限（中位无进展生存期 PFS 仅 4-6 个月），且成纤维细胞生长因子受体（FGFR）抑制剂单药或联合内分泌治疗在未筛选人群中活性不足，如何通过精准靶向策略改善这一耐药人群的治疗效果并明确关键生物标志物。基于既往预临床研究发现 FGFR1/2 扩增与内分泌治疗、CDK4/6i 耐药相关，且完全阻断 RB 蛋白磷酸化需同时抑制 ER、CDK4/6 和 FGFR 通路，研究提出核心假说：采用 ER 抑制剂（fulvestrant）、CDK4/6i（palbociclib）与泛 FGFR 抑制剂（rogaratinib）的三药联合方案，可能对 FGFR1/2 扩增或过表达的耐药 HR+HER2 - 乳腺癌患者有效，且患者肿瘤中 PIK3CA 和 ESR1 的突变状态可能影响治疗响应。为验证这一假说，研究采用 “患者来源类器官（PDOs）预临床研究 + 临床 I 期剂量递增试验” 的联合设计思路，先通过 PDOs 模型筛选有效药物组合及潜在生物标志物，再在临床患者中验证方案的疗效与安全性，同时采用荧光原位杂交（FISH）检测 FGFR1/2 扩增、RNAScope 检测 FGFR1/2 mRNA 过表达以筛选入组患者，结合全外显子测序（WES）和循环游离 DNA（cfDNA）分析明确肿瘤突变谱。一、PDOs 预临床研究结果：明确三药联合的响应条件与药物替换策略研究首先建立了 4 例来自 CDK4/6i + 内分泌治疗耐药 HR+HER2 - 乳腺癌患者的 PDOs 模型，其中 3 例存在 FGFR1 扩增（H12_5、H12_31、H12_7），1 例为 FGFR 非扩增（H12_28），且这 4 例 PDOs 携带不同的 PIK3CA 和 ESR1 突变组合（图 1B、C）：H12_5 为 PIK3CA 突变、ESR1 野生型，H12_31 为 PIK3CA 野生型、ESR1 突变型，H12_7 为 PIK3CA 和 ESR1 双野生型，H12_28 为 PIK3CA 和 ESR1 双野生型但 FGFR 非扩增。通过对这些 PDOs 进行单药、双药及三药联合的药物敏感性检测（图 2），结果显示，fulvestrant（ER 抑制剂）、palbociclib（CDK4/6i）或 rogaratinib（FGFR 抑制剂）单药处理时，所有 FGFR 扩增 PDOs 均未达到半数抑制浓度（IC50），即单药无显著活性（图 2A、B、C）；而在固定 fulvestrant 和 palbociclib 浓度为 1μM、梯度增加 rogaratinib 浓度的三药联合方案中，仅PIK3CA 和 ESR1 双野生型的 FGFR 扩增 PDO（H12_7）对该组合敏感，其 rogaratinib 的 IC50 显著低于其他 FGFR 扩增 PDOs，而 FGFR 非扩增的 H12_28 对该三药组合无特异性敏感（图 2D），这一结果初步验证了研究假说中 “PIK3CA 和 ESR1 突变状态影响治疗响应” 的推测。进一步针对突变型 PDOs 的药物替换实验显示，若将 fulvestrant 替换为针对 ESR1 Y573S 激活突变的 camizestrant，ESR1 突变的 H12_31 PDO 对 “camizestrant+palbociclib+rogaratinib” 组合的敏感性显著提升（图 2E）；若将 palbociclib 替换为针对 PIK3CA H1047R 突变的 alpelisib，PIK3CA 突变的 H12_5 PDO 对 “fulvestrant+alpelisib+rogaratinib” 组合的响应也得到改善（图 2F），这为携带 PIK3CA 或 ESR1 突变的 FGFR 异常患者提供了潜在的药物调整方向。二、临床试验结果：三药联合对双野生型患者疗效显著，毒性可控基于 PDOs 预临床结果，研究开展了临床 I 期剂量递增试验，共筛选 66 例 HR+HER2-、CDK4/6i + 芳香化酶抑制剂（AI）一线治疗进展的患者，其中 29 例（43%）通过 FISH 检测到 FGFR1/2 扩增或 RNAScope 检测到 FGFR1/2 mRNA 过表达（图 3A），最终 9 例患者符合入组标准并接受三药联合治疗（患者基线特征见表 1，包括中位年龄 56.9 岁、88.9% 为 ECOG PS 0/1、所有患者均接受过 CDK4/6i 和 AI 治疗）。临床试验的疗效结果显示，9 例患者的中位 PFS 为 3.5 个月（95% CI：0.11-6.8 个月），6 例（66.7%）患者达到疾病稳定，2 例（22.2%）为疾病进展，1 例因剂量限制性毒性（DLT）提前退出未评估（图 4A）。但根据患者肿瘤组织或血浆样本的 WES 及 cfDNA 测序结果（图 4B），将患者分为 “PIK3CA 和 ESR1 双野生型” 与 “PIK3CA 和 / 或 ESR1 突变型” 两组后，亚组分析显示出显著的疗效差异：双野生型患者的中位 PFS 达到 9.1 个月（95% CI：183.8-364.2 天），而突变型患者仅为 1.9 个月（95% CI：51.6-64.4 天），两组差异具有统计学意义（P=0.005）（图 4C、D），这一结果与 PDOs 预临床研究结论高度一致，进一步证实了 PIK3CA 和 ESR1 双野生型是三药联合方案响应的关键生物标志物。