Hangzhou Institute for Advanced Study, UCAS

糖尿病足溃疡（DFU）是糖尿病高危慢性并发症，患病率高、截肢风险大，给患者及医疗系统带来沉重负担。创面长期不愈源于缺血、神经病变、持续炎症与氧化应激等复杂病理微环境，传统对症治疗难以解决根本问题，复发率居高不下。干细胞再生疗法可多途径调控创面微环境，而干细胞外泌体等无细胞策略进一步降低活细胞应用的安全风险，为难愈性 DFU 修复提供新思路。 干细胞修复 DFU 的作用机制 与主要细胞类型 干细胞治疗依托多通路协同调控创面微环境，核心机制包含四点：调控巨噬细胞向 M2 修复表型极化、抑制过度炎症；分泌 VEGF、FGF 等因子激活 PI3K/AKT 等通路，促进新生血管生成；激活 Nrf2 通路、释放抗氧化酶，清除活性氧，减轻氧化损伤与细胞凋亡；调控 TGF-β/SMAD 通路，促进成纤维细胞增殖、胶原沉积与细胞外基质重塑。 目前研究主流干细胞各有优劣：脂肪来源干细胞（ADSCs）取材简便、产量高，适合自体应用；骨髓间充质干细胞（BM-MSCs）研究时间最长，临床数据积累充分，但取材具有侵入性，细胞活性受供体年龄、糖尿病自身微环境影响；脐带血间充质干细胞（UCB-MSCs）免疫原性低，适合异体现成制剂，但是资源有限、扩增难度高；诱导多能干细胞（iPSCs）分化谱系广、可个性化制备，存在基因组稳定性、致瘤风险与制备成本高的短板。 干细胞衰老介导不同类型 骨骼退行性病变 干细胞的修复效应很大程度来自旁分泌作用，由此推动了以外泌体为代表的无细胞疗法发展。干细胞外泌体是 30–150 nm 的细胞外囊泡，携带蛋白质、mRNA、miRNA，复刻干细胞修复功能，规避活细胞移植带来的免疫排斥、致瘤风险等安全隐患，可同步抗炎、促血管生成、抗氧化、促进再上皮化。 游离外泌体在体内清除快、半衰期短，现有研究将外泌体负载于水凝胶、纳米纤维支架等生物材料，构建响应型递送系统，实现局部长效缓释、靶向调控创面微环境。此外，干细胞 / 外泌体联合低强度激光、纳米载体、富血小板基质等方案，能够进一步提升细胞留存率与修复效能，是当前转化研究的热点方向。 转化瓶颈与未来研究方向 尽管临床前与部分早期临床试验结果积极，该领域距离常规临床应用仍存在多重障碍：细胞与外泌体制备流程、质控标准尚未完全统一；创面高糖缺氧微环境造成移植细胞存活率偏低；iPSCs 存在基因组不稳定风险；不同研究的给药剂量、给药方式、随访方案差异大，患者个体异质性也会影响疗效。同时长期安全性、复发控制、卫生经济学证据仍有待大型多中心试验验证。 后续研究重点将围绕标准化生产体系建立、递送平台优化，持续推进外泌体等无细胞产品开发，统一临床研究终点与随访方案，逐步建立适配糖尿病足创面的再生治疗方案，推动再生技术安全、规范地融入慢性创面管理体系。 结语 干细胞及其衍生外泌体为糖尿病足溃疡的修复开辟了再生医学新方向，依靠多靶点调控优势弥补了传统创面治疗的局限。不同来源干细胞、外泌体复合生物材料体系各有适用场景，不存在单一最优方案。 关于安理新北科 安理新北科（Anli New Beike）坐落于安徽省淮南市国家级高新技术产业开发区——安徽理工大学科技园，由深圳北科生物、安徽理工大学精准医学创新研究院和国科大杭州高等研究院共同组建。 公司以推动科技成果转化、护佑人类生命健康为使命，恪守“质量为本、诚信为先、创新为魂、服务至上”的核心理念。聚焦于尘肺病干细胞药物研发、多谱系细胞资源储存、精准细胞应用、生物活性美容、类器官体外药敏筛选、高通量基因检测及基因导向的精准医疗等核心业务领域，矢志成为生物医学领域的世界一流领军企业。 详情咨询电话:400-6780-126 地址:安徽省淮南市山南新区泰宁大街双创中心 免责声明 1.本文旨在分享科普知识，进行学术交流，或传递行业前沿进展，不作为官方立场，不构成任何价值判断，不作为相关医疗指导或用药建议，无任何广告目的，非进行产品贩卖，仅供读者参考。 2.如文章内容涉及版权或其他问题，请及时跟本公众号联系，我们将在第一时间处理。

