Seqirus GmbH

近日，成都欧林生物科技股份有限公司（以下简称“公司”）收到国家药品监督管理局核准签发的关于三价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）的《药物临床试验批准通知书》，现将相关情况公告如下： 一、《药物临床试验批准通知书》的主要信息 药品名称：三价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞） 受理号：CXSL2400430 通知书编号：2024LP02155 申请人：成都欧林生物科技股份有限公司；成都新诺明生物科技有限公司；兰州百灵生物技术有限公司 主要审批结论：根据《中华人民共和国药品管理法》、《中华人民共和国疫苗管理法》及有关规定，经审查，2024年7月5日受理的三价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）符合药品注册的有关要求，同意在6月龄及以上人群中开展预防疫苗相关型别流感病毒引起的流行性感冒的临床试验。二、疫苗简介 接种流感疫苗后，可刺激机体产生抗流感病毒的免疫力，用于预防疫苗相关型别的流感病毒引起的流行性感冒。从疫苗组分和预防病毒的种类划分，目前我国已上市的流感疫苗包括三价流感疫苗和四价流感疫苗，其中三价流感疫苗主要预防甲型流感中的H1N1、H3N2亚型，以及乙型流感Victoria系病毒。 公司此次申报的三价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）为国内首个申报临床的细胞基质三价流感疫苗。细胞基质流感疫苗通过在生物反应器中大规模培养， 可以实现生产产量更高、产品质量更稳定、生产成本更低的效果，国外已有CSL 等厂家细胞基质流感疫苗上市。目前国内暂没有细胞基质流感疫苗上市。三、对公司的影响 通过研发流感系列疫苗，公司成功搭建了病毒疫苗研发团队和技术平台。公司四价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）此前已获得到国家药品监督管理局核准签发的《药物临床试验批准通知书》，此次三价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）临床试验申请获批，是对公司流感系列疫苗的有力补充，若该疫苗研发成功，能够为满足市场需求提供更加多元的产品，有利于丰富公司产品布局，进一步提高公司市场竞争力。四、风险提示 根据国家药品注册相关的法律法规要求，药品在临床试验获批后，尚需开展临床试验、取得安全性和有效性数据并经国家药监局批准后方可生产上市，临床研究存在结果不及预期甚至临床研究失败的风险。本次三价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）临床试验获批不会对公司近期业绩产生重大影响。 由于疫苗研发的特殊性，疫苗从临床试验到投产的周期长，环节多，易受不可预测因素的影响。疫苗临床试验的进程和结果以及上市进度具有不确定性，敬请广大投资者谨慎决策，注意投资风险。 特此公告。   成都欧林生物科技股份有限公司董事会  2024年10月22日 1、上海生物制品研究所 上海生物制品研究所有限责任公司成立于1949年9月，前身为上海生物制品厂，现隶属于中国医药集团有限公司中国生物技术股份有限公司。上海所是国家医学微生物学、免疫学、细胞工程、基因工程、血液制品的主要研究机构、生物制品产、学、研、销一体的国家认定的高新技术企业。目前，公司主要产品为预防用生物制品。麻腮风联合减毒活疫苗、流感病毒裂解疫苗、水痘减毒活疫苗制品分别获得了国家和上海市“重点新产品”、上海医药行业“名优产品”等称号；“上生”品牌多次荣获“上海市著名商标”称号。 上海所于2001年率先在国内研制成功流感病毒裂解疫苗，并于2002年在国内首发上市。在此基础上自主研制的四价流感病毒裂解疫苗，于2021年3月获得国家药品监督管理局签署的药品注册证，并成功入选《2021年度上海市创新产品推荐目录》。另外，公司的四价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）I期临床试验正在进行中，处于尚未招募状态。 2、长春生物制品研究所 长春生物制品研究所有限责任公司位于吉林省长春市，是一个赋有悠久历史，集生产、研发、教育、销售为一体的高科技企业，系中国医药集团有限公司旗下中国生物技术股份有限公司的二级子公司。公司始建于1946年，前身为卫生部东北卫生技术总厂（卫生部长春生物制品研究所），历经搬迁、合署、更迭、演变逐步发展起来。公司下属两个子公司及一个杂志社：长春祈健生物制品有限公司和上海捷诺生物科技有限公司。《中国生物制品学杂志》是国内唯一生物制品专业期刊。 公司以生产研发病毒性疫苗、重组蛋白治疗产品、诊断试剂为主要发展方向。其中，疫苗板块产品包括流感病毒裂解疫苗、冻干人用狂犬病疫苗、水痘减毒活疫苗、冻干甲型肝炎减毒活疫苗、双价肾综合征出血热灭活疫苗、森林脑炎灭活疫苗等。 公司是国内最早研制流感疫苗的企业，研制的流感病毒裂解疫苗已上市近20年，分为三价、四价，成人款、儿童款。