安全性方面，49 个治疗周期内未观察到 4 级不良反应，常见毒性反应与各药物已知的类效应一致（表 2），其中与 palbociclib 相关的最常见毒性为中性粒细胞减少（6 例患者出现 3 级中性粒细胞减少，占 66.7%），与 rogaratinib 相关的最常见毒性为高磷血症（7 例患者出现 1-2 级高磷血症，1 例出现 3 级高磷血症，总发生率 77.7%），且所有毒性均可通过支持治疗、剂量中断或减量控制，表明三药联合方案的耐受性良好。此外，研究还发现 FISH 与 RNAScope 检测结果的一致性并非 1:1（图 3B），29 例 FGFR 异常患者中，12 例（41.4%）为 FGFR1 扩增且 FGFR1 过表达，8 例（27.6%）仅 FGFR1 过表达，3 例（10.3%）仅 FGFR1 扩增，提示两种检测方法互补可最大化识别潜在获益患者。该研究通过 PDOs 预临床研究与临床试验的双向验证，明确了针对 FGFR1/2 扩增或过表达的 CDK4/6i 耐药 HR+HER2 - 乳腺癌患者，采用 fulvestrant+palbociclib+rogaratinib 三药联合方案的有效性和安全性，核心结论包括：第一，PIK3CA 和 ESR1 双野生型是该三药联合方案治疗响应的关键预测生物标志物，仅这一亚组患者能获得显著的 PFS 延长（9.1 个月 vs 1.9 个月，P=0.005）；第二，FISH 检测 FGFR 扩增与 RNAScope 检测 FGFR mRNA 过表达的互补应用，可提高 FGFR 异常患者的筛选效率，避免遗漏潜在获益人群；第三，三药联合方案的毒性谱与各单药已知毒性一致，无新的安全性信号，整体可控。这些结论为 CDK4/6i 耐药 HR+HER2 - 乳腺癌的精准治疗提供了重要依据，解决了既往 FGFR 靶向治疗 “疗效有限、获益人群不明” 的核心问题，同时验证了 “PDOs 预临床模型指导临床用药” 这一联合研究设计的可行性，为后续耐药肿瘤的靶向治疗研究提供了可参考的范式。当然，该研究也存在一定局限性，这些局限性同时引出了后续需要探索的新问题：首先，临床试验入组患者仅 9 例，样本量较小可能限制结论的普适性，下一步需在更大规模的多中心临床试验中验证 PIK3CA 和 ESR1 双野生型这一生物标志物的预测价值；其次，由于 rogaratinib 的研发被药企提前终止，研究未能进一步探索更高剂量或更长疗程的疗效，未来需评估其他新一代 FGFR 抑制剂（如 futibatinib）与 ER 抑制剂、CDK4/6i 联合的疗效；此外，PDOs 模型虽能保留肿瘤的基因突变谱，但未能完全复刻体内肿瘤微环境（如免疫细胞、基质细胞的相互作用），后续研究可构建含肿瘤微环境的类器官模型，更精准地模拟体内治疗响应；最后，研究发现部分患者存在 AKT、NF1 等其他基因突变，这些突变是否影响三药联合方案的疗效尚未明确，需进一步通过扩大样本量和功能实验验证这些潜在的耐药机制。特色与创新之处该研究的特色与创新之处紧密围绕 “解决 FGFR 异常耐药 HR+HER2 - 乳腺癌治疗困境” 展开，从研究设计、生物标志物挖掘、治疗策略优化到预临床模型应用，均体现出针对性与突破性，且每一项创新均有明确的实验数据支撑，并非理论层面的空想，具体可从以下几方面阐述：首先，采用 “患者来源类器官（PDOs）预临床研究与临床 I 期试验同步推进的联合临床试验设计”，打破了传统 “先基础研究、后临床转化” 的单向流程局限。传统研究中，预临床模型（如细胞系、动物模型）常因无法完全复现人类肿瘤的突变异质性和药物响应特征，导致大量在模型中有效的方案在临床中失败；而直接开展临床试验又面临患者筛选盲目、资源浪费的问题。该研究则直接从 4 例 CDK4/6i + 内分泌治疗耐药的患者体内获取肿瘤组织，构建保留原肿瘤基因突变谱（如 PIK3CA、ESR1 不同突变组合）和 FGFR 状态（3 例扩增、1 例非扩增）的 PDOs 模型（图 1B、C），先通过 PDOs 筛选出 “仅 PIK3CA+ESR1 双野生型 FGFR 扩增模型对三药联合敏感” 的关键线索（图 2D），再以此为依据指导临床患者入组和疗效分析 —— 最终 9 例入组患者的亚组结果（双野生型 PFS 9.1 个月 vs 突变型 1.9 个月，P=0.005）与 PDOs 结论高度一致（图 4C、D）。这种设计不仅大幅提升了基础研究到临床应用的转化效率，还能通过 PDOs 提前排除无效方案，避免患者暴露于无获益的治疗中，同时减少了临床研究的盲目性，这在 FGFR 靶向治疗领域此前尚未有类似报道。其次，首次明确 “PIK3CA 和 ESR1 双野生型” 是 FGFR 抑制剂联合 ER 抑制剂、CDK4/6i 治疗响应的关键预测生物标志物，解决了既往 FGFR 靶向治疗 “获益人群不明” 的核心瓶颈。