📮 开卷先立个"科研互助牌"：本号只做一件事——把顶刊论文拆成你能直接用的"作战地图"。如果你手头也压着一篇啃不动的论文，关注我、把题目私信发来，我把它按背景-证据-机制-缺口四层剥开，给你一份带可开题方向的定制精读。数据越挖越值钱，时间越等越贬值——别人发一篇的功夫，你阅读的深度已经领先一个身位。 📜 开篇顺口溜｜先押韵后拆解 肺分气道与肺泡，各修各的是老道； 细支气管道一坏，免疫聚堆把旗摇； SPP1 做导航，ITGB1 收信号； 纤毛递出 JAG1，Notch 开关拧一拧； Cldn4 中转站，肺泡干细胞换新袍； 跨区救援立功了，慢阻肺里找新药。 所有人都默认：肺泡和气道，泾渭分明、各管各的。这篇 Nature 证明了那条看不见的边界是可以被"紧急征用"的——细支气管受损失修时，隔壁肺泡里的 AT2 干细胞会翻越解剖边境，落地、变身、上岗，直接顶上气道维修的主力位。 In one sentence: Using dual-recombinase genetic lineage tracing, this study provides the first in vivo genetic evidence that alveolar type II (AT2) stem cells cross anatomical boundaries after bronchiolar injury: infiltrating immune cells secrete SPP1 to form a chemoattractant gradient that is sensed by integrin ITGB1 on adjacent AT2 cells to direct their migration; upon arrival, ciliated cells deliver Notch ligand JAG1 to activate NOTCH2 signaling, driving an intermediate CLDN4⁺ state and terminal transdifferentiation into club and ciliated cells that rebuild the airway epithelium. 🔎 关键词：AT2 肺泡干细胞 ｜ SPP1（骨桥蛋白）｜ ITGB1 ｜ JAG1–NOTCH2 ｜ CLDN4⁺ 中间态 ｜ 谱系示踪 2.0 Keywords: bronchiolar regeneration · transdifferentiation · chemoattractant gradient · lineage tracing · COPD👥 手记主角：研究团队名片 通讯作者：周斌，中科院分子细胞科学卓越创新中心研究员、国科大杭高院生命学院首席教授——国内"谱系示踪"领域公认旗手，新基石研究员、国家杰青，今年已连发 Cell、Science、Nature。 共同第一作者：刘扩（杭高院特聘研究员，国家优青 B 类）、刘子鑫、孟鑫凤、唐慕雪。 单位：国科大杭州高等研究院（第一完成单位）＋分子细胞卓越中心＋上海科技大学＋上海胸科医院。 一句话点评：一个把"谁变成了谁"这件事做到极致的团队——先造工具（双重组酶示踪），再翻旧案（AT2 到底会不会跨界），逻辑闭环严丝合缝。🧬 元件清单：先认识这九位「分子零件」 分子 身份 本篇戏份SFTPC （基因 ID 219741） AT2 细胞标志蛋白（表面活性物质相关） 主角"身份证"，示踪系统的起点SPP1 / Osteopontin （基因 ID 6696） 分泌型磷酸化糖蛋白，骨桥蛋白导航员 ：免疫细胞分泌，形成趋化梯度ITGB1 （基因 ID 3688） β1 整合素，ECM 受体天线 ：AT2 细胞靠它感知 SPP1；敲除即迷路JAG1 （基因 ID 182） Notch 配体 Jagged1变身令 ：纤毛细胞递出的第一声口令NOTCH2 （基因 ID 4853）/ RBPJ Notch 受体与核内效应器 命运开关的"电路与保险丝"CLDN4 （基因 ID 