另外，公司的四价流感病毒亚单位疫苗（MDCK细胞）I期临床试验正在进行中。 3、武汉生物制品研究所 武汉生物制品研究所有限责任公司始创于1950年，现隶属于国务院国资委主管的中国医药集团有限公司旗下的中国生物技术股份有限公司，下属一个子公司武汉中生毓晋生物医药有限责任公司，是生物制品产、学、研、销一体的大型高新技术企业和全国主要生物制品研发、生产和供应基地之一，也是国务院首批博士、硕士学位授予单位。 武汉所主营业务涵盖人用疫苗、治疗制剂、诊断试剂和技术服务四大板块，拥有药品生产批准文号60余个。其中，承担5种国家免疫规划疫苗的生产供应，品类居全国之首。在产产品10余种，70年来累计向社会供应超70亿剂生物医药产品，为保障人民生命健康、维护国家公共卫生安全做出重要贡献。 在流感疫苗方面，2020年4月，武汉所研发的四价流感病毒裂解疫苗获得国家药品监督管理局颁发的药品注册批件，成为中国生物第二家、国内第四家获批生产的四价流感疫苗生产企业。此外，武汉生物制品研究所/ 百灵生物/ 西北民族大学一项评价四价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）接种于3周岁及以上人群的免疫原性和安全性的随机、双盲、同类疫苗对照Ⅲ期临床试验正在进行中。 4、金迪克生物 江苏金迪克生物技术股份有限公司成立于2008年12月，是一家集人用疫苗科研、生产、经营、服务为一体的生物高科技企业，于2021年在上海证券交易所科创板上市。公司已形成四大核心平台技术，产品管线已实现了对流行性感冒、狂犬病、水痘、带状疱疹和肺炎疾病等5种重要传染性疾病预防的覆盖。 在流感疫苗方面，公司的四价流感病毒裂解疫苗已于2019年底上市销售，四价流感病毒裂解疫苗（儿童）完成了I期临床试验，四价流感病毒裂解疫苗（高剂量）处于临床前研究阶段。此外，公司还在探索研究在中国3至8岁儿童中四价流感病毒裂解疫苗2针次免疫程序。 5、华兰生物 华兰生物成立于1992年，是一家从事血液制品、人用疫苗、抗体及重组蛋白药物研发、生产和销售的国家高新技术企业和上市公司。华兰疫苗为华兰生物分拆上市子公司，是一家专业从事人用疫苗研发、生产、销售的高新技术企业。目前，公司已取得《药品注册证书》的疫苗有流感病毒裂解疫苗、四价流感病毒裂解疫苗、四价流感病毒裂解疫苗（儿童剂型）、甲型H1N1流感病毒裂解疫苗、ACYW135 群脑膜炎球菌多糖疫苗、重组乙型肝炎疫苗（汉逊酵母）、A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗、冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）以及吸附破伤风疫苗。 流感疫苗为华兰疫苗的主要销售产品。2018年至2020年，公司流感疫苗年批签发数量分别为 852.3万剂、1,293.4万剂和2,315.3万剂，其中四价流感疫苗批签发数量分别为512.2万剂、836.1万剂和2,062.4万剂，均居国内首位。2021年至2023年，公司流感疫苗分别获的批签发100批次、103批次和94批次，流感疫苗批签发批次数量持续保持国内龙头地位。此外，华兰疫苗还布局了流感病毒mRNA疫苗，临床前研发工作在推进中。 6、科兴生物 科兴控股生物技术有限公司（SINOVAC科兴）是一家总部位于北京的生物高新技术企业，目前在美国纳斯达克全球精选市场（Nasdaq-GS:SVA）上市。公司通过全资子公司科兴控股（香港）有限公司拥有北京科兴生物制品有限公司、北京科兴中维生物技术有限公司、科兴（大连）疫苗技术有限公司等多家企业，在北京海淀、昌平、大兴及辽宁大连拥有四个产业基地，并在海外多国推进生物医药产品研发和产业化合作。 SINOVAC科兴以“为人类消除疾病提供疫苗”为使命，致力于人用疫苗及其相关产品的研究、开发、生产和销售，为疾病预防控制提供服务。公司上市产品主要包括新型冠状病毒灭活疫苗（克尔来福®）、肠道病毒71型灭活疫苗（益尔来福®）、中国第一支甲型肝炎灭活疫苗（孩尔来福®）、三价流感病毒裂解疫苗（安尔来福®）和四价流感病毒裂解疫苗、水痘减毒活疫苗、腮腺炎减毒活疫苗、23价肺炎球菌多糖疫苗、Sabin株脊髓灰质炎灭活疫苗等。 据悉，SINOVAC科兴是中国首个加入国际制药企业协会联合会（IFPMA）流感疫苗供应国际行动组（IVS）的流感疫苗生产企业，已获批上市的流感疫苗包括中国第一支不含防腐剂的三价流感病毒裂解疫苗安尔来福®、中国第一支大流行流感病毒灭活疫苗盼尔来福®、全球第一支甲型H1N1流感病毒裂解疫苗盼尔来福.1®以及四价流感病毒裂解疫苗。 7、大连雅立峰 复星雅立峰（大连）生物制药有限公司成立于2002年，是一家专门从事预防性生物制品研发、生产和销售的高新技术企业，同时也是国家科技计划生物专项课题的研究基地。复星雅立峰隶属于复星医药集团疫苗事业部，是复星集团斥巨资打造的疫苗产业平台。公司上市产品有人用狂犬病疫苗（Vero细胞）、冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞）和流感病毒裂解疫苗。 