Milademetan

-01- 引言：从“不可成药”困境到临床突破 p53肿瘤抑制蛋白是阻止癌症发生和发展的主要屏障。p53主要作为一种序列特异性转录因子发挥作用，能够与基因组内特定的DNA序列（称为p53反应元件）结合，并激活相邻基因的转录，以及由具有p53结合位点的增强子调控的远端基因的转录。此外，p53还可以通过间接机制抑制很多基因的转录。 TP53基因的突变使其编码蛋白p53的肿瘤抑制活性消失，是人类癌症中最常见的单基因改变，被认为是多种肿瘤的驱动因素。因此，几十年来，人们一直尝试将p53在肿瘤中的功能恢复作为一种治疗策略。然而，这些努力未能取得成功，很少有p53药物开发进入到临床后期阶段，迄今为止还没有一项获得FDA或EMA批准。这可能是因为，作为一种核转录因子，p53不具有典型的药物靶点特征，因此长期以来被认为是不可成药的。 然而，近年来出现了几种基于p53的治疗新策略和新方法，针对特定类型p53突变的药物正在出现。与此同时，人们对基因治疗策略和基于p53的免疫治疗方法也产生了浓厚的兴趣。获得靶向p53的肿瘤治疗药物指日可待。 -02- p53的肿瘤生物学基础 自1979年首次发现p53以来，人们对p53蛋白的功能及其与癌症的关系有了广泛的了解。毫无疑问，p53是一种强大的肿瘤抑制因子，可以通过多种方式抑制肿瘤生长。作为一种转录因子，p53调控靶基因的表达，这些靶基因可以促进细胞周期阻滞、凋亡、DNA修复等。此外，p53还可以通过独立转录机制发挥抗增殖作用。事实上，据报道，p53几乎影响所有细胞室和细胞器，包括线粒体、溶酶体、，内质网等。 重要的是，当TP53突变时，p53的这些活性受到影响。与其他肿瘤抑制基因的观察结果不同，肿瘤相关的TP53突变主要是错义突变，导致单个氨基酸替换。大量研究的综合数据显示，在30%-50%的人类肿瘤中都存在p53基因的突变。 实际上，在迄今所以人类肿瘤细胞基因组中，p53是发生突变频率最高的基因，在几乎1/3的人类肿瘤中都以突变的形式存在。 此外，越来越多的证据表明，除了wtp53的抑癌活性丧失外，一些p53突变体还可以获得新的功能活性，从而进一步促进癌症。与wtp53类似，mutp53可以影响多种细胞进程。虽然失去了与DNA中p53结合位点直接相互作用的能力，但mutp53仍然可以依赖其他转录因子来驱动促肿瘤基因转录。除了自身的直接活性外，mutp53还可以调节肿瘤微环境（TME）。例如， mutp53可以通过调节外泌体含量来支持肿瘤的进展，从而导致巨噬细胞重新编程为M2型，产生更有利肿瘤进展的TME。 -03- 靶向p53的小分子药物：突破与挑战 不同TP53状态的肿瘤需要非常不同的小分子靶向策略。对于含有TP53错义突变的肿瘤，小分子药物开发主要侧重于恢复mutp53蛋白野生型构象和活性。相反，对于保持wtp53的癌症，主要的策略将p53从其负调控因子的抑制中释放出来，从而释放出p53的全部活性。 靶向TP53错义突变 TP53错义突变在人类癌症中异常常见，约占所有TP53突变的70%。由此产生的结构或构象突变体被视为小分子的潜在靶点，可以恢复mutp53的正确折叠和功能。1999年，辉瑞公司筛选出了第一个具有mutp53再激活能力的化合物CP31398。从机理上，CP31398稳定了p53的野生型构象，并通过抑制其泛素化防止其降解。然而，后来的研究揭示了更复杂的作用，包括药物嵌入DNA引起的非特异性毒性和p53非依赖性上调促凋亡蛋白BAX。因此，CP31398未被纳入临床研究。尽管如此，这个药物标志着靶向mutp53的小分子时代的开始。 多年来，人们发现了许多mutp53的激活药物。包括MIRA-1，其含有可参与亲核加成反应的马来酰亚胺基团，以及STIMA-1，一种2-苯乙烯基喹唑啉-4（3H）-酮相关衍生物。尽管这两种化合物在体外和体内均表现出p53依赖性效应，但由于溶解度问题和对正常细胞的毒性，这两种药物均未进入临床试验。 在报道的mutp53激活小分子中，只有少数被纳入临床试验。第一个进入临床试验的是PRIMA-1 MET，它是PRIMA-1的甲基化衍生物，也称为APR-246。