此前针对 FGFR 异常乳腺癌的研究，无论是单药 FGFR 抑制剂还是 FGFR 抑制剂联合内分泌治疗，均未明确区分患者的 PIK3CA/ESR1 突变状态，导致临床结果显示 “整体疗效有限”（客观缓解率不足 20%），无法判断是方案本身无效还是未筛选到合适人群。该研究通过 PDOs 预实验发现，仅双野生型的 FGFR 扩增 PDO（H12_7）对 fulvestrant+palbociclib+rogaratinib 三药联合敏感，而携带 PIK3CA 或 ESR1 突变的 FGFR 扩增 PDO（H12_5、H12_31）均无响应（图 2D）；后续临床研究进一步验证，这一亚组患者的中位 PFS 显著优于突变型患者（9.1 个月 vs 1.9 个月，P=0.005）（图 4D）。这一发现并非简单的 “找到标志物”，而是直接将生物标志物与治疗方案绑定，明确了 “哪些患者真正适合该三药联合方案”，为后续精准筛选患者提供了可落地的标准，避免了 “一刀切” 式的治疗尝试，这对提高 FGFR 靶向治疗的临床获益率具有里程碑意义。第三，提出 “FISH 检测 FGFR 扩增与 RNAScope 检测 FGFR mRNA 过表达互补应用” 的筛选策略，最大化覆盖潜在获益患者，弥补了单一检测方法的局限性。此前研究多单独使用 FISH 或免疫组化检测 FGFR 状态，但该研究发现，在 29 例 FGFR 异常患者中，检测结果存在明显差异：12 例（41.4%）为 FGFR1 扩增且 FGFR1 过表达，8 例（27.6%）仅 FGFR1 过表达，3 例（10.3%）仅 FGFR1 扩增，还有 6 例（20.7%）为其他组合阳性（图 3B）。若仅用 FISH 检测，会遗漏 8 例仅 RNAScope 阳性的患者；若仅用 RNAScope 检测，则会遗漏 3 例仅 FISH 阳性的患者。研究团队基于这一发现提出 “两种方法联合使用”，既考虑了基因组层面的 FGFR 扩增，也兼顾了转录组层面的 FGFR 过表达 —— 这两种状态均与患者耐药和预后不良相关（图 1C、图 3B），因此互补筛选能更全面地识别出可能从 FGFR 靶向治疗中获益的患者，避免因检测方法单一导致的潜在获益人群漏诊，这一策略在 FGFR 异常乳腺癌的临床筛选中具有重要的实践价值。第四，针对不同突变亚型提出 “药物替换优化策略”，为 PIK3CA 或 ESR1 突变的 FGFR 异常患者提供了个体化治疗方向，而非局限于单一固定方案。该研究并非仅验证 “fulvestrant+palbociclib+rogaratinib” 这一种组合，还通过 PDOs 模型探索了 “针对突变患者的调整方案”：对于 ESR1 突变的 FGFR 扩增 PDO（H12_31），将 fulvestrant 替换为针对 ESR1 激活突变的 camizestrant 后，模型对 “camizestrant+palbociclib+rogaratinib” 组合的敏感性显著提升（图 2E）；对于 PIK3CA 突变的 FGFR 扩增 PDO（H12_5），将 palbociclib 替换为 PIK3CA 抑制剂 alpelisib 后，也观察到类似的响应改善（图 2F）。这一探索并非凭空设想，而是基于 “突变基因会绕过原有靶点抑制通路” 的生物学机制 ——ESR1 突变会导致 ER 对 fulvestrant 不敏感，PIK3CA 突变会激活 PI3K 通路绕过 CDK4/6 抑制，因此针对性替换药物可阻断新的耐药通路。这种 “基于突变谱调整联合方案” 的思路，为无法从标准三药联合中获益的突变型患者提供了新的治疗可能，也为后续 “个体化联合靶向治疗” 的探索奠定了基础。最后，在 “三药联合治疗耐药乳腺癌” 的安全性验证上，首次证实 ER 抑制剂 + CDK4/6i+FGFR 抑制剂的组合无新的安全性信号，且毒性可控，为该类方案的后续临床应用提供了安全性依据。此前针对多靶点联合治疗的担忧主要集中在 “毒性叠加导致患者无法耐受”，但该研究在 49 个治疗周期的观察中发现，所有不良反应均为各单药已知的类效应：与 palbociclib 相关的 3 级中性粒细胞减少发生率 66.7%，与 rogaratinib 相关的高磷血症发生率 77.7%（表 2），且无 4 级毒性，所有不良反应均可通过支持治疗、剂量中断或减量控制，未出现因毒性导致的永久性停药或新的未知毒性。这一结果至关重要 —— 它证明了 “同时抑制 ER、CDK4/6、FGFR 三个靶点” 在临床实践中的可行性，打破了 “三药联合必然毒性过高” 的顾虑，为后续类似多靶点联合方案的设计提供了安全性参考，也让该研究提出的精准治疗策略具备了向临床推广的前提条件。可以改进的地方[AI基于大数据总结，仅供参考]该研究虽为 FGFR 异常耐药 HR+HER2 - 乳腺癌的精准治疗提供了重要依据，但结合研究设计、执行过程及结果局限性，仍存在几方面明确不足，且可针对性提出切实可行的改进建议，具体分析如下：首先，研究样本量偏小，尤其是临床试验入组患者及 PDOs 模型数量有限，可能限制结果的普适性与统计效力。