其中，流感病毒裂解疫苗包括成人剂型、儿童剂型；成人剂型于2005年11月获国家药监局批准上市，规格为预充式0.5ml/支；儿童剂型于2009年7月获国家药监局批准上市，规格为预充式0.25ml/支。 8、天元生物 浙江天元生物药业有限公司是一家从事疫苗研究、开发、生产的生物制药企业，为步长制药控股子公司，主要致力于细菌性疫苗、病毒性疫苗、基因工程类疫苗及新型佐剂疫苗的研究开发。天元生物原是葛兰素史克（GSK）下属的在华疫苗生产企业，完整承继了诺华和GSK两家具有国际先进疫苗研发、生产和管理的人才、设备和经验体系，具有符合国际标准的细菌类和病毒类疫苗的生产厂房和检测实验室。 目前，天元生物拥有流感病毒裂解疫苗（成人及儿童型）、A群C群脑膜炎球菌多糖疫苗、ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗4项疫苗产品，另有四价流感病毒裂解疫苗（鸡胚、成人型）、四价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）、水痘减毒活疫苗、带状疱疹减毒活疫苗等产品正在研发。 其中，2023年12月30日，公司的四价流感病毒裂解疫苗的上市申请获CDE受理；另外，查询药物临床试验登记与信息公示平台，天元生物/百灵生物/西北民族大学的四价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）Ⅰ期临床试验正在进行中。 9、国光生技 国光生物科技股份有限公司成立于1965年，是中国台湾第一家专业的疫苗研发生产公司，具备疫苗与生物制剂从研发到生产全程自制能力。AdimFlu-S（QIS）是国光生物的一款四价流感裂解灭活疫苗，于2022年1月获得中国国家药品监督管理局批准，适用于3岁及以上人群。值得注意的是，2024年2月，三叶草生物宣布与国光生技达成四价流感病毒裂解疫苗在中国分销的独家协议。 10、百克生物 长春百克生物科技股份公司是一家致力于传染病防治的创新型生物医药企业。自2004年成立以来，主要从事人用疫苗产品的研发、生产与销售业务。凭借多年的技术积累，公司建立了五大核心技术平台，包括病毒规模化培养技术平台、制剂及佐剂技术平台、基因工程技术平台、细菌性疫苗技术平台及mRNA 疫苗技术平台。 百克生物目前已有水痘减毒活疫苗、冻干鼻喷流感减毒活疫苗及带状疱疹减毒活疫苗三种已获批上市的疫苗产品，截至2024年6月30日，公司已有13项在研疫苗和3项在研的用于传染病防控的单克隆抗体，主要包括液体鼻喷流感疫苗、百白破疫苗（三组分）、冻干狂犬疫苗（人二倍体细胞）、狂犬单抗、破伤风单抗等。 在流感疫苗方面，公司的冻干鼻喷流感减毒活疫苗于2020年在我国上市，打破我国只有灭活流感疫苗的局面，开创了疫苗鼻喷接种的先河，目前也是国内独家经鼻喷方式接种的流感减毒活疫苗。此外，公司还在布局液体鼻喷流感疫苗、佐剂流感疫苗以及通用流感mRNA疫苗。其中，液体鼻喷流感疫苗上市许可申请已获得受理，而后两款疫苗则处于临床前研究中。 11、中逸安科 中逸安科生物技术股份有限公司成立于2001年9月，注册于天津市北辰区，为研发、生产和销售人用疫苗高科技生物技术公司。公司研发生产的流感病毒亚单位疫苗，在国内上市销售。在此基础上公司又自主研发了四价流感病毒亚单位疫苗，并已获得发明专利证书。公司参与的国家应急专项重组新型冠状病毒疫苗（CHO细胞）已完成二期临床，于2021年9月进入三期临床，并积极申请国内外EUA.公司目前在研产品多联多价疫苗、结合疫苗、重组疫苗、mRNA疫苗等多种创新疫苗在临床或申请临床。 12、智飞生物 重庆智飞生物制品股份有限公司成立于2002年，是一家集疫苗、生物制品研发、生产、销售、推广、配送及进出口为一体的国际化、全产业链生物高科技企业。公司于2010年9月在深交所挂牌上市，为第一家在创业板上市的民营疫苗企业，旗下五家全资子公司及两家参股公司，其中北京智飞绿竹生物制药有限公司及安徽智飞龙科马生物制药有限公司为高新技术企业。 目前，公司共有13种产品上市在售，1种产品附条件上市，包括预防流脑、宫颈癌、肺炎、轮状病毒、带状疱疹等传染病的疫苗产品，也涵盖提供结核感染诊断、预防、治疗有效解决方案的药品，覆盖人群包括婴幼儿、青少年、成人；自主研发项目共计32项（不含新冠系列项目），其中处于临床试验及申请注册阶段的项目18项。 在流感疫苗产品方面，据智飞生物2024年半年报显示，包括四价流感病毒裂解疫苗（申报上市审评中）、流感病毒裂解疫苗（完成临床试验）和四价流感病毒裂解疫苗（ZFA02佐剂）（申报临床），具体进展详情如下： 2024年7月29日，智飞生物公布了其全资子公司智飞龙科马的四价流感病毒裂解疫苗（ZFA02佐剂）获得国家药品监督管理局药物临床试验申请受理通知书，受理号为CXSL2400485。截至目前，国内暂无佐剂流感疫苗正式获批上市。海外有Seqirus公司的佐剂流感疫苗获批上市使用。 2024年8月15日，智飞生物发布关于公司撤回四价流感病毒裂解疫苗（西林瓶包装）注册申请的公告，基于流感疫苗产品线创新性差异化的考虑，为进一步优化公司资源配置，更好地匹配市场需求，经审慎研究，公司调整了四价流感病毒裂解疫苗的注册策略，并主动撤回了四价流感病毒裂解疫苗（西林瓶包装）的注册申请，保留四价流感病毒裂解疫苗（预灌封包装）的注册申请。