1364） 紧密连接蛋白 claudin-4中转站 ：身份切换的中间态路标SCGB1A1 （基因 ID 742） Club 细胞分泌蛋白 CC16 目的地"工牌"：变身完成的证明FOXJ1 （基因 ID 2296） 纤毛转录因子 纤毛细胞路线的"另一张工牌" （分子信息可交叉验证：NCBI Gene[1] · UniProt[2] · GeneCards[3]）🧭 NOTEBOOK_01｜破案工具：先给 AT2 细胞"验明正身" 老工具 Sftpc-CreER 有个致命弱点：它分不清 AT2 细胞和支气管肺泡干细胞（BASC）——两个都带 Sftpc 标签，等于把嫌疑人和路人一起铐走了。这正是"AT2 能不能跨界"吵了多年的原因。 团队这次上了双重组酶（Cre-loxP ＋ Dre-rox）交叉/嵌套示踪，五种互补方案互相校验，先把 club 细胞与 BASC 从画面里精准移除，只留纯 AT2 谱系发荧光。结果：萘损伤等模型里，AT2 后代出现在细支气管区域的覆盖率超过一半（部分体系定量达 77%），成为气道修复的最大单一细胞来源。 🛰️ NOTEBOOK_02｜导航篇：免疫细胞放的"信号弹" AT2 怎么知道该往哪走？空间转录组显示损伤后支气管周围免疫浸润增加约 3 倍，免疫荧光证实 CD45⁺ 免疫细胞高表达 SPP1，形成由气道向外递减的浓度梯度——一张现成的"化学导航地图"。 两层体内验证把链条钉死：药理阻断 SPP1，迁移显著受抑；AT2 特异性敲除 Itgb1，细胞集体"失明"，细支气管壁增厚、小气道通气功能受损。SPP1–ITGB1 就是这条救援通道的 GPS。 🔑 NOTEBOOK_03｜变身篇：JAG1–Notch2 拧动命运开关 抵达现场只是第一步——换了街区，还得换工牌。残存纤毛细胞通过表面 JAG1 与 AT2 细胞的 Notch 受体握手，激活 NOTCH2–RBPJ 级联：抑制 Notch，转分化直接卡壳；过度激活，变身明显提速。中间要经过一道 CLDN4⁺ 过渡态（对再生群体贡献约 62%），最终长成能分泌、能再分化、连纤毛都能长的成熟 club 细胞——功能与内源气道细胞看齐，表观遗传层面完成稳定重编程。 🗺️ 核心机制路线图：一条带"放大环"与"自限环"的跨区救援线 读图要点：① 损伤触发免疫浸润与 SPP1 梯度 → ② ITGB1 介导 AT2 定向迁移 → ③ JAG1–NOTCH2 驱动 CLDN4⁺ 中间态与 club/纤毛分化。放大环：损伤不愈，SPP1 持续招兵；自限环：上皮重建后梯度消散、救援收工。临床悬念在右下角——慢阻肺患者的这条轴，是坏了还是被纤维化按住了？ 💻 R 语言复刻：一张「谱系贡献 × 迁移救援」手记风双联图 只放绘图与主题部分（约 60 行）。完整脚本还含五种示踪体系的贡献率汇总、SPP1/Itgb1 敲除统计标注与森林图输出——关注本号并留言「跨区救援代码」，我把全套（含示例数据与逐行注释）打包私发。 # ─────────────────────────────────────────────────────────────────# AT2 跨区救援 · 手记风双联图（酒红 + 米白 + 墨蓝金）# 左：AT2 谱系对再生 club 细胞的贡献率  右：迁移救援的三种干预# ─────────────────────────────────────────────────────────────────library(tidyverse); library(patchwork); library(showtext)font_add("noto", "/usr/share/fonts/opentype/noto/NotoSansCJK-Regular.ttc"); showtext_auto()CREAM <- "#f3ead8"; INK <- "#1c2b3a"; WINE <- "#a03040"; GOLD <- "#c9a86a"; FG <- "#f7f1e3"theme_nb <- function() {  