数据
资源
版本对比
免费注册
预约演示
免费注册
【NCB】
KRAS-G12D
KRAS
-G12D的选择性共价抑制剂设计
2024-03-18
·
精准药物
突破性疗法
KRAS
是人体内最常见的致癌突变基因,每年造成全球超过300万的新增患者负担。FDA近期批准的药物
sotorasib
与
adagrasib
作为突破性疗法,通过共价结合
KRAS-G12C
突变蛋白的12位半胱氨酸,将其锁定在信号失能状态,实现抑制
肿瘤
增殖。G12D突变是人类
肿瘤
中最常见的
KRAS
突变,尤其在
胰腺癌
中普遍存在。然而,由于缺乏靶向天冬氨酸的共价弹头,靶向
KRAS-G12D
的共价抑制剂开发仍然面临挑战。近日,加州大学旧金山分校的研究人员发现了一类基于β-丙内酯的共价亲电弹头,与
MRTX1133
的化学骨架结合后,能够与
KRAS-G12D
形成稳定的共价络合物,并展现出对
KRAS-G12D
驱动的癌细胞增殖和小鼠异种移植
肿瘤
生长的高度选择性抑制效果。由于羧基侧链的低亲核性,天冬氨酸是公认最难以亲核反应进行共价修饰的氨基酸之一。
KRAS-G12D
KRAS
-G12D共价抑制剂开发的关键挑战在于设计一种能够在生理pH条件下与天冬氨酸羧基侧链高效结合的共价弹头,同时保证该弹头在水溶液中的稳定性,且不会与谷胱甘肽(GSH)等具有高亲核性的内源物质发生反应。为了寻找合适的共价弹头,研究人员探索了一系列三元和四元杂环共价基团,这些基团是反应活性很强的应变释放亲电试剂(strain-
release
electrophiles),已有报道能够与羧基发生烷基化或酰基化反应。共价修饰速率实验结果显示,基于β-丙内酯的四元杂环弹头可在多个位点(包括Asp12)以剂量依赖的方式高效共价修饰KRAS-G12D蛋白。而氮丙环和环氧乙烷类弹头则展现了中等程度的
KRAS-G12D
KRAS
-G12D共价交联效率(40%-60%)。在成功发现靶向Asp12的潜在共价弹头后,研究团队将此弹头与MRTX1133的化学骨架结合,得到了外消旋体化合物G12Di-1。全蛋白质组质谱分析显示,G12Di-1能够与
KRAS
-G12D·GDP形式的蛋白发生快速的共价偶联反应(半衰期=99s),而对
KRAS
野生型、
KRAS-G12S
、
KRAS-G13D
以及另一种酸性氨基酸突变蛋白
KRAS-G12E
均未显示出共价反应性。值得注意的是,G12Di-1对GTP结合状态下的
KRAS
-G12D蛋白同样展现出一定的共价反应性,这一发现与先前报道的KRAS突变体抑制剂存在显著的区别。鉴于上述发现,研究人员进一步探究了这种共价修饰是否会影响
KRAS
在活性状态下与效应蛋白(如Raf)的相互作用。TR-FRET分析结果表明,G12Di-1能够以剂量依赖地抑制Raf-
Ras
结合域(Raf-RBD)和
KRAS-G12D
之间的相互作用,而对
KRAS
野生型与Raf的结合无显著影响。此外,生物膜干涉实验进一步证实,与
KRAS-G12D
·GppNHp相比,
KRAS-G12D
·GppNHp·G12Di-1复合物与Raf-RBD的结合能力显著降低。这样的共价修饰特性对G12D突变体可能尤为有利,因为该突变型的GTP水解酶活性受到严重影响,导致大多数
KRAS-G12D
分子持续处于GTP结合的激活状态。为了深入探究G12Di-1与
KRAS蛋白
的共价相互作用机制,研究团队对
KRAS-G12D
·GDP与G12Di-1的复合物晶体结构进行了解析。结果显示,G12Di-1的分子结合构象与
MRTX1133
及
AMG510
类似,其中G12Di-1的β-丙内酯环打开,通过其β-碳原子与Asp12发生烷基化反应,从而实现共价交联。有趣的是,绝大多数G12Di-1分子以S型构象与
KRAS-G12D
结合,这引导研究者们推测,这一现象很有可能来源于R型构象的β-丙内酯弹头在结合Asp12时发生的
SN2
构型翻转。因此,研究团队通过手性拆分G12Di-1,获得了(R)-G12Di-2和(S)-G12Di-2两种对映异构体,并对它们与
KRAS-G12D
的反应性进行了评估。实验结果表明,(R)-G12Di-2对
KRAS
-G12D·GDP的共价反应性明显更强,这进一步证实了研究人员的假设。尽管(R)-G12Di-2作为
KRAS-G12D
的有效共价配体显示出良好的活性,其β-丙内酯共价弹头的高反应性却导致其在生理条件下的水溶液中稳定性较低,这限制了其在细胞实验中的应用。为了克服这一挑战,研究人员在β-丙内酯环的α碳原子上引入取代基,以降低水解反应发生的可能。结果显示,通过异丙基取代得到的G12Di-4,虽然它的共价反应速率在空间位阻的影响下有所下降,但其在PBS溶液中的稳定性显著提高。为了进一步提高G12Di-4对
KRAS-G12D
的亲和力,研究小组继续对其结构进行优化,通过整合