目前四价流感病毒裂解疫苗（预灌封包装）已通过注册现场核查，正处于技术审评阶段，公司将持续积极推动该产品的上市许可。 13、康润生物 江苏康润生物科技有限公司成立于2011年，坐落于江苏省常州市，是一家集研发、生产和销售于一体的疫苗企业。公司坚持以创新为导向，采取自主开发与联合研究相结合的模式，建立了大规模哺乳动物细胞培养、大规模抗原纯化、疫苗检定和质量研究，以及mRNA疫苗开发等多个技术平台。公司现有一款上市疫苗——冻干人用狂犬病疫苗（Vero细胞），在研产品包括四价流感病毒裂解疫苗、多价手足口病疫苗以及多个重组蛋白疫苗、mRNA疫苗等。2024年03月22日，据CDE官网显示，康润生物的四价流感病毒裂解疫苗的上市申请获受理。 14、康泰生物 深圳康泰生物制品股份有限公司（300601）成立于1992年，专注人用疫苗的研发、生产和销售。公司在北京、深圳两地设有5大研发产业基地，拥有已上市及获得药品注册批件的产品11种，包括60微克乙肝疫苗、四联疫苗、双载体13价肺炎疫苗、“四针法”人二倍体细胞狂犬病疫苗等独家核心品种，营销及配送网络覆盖中国31个省（自治区、直辖市）。此外，还拥有专利80余项、在研品种30余项，包括五联疫苗、四价流感疫苗、重组RSV疫苗、重组带状疱疹疫苗、20价肺炎球菌多糖结合疫苗、麻腮风减毒活疫苗等，基本覆盖世界主流疫苗品种。 在流感疫苗方面，公司布局了四价流感病毒裂解疫苗和四价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）： 四价流感病毒裂解疫苗（3 岁及以上人群）目前处于Ⅰ、Ⅲ期临床试验阶段。今年8月，公司四价流感病毒裂解疫苗新增6-35月龄人群获得临床试验批准通知书，进一步扩大了该疫苗的适用人群范围。 2024年7月15日，康泰生物发布公告称收到国家药品监督管理局签发的受理通知书，同意受理公司和兰州百灵生物技术有限公司研发的四价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）的临床试验申请，该次申请的疫苗适用于3周岁及以上人群。 15、成大生物 辽宁成大生物股份有限公司成立于2002年，专注人用疫苗的研发、生产与销售，并于2021年10月28日在上交所科创板上市。公司主要上市产品为人用狂犬病疫苗（Vero细胞）、人用乙脑灭活疫苗（Vero细胞）；主要在研产品包括人用二倍体狂苗、四价/三价流感疫苗、15价HPV疫苗、13价和20价肺炎疫苗、重组带状疱疹疫苗、B群流脑疫苗、多价手足口疫苗、狂犬病单抗等。 在流感疫苗方面，据成大生物2024年半年报显示，目前公司的四价流感疫苗处于III期临床试验，高剂量流感病毒裂解疫苗处于临床前研究。 16、北京生物制品研究所 北京生物制品研究所有限责任公司是中国医药集团有限公司所属中国生物技术股份有限公司的子公司，从事疫苗、诊断制剂等生物制品的研究、生产和经营。公司历史可以追溯到1919年北洋政府时期成立的中央防疫处，是新中国生物制品的摇篮。公司产品涵盖病毒类、细菌类、基因工程类疫苗，拥有麻腮风系列、百白破系列、脊髓灰质炎系列、新冠灭活疫苗等多联多价疫苗，年产能超过50亿剂。 在流感疫苗方面，北京生物制品研究所的四价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）已获得临床试验默示许可，不过在药物临床试验登记与信息公示平台未查询到相关临床登记信息。 17、欧林生物 成都欧林生物科技股份有限公司成立于2009年，是一家专注于人用疫苗研发、生产及销售的生物制药企业。公司于2021年6月8日，成功登陆上交所科创板（股票代码：688319）。自成立以来，公司一直致力于向国内外消费者提供安全有效和品质优异的人用疫苗产品，现累计获得中国发明专利62项，美国专利2项、欧洲专利1项，包括为提升人民群众生活品质而开发的，当前市场需求广阔的传统疫苗的升级换代产品；以及疾病控制和预防需求尚未满足或急需的，未来市场潜力巨大的创新疫苗产品。 2024年5月16日，欧林生物发布公告称收到国家药品监督管理局核准签发的关于四价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）的《药物临床试验批准通知书》，同意在6月龄及以上人群中开展预防疫苗相关型别流感病毒引起的流行性感冒的临床试验。7月6日，公司的三价流感病毒裂解疫苗（MDCK细胞）的临床申请获CDE受理，据悉，该产品也是国内首个申报临床的细胞基质三价流感疫苗。至此，公司流感系列疫苗产品组合初步形成。 18、华南疫苗 广东华南疫苗股份有限公司是一家专注于重组蛋白纳米颗粒疫苗创新研发与生产的高科技成长型企业。公司成立于2011年，并于2021年成为一品红集团的一员。自成立以来，华南疫苗利用自主知识产权的昆虫细胞-杆状病毒表达系统（BEVS）以及成熟的蛋白表达、纯化工艺技术优势，搭建了全新的基因工程疫苗研发与中试平台。公司已开发多款人用、兽用及宠物用的纳米颗粒候选疫苗，其中几款疫苗即将进入临床试验。 