theme_minimal(base_size = 13, base_family = "noto") +    theme(      plot.background  = element_rect(fill = INK, colour = NA),      panel.background = element_rect(fill = INK, colour = NA),      panel.grid.major = element_line(colour = "#2c3f52", linewidth = .35),      axis.text  = element_text(colour = "#9db0c2"),      axis.title = element_text(colour = FG, face = "bold"),      plot.title = element_text(colour = GOLD, face = "bold", size = 15,                                margin = margin(b = 8)),      legend.position = "none")}# ① 各示踪体系下 AT2 对再生 club 细胞的贡献率（%）trace <- tribble(  ~sys, ~pct,  "AT2-tracer1", 77.4,  "AT2-tracer2", 42.9,  "AT2-tracer3", 52.4,  "CLDN4 中间态", 62.1)p1 <- ggplot(trace, aes(reorder(sys, pct), pct)) +  geom_col(aes(fill = pct), width = .62) +  geom_text(aes(label = paste0(pct, "%")), hjust = -.15,            colour = CREAM, size = 4.6, fontface = "bold", family = "noto") +  coord_flip() + scale_y_continuous(expand = c(0, .02), limits = c(0, 92)) +  scale_fill_gradient(low = WINE, high = GOLD) +  labs(title = "NOTEBOOK_01 · 谁在修气道",       subtitle = "五种双重组酶示踪体系：AT2 谱系对再生 club 细胞的贡献率",       x = NULL, y = "贡献率 (%)")# ② 迁移覆盖率：对照 / SPP1 抑制 / Itgb1 敲除（示意）migr <- tribble(  ~grp, ~lo, ~hi, ~mid,  "Vehicle 对照", 38, 62, 50,  "SPP1 抑制", 14, 30, 21,  "Itgb1 敲除", 9, 24, 15) |>  mutate(grp = fct_reorder(grp, mid))p2 <- ggplot(migr, aes(grp, mid)) +  geom_linerange(aes(ymin = lo, ymax = hi), colour = GOLD, linewidth = 7, alpha = .25) +  geom_linerange(aes(ymin = lo, ymax = hi), colour = GOLD, linewidth = 1.4) +  geom_point(size = 5, colour = CREAM) +  geom_hline(yintercept = 50, colour = "#3d5570", linetype = "dashed") +  labs(title = "NOTEBOOK_02 · 拆掉导航会迷路",       subtitle = "AT2 后代在细支气管的覆盖率 (%)：药物与基因两路验证",       