从文档可知，临床仅纳入 9 例患者，其中 “PIK3CA 和 ESR1 双野生型” 与 “突变型” 亚组的样本量进一步拆分后更少（图 4C、D 中双野生型患者仅占部分比例），虽亚组分析显示 PFS 差异有统计学意义（P=0.005），但小样本下的统计结果易受个体差异影响，难以排除偶然因素，也无法进一步分析不同 FGFR 异常类型（如 FGFR1 扩增 vs FGFR2 扩增、单纯扩增 vs 单纯过表达）对疗效的影响；同时，PDOs 模型仅构建 4 例，且涵盖的突变组合有限（仅 1 例双野生型、1 例 PIK3CA 突变、1 例 ESR1 突变、1 例 FGFR 非扩增），无法全面模拟临床中多样的耐药突变谱（如合并 AKT、NF1 突变的情况），导致预临床结论的代表性不足。针对这一不足，建议后续开展多中心、开放标签的 II 期临床试验，扩大入组样本量至 50-100 例，且根据 FGFR 异常类型（FISH+/RNAScope+、FISH+/RNAScope-、FISH-/RNAScope+）及 PIK3CA/ESR1 突变状态进行分层，确保各亚组有足够样本量；同时，扩充 PDOs 模型库至 20 例以上，纳入携带不同共突变（如 AKT、NF1、TP53）的耐药样本，覆盖更广泛的临床突变场景，提升预临床结果的外推价值。其次，临床试验因 rogaratinib 研发终止而提前关闭，导致药物剂量探索不充分，且无法评估长期疗效与生存获益。文档显示，该试验原计划采用 “3+3” 剂量递增设计，rogaratinib 仅探索了 400mg bid（Level 1，6 例患者）和 600mg bid（Level 2，3 例患者）两个剂量，未观察到剂量限制性毒性（DLT）却因药企决策终止，既无法确定最佳推荐剂量（RP2D）的稳定性（仅 3 例患者暴露于 Level 2 剂量，数据支撑不足），也无法获取患者长期用药后的疗效持续性（如 6 个月、12 个月的疾病控制率）及总生存期（OS）数据 —— 而 OS 作为临床终点，比 PFS 更能反映治疗对患者生存的实际获益，当前仅依赖 PFS 难以全面评估方案的临床价值。对此，建议后续研究替换为其他已上市或处于晚期临床试验阶段的泛 FGFR 抑制剂（如文档中提及的 futibatinib，已在胆管癌中证实疗效，重新设计剂量递增试验，确保每个剂量组至少入组 6 例患者，充分探索 DLT 及最大耐受剂量（MTD），并延长随访时间，收集 OS、客观缓解率（ORR）及持续缓解时间（DOR）等关键终点数据，同时通过长期安全性监测，评估药物蓄积毒性（如长期高磷血症对肾功能的影响）。第三，PDOs 模型未完全复刻体内肿瘤微环境，可能导致预临床药物响应与临床实际存在偏差。文档明确指出，PDOs 模型 “未完全复现肿瘤微环境，而肿瘤微环境可能影响治疗响应”—— 临床中肿瘤并非孤立生长，而是与免疫细胞（如 T 细胞、巨噬细胞）、基质细胞（如成纤维细胞）及血管网络相互作用，这些成分可能通过分泌细胞因子、调节药物渗透等方式影响药物疗效（如免疫细胞可增强或削弱靶向药物的抗肿瘤效应），但当前 PDOs 仅为肿瘤细胞的三维培养体系，缺乏上述微环境成分，导致其对药物的响应可能无法完全模拟体内真实情况（如某药物在 PDOs 中敏感，但因体内免疫抑制微环境而失效）。改进方向可聚焦于构建 “含肿瘤微环境的类器官模型”：在现有 PDOs 培养体系中，加入从患者外周血分离的免疫细胞（如 CD8+T 细胞、NK 细胞）或肿瘤相关成纤维细胞（CAFs），或采用类器官芯片技术，模拟体内血管灌注、氧气梯度等微环境特征，使模型更贴近临床肿瘤的生长状态；同时，可通过对比 “单纯 PDOs” 与 “含微环境 PDOs” 的药物响应差异，明确微环境对三药联合方案的影响，为临床疗效预测提供更精准的预临床依据。第四，关键生物标志物（PIK3CA/ESR1 双野生型）缺乏独立队列验证，且未探索动态监测的临床价值。研究虽发现双野生型是三药联合响应的预测因子，但该结论仅基于入组 9 例患者的探索性分析，未在另一组独立的 “CDK4/6i 耐药 + FGFR 异常”HR+HER2 - 乳腺癌患者中验证，无法排除 “单队列样本偏倚”，也难以确定该标志物在不同临床中心、不同种族患者中的预测稳定性；此外，研究仅在基线时检测 PIK3CA/ESR1 突变状态，未通过液体活检（如 cfDNA）动态监测治疗过程中突变的演变（如是否出现新的 ESR1 突变导致耐药），而临床中肿瘤常出现获得性突变，动态变化可能影响治疗决策。对此，建议后续开展前瞻性验证研究，在至少 2 个独立医疗中心纳入 100 例以上符合条件的患者，将 PIK3CA/ESR1 双野生型作为入组分层因素，验证该标志物对三药联合疗效的预测价值；同时，在治疗前、治疗中（每 8 周）及疾病进展时采集患者血浆，通过 cfDNA 测序（如文档中使用的 Oncomine Pan-Cancer Cell-Free Assay动态监测 PIK3CA/ESR1 突变状态及其他潜在耐药突变（如 AKT、NF1），分析突变动态变化与疗效的关联，为及时调整治疗方案（如出现 ESR1 突变时换用 camizestrant）提供依据。