2024年8月8日，一品红发布公告称公司控股子公司华南疫苗自主研发的四价流感重组蛋白疫苗的药物临床试验申请已获得国家药品监督管理局受理，并收到《受理通知书》（受理号：CXSL2400528）。 19、康华生物 成都康华生物制品股份有限公司（股票代码：300841）成立于2004年，主要从事人用疫苗的研发、生产与销售。公司已取得药品注册证书的疫苗有冻干人用狂犬病疫苗（人二倍体细胞）和 ACYW135群脑膜炎球菌多糖疫苗。 据康华生物2024年半年报显示，报告期内，公司主要研发项目共计7项，其中包括四价鼻喷流感疫苗，该疫苗已完成中试工艺开发，并在开展模式动物攻毒保护研究，预计2024年-2025年将会申报临床试验，并开展临床试验。 20、康希诺生物 康希诺生物股份公司成立于2009年，致力于在世界范围内提供预防和治疗感染类疾病的解决方案。公司现有病毒载体疫苗技术、合成疫苗技术、蛋白结构设计和VLP组装技术、mRNA技术、制剂及给药技术五大创新疫苗平台技术。目前，康希诺生物已建立覆盖10余种适应症的多款创新疫苗产品，包括亚洲首款四价流脑结合疫苗曼海欣®、二价流脑结合疫苗美奈喜®、获得世卫组织认可的新冠疫苗克威莎®、全球首款吸入用新冠疫苗克威莎®雾优®以及亚洲首个重组埃博拉病毒病疫苗。 2024年7月25日，康希诺生物与马来西亚国立生物技术研究院（NIBM）代表中马两国签署合作协议，双方在疫苗领域的合作进入了长期、广泛、深化的全新阶段。根据合作协议，康希诺生物与NIBM将围绕mRNA多价流感疫苗等创新产品的开发、生产制造、技术转移以及人才交流等方面展开深入合作。 此外，如荣盛生物、培森生物、海基亚生物等企业，过往均有在研的流感疫苗项目，不过目前均没有更新进展，项目是否还在推进未可知，因此就不做详细介绍了。 参考资料：各公司官网、官微、财报，国家药品监督管理局药品审评中心，药物临床试验登记与信息公示平台等. 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

中文摘要流感是由流感病毒引发的急性呼吸道传染病，每年可引起季节性流行。疫苗接种是预防和控制流感流行和大流行期间病毒感染的主要方法，目前流感疫苗生产主要仍依赖鸡胚培养技术，但近年来，使用动物细胞基质代替鸡胚培养已成为流感疫苗技术创新的重要趋势。随着贴壁培养及无血清全悬浮培养等培养技术在生物制药领域的发展，已有多种动物细胞系用于流感疫苗生产。此文简要综述近年来动物细胞培养技术在流感疫苗研发中的应用进展。正文流行性感冒是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病。流感病毒可分为甲、乙、丙、丁型，又可根据表面糖蛋白血凝素（hemagglutinin，HA）和神经氨酸酶划分为若干亚型，能够通过适应性突变和基因重组突破种属屏障获得跨宿主传播[1]，曾在世界范围内引起5次有记录的大流行和每年重复的季节性流行，对全球经济和公共卫生都造成了严重的影响[2]。特别是近年来不断出现感染人类的高致病性禽流感病毒H5N1、H7N9等的流行，给人们敲响了警钟[3]。接种流感疫苗是预防流感病毒感染、降低发病率和死亡率最有效的策略之一。目前流感疫苗的生产仍主要采用传统鸡胚培养，该工艺成熟稳定，但过于依赖鸡胚的持续稳定供应，且培养周期长，难以满足流感大流行期间激增的疫苗需求，最重要的是，流感病毒在鸡胚传代适应过程中积累的突变会改变抗原性，可能降低疫苗的有效性[4]。此外，某些毒株如H3N2在鸡胚中复制效率不高、某些高致病性禽流感毒株对鸡胚具有致死性等因素也影响了疫苗的产量[5]。已有多项研究比较了基于动物细胞培养和鸡胚培养生产的流感疫苗效力结果，尽管存在样本量较小、未进行多个季节研究等不同缺陷，因而无法形成全面的判断，但仍可以看出，基于细胞培养的流感疫苗效力非劣效于鸡胚培养[6]。有研究发现细胞培养的流感病毒所有代次均未观察到抗原突变，而用鸡胚培养时，HA受体结合位点附近发生了氨基酸突变，因此利用细胞培养技术生产流感疫苗流行株突变的风险较低，生产的疫苗更安全有效[7]。此外，细胞培养不依赖诸如鸡胚等原料的供应和质量控制，具有更大的灵活性和可扩展性[8]，因此利用动物细胞培养技术快速生产流感疫苗仍逐渐成为一种有吸引力的选择。本文简要综述近年来动物细胞培养技术在流感疫苗研发中的应用进展。1动物细胞培养技术1.1贴壁培养贴壁培养主要适用于具有贴壁依赖性的细胞，细胞体外培养时需贴附于玻璃或塑料等无活性物质的表面生长，随着细胞数量不断增长，生长空间越来越小，营养环境恶化，会出现接触抑制[9]。细胞贴壁培养的放大可选择转瓶、细胞工厂等[10]，但二维细胞培养存在表面积与体积比低、培养参数难以监测等缺陷，可引入兼具贴壁培养和悬浮培养优势的微载体，在相对较小的培养体积中实现较高的细胞密度[11]。微载体带有适当电荷，细胞通过细胞膜与带电基质作用而黏附于其表面，以悬浮状态在搅拌槽生物反应器或其他支撑系统中生长，增加培养面积的同时获得均一的培养条件，实现了贴壁细胞培养的自动化可控管理[12]。1.2悬浮培养悬浮适应细胞、肿瘤细胞等非贴壁依赖性细胞在体外培养时不需要附着物，可悬浮于液体培养基中大量增殖。