在体外和临床前研究中，APR-244表现出比PRIMA-1更好的活性，在急性髓细胞白血病（AML）细胞系和患者的原代细胞中增强了凋亡作用。目前正在进行APR-246的两个I/II期临床试验，与阿扎胞苷联合治疗携带p53突变的MDS或AML患者，均显示出实质性疗效。2020年1月，FDA授予APR-246治疗MDS的突破性疗法。最近，一项评估APR-246联合阿扎胞苷的II期试验宣布了令人鼓舞的结果。APR-246和阿扎胞苷的联合治疗实现了58%的1年无复发生存率（RFS），中位OS为19.3个月。目前正在进行或计划进行更多以APR-246为单药或联合用药的临床试验。 靶向wtp53的肿瘤 在保持wtp53表达的肿瘤中，最广泛采用的p53靶向治疗方法是抑制p53的降解。p53降解的机制涉及E3泛素连接酶MDM2对p53的泛素化，导致p53的蛋白酶体降解。MDM2介导的泛素化依赖于其与p53的直接结合，促使人们寻找抑制MDM2–p53结合的小分子，作为稳定p53并使其恢复效力的手段。 第一类抑制剂是Nutlins，可诱导wtp53癌细胞中的p53激活，但对mutp53细胞无影响。Nutlins的衍生物RG7112是临床试验中测试的第一个MDM2抑制剂。在难治性复发性AML和CML患者中，RG7112可触发wtp53激活，并提高许多p53靶基因的表达，在许多患者中观察到RG7112的抗白血病活性。然而，需要大剂量的RG7112才能达到疗效，导致不良事件发生，如胃肠道不耐受和血小板生成抑制。随后，RG7112被第三代衍生产品idasanutlin（RG7388）取代。目前，有几项临床试验正在测试idasanutlin对各种癌症的安全性和疗效。 除了Nutlins衍生物，许多其他干扰MDM2–p53结合的分子也在开发和测试中。例如，APG-115是一种口服的MDM2抑制剂，在AML临床前模型和放射治疗致敏的胃癌异种移植物中显示出强大的抗肿瘤作用。APG-115目前正在几个临床试验中进行评估（如NCT02935907、NCT03611868、NCT04785196、NCT0037816），单药或联合化疗和免疫检查点抑制剂。 AMG-232是另一种口服的MDM2抑制剂，显示可促进骨肉瘤细胞的wtp53功能和肿瘤消退。目前，已经启动了十多项AMG-232（后更名为KRT-232）的临床试验，包括JNK抑制剂失效后骨髓纤维化的III期试验以及其他癌症的早期试验。其他MDM2抑制剂，包括siremadlin和milademetan，也在临床试验中（NCT03634228、NCT04116541）。 靶向截短的p53 大约10%的TP53变异肿瘤携带无义突变，产生截短蛋白，通常很快降解。由于这些蛋白质的寿命很短，并且通常缺乏大部分p53蛋白序列，因此通过上述方法重新激活可能毫无意义。 因此，人们提出了两种替代方法来激活含有p53截短突变癌细胞中的p53信号通路。第一种方法是基于促进翻译通读的分子，使翻译机制绕过RNA终止密码子，产生全长p53蛋白。这些化合物包括氨基糖苷类抗生素及其衍生物，如G418和新一代合成衍生物NB124。用这些氨基糖苷治疗可挽救完整p53的合成，促进癌细胞凋亡。另一种替代方法是抑制无义介导的mRNA降解（NMD）过程。例如，NMD14靶向SMG7的结构口袋，SMG7是NMD机制的一个关键组成部分。类似的药物，如ataluren，已经进入囊性纤维化的III期临床试验。 靶向mutp53 GOF 尽管大多数基于p53的药物开发都是为了恢复癌细胞中野生型p53的活性，但也有人试图通过靶向mutp53快速降解来消除mutp53-GOF（gain-of-function）活性。鉴于HSP90热休克蛋白可以减弱mutp53的降解，研究表明，长时间抑制HSP90可以提高携带mutp53表达肿瘤小鼠的存活率。 -04- 基于p53的肿瘤免疫治疗创新 近年来，癌症免疫治疗取得了前所未有的成功，这也重新激发了人们对基于p53免疫治疗策略的兴趣，主要是提高免疫系统识别和根除含有不受调控的p53癌细胞的策略。 