最后，对合并其他共突变（如 AKT、NF1）患者的耐药机制探索不足，未提供针对性治疗策略。文档提及部分患者存在 AKT（如 R121W、R406C）、NF1 等突变，但研究未深入分析这些突变是否导致三药联合耐药，也未探索对应的解决方案 —— 例如，AKT 突变可能激活 PI3K-AKT 通路，绕过 CDK4/6 或 FGFR 抑制，导致治疗失效，但当前仅针对 PIK3CA/ESR1 突变提出药物替换策略，对 AKT、NF1 突变患者缺乏关注，导致这部分患者仍无明确治疗方向。改进建议可从两方面入手：一是在 PDOs 模型中纳入携带 AKT、NF1 突变的样本，通过药物敏感性实验，测试在三药联合基础上加入 AKT 抑制剂（如 ipatasertib）或 MEK 抑制剂（针对 NF1 突变激活的 RAS-MAPK 通路）是否能逆转耐药；二是在临床试验中，对合并这些共突变的患者进行亚组分析，评估其对三药联合的响应率，若疗效不佳，可设计 “三药联合 + 针对性抑制剂” 的四药方案，开展小规模探索性试验，为这类小众突变患者提供个体化治疗选项。求点赞求分享求推荐如果你想在此显示您的广告信息，请联系我们。 与万千同行共同关注类器官！ 关注我们 肠道类器官（Organoid Bulletin）本公众号由AI智能体ORGANOID AGENT驱动赋能，您可以直接与公众号对话，获得最专业的类器官知识指导与信息。 我们致力于发布本领域优质资讯与评述，推送国内外类器官与干细胞相关领域最新研究论文、综述与技术进展。发布科普文章、专家观点评论、行业分析、招聘信息和会议通知。您可以在微信、小红书、百家号、企鹅号、今日头条、知乎和Bilibili关注我们。秉承干细胞与类器官创新计划组织(ISCO)愿景，我们积极传播科学知识，促进同行交流，推动产业发展，服务国家战略，积极为类器官与干细胞技术发展提供助力。欢迎各位关注、分享、转载、投稿！原创内容欢迎转载，直接私信即可，完全免费授权。内容多来自学术论文或网络公开资源，如有侵权还请联系删除。编辑部联系邮箱：zj@organoid.ac.cn广告赞助 欢迎找到组织类器官创新计划组织 类器官创新计划组织（Innovations in organoids organization）是由来自中国科学院、北京大学、清华大学和复旦大学等多个顶级研究机构的头部研究团队组织发起的，完全公益的学术与研究技术交流合作组织，成员主要由来自类器官行业内的企业高管、技术经理、高级PI等构成。加入“类器官创新计划”后，您将以极低的成本实现类器官资源的互换与共享，基于肠道类器官和类器官创新计划组织微信公众号平台，您将获得来自全行业的赋能与指导，进行标准化的类器官制备与检测，保证您的研究顺利且高质量开展。我们会将你纳入本组织“技术研发”、“开源公益”和“产品服务”等多个微信群，这样您能够与所有参与计划的成员及时沟通，您所有的类器官问题都能最及时的得到解答和帮助，互换类器官品系和干细胞研究工具资源，解决技术难题，获得技术支持。我们已有上万个来自全国顶级类器官研究机构、大学和企业的注册认证会员，大家一起为类器官事业发展点燃星星之火，推动类器官产业发展壮大。我们还建立了AI知识问答和开源类器官分析工具等多个公益项目为类器官研究提供帮助，构建开放包容的领域生态。在这里,我们敢为人先，始终积极寻求更新类器官更优的解决方案，勇于突破经验与预想的界限，致力打造科学卓越的行业新标准。官方网站：www.organoid.ac.cn联系邮箱：info@isco.ac.cn 组织愿景1.共建开放协作生态：搭建行业资源共享平台，促进技术互通与经验共享，降低类器官研究门槛。2.引领标准与规范：推动制定行业与国家工程标准，实现类器官培养与应用的规范化、全流程标准化。3.打造国际级资源枢纽：推动建设全球认可的类器官库与智库平台，加速技术向精准医学与药物研发转化。4.驱动技术融合创新：推动整合生物材料、智能装备等工程技术创新，突破类器官规模化制备与功能重建瓶颈。5.强化技术自主可控：推进国产化试剂、仪器研发与技术体系替代，保障核心研发链安全与战略主动权。 加入交流 ISCO面向类器官全领域同行提供交流平台和会员身份认证服务，可以加入“技术研发”、“开源公益”、“产品服务”和“专属领域”等多个类型的交流群，涵盖科学研究技术、开源工具和公益、销售产品与服务、细分领域如类器官芯片、生物材料等专属群等平台，参与讨论。高级研究员或独立PI可以申请成为荣誉发起人，成为类器官创新计划贡献者与受益者。本公益组织目前已有8000+会员，期待您加入讨论分享，让我们共同促进类器官产业发展。 现在，您只需添加发起人微信，备注自己的真实姓名与单位例如“李四-中国科学院大学”，说明申请加入类器官创新计划，提供有效身份证件如学生证、身份证、工作证或其他任何可以证明身份的真实性的证件，即可加入对应社群。而这一切都是公益的，免费的，不收取任何费用。欢迎您找到组织！~扫描二维码添加发起人微信以进群交流专业收费资源面向专业科普需求和企业级资源共享，现在扫描二维码加入“肠道类器官”知识星球，就能获得来自顶级研究机构分享的类器官培养基配方和方案，类器官创新计划组织发布的官方标准指南、AI类器官分析工具等更加专业的资料。