x = NULL, y = "覆盖率 (%)")(p1 | p2) + plot_annotation(  title = "肺泡干细胞的跨区救援：找到路，才配变身",  theme = theme(plot.background = element_rect(fill = INK, colour = NA),                plot.title = element_text(colour = FG, size = 19, face = "bold", hjust = .5)))ggsave("fig_AT2_rescue.png", width = 13, height = 5.4, dpi = 320, bg = INK) ⚙️ 可复用的技术点：fct_reorder() 让条形/区间图自动按中位数排序，讲故事时"高→低"一眼分明；"粗半透明区间 + 细实线"叠层是暗底图上做"发光感"的老配方；贡献率图用 scale_fill_gradient 把数值映射进颜色，省掉一张图例。 🌍 同一片战场：国内外还在谁家做"肺再生"？ 国外 · 肺上皮可塑性与气道再生 机构 主要学者 方向 Duke 大学Brigid Hogan  / Purushothama Rao Tata 肺干细胞生物学开山系；Tata 组聚焦 AT2-成纤维细胞串扰与 IPF/肺气肿的"再生失衡" UPennEdward Morrisey AT1→AT2 转分化、机械力与 KLF5/CDC42 调控，肺再生信号网络权威 剑桥大学 Gurdon 研究所Emma Rawlins 低氧调控人 AT2 命运切换，发育-再生对照视角 剑桥 Wellcome-MRCJoo-Hyeon Lee club 细胞亚群与体内谱系示踪 Harvard / DFCICarla Kim 肺干细胞微环境与线粒体调控 UCSF / Cedars-SinaiJason Rock  / Barry Stripp 气道上皮损伤修复与神经内分泌细胞 国内 · 强相关团队 中科院分子细胞卓越中心 / 国科大杭高院 · 周斌团队（本文）：谱系示踪工具链＋肺再生"司法鉴定中心"，隋鹏飞研究员深度参与本文。 北京生命科学研究所 · 汤楠团队：肺泡再生与免疫微环境，与本文免疫-SPP1 轴高度互补。 上海胸科医院 · 李锋主任（本文合作者）：气道疾病临床资源与转化接口。 中日友好医院 · 代华平团队等：慢阻肺大型队列，是未来"这条轴在人体上灵不灵"的验证场。 💡 选题提示：把"免疫 SPP1 梯度—上皮整合素感知"的框架平移到鼻黏膜、胆管、输尿管等其他"双区器官"，或用空间转录组在 COPD/支气管扩张人肺里找 SPP1⁺ 浸润格局，都是低成本高辨识度的切入位。 💰 产业与资本：气道修复赛道的钱正在换赛道 ① 慢阻肺新药：从"三联吸入"跳到"新机制" 默沙东以 约 100 亿美元收购 Verona Pharma，其吸入 PDE3/4 抑制剂 Ohtuvayre（ensifentrine） 20 余年来首个 COPD 新机制药物，2026 上半年营收 3.35 亿美元，仍在放量早期。 中国生物制药（01177.HK）TQC3721：国产进度第一的吸入 PDE3/4，2026-10-08 宣布 III 期完成全部入组；7 月授权阿斯利康出海——2 亿美元首付、总额最高 19 亿美元。 恒瑞医药（600276.SH）HRS-9821：与 GSK 达成 首付 5 亿美元、总额约 120 亿美元 的 BD；海思科（002653.SZ）HSK39004 已授权出海。 生物制剂线：正大天晴 TQC2731（TSLP，III 期）、健康元（600380.SH）QX008N（TSLP，II 期）、三生国健（688336.SH）SSGJ-611（IL-4R）、迈威生物（688062.SH）9MW1911（ST2）、康诺亚（2162.HK）CM512 已 BD 出海。 ② 肺纤维化与"再生调控"：下一个估值高地 United Therapeutics（NASDAQ: UTHR） 宣布从肺高压全面转向肺纤维化，Tyvaso IPF 的 NDA 已获 FDA 受理（PDUFA 2027-04-26），管理层称 TETON 数据是"30 年来肺纤维化最好结果"。 中国生物制药 TDI01（ROCK2 抑制剂）在 IPF 的中国 III 期推进中——免疫调节＋逆转纤维化的"双重机制"叙事与本文"再生微环境"高度同频。 单细胞研究反复点名 SPP1⁺TREM2⁺ 促纤维化巨噬细胞为跨器官纤维化的公共靶点，SPP1/骨桥蛋白轴的靶向工具（抗体、小分子、递送）仍是全球性空白——本文恰好证明它在再生侧是"油门"而非"刹车"，双向成药空间值得盯。 ⚠️ 反向思考：慢阻肺产业烧钱二十年只换来"减慢加重"，而本文提示第三条路——给损伤气道"调细胞"而不是"调药物"。谁能做出靶向 SPP1 梯度或 Notch 激动的吸入式递送，谁就有机会定义"气道再生疗法"这个品类。 🔬 给临床科研人的可操作启发 换视角：慢阻肺急性加重反复住院的患者，支气管黏膜 SPP1⁺ 免疫细胞密度与 CLDN4⁺ 中间态比例，可能是"再生力储备"的新型内镜活检读数。 换模型：没有遗传工具？用人 PDX/类器官 + SPP1 梯度微流控即可低成本复现"迁移-变身"两步，临床医生也能上手。 换读数：评价气道修复别只盯 FEV₁，把 club 细胞成熟度（SCGB1A1⁺/FOXJ1⁺ 共染） 作为再生终点纳入 trial design。 可开题的方向： • COPD vs 哮喘 vs 支气管扩张的支气管黏膜 SPP1-ITGB1 轴空间图谱（空间转录组＋多色免疫荧光）； • 吸入糖皮质激素是否"按住"这条救援轴——药物暴露与再生迟滞的回顾性队列； • 肺移植供肺/受肺中 SPP1 梯度与缺血再灌气道修复的关联研究； • 与汤楠组"免疫-肺泡再生"框架合流，做 跨区再生需求的免疫状态分层。🖇️ 手记合上之前 一百年来，肺的教科书把气道和肺泡画成两个世界。这篇 Nature 把中间那道虚线擦掉了：救援不是同区细胞的自嗨，而是一场由免疫细胞放信号弹、干细胞循光而行的跨区联合作战。对临床科研人，这意味着一个从没被测量过的变量（再生微环境）；对产业界，这意味着一个还没人占住的名字（气道再生疗法）。 📎 本篇手记完，但你的那篇还没拆。把卡了壳的论文标题私信发过来，我从数据海洋里替你把信号从噪声里捞出来——证据链、方法学、可开题缺口一次理顺，让你省下的时间都花在实验台前：别人还在让 AI 群聊里刷摘要，你的标书创新点已经写完了。 觉得有用就 点赞、点"推荐"、转发 给科里的小伙伴，顺手分享/在看，这是我熬夜写手记的全部燃料。⚡ 📬 下期预告：换一个疾病大类（照旧不剧透），继续一张海报读薄一篇顶刊。 参考文献：Liu K#, Liu Z#, Meng X#, Tang M#, et al. Alveolar stem cells transdifferentiate to drive bronchiolar regeneration. Nature. 2026 Oct 7. DOI: 10.1038/s41586-026-11127-w. 图片来源：AI医数自制信息图；人物照片来自中国科学院分子细胞科学卓越创新中心官网与国科大杭州高等研究院官网公开资料。引用链接 [1]NCBI Gene: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene [2]UniProt: https://www.uniprot.org [3]GeneCards: https://www.genecards.org