基于p53的疫苗 20世纪90年代，人们开始尝试旨在提高对含有过量p53的癌细胞免疫力的疫苗。一种合成长肽（SLP）疫苗由来自wtp53序列的十个重叠肽组成，其在转移性结直肠癌中引发了以CD4+T细胞为主的T细胞反应，不良反应相对较轻。然而，临床试验未能显示SLP疫苗相对于历史对照的益处。 此外，编码wtp53的改良痘苗病毒ankara（MVA）疫苗也在难治性胃肠道癌和卵巢癌患者的早期临床试验中进行了测试，在总共11名患者中，分别有6名和5名患者能诱导CD8+和CD4+T细胞反应。目前正在进行MVAp53疫苗和抗PD1抗体pembrolizumab的进一步临床试验（NCT03113487，NCT02432963）。 mRNA疫苗的成功也为p53 mRNA疫苗带来了新的希望。将自体TP53 mRNA转染的DC导入乳腺癌患者体内后，在18例高表达p53的肿瘤患者中，有13例在体外表现出p53特异性T细胞反应，这健康志愿者（1/10）和p53低表达乳腺癌患者（2/18）形成鲜明对比。 p53特异性抗体 其他基于p53的免疫治疗方法也正在出现。T细胞受体模拟物（TCRm）抗体，也称为TCR样抗体，是一种潜在的靶向细胞内蛋白质的策略。这些抗体识别MHC在细胞表面显示的表位，类似于TCR识别，从而能够识别来自细胞内蛋白质的肽。 双特异性抗体是另一种非常有前途的癌症免疫治疗方法。最近开发了一种基于mutp53的双特异性抗体，可以识别来自p53（R175H）热点突变和TCR–CD3复合物的新抗原。通过与癌细胞上的p53（R175H）肽-HLA复合物以及T细胞上的TCR-CD3复合物高亲和力结合，这种双特异性抗体可以克服新抗原提呈的缺乏，并选择性地重定向T细胞以识别展示突变肽的癌细胞。 p53与肿瘤微环境 最近的研究显示p53与癌症免疫治疗之间存在更广泛的联系。癌细胞中的p53状态会影响TME的免疫状态。 癌细胞中的功能性wtp53倾向于支持癌症限制性TME，而wtp53的缺失则使平衡朝着支持癌症的TME倾斜。此外，作为GOF活性的一部分，一些错义mutp53蛋白可能会进一步限制免疫系统攻击癌细胞的能力。例如，wtp53可以通过上调miR-34a间接降低PD-L1的水平，并诱导自然杀伤（NK）细胞激活性配体UL16结合蛋白1（ULBP1）和ULBP2的表达，使癌细胞更容易受到细胞毒性T细胞和NK细胞的攻击。 此外，通过调节细胞因子表达，wtp53可以通过改变TIME的组成来发挥抗肿瘤作用。因此，肿瘤的TP53状态可能对与免疫治疗相关的患者用药非常重要。此外，恢复或增强癌细胞中p53功能的药物也可考虑与免疫治疗方案联合用药，以增加其成功的可能性。2022年7月，PMV制药公司宣布与默克公司合作进行PC14586与pembrolizumab的临床试验，以治疗携带p53（Y220C）突变的晚期实体瘤患者。 -05- 基于p53的基因治疗：改写p53基因缺陷 第一个被批准用于临床的基因治疗就是基于p53的。Gendicine是深圳赛百诺公司开发的一种重组人p53腺病毒，于2003年被中国食品药品监督管理局（CFDA）批准用于HNSCC。据报道，当与化疗或放疗结合时，Gendicine的响应率明显高于标准护理。其他基于腺病毒的p53基因治疗，包括advexin和SCH-58500，也在临床试验中显示出良好的结果。 纳米颗粒也被探索用于p53基因治疗载体。与病毒不同，纳米颗粒具有低免疫原性，因此对抑制性抗体不敏感，从而延长其循环时间，同时减少免疫相关的副作用。此外，通过静脉注射，纳米颗粒比肿瘤内注射更适合治疗远处转移。SGT-53是一种由SynerGene Therapeutics开发的阳离子脂质体，携带wtp53编码的DNA，通过抗转铁蛋白单链抗体片段选择性地归巢肿瘤细胞。在对11名患有不同类型晚期实体瘤的患者进行的一期临床试验中， 11名患者中有7名在6周评估时病情稳定。 p53 mRNA纳米颗粒也在开发中。