悬浮培养可借鉴微生物发酵的理论和经验，易于自动化操作，细胞传代培养只需新鲜培养基按比例稀释，是动物细胞大规模培养的理想模式。实现规模化悬浮培养的关键技术主要有4点：贴壁细胞的驯化改造，个性化培养基的研制，生物反应器及培养工艺的选择优化[13]。细胞驯化过程中一般通过逐渐降低培养基中血清浓度来保持细胞的稳定性，细胞的活力需维持在90%以上[14]。血清可为细胞生长提供营养物质，但也存在成本较高、批次间质量不稳定、成分不清晰、潜在微生物或致病因子污染、不利于下游纯化等问题[15]，在动物细胞悬浮培养过程中一般根据细胞营养需求采用个性化的无血清人工合成培养基。生物反应器作为悬浮培养的关键设备，有搅拌式、气升式、中空纤维式、波浪式、一次性、流化床、固定床、堆积床等类型，在实际生产过程中应结合各方面因素进行选择[16]。培养工艺有分批式培养、流加式培养、半连续式培养、连续式培养、灌流式培养等，可根据细胞生长特性及培养产物性质不同择优选择[17]。2动物细胞培养技术在流感疫苗研发中的应用2.1Madin-Darby 犬肾（Madin-Darby canine kidney，MDCK）细胞悬浮培养技术MDCK细胞系是从犬肾脏组织中分离培养获得的上皮样细胞，该细胞同时含有α-2，6-和α-2，3-连接的唾液酸受体，可以高效地支持人和禽流感病毒的感染和增殖，被广泛应用于流感病毒分离和疫苗生产研究[18]。目前已有基于MDCK细胞培养的成熟产品获得监管机构批准，如瑞士Novartis公司的Optaflu和Celtura疫苗，前者是含2株A型和1株B型流感病毒的三价疫苗，后者是含MF59佐剂的H1N1大流行流感疫苗；另外澳大利亚Seqirus公司的四价流感疫苗Flucelvax也是利用MDCK细胞培养技术生产的[19]。Tzeng等[20]将利用反向遗传技术构建的重组病毒接种到悬浮MDCK细胞中，发现病毒产量高于贴壁MDCK细胞中的产量，可能是因为重组病毒适应悬浮MDCK细胞的过程中，HA发生了促进病毒的生长的N-糖基化。Nakamura等[21]也发现在悬浮MDCK和贴壁MDCK细胞中扩增的流感病毒株之间氨基酸替换模式和抗原特性有很大差异，可能是不同培养条件下两种细胞系表面蛋白表达和糖基化不同所致。悬浮培养避免了细胞生长面的限制且易于实现大规模生产，悬浮MDCK细胞主要是通过无血清驯化培养获得，传统的驯化过程主要是贴壁细胞悬浮驯化、无血清驯化、生物反应器高密度驯化三步法[17]，费时又费力。Ye等[22]发现一些与细胞黏附相关的蛋白如钙黏蛋白1在贴壁MDCK细胞中的表达明显高于悬浮MDCK细胞，且在转录水平上进一步验证了这些蛋白在悬浮MDCK细胞中表达的降低，也就是说这些蛋白或可作为基因工程修饰靶点以建立稳定的MDCK悬浮细胞系。某些流感病毒在MDCK细胞中的复制效率较低，除了通过经典重组或反向遗传学构建高产且稳定性好的疫苗株以外，还可对细胞进行修饰来提高产量。如MDCK-SIAT1细胞系是通过人α-2，6-唾液酸转移的cDNA稳定转染MDCK细胞而获得的，高表达的α-2，6-连接唾液酸受体使其更适合临床流感样本的分离或扩增；而英国索尔兹伯里普通感冒实验室构建的MDCK-London细胞系生长速度更快，且对多种流感病毒株都很敏感[23]。Wen等[24]建立了 2个稳定表达人呼吸道跨膜丝氨酸蛋白水解酶的细胞系MDCK-TMPRSS2和MDCK-MSPL，能够自行水解病毒表面HA，将其切割成HA1和HA2亚基，进而介导病毒与细胞的受体结合及膜融合，支持H5和H9亚型禽流感病毒在无甲苯磺酰-苯丙氨酰氯甲基酮（tosyl-phenylalanine chloromethyl-ketone，TPCK)-胰蛋白酶（胰酶）的情况下多周期生长，且病毒滴度与外加TPCK-胰酶在MDCK细胞中生长的病毒滴度相当。郭寿清等[25]构建了组织转谷氨酰胺酶2 （transglutaminase 2，TGM2）过表达和敲除的MDCK稳定细胞系，探究TGM2对甲型H1N1流感病毒在MDCK细胞中增殖的影响，结果显示敲除TGM2基因可上调病毒核蛋白（nucleoprotein，NP）基因的表达，且病毒滴度显著增加。2.2Vero细胞微载体悬浮培养技术Vero细胞系是从健康成年非洲绿猴肾脏中分离培养而建立的上皮细胞，用于人类疫苗如脊髓灰质炎和狂犬病疫苗生产已有很长的历史，并被WHO推荐用于流感疫苗生产，其优点在于生长增殖快、遗传性状稳定、安全性好[26]。美国Baxter公司开发的基于Vero细胞培养的H5N1单价流感疫苗Celvapan于2009年获得欧洲批准，生产的另一款Vero细胞三价(H1N1、H3N2、B型)季节性流感灭活疫苗Preflucel于2010年获得欧洲批准[19]。Vero细胞是一种贴壁依赖性细胞，早期主要通过转瓶培养进行规模化生产，后来通过兼具贴壁和悬浮培养优点的微载体技术实现大规模高密度培养，目前主要采用生物反应器低血清微载体悬浮培养技术，以传统培养基为基础，在Vero细胞驯化过程中，逐步减少血清含量并添加一定量低成本且安全性高的血清替代物，在不影响细胞生长增殖的情况下大大降低了成本[27]。