来自深圳三院、深圳理工大学、国科大杭州高等研究院和复旦大学的联合研究团队共同合作完成了猴痘病毒中和抗体的筛选、功能表征与结构研究工作，研究成果于近期发表于MedComm杂志。 一、引言 猴痘病毒（mpox virus，MPXV）隶属于痘病毒科正痘病毒属。2022 年 IIb 分支、2024 年 Ib 分支毒株相继引发全球猴痘暴发，世界卫生组织两年内两度将其列为国际关注的突发公共卫生事件。截至 2025 年 11 月 30 日，全球 142 个国家和地区累计报告 175415 例确诊病例、467 例死亡病例，该病毒对免疫功能低下人群可造成重症感染，公共卫生风险突出。 现有猴痘防控手段存在显著局限，ACAM2000、JYNNEOS 等天花类疫苗存在不良反应，不适用于脆弱人群；已获批抗痘病毒药物替考韦马特对 I 分支 MPXV 感染的疗效有限；目前尚无猴痘特异性单克隆抗体进入临床试验。 MPXV 存在细胞成熟病毒（IMV）、细胞外囊膜病毒（EEV）两种感染颗粒，其中 EEV 是介导病毒在宿主体内细胞间扩散的关键形式，其表面 A35R 蛋白是理想免疫靶点。既往研究发现，数十年前接种天花疫苗人群体内仍可检测到长效 A35R 结合抗体，提示该抗原可诱导持久免疫记忆。但猴痘 A35R 与牛痘病毒 A33R 存在序列差异，会造成抗体交叉识别失效，且现有 A35R 靶向抗体的精准表位与中和分子机制尚不明确。传统杂交瘤筛选、康复者血清分离抗体技术流程冗长、效率偏低。本研究依托 mRNA-LNP 免疫联合 Beacon®单细胞光导平台快速筛选靶向 A35R 蛋白的单克隆抗体，从中筛选最优克隆 17H1，从体外结合能力、体外中和活性、体内保护效力、冷冻电镜复合物结构四个维度系统解析其抗病毒分子基础，为猴痘被动免疫治疗提供候选分子。 二、研究结果 （一）Beacon®筛选靶向A35R的单抗 采用间隔 3 周的免疫程序，对 BALB/c 小鼠肌肉注射 5 μg A35R-Fc mRNA-LNP 完成初免与加强免疫；加强免疫后筛选血清抗体滴度高于 10⁶的小鼠，于三免 5 天后分离脾脏细胞。通过磁珠负选富集总 B 细胞、正选获得 CD138⁺抗体分泌浆细胞，利用 Beacon®单细胞光导平台完成抗原特异性B细胞筛选。扩增抗体轻重链可变区（VH/VL）基因，将鼠源可变区与人 IgG1 恒定区载体重组，转染 HEK293F 细胞表达纯化，最终获得 5 株特异性单抗：1H4、3H3、3H6、13H1、17H1。 图1：基于Beacon®单细胞光导平台的A35R特异性单抗筛选流程。 基因测序结果显示 5 株抗体重链均由 IGHV1 胚系基因编码；17H1 轻链胚系基因为 IGKV14。各抗体轻重链体细胞超突变频率适中，HCDR3 长度区间为 8–19 个氨基酸，κ 链 CDR3 均为 9 个氨基酸，符合功能性中和抗体特征。流式细胞术检测证实 5 株抗体均可特异性识别 HEK293T 细胞表面全长 A35R 蛋白；其中 17H1 细胞结合阳性比例显著高于其余 4 株抗体以及商业化阳性对照抗体。 （二）体外功能验证：17H1 具备高亲和力与补体依赖性强效中和活性 ELISA 检测显示 5 株抗体结合 A35R 的 EC₅₀介于 2.82~8.26 ng/mL。表面等离子共振（SPR）动力学检测证实 17H1 平衡解离常数 KD仅 0.09 nM，达到皮摩尔级超高亲和力，优于其余 4 株抗体及已报道交叉中和抗体 A27D7（KD=2.31 nM）。竞争 SPR 实验表明 17H1 与 A27D7 识别表位存在部分重叠，但 17H1 结合能力更强。 图2：采用ELISA和SPR测定5株单抗与A35R蛋白的结合能力。 采用病灶减少中和试验（FRNT）以活 MPXV 开展中和检测。补体存在条件下，17H1 中和半数病毒的 IC₅₀为 259.3 ng/mL，中和效力为 5 株抗体最优；缺失补体时，全部抗体在 10 μg/mL 最高测试浓度下均无中和效果，证实 EEV 靶向抗体的中和功能严格依赖补体通路。 （三）致死 MPXV 攻毒小鼠模型证实 17H1 兼具预防、治疗完全保护作用 构建鼻内致死剂量 MPXV 感染 BALB/c 小鼠模型，分别评价 17H1 的预防与治疗效力。 攻毒前 24 h 腹腔注射 1 mg/kg 17H1，同型 IgG 为空白对照。14 天观察周期内 17H1 组小鼠存活率 100；对照组小鼠 6 天内全部达到人道终点（体重下降超 25%）。感染第 5 天肺组织病毒载量检测显示，17H1 组病毒 DNA 载量（7.94 log₁₀）较对照组（10.79 log₁₀）显著降低，肺部组织病理损伤明显减轻。 