在最近的一项研究中，在HCC和NSCLC小鼠模型中，通过纳米颗粒递送p53 mRNA使p53缺失的肺癌细胞存活率显著降低，肿瘤大小显著减小。此外，与单独的治疗相比，p53 mRNA纳米颗粒与免疫治疗相结合可提高抗癌效果。 -06- 结语：p53靶向治疗临床转化的新纪元 开发基于p53的治疗方法已经进行了近三十年，尽管目前还没有基于p53的癌症药物获批，但是基于p53基因在人类癌症中的中心地位，如果取得成功，则有可能彻底改变癌症治疗。近年来，一系列所取得的进展逐渐摒弃了p53不可成药的观点，最近KRAS抑制剂的成功也给我们带来了鼓舞。与p53一样，由于反复失败，KRAS也被许多人认为是不可成药的靶标。相信随着新技术的不断进步以及对p53更加深入的研究，靶向p53的癌症治疗药物将很快应用于临床，从而使更多的患者受益。 参考文献：1.Drugging p53 in cancer: one protein, many targets.Nat Rev Drug Discov. 2022 Oct 10 : 1–18. 公众号内回复“ADC”或扫描下方图片中的二维码免费下载《抗体偶联药物：从基础到临床》的PDF格式电子书！ 公众号已建立“小药说药专业交流群”微信行业交流群以及读者交流群，扫描下方小编二维码加入，入行业群请主动告知姓名、工作单位和职务。

p53 是最重要的肿瘤抑制因子。大多数肿瘤中通过肿瘤蛋白 p53 （TP53） 基因突变或关键负调节因子（MDM2）的拷贝数扩增而失活。破坏 MDM2与 p53 相互作用的化合物可恢复 p53 抑癌基因活性，从而促进细胞周期停滞和细胞凋亡。然而，MDM2-p53 蛋白相互作用拮抗剂临床经验表明，靶向药物存在血小板减少症和中性粒细胞减少的剂量限制性毒性，限制了治疗效用。在保持有效暴露的同时降低给药频率，是减轻毒性和改善 MDM2-p53 拮抗剂治疗窗口的方法。为了实现这一目标，需要具有优异效力和理想药代动力学特性的分子。 本文介绍了 brigimadlin （BI 907828） 的发现和表征，这是一种新型的临床在研的 MDM2-p53 拮抗剂。Brigimadlin 在临床前模型中表现出高生物利用度和暴露量，以及剂量线性药代动力学。Brigimadlin 治疗恢复了 p53 活性，并在 TP53 野生型、MDM2 扩增癌症的临床前模型中诱导细胞凋亡。临床1期药代动力学研究 （NCT03449381） 显示口服 brigimadlin 患者有高全身暴露和较长的血浆消除半衰期。这些发现支持 brigimadlin 在 MDM2 扩增癌症（如去分化脂肪肉瘤）患者中的临床评估。 1. 背景介绍 p53 是一种关键的抑癌基因蛋白，是人体细胞抗癌防御机制的支柱。p53 失活促进细胞周期停滞和凋亡的逃避，并且对肿瘤的启动和维持至关重要。在许多癌症中，p53 的功能会因 TP53 基因功能丧失突变或负调节因子水平升高而被破坏，包括原癌基因MDM2。MDM2 抑制 p53 转录活性，诱导 p53 从胞核输出，并作为 p53 泛素连接酶诱导蛋白酶体介导的 p53 降解。 MDM2 扩增发生在大约 3% 的癌症中，在某些肿瘤类型中发生率更高。数据分析显示，94% 的脂肪肉瘤 [LPS;包括去分化脂肪肉瘤 （DDLPS） 和高分化脂肪肉瘤 （WDLPS）]、8% 的膀胱尿路上皮癌和 5% 的胆道腺癌都是野生型肿瘤蛋白 p53 （TP53wt） 和 MDM2 扩增癌。 靶向 MDM2 以恢复 p53 抑癌基因活性是 TP53wt 肿瘤患者的一种有前途的治疗方法。初步临床研究表明，MDM2-p53 拮抗剂显示出抗肿瘤疗效的初步迹象;然而，治疗与血小板减少症和中性粒细胞减少症有关，这可能是由于 p53 激活后巨核细胞生成和巨核细胞分化受到抑制。间歇给药作为一种通过维持抗肿瘤活性同时减轻靶标相关副作用来增加 MDM2-p53 拮抗剂治疗窗的方法。这只能通过出色效力和药代动力学 （PK） 特性的抑制剂来实现。螺环吲哚类代表了一类很有前途的 MDM2-p53 拮抗剂，但一直受到稳定性差的限制，导致差向异构化。