与1000+位行业精英共同交换类器官技术资料和资源，向行业专家提问，免费参与国内领先的类器官品牌产品内测试用，获得类器官工程师认证等。全行业最专业的类器官知识社区和公益平台，让您的类器官研究少走弯路！#为什么要加入知识星球？1.最新最专业的培养基配方和技术资料即时获取。2.标准类器官培养方案和技术标准材料发布唯一渠道。3.最强AI智能体和类器官分析软件和工具解析和下载。4.类器官领域TOP专家一对一沟通，权威资料触手可及。5.类器官企业新产品评测和免费试用特权通道。6.定期发放免费会议入场券和资料，提供演讲机会。 更多福利，请移步知识星球内部了解。开源公益 类器官能模拟人体器官功能与结构，为疾病研究、药物研发提供有力模型。但分析类器官数据困难复杂，开源算法项目汇聚前沿科学家智慧，让科研人员共享代码，优化数据处理与分析，加速成果转化，推动类器官研究迈向新高度。我们的管理团队和多个科研团队合作，依托类器官创新计划组织，率先开源基于大模型的类器官AI算法工具，未来类器官创新计划组织将不断提供开源免费的类器官分析与报告工具，助力行业快速发展。#公益知识问答项目Organoid Agent,采用最新的AI智能体技术，提供超越博士级类器官研究水平和教授级实验技术知识储备。https://www.coze.cn/store/agent/7376069505418280970?bot_id=true&bid=6fck970447g1k您还以直接在公众号对话框与它对话，获取帮助。#开源AI图形算法项目地址https://github.com/zjdevo/ISCOhttps://gitee.com/zjdevo/ISCO开源项目自发起以来，持续受到企业公益赞助,我们感谢以下企业的支持：上海捷方凯瑞生物科技有限公司 吉诺生命健康控股集团有限公司 如您有意通过赞助公益项目，实现品牌推广与发展，欢迎与我们联系。扫描二维码添加微信以咨询赞助政策注册会员 注册会员是面向所有人的公益身份识别项目。如需以组织会员身份获取各种资源与免费福利。您只需访问www.organoid.ac.cn注册会员，并补充个人真实有效身份信息，经人工审核后，即可获得注册会员认证。通过“类器官创新计划组织”和“肠道类器官公众号”的“身份认证”菜单就能找到查询入口。也可以下载专属的身份二维码用于各种需要出示本组织身份的场合如学术会议、合作商提供的免费产品申请。由PI或课题组长及以上级别提供实名信息可注册为“注册会员”，加入“注册认证会员群”优先享受本组织提供的学术界与产业界资源。特别的，您所有的信息仅用于身份识别，不会被进行任何形式的商业用途， 欢迎监督举报（邮箱：isco@organoid.ac.cn）。未进行注册的，不被认为是我组织正式会员，合作方有权拒绝提供任何服务和或产品。具体注册方式点击下列文章了解：如何注册成为注册会员？扫描二维码快速进入 身份认证系统

-01-引言成纤维细胞生长因子（FGF）通过FGF受体（FGFR1-4）发出信号，协调胎儿发育，有助于组织和全身稳态，但FGFR基因的融合、重排或突变也可能促进肿瘤发生。FGFR融合可分为I型（非受体型，由融合伴侣的N端置换引起，如BCR-FGFR1和ZYM2-FGFR1）、IIa型（受体型，也由融合伴侣N端置换产生；如FN1-FGFR1、KLK2-FGFR2）或IIb型（受体型，由融合伴侣C端置换产生；如FGFR2-BICC1、FGFR3-TACC3）。在实体瘤中检测到的FGFR变化包括非小细胞肺癌中的FGFR1扩增（20%）、乳腺癌中的FGFR 1/2扩增（7-23%）、尿路上皮癌中的FGFR3突变（10-60%）或FGFR3融合（6%）、肝内胆管癌中的FGFR2融合（10-20%）、子宫内膜癌中的FGFR2突变（12%）和胃癌中FGFR2的扩增（5-10%）。在约7.0%的未经选择的癌症患者中可以检测到FGFR基因的改变。目前，已经开发出了多种FGFR靶向药物，包括泛FGFR抑制剂（erdafitinib和futibatinib）、FGFR1/2/3抑制剂（infigratinib和pemigatinib），以及一系列更具特异性的药物，其中一些已进入临床使用。Erdafitinib已被批准用于携带FGFR2/3突变的尿路上皮癌患者，futibatinib和pemigatinib被批准治疗携带FGFR2融合或重排的胆管癌患者。这些药物的临床益处在一定程度上受到高磷血症的限制，这是由于FGFR1的脱靶抑制以及FGFR基因中耐药性突变的出现。下一代小分子抑制剂，如lirafugratinib和LOXO-435，以及FGFR2特异性抗体bemarituzumab，有望降低高磷血症的风险，并有能力克服某些耐药性突变。-02-一、FGFR的结构和信号通路FGFs由具有球状或非典型β三叶结构的保守核心结构域组成，可分为典型FGFs（FGF1-10、FGF16-18、FGF20和FGF22）、内分泌型FGF（FGF19/FGF15、FGF21和FGF23）以及FGF同源因子（FGF11-14）。