一些Vero细胞的无血清悬浮培养研究也在进行，如Alfano等[28]利用重组人转铁蛋白和重组人白蛋白取代胎牛血清（fetal bovine serum，FBS）的蛋白质组分来配制一种化学成分明确的无血清培养基OptiVERO并进行了优化，使Vero细胞在该培养基中的生长繁殖和病毒的增殖能力与在含10%FBS的EMEM培养基中基本一致。Vero细胞对多种病毒易感，接种后可得到大量扩增的病毒。研究发现，这是因为该细胞在病毒感染后无法表达可阻碍病毒复制的干扰素所致[29]，其细胞凋亡和诱导抗病毒免疫状态可能与能产生干扰素的MDCK细胞有所不同。流感病毒非结构蛋白（non-structural protein 1，NS1）可作为一种干扰素拮抗剂，可以拮抗视黄酸诱导基因蛋白I介导的I型干扰素的产生，NS1基因突变或截短的流感病毒缺乏对干扰素信号通路的抑制，可以在干扰素缺乏的Vero细胞中高效复制增殖[30]。与MDCK细胞相比，Vero细胞表面α-2，6-连接唾液酸受体相对较少，对某些流感病毒的敏感性较低，可通过筛选适应Vero细胞的高产流感病毒株或通过改造细胞来提高病毒产量。Zhou等[31]利用Vero细胞筛选出3株高产重组流感病毒，并均可以保持原始野生型流感病毒的免疫原性，通过鸡胚、小鼠、豚鼠和雪貂的生物安全性评价，所有重组病毒均为低毒力株。II型跨膜蛋白BST-2是一种宿主限制因子，能够抑制各种被包裹的病毒从感染的宿主细胞中出芽，Yi等[32]建立了BST-2基因缺陷的Vero细胞系以增加细胞培养中流感病毒颗粒的释放，与未改造的Vero细胞相比，其释放的病毒颗粒至少增加了2倍，最多可增加50倍。2.3PER.C6细胞悬浮培养技术PER.C6细胞系是通过转染人5型腺病毒E1基因而永生化的人胚胎视网膜上皮细胞系，在没有血清和微载体的情况下也可以在大型生物反应器中悬浮生长至高密度。因为细胞表面同时含有α-2，6-和α-2，3-连接的唾液酸受体，所以对多种人、禽流感病毒株都很敏感[33]。来自临床分离的人流感病毒包括那些不能在鸡胚中复制增殖的分离株，在PER.C6细胞中扩增不会诱导适应性突变，与所选择的临床分离株的抗原完全匹配，因此PER.C6细胞是制备流感疫苗毒种和大规模生产流感疫苗非常合适的底物[34]。Koudstaal等[35]利用反向遗传学通过不同的转染方法在PER.C6细胞中构建了多株重组流感病毒，将含有A/HK/156/97（H5N1）的HA和神经氨酸酶片段的重组体作为疫苗毒种生产全病毒灭活疫苗，疫苗的有效性结果显示，可以保护小鼠免受致死量的同源毒株攻击。Cox等[36]开发了第一个基于PER.C6细胞培养的人用候选H7N1流感大流行裂解疫苗，Ⅰ期剂量递增临床试验评估表明，该疫苗具有良好的安全性和耐受性，但是辅以氢氧化铝佐剂依旧只能诱导较低的免疫应答，有效性不符合欧盟人用药品委员会的标准。2.4其他细胞培养技术目前，除MDCK、Vero、PER.C6细胞在美国和欧盟国家已经获批可用于流感疫苗研发生产外，另一些细胞系也被提议用作生产流感疫苗的细胞基质。EB66细胞系来源于鸭胚胎干细胞，可以在无血清培养基中全悬浮培养，其细胞密度和产物表达量都较高，已被广泛用于生产人类和禽类的治疗性药物和疫苗[37]。Endo等[38]开发了一种基于EB66细胞辅以AS03佐剂的H5N1流感疫苗，在Ⅰ期临床研究中确认该疫苗安全且耐受性良好，并引发了广泛的交叉抗体反应，Ⅱ期和Ⅲ期临床研究进一步评估表明，3.75 mg HA + AS03佐剂耐受性好，免疫原性强，未见严重不良反应。DuckCelt-T17细胞系是利用转基因技术培育的一种新的禽类细胞系，该细胞系由鸭端粒酶逆转录酶组成型表达的原代鸭胚胎细胞培养而成，能在无血清条件下进行大规模悬浮培养。通过对感染条件的优化，大多数人、禽、猪流感病毒的毒株均能在DuckCelt-T17细胞系中扩增至高滴度[39]。AGE1.CR.pIX细胞系是通过将人5型腺病毒E1基因转染至鸭胚胎视网膜原代细胞而形成的永生化番鸭细胞，在无或低蛋白含量的无血清培养基中可以无限增殖。Folegatti等[40]开发了一种减毒的正痘病毒修饰的痘苗病毒安卡拉株（modified vaccinia virus Ankara，MVA）载体，用以表达高度保守的甲型流感病毒抗原NP和基质蛋白1（matrix protein-1，M1），并研发了基于AGE1.CR.pIX细胞悬浮培养的MVA-NP+M1通用流感疫苗，其安全性、耐受性、免疫原性均较好。Coussens等[41]介绍了 一种来源于永生化的鸡胚胎细胞系（PBS-1）的细胞，经过驯化适应无血清生长条件，命名为PBS-12SF。H1N1和H3N2人流感病毒以及重组H5N1流感病毒都可以在PBS-12SF细胞中扩增，病毒滴度与在MDCK、Vero细胞中扩增的滴度相当。此外，流感病毒在PBS-12SF细胞中不需要添加TPCK-胰酶即可复制增殖，从而减少污染的机会，并简化下游纯化过程。此外，昆虫细胞杆状病毒表达载体系统也可以用来生产流感疫苗，如2013年美国Protein Sciences公司获得FDA批准的Flublok流感疫苗便是利用这种系统生产的。