在这里，介绍了 brigimadlin （BI 907828） 的发现和特性，这是一种新型且高效的研究性螺氧吲哚 MDM2-p53 拮抗剂，可破坏 MDM2 和 p53 之间的蛋白质-蛋白质相互作用。 2. brigimadlin分子发现 MDM2 的 p53 结合口袋代表了抑制剂设计的挑战，因为三个子口袋的疏水三联体具有独特的方向，即以与其结合的 p53 氨基酸（Leu26、Trp23 和 Phe19 口袋）。化合物需要对整个疏水三元口袋进行最佳填充，才能显示出足够的效力。螺环吲哚类支架已成为 MDM2 结合口袋疏水三联体的理想模型。第一代螺环，spiro[3H-indole-3,3′-pyrrolidin]-2(1H)-one 的 MDM2-p53 拮抗剂容易在溶液中发生retro-Mannich反应在位 2' 和 3' 的碳上发生差向异构化 。 这里通过设计 spiro[3H-indole-3,2′-pyrrolidin]-2(1H)-one 支架解决了第一代螺环吲哚 MDM2-p53 拮抗剂的稳定性问题，其中吡咯烷环的氮移动了一个位置，避免差向异构化。有其他研究组通过将螺环连接到吡咯烷环来解决这个问题，如临床化合物milademetan 和 alrizomadlin 。 化合物 2（图 1A）仅占据 MDM2 的三个亲脂性子口袋（Leu26 和 Trp23 口袋）中的两个，显示出与类似的 spiro[3H-indole-3,3′-pyrrolidin]-2(1H)-one 抑制剂相当的体外效力。通过将环丙基甲基引入吡咯烷环来解决 Phe19 口袋，并通过刚性化进一步进行基于结构的优化，从而产生了 BI-0252（图 1A）。该分子的合成和表征之前已经描述过（PMID: 27775892）。为了进一步提高结合亲和力，作者设计了His96MDM2 的侧链具有 H 键受体而不是 H 键供体（BI-0252 中的 NH）的化合物。在第一批化合物中，用酰胺的羰基取代了 BI-0252 的仲胺。这在细胞测定中产生了更有效的化合物，这些化合物由于不利的 PK 特性而受到限制（PMID: 30458062）。 图 1. brigimadlin 的发现和结构。 第二系列化合物旨在解决　His96MDM2 与五元芳香族杂环的 H 键受体氮的相互作用。这导致了结构上更刚性的 2H-吲唑衍生物 BI-0282（图 1A），与 BI-0252 相比，它显示出更好的效力和 PK 特性 [体外 SJSA-1 （TP53wt） 细胞中的IC50：BI-0252=471 nmol/L;BI-0282=163 nmol/L]。BI-0282 的合成和表征之前已经描述过 （PMID: 36032359）。BI-0282 的 X 射线结构表明，与 His96MDM2 的相互作用可能仍然不是最佳的。进一步的优化形成了高度刚性四环状支架，它在模拟的胃肠道液中表现出低外排但高渗透性和溶解度。最后，将甲基置于羧酸的邻位进一步改善了 PK 性能，从而产生了 brigimadlin（图 1A 和 B）。 brigimadlin 的 X 射线共晶体结构，证实 brigimadlin 与 MDM2 的 p53 口袋结合。吲哚酮基团在 Trp 口袋中结合，吲哚酮-NH 质子与 Leu54 的主链羰基形成氢键。Leu 口袋充满卤代苯基，该苯基也被定位于与 His96 的 pi-pi 相互作用，而 Phe 口袋则由环丙基甲基定位。吲唑基团与 His96 的侧链形成氢键。 3. brigimadlin 的体外活性 Brigimadlin 在体外活力测定中表现出 MDM2 扩增的 SJSA-1 癌细胞系的 AlphaScreen 测定中表现出比 BI-0252 和 BI-0282 更高的效力。Brigimadlin 在具有 TP53wt 的细胞系中表现出比在 TP53突变细胞系中更低的 IC50 值（12 nmol/L vs. 50000 nmol/L）。进行了细胞面板活力筛选 （PRISM），以研究 brigimadlin 在多种肿瘤类型的治疗潜力，并探索其他反应生物标志物 。