MRTX1133
的完整化学结构,得到了G12Di-6。该分子在亲和力和共价反应速率方面均获得了显著提升,更值得注意的是,G12Di-6是第一个展示出对
KRAS
蛋白在GTP结合状态下选择性优于GDP结合状态的共价分子,这一特性与
MRTX1133
存在显著的区别。细胞水平的Western Blot实验也进一步验证了G12Di-6能够在细胞内高效共价结合KRAS-G12D蛋白,并显著抑制下游
ERK
的磷酸化水平。基于共价标记动力学的构效关系研究表明,左侧萘环3号位的羟基取代是引起G12Di-6对GTP结合状态下的
KRAS
-G12D高选择性的关键因素,这与该羟基和
KRAS蛋白
的Asp69侧链形成的氢键密切相关。然而,G12Di-6在抑制多种癌细胞系增殖的实验测试中,并未表现出显著的
KRAS
突变特异性。经过研究发现,由于异丙基单取代的β-丙内酯结构在真核生物的蛋白酶体抑制剂中较为常见(如belactosin C),G12Di-6因与癌细胞内蛋白酶体的高效结合而发生脱靶效应。为了解决这一问题,研究团队在丙内酯结构的β-碳原子上再次引入了甲基取代,从而得到了新的化合物G12Di-7。这一改进不仅有效阻止了G12Di-6与蛋白酶体的脱靶结合,而且进一步提高了化合物的稳定性。更为重要的是,G12Di-7不仅展现了与GDP及GTP结合状态下的
KRAS-G12D
蛋白的高效共价结合能力,还表现出对
KRAS-G12D
突变型细胞的高度选择性。此外,G12Di-7在KRAS-G12D基因转化的小鼠BA/
F3
癌细胞模型中同样表现出显著的浓度依赖性抑制效果。无论是在传统的2D单层细胞培养,还是更为复杂的3D细胞培养模型中,G12Di-7均展现出了对
KRAS-G12D
突变驱动的癌细胞株(SW1990、AsPC-1和
AGS
)生长的显著抑制作用。而对非
KRAS-G12D
突变驱动的癌细胞株则均无明显影响,且在10μM浓度下未表现出明显的毒性,强调了其高选择性和安全性。接着,研究人员通过在小鼠体内模型中评估G12Di-7对KRAS-G12D转化细胞系衍生的异种移植瘤组织的抗
肿瘤
活性,进一步评估G12Di-7的体内有效性。结果显示,G12Di-7通过静脉滴注给药的方式,剂量依赖性地抑制了SW1990
异种移植瘤
的生长。与此同时,在治疗期间两组小鼠的体重增加情况相似,表明了G12Di-7治疗方案未引起明显的分子系统性毒性。综上,通过将改良后的β-丙内酯衍生物共价弹头与
MRTX1133
的化学骨架结合,研究人员成功设计了首个针对
KRAS-G12D
的共价抑制剂。这类分子能够有效地共价修饰GDP和GTP结合状态下
KRAS-G12D
的12位突变天冬氨酸,且具有出色的
KRAS-G12D
突变型细胞选择性和体内
肿瘤
抑制效果,为
KRAS-G12D
突变驱动的
癌症
治疗提供了一种新的策略。参考文献Zheng Q, Zhang Z, Guiley KZ, Shokat KM. Strain-
release
alkylation of Asp12 enables mutant selective targeting of K-Ras-G12D. Nat Chem Biol. Published online March 5, 2024. doi:10.1038/s41589-024-01565-w声明:发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要,并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断,后果自负。若有侵权,告知必删!长按关注本公众号 粉丝群/投稿/授权/广告等请联系公众号助手 觉得本文好看,请点这里↓
更多内容,
请访问原始网站
文中所述内容并不反映新药情报库及其所属公司任何意见及观点,如有版权侵扰或错误之处,请及时联系我们,我们会在24小时内配合处理。
机构
-
适应症
肿瘤
胰腺癌
靶点
KRAS
KRAS G12C
KRAS G12D
[+8]
药物
KRAS G12D inhibitors (Shenzhen Forward Pharmaceuticals)
索托拉西布
阿达格拉西
[+2]
标准版
¥
16800
元/账号/年
新药情报库 | 省钱又好用!
立即使用
热门报告
2024年3月全球首批及特殊审评药物报告
智慧芽生物医药
THR-β 激动剂药物进展及专利调研报告
智慧芽生物医药
2024年2月全球首批及特殊审评药物报告
智慧芽生物医药
立即开始免费试用!
智慧芽新药情报库是智慧芽专为生命科学人士构建的基于AI的创新药情报平台,助您全方位提升您的研发与决策效率。
开始免费试用
立即开始数据试用!
智慧芽新药库数据也通过智慧芽数据服务平台,以API或者数据包形式对外开放,助您更加充分利用智慧芽新药情报信息。
试用数据服务