先将expresSF+昆虫细胞在不含动物血清蛋白的培养基中悬浮培养至合适密度，然后感染插入流感病毒HA基因序列的重组杆状病毒，即可生产重组HA[42]。这一通用培养技术既可用于季节性流感疫苗的生产，也可用于大流行流感疫苗的生产,即便毒株快速突变，只需转换毒株HA的基因序列即可。3结语动物细胞培养技术生产流感疫苗表现出巨大优势，已被认为是新一代流感疫苗研发的主要方向，但该技术尚未完全成熟，各种培养方法都存在阻碍广泛应用的不足之处，还有优化和升级的空间。细胞株不同和培养条件存在差异，特别是从含血清培养基到无血清培养基的改变，可能会对细胞的特性产生重大影响。在长时间大规模人工培养过程中细胞群体的生理机能可能也会受到影响，如分泌和代谢能力的降低或丧失等。目前尚不清楚是否有特定动物细胞系在不改变其遗传和抗原特性的情况下扩增多种亚型流感病毒，有必要对细胞库进行检定测试，开发适合多种疫苗病毒株复制增殖的细胞底物。此外，动物细胞存在潜在病原体感染的风险，如呼吸道病毒、肠道病毒和疱疹病毒等，需要更严格的质量控制以确保细胞基质疫苗的安全性。动物细胞培养技术在未来发展中应注重优化细胞培养环境，改进细胞特性等，来扩大生产规模、提高疫苗产量。但仅采用某种特定的疫苗生产机制可能是不够的，特别是在大流行的情况下难以满足需求。除了基于鸡胚和细胞基质培养的经典疫苗外，对抗原结构设计、纳米颗粒、病毒载体等技术平台的部分或周期性依赖是不可避免的。作者彭婷1 综述    吴金妍2 审校1上海生物制品研究所有限责任公司第四研究室，上海  200051；2上海生物制品研究所有限责任公司合作部，上海  200051通信作者：吴金妍，Email：wujinyan1@sinopharm.com引用本文：彭婷，吴金妍. 动物细胞培养技术在流感疫苗研发中的应用进展 [J]. 国际生物制品学杂志, 2022, 45(5):277-282.  DOI：10.3760/cma.j.cn311962-20220110-00003

在mRNA新冠疫苗取得历史性的突破之后，越来越多的疫苗正在使用mRNA这种新型生物技术，其中就包括流感疫苗。11月24日，《科学》杂志上发表了一篇题为“A multivalent nucleoside-modified mRNA vaccine against all known influenza virus subtypes”的文章，介绍了一种基于mRNA的通用流感疫苗，可以对抗所有20种已知的甲型和乙型流感毒株，这可能为通用流感疫苗开辟一条新的途径，将有助于预防未来的大流行。设计和制造能够提供广泛保护的疫苗一直具有挑战性。最新的文章指出，目前的流感疫苗由四种流感病毒抗原组成，除了疫苗所针对的病毒株外，几乎没有其他保护作用。这意味着理论上每年都需要针对当季流行的流感病毒开发新的疫苗，而使用mRNA技术，为通用流感疫苗的开发提供了一种新的策略。在这项最新的动物试验中，接种疫苗的动物免疫系统能够识别并抵御所有已知流感病毒株，疫苗诱导的抗体水平在至少四个月内保持不变。研究人员称，即使雪貂接触了未知的流感病毒，疫苗也有望减少疾病的严重程度并预防死亡。与新冠疫苗的开发思路一样，mRNA流感疫苗传递含有mRNA指令的微小脂质颗粒，让细胞产生流感病毒表面的蛋白副本，从而产生抗体免疫记忆，识别未来可能遇到的任何类型的流感病毒。“我们的想法是研制一种疫苗，使人们对不同的流感病毒株具有基线免疫记忆水平，这样在下一次流感大流行发生时，疾病和死亡人数就会大大减少。”美国宾夕法尼亚大学医学院佩雷尔曼学院研究负责人斯科特·亨斯利（Scott Hensley）在一份声明中表示。他同时强调，通用流感疫苗即使在人体试验中取得成功，也不一定能预防感染。“目标是针对严重疾病和死亡提供持久保护。”亨斯利表示。在开发了新冠疫苗后，目前疫苗厂商都在致力于开发通用流感疫苗。美国疫苗厂商Moderna和辉瑞都在后期人体试验中测试mRNA流感疫苗；葛兰素史克（GSK）和合作伙伴德国CureVac公司也正在人体早期安全试验中测试mRNA流感疫苗；赛诺菲去年以32亿美元收购了mRNA科技公司Translate Bio，从而加大对mRNA技术的布局，该公司也在测试mRNA流感疫苗，流感疫苗业务为赛诺菲贡献了最大的收入，占其总销售额的约一半；澳大利亚CSL公司旗下流感疫苗制造商Seqirus公司也正在研究下一代低剂量的mRNA流感疫苗，采用自扩增RNA技术。mRNA技术被视为是下一代具有重大前景的生物技术。生物基金公司Loncar Investments创始人布拉德隆卡（Brad Loncar）对第一财经记者表示：“现在看来mRNA疫苗技术可能会成为一个强劲的转化平台，不仅仅是这次新冠疫苗的研发，未来很多药物都会需要这种创新技术的引领。”不过，疫苗针对未知病毒的有效性以及监管仍然是一大挑战。加拿大萨斯喀彻温大学的艾莉森·凯尔文（Alyson Kelvin）和达里尔·法尔扎拉诺（Darryl Falzarano）在上述研究发表的评论中写道：“关于如何判断疫苗针对目前尚未传播但未来可能流行的病毒的功效和潜在的监管要求仍然是个问题。”识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。