将全外显子组突变、体细胞拷贝数改变和基因表达谱与细胞系的反应谱相匹配，以探索对 brigimadlin 敏感的生物标志物，90% （198/221） 的brigimadlin敏感细胞系具有 TP53wt 状态，83% （469/563） 的耐药细胞系为 TP53突变状态（图 2A）。高度敏感的 TP53wt 细胞系亚群富集了脂肪肉瘤、肾细胞癌、横纹肌肉瘤和黑色素瘤等肿瘤类型（图 2B）。 图 2. 基于 PRISM 筛选 brigimadlin 的敏感性。 与未扩增的细胞系( U-2 OS 和 SW982 )相比，Brigimadlin 处理导致 MDM2 扩增细胞系( SJSA-1 和 94T778 )中 p53 靶基因的 mRNA 水平增加更大。在 MDM2 扩增和非扩增细胞系中观察到 PUMA （BBC3）、CDKN1A （P21）、MDM2、CD80、BAX 和 BIM mRNA 表达水平的剂量依赖性增加（图 3B）。未观察到 BCL-XL 表达 （抗凋亡标志物） 的一致变化。MDM2、p53 和裂解的 caspase-3/7 蛋白水平在 MDM2 扩增和非扩增细胞系中均显示剂量依赖性上调，在 MDM2 扩增细胞中观察到更大的上调（图 3C） 。在 MDM2 扩增的 SJSA-1 细胞系中，暴露于 brigimadlin 72 小时后，升高的 p53 蛋白水平再次降低。在两种 MDM2 扩增细胞系 SJSA-1 和 94T778 中观察到裂解的 caspase-3 和裂解的 PARP 水平的剂量依赖性增加 （Fig. 3D）。 使用体外人巨核细胞造血祖细胞集落形成试验 （3D CFU-MK） 检查 Brigimadlin 靶向毒性。Brigimadlin 抑制 CFU-MK 的集落形成，IC50 和 IC90 值分别为 25 和 119 nmol/L。Brigimadlin 不会诱导这些非恶性细胞凋亡，而 SJSA-1 肿瘤细胞在暴露于 brigimadlin 后 24 小时开始表现出强烈的 caspase-3/7 激活，并在 52 小时达到峰值。肿瘤细胞和正常细胞之间的明显敏感性差异表明，brigimadlin 可能存在治疗 MDM2 扩增的 TP53wt 肿瘤的治疗窗口。 图 3.MDM2 扩增和非扩增实体瘤细胞系中 p53 靶基因和细胞凋亡的 MDM2 表达和 brigimadlin 剂量依赖性调控。 4. brigimadlin 体内PK-PD、生物标志物分析 在 brigimadlin 的不同临床前物种中观察到高口服生物利用度和剂量线性度，AUC 和最大血浆浓度 （Cmax） 的可变性低（表 1）。在所有测试的物种中，brigimadlin 的血浆蛋白结合非常高 （>99%） ，并且没有表现出对浓度或性别的依赖性。发现人血清白蛋白是人血浆中 brigimadlin 的主要结合蛋白，而 hAGP 结合的重要性可以忽略不计。 表 1.brigimadlin 在不同物种中的血浆药代动力学和剂量线性药代动力学特征。 单次口服 brigimadlin 后 24 小时，可以在 SJSA-1 荷瘤 BALB/c 小鼠的血清样本中检测到 GDF15 蛋白水平的剂量依赖性增加，这是靶向 p53 的生物标志物 （0.25、 2 或 10 mg/kg;图 4A）。血清中 GDF15 的增加与肿瘤样本中观察到的 GDF15 mRNA 诱导程度呈正相关（图 4B 和 C）。支持使用血浆 GDF15 水平作为患者靶标参与的生物标志物。 图 4. brigimadlin 处理的 SJSA-1 荷瘤小鼠的标志物。 根据两种给药方案评估每周给药的 Brigimadlin 疗效 （图 5A）。在单剂量组中，小鼠在第 1 天和第 8 天接受一剂 brigimadlin （1、1.5 或 2 mg/kg）。在分次剂量组中，小鼠在第 1 天和第 8 天接受 brigimadlin 1 mg/kg BID （7 小时间隔）。单剂量方案显示出明显的剂量-反应关系。分次给药组 （1 + 1 mg/kg） 比 2 mg/kg 单剂量组效果不明显且时间短。