图3：17H1 抗体对MPXV感染的预防保护效力。 小鼠鼻内攻毒 24 h 后腹腔注射 5 mg/kg 17H1 干预。17H1 处理组小鼠全程体重稳定、100% 存活；IgG 对照组全部于第 6 天死亡。肺组织定量 PCR 结果显示，17H1 可将肺部病毒载量降低超 1000 倍，肺组织炎症、坏死病理改变大幅缓解。 图4：17H1 抗体对MPXV感染的治疗效力。 体内实验证明，单独使用 17H1 即可完全抵御致死剂量 MPXV 感染，显著抑制肺部病毒复制与组织病变。 （四）冷冻电镜解析 17H1-A35R 复合物独特中和结构机制 本研究解析分辨率 3.63 Å 的 MPXV A35R 胞外域-17H1 Fab 复合物冷冻电镜结构，阐明强效中和的分子机制。 A35R 天然以同源二聚体形式存在，单体包含 3 段 α 螺旋、3 条 β 折叠；其核心保守区（99–181 位氨基酸）与牛痘 A33R 高度同源，二者 Cα RMSD 仅 0.7 Å；蛋白 N 端 57–98 位柔性区域无稳定电子密度，结构高度可变。 一分子 A35R 二聚体可结合两分子 17H1 Fab 片段，Fab 与二聚体平面夹角约 20°，靶向二聚体远端构象表位，区别于既往结合二聚体中央凹槽的抗体。 图5：结合 17H1 Fab的猴痘病毒 A35R 蛋白冷冻电镜结构。 抗原-抗体界面相互作用以重链为主，重链埋藏表面积 498 Ų，轻链埋藏表面积 289 Ų。核心相互作用为 17H1 CDRH3 的 R9 残基与 A35R 关键残基 E120 形成 3 组盐桥，同时搭配多条氢键、疏水作用共同稳定复合物；该表位为构象依赖型，不同于已报道线性 A35R 表位抗体。 序列保守性分析显示 Ib、Ia、IIb、IIa 四类主流 MPXV 分支的 A35R 同源性＞98%，E120 关键位点完全保守，提示 17H1 对当前流行毒株具备广谱交叉中和潜力。 三、讨论与结语 全球猴痘持续人传人流行，现有疫苗与药物存在适用人群、疗效短板。EEV表面A35R蛋白是极具开发价值的抗病毒靶点，但此前缺少亲和力高、中和机制清晰的治疗性单抗。本研究搭建 mRNA-LNP 免疫联合Beacon®单细胞光导平台的快速高通量抗体发现实验流程，克服传统杂交瘤筛选周期长、重组蛋白免疫原性不足的缺陷，快速获得多株功能性中和抗体，其中 17H1 综合性能最优。 体内动物实验证实，单一17H1给药即可实现致死MPXV攻毒小鼠完全防护，无需联用靶向IMV的抗体，同时具备暴露前预防、暴露后治疗双重应用前景。冷冻电镜结构揭示 17H1识别二聚体远端全新构象表位，依靠E120介导多重分子相互作用实现超高亲和力，从结构层面解释其强效中和能力。A35R在各MPXV谱系高度保守，预示17H1可覆盖当前主流流行分支Ib、IIb毒株。 综上，本研究筛选得到的17H1是靶向MPXV A35R蛋白极具潜力的候选治疗性中和抗体。解析的抗原-抗体精细复合物结构，为广谱抗猴痘病毒单抗的改造、新型疫苗抗原设计提供关键结构依据，为全球猴痘疫情防控提供全新被动免疫干预思路。 参考文献 S. Bai, S. Song, X. Wang, et al. “Discovery and Structural Characterization of a Highly Protective Neutralizing Antibody Targeting the Mpox Virus A35R Protein.” MedComm 7, no. 7 (2026): e70804. https://doi.org/10.1002/mco2.70804 上海玮驰深耕生命科学与制药领域，和Bio-Rad、瑞孚迪、Repligen、Bruker、赛桥、CBS、基点等多品牌达成战略合作，服务全球生物制药客户。公司获ISO9001、ISO14001、ISO45001质量体系认证，具有先进技术生产力的产品，完善的售前售后体系，资质齐全的专业服务团队，强大的供应链和物流保障，满足多样化需求，助力客户革新升级。