全长FGF受体（FGFR1-4）是I型跨膜蛋白，具有三个细胞外免疫球蛋白样结构域和一个胞内酪氨酸激酶结构域。典型的FGF与硫酸乙酰肝素辅因子一起通过FGFR传递信号，而内分泌型FGF与klotho共受体（KLA和KLB）和硫酸乙酰肝素辅助因子一起通过FGFR传递信号。FGF–FGFR信号传导参与细胞存活、增殖、代谢、迁移和分化，包括生理作用，如协调胎儿发育和维持组织和/或全身稳态。这些受体也可以驱动肿瘤的发展。FGFR中配体依赖性二聚化或病理改变通过自身抑制机制释放而导致内源性激酶激活。FGFR激活导致FRS2依赖性激活PI3K–AKT、RAS–ERK和磷脂酶Cγ（PLCγ）依赖性二酰基甘油（DAG）–PKC和IP3–Ca2+信号。癌症患者的FGFR改变通过异常的FGFR信号传导促进肿瘤发生：FGFR扩增导致FGFR过度表达和下游信号通路过度激活；FGFR融合或重排导致融合伴侣介导的FGFR二聚化、磷酸化改变和异常的下游信号传导；细胞外区或跨膜结构域中的FGFR突变通过改变对FGF配体的特异性或亲和力，以及配体非依赖性二聚化来激活FGFR；酪氨酸激酶结构域中的FGFR突变由于自身抑制机制的破坏而结构性性地激活FGFR。-03- 二、小分子FGFR抑制剂几种小分子FGFR抑制剂已被开发用于治疗具有FGFR改变的癌症患者，如尿路上皮癌、乳腺癌、胃癌、肝癌、肺癌、卵巢癌和宫颈癌。能够与酪氨酸激酶结构域的ATP结合位点结合的FGFR抑制剂通常分为多激酶FGFR抑制剂或选择性FGFR抑制剂。Derazatinib、dovitinib、tasurgratinib、lenvatinib、lucitanib、nintedanib和ponatinib都是多激酶FGFR抑制剂，对FGFR以外的多种RTK具有活性。然而，由于其广泛的活性，与选择性FGFR抑制剂相比，多激酶FGFR抑制剂的作用机制和不良反应都很复杂。选择性FGFR抑制剂包括泛FGFR、FGFR1/2/3和FGFR2/3抑制剂以及选择性FGFR2、FGFR3或FGFR4抑制剂。泛FGFR抑制剂包括 erdafitinib, futibatinib, rogaratinib和resigratinib；FGFR1/2/3抑制剂包括pemigatinib, infigratinib, fexagratinib和zoligratinib；Lirafugratinib是一种选择性FGFR2抑制剂，LOXO-435是一种选择FGFR3抑制剂，roblitinib和fissotioninib是选择性FGFR4抑制剂。目前，根据在II期试验中观察到的疗效和耐受性，美国食品药品监督管理局（FDA）在这些适应症的二线或更后线的治疗中加速批准erdafitinib、futibatinib、infigratinib和pemiginib。在erdafitinib的临床研究（BLC2001）中，根据FGFR3或FGFR2/FGFR3融合物中至少一种突变的存在，选择局部晚期和/或不可切除的尿路上皮癌患者。整体队列的ORR为40%，中位无进展生存期（mPFS）和中位总生存期（mOS）分别为5.5个月和13.8个月。46%的患者出现≥3级不良事件，在初步分析中包括低钠血症（11%）、口腔炎（10%）和乏力（7%），以及长期随访的指甲（15%）、口炎（14%）和皮肤事件（8%）。在FIGHT-203的II期研究中，在携带I型FGFR1融合（如ZMYM2–FGFR1或BCR–FGFR2）的MLN患者中测试了pemiginib的药效和安全性。其中77%（24/31）的患者对pemiginib有完全响应。常见的≥3级不良事件包括贫血（18%）、口腔炎和四肢疼痛（均为12%）。2022年8月，FDA批准了pemiginib用于携带FGFR1融合的复发性和/或难治性MLN患者。任何级别的高磷血症都发生在大多数接受泛FGFR抑制剂或FGFR1/2/3抑制剂的患者中。这种不良反应很可能反映了泛FGFR或FGFR1/2/3抑制剂对FGF23信号传导的抑制，因为这种分泌蛋白依赖于与近端小管上皮细胞膜上的FGFR1和klotho的结合。该复合物通过抑制磷酸钠协同转运蛋白（NPT2a/c）调节肾脏中的磷酸盐吸收。FGFR1在这一过程中的作用得到证实，因此，开发FGFR2特异性和FGFR3特异性抑制剂有望避免或降低这种不良反应的发生率。-04-三、FGFR抑制性单克隆抗体在靶向FGF/FGFR信号的生物制剂中，bemarituzumab是目前正在III期试验中评估的唯一药物。bemarituzumab是一种人源化抗FGFR2b抗体，其抑制FGF7、FGF10和FGF22的结合，从而抑制癌细胞中配体诱导的FGFR2b信号传导，并且由于修饰的Fc结构域对自然杀伤细胞上的人FcγRIIIA受体的亲和力增加，因此具有诱导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性（ADCC）的能力。在一项涉及晚期FGFR2b过表达胃和胃食管交界腺癌（GEA）患者的I期试验中，bemarituzumab单药治疗显示出可接受的耐受性，ORR为18%（5/28）。