这些实验表明，brigimadlin 治疗以 1 周的间隔单次给药可产生持久的抗肿瘤活性，支持在临床试验中使用高剂量间歇性方案。 图 5.Brigimadlin 在小鼠模型中的疗效。 brigimadlin 在几种 MDM2 扩增的 TP53wt 肿瘤类型的PDX 模型中证明了抗肿瘤活性。在两剂 brigimadlin （2 mg/kg，第 1 天和第 8 天; 图 5B-D），在 MDM2 扩增的未分化多形性肉瘤 （SA3283） ，鳞状细胞肺癌 （LU0861），鳞状细胞肺癌 （LU6903）。在体内研究中，任何一种给药方案的小鼠中均未观察到毒性（体重无变化）。 5. 临床 PK-PD、生物标志物分析 Brigimadlin 在临床试验中对 27 名接受每 3 周 45 mg 的患者 （Q3W） 的探索性 PK 分析中显示出高全身暴露，这是 NCT03449381 年 Ib 期扩展队列的推荐扩展剂量（ Cmax：2,880 nmol/L;AUC0–∞：173,000 nmol/L × 小时/L）。达到峰值浓度的中位时间 （Tmax） 为 5.0 小时。Brigimadlin 表现出低清除率 （7.34 mL/min） 和较长的血浆消除半衰期 （42 h），分布容积较低 （Vz/F;26.7 L） 。 在 Ib 期研究中入组的 27 名患者的血浆中测量 GDF15 水平。用单次口服剂量的 brigimadlin （45 mg） 治疗诱导 GDF15 相对于基线的强烈绝对变化，给药后至少持续 24 至 72 小时。 临床暴露被转化为小鼠研究，以提高临床前结果的特异性和相关性。作者试图将观察到的临床未结合暴露与临床前未结合暴露相匹配。根据群体 PK 模型，计算出首次 45 mg 剂量后人类未结合的 Cmax 为 5.4 nmol/L，未结合的 AUC0–inf 为 349.8 nmol/L × h。计算出未结合的 Cmax与未结合的 IC50 相比约为 10 倍。 小鼠中，经计算，口服剂量 1.5 mg/kg 将赋予未结合的Cmax为 7.5 nmol/L，未结合的 AUC 0–inf为 127.5 nmol/L × h。在此剂量下，小鼠的未结合 Cmax 超过未结合 IC50 计算为 14 倍。总之，估计小鼠口服剂量为 1.5 至 2 mg/kg 会导致小鼠的未结合血浆暴露接近患者 45 mg 剂量达到的未结合血浆暴露，支持临床前研究中选择的剂量。 总之，与以前的相关化合物 （BI-0252 和 BI-0282） 相比，brigimadlin 表现出更好的药物样特性，显示出高效和良好的 PK 特性。 7. 总结与讨论 本文描述了 brigimadlin 的发现和表征，brigimadlin 是一种新型 MDM2-p53 拮抗剂，具有高效力和良好的 PK 特性。其高度优化的特性允许间歇给药，这是一种旨在减轻靶向毒性（血小板减少症）的策略，同时保持强大的疗效。 brigimadlin 的临床开发正在进行中（已进入临床三期研究）。Brigimadlin 单药治疗正在 I 期试验 （NCT03449381）、随机 II/III 期 Brightline-1 试验 （NCT05218499） 中研究，该试验评估了 brigimadlin 与阿霉素作为晚期 DDLPS 患者 [FDA 已授予快速通道资格] 的一线治疗，以及 II 期 Brightline-2 研究 （NCT05512377） 评估 brigimadlin 作为 MDM2扩增的实体瘤患者的二线治疗，包括胆道癌和胰腺癌。FDA 已授予 brigimadlin 孤儿药资格认定，用于治疗胆道癌。 声明：发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要，并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断，后果自负。若有侵权，告知必删！ 长按关注本公众号  粉丝群/投稿/授权/广告等 请联系公众号助手 觉得本文好看，请点这里↓