随后，在携带FGFR2扩增或FGFR2过表达的GEA患者的II期FIGHT试验中，将bemarituzumab与mFOLFOX6（包括氟嘧啶、亚叶酸和奥沙利铂）联合测试。bemarituzumab联合化疗组和安慰剂联合化疗组患者的ORR分别为53%和40%，mPFS分别为9.5个月和7.4个月（P=0.073)。bemarituzumab的其他几项试验，包括评估bemarituzumab联合mFOLFOX6加(NCT0511626) 或不加(NCT050252801) nivolumab在先前未经治疗的晚期GEA患者中的研究正在进行中。-05-四、新型FGFR靶向疗法蛋白水解靶向嵌合体（PROTAC）、嵌合抗原受体（CAR）T细胞、抗体偶联药物（ADC）、放射免疫偶联物（RICs）和可溶性受体是能够靶向FGF–FGFR信号级联的潜在新治疗模式，其中一些已经或正在临床试验中进行测试。PROTACPROTAC具有双重部分，使其能够与靶蛋白和E3泛素连接酶相互作用，从而诱导靶蛋白的泛素化介导的蛋白酶体降解。LC-MB12是一种基于infigratinib的PROTAC，能够优先降解FGFR2，并抑制表达TEL–FGFR2融合的Ba/F3细胞和FGFR2扩增的SNU16癌细胞的增殖。相比之下，DGY-09-192是另一种基于 infigratinib的PROTAC，旨在募集von Hippel–Lindau蛋白（VHL），从而优先降解FGFR1和FGFR2。这些药物目前仍处于临床前开发阶段。CAR-T细胞由于PAX3–FOXO1的下游作用，FGFR4在儿科横纹肌肉瘤中普遍过表达。然而，N535K和V550L等耐药性突变通常在治疗前出现，这可能会限制小分子抑制剂的有效性。因此，研究人员开发了靶向FGFR4的CAR-T细胞，如RJ154-HL和3A11，具有不同的靶向FGFR4的scFv。目前，靶向FGFR的CAR-T细胞也仍处于临床前开发阶段。基于抗体的药物Aprutumab是一种全人源抗FGFR2抗体，它识别FGFR2b和FGFR2c亚型共同N末端区域P23、L27和E29周围的表位，并已被证明能诱导这些变体的内化和运输至溶酶体降解。Aprutumab和bemarituzumab在I期临床试验中均显示出良好的安全性和耐受性。目前，bemarituzumab已作为联合疗法进行II期和III期临床试验，而Aprutumab用于开发ADCs和RICs。Aprutumab ixadotin（前身为BAY-1187982）是具有不可裂解连接子的抗FGFR2 ADC，LY3076226是具有可裂解连接子的抗FGFR3 ADC。然而，测试这两种药物的第一阶段试验(nct22368951)由于耐受性差和活性有限而终止。此外，Aprutumab和抗FGFR3抗体vofatamab分别用于FGFR2靶向的RIC（227Th-Aprutumab，BAY 2304058）和FGFR3靶向的RIC，225Ac-vofatamab（FPI-1966）和111In vofatamab（FPI-1967）。BAY 2304058仍处于临床前开发阶段，而FPI-1966（用于放射免疫疗法）和FPI-1967（用于放射成像）目前正在I/II期试验(NCT05363605)中进行测试，用于表达FGFR3的晚期实体瘤患者。可溶性FGFR受体可溶性FGFR受体，如衍生自FGFR1c的细胞外结构域的FP-1039和衍生自FGFR 3c的细胞外区域的Recifecept，是另一类通过充当诱饵受体来捕获FGFR配体的重组蛋白药物。FP-1039已显示对促有丝分裂FGF配体具有高亲和力，并且在FGFR1扩增的肺癌和FGFR2突变的子宫内膜癌的小鼠异种移植模型中具有抗肿瘤作用。FP-1039在一期试验中具有可接受的耐受性。测试FP-1039与各种化疗联合用药的Ib期试验(NCT01868022) 显示同时接受紫杉醇和卡铂治疗的鳞状非小细胞肺癌患者的ORR为47%，同时接受培美曲塞和顺铂治疗的恶性胸膜间皮瘤患者的ORR为39%。-06-结语目前，小分子FGFR抑制剂和FGFR靶向抗体药物已在临床后期试验中进行开发和测试，其中几种小分子FGFR抑制剂已被批准用于FGFR改变的癌症患者。尽管如此，某些不良事件，如FGFR1脱靶抑制引起的高磷血症和获得性耐药性，仍然限制了这些药物的临床益处。选择性第三代抑制剂，如特异性靶向FGFR2或FGFR3的抑制剂，正在临床开发中，这些药物可能避免或显著降低高磷血症的风险，并可能克服突变介导的耐药性。参考资料：1.FGFR-targeted therapeutics: clinical activity, mechanisms of resistance and new directions. Nat Rev Clin Oncol.2024 Feb 29公众号内回复“ADC”或扫描下方图片中的二维码免费下载《抗体偶联药物：从基础到临床》的PDF格式电子书！公众号已建立“小药说药专业交流群”微信行业交流群以及读者交流群，扫描下方小编二维码加入，入行业群请主动告知姓名、工作单位和职务。