Bcl-2

据 Insight 数据库统计，本周（9 月 15 日—9 月 21 日）全球共有 72 款创新药（含改良新）研发进度推进到了新阶段，其中 3 款申报上市，3 款进入 III 期临床，16 款获批临床，5 款申报临床。 下文，Insight 将分别摘取国内外部分重点项目做介绍。 境外创新药进展 境外部分，本周有多款新药/新适应症新获批准。ESMO 临床结果仍在持续释放，详见 Insight 前几日新鲜报道，而周报将聚焦于 ESMO 之外不容错过的重要研发进展和临床结果，为读者做分享和补充。    获批上市 据 Insight 数据库显示，本周强生制药的重磅双抗新药埃万妥单抗（Amivantamab）新适应症又在美国新获一项批准，用于 NSCLC 二线。K 药帕博利珠单抗又有一项适应症拓展，一线治疗胸膜间皮瘤。诺华 CDK4/6 抑制剂瑞波西利获得了辅助治疗重磅适应症监管批准，这将帮助他们在 CDK 赛道继续攻城略地。 此外，阿斯利康的 IL-5R 单抗本瑞利珠单抗新获批一项适应症、Bavarian Nordic 也有一款疫苗在欧洲获批，详细信息如下： 截图来自：Insight 数据库网页版 1、诺华：CDK4/6 抑制剂「瑞波西利」获批新适应症，乳腺癌辅助治疗 9 月 17 日，诺华宣布，CDK4/6 抑制剂瑞波西利（Kisqali）新适应症获 FDA 批准，用于早期 HR+/HER2- 乳腺癌辅助治疗。 截图来自：企业官网 瑞波西利（也称利柏西利）是全球第 2 款获批上市的 CDK4/6 抑制剂。首款是辉瑞的哌柏西利，在 2021 年达到了 54.37 亿美元的峰值销售额，占据了该靶点 70% 的市场份额；而紧随其后的瑞波西利和阿贝西利也不容小觑，正在高速增长，不断蚕食其市场份额。礼来的阿贝西利涨势更是惊人，在 2023 年度已经达到 38.63 亿美元销售额，而其高速增长的关键之一正是得益于辅助治疗适应症的率先攻破。本次诺华终于获批辅助治疗，增长潜力可想而知。 诺华此前在 2023 ASCO 上披露了瑞波西利联合非甾体芳香化酶抑制剂治疗 HR+/HER2- 早期乳腺癌患者辅助治疗的 III 期 NATALEE 研究结果。数据显示，瑞波西利 + 非甾体芳香化酶抑制剂（NSAI）治疗比单用 NSAI 在无侵袭性疾病生存率（iDFS）方面有显著优势（HR=0.748；95% CI，0.618-0.906；P =0.0014）。 而在 2023 SABCS 会上，诺华又披露了最新 iDFS 数据。截止 2023 年 07 月 21 日，瑞波西利（RIB）+非甾体芳香化酶抑制剂（NSAI）组的 2549 例患者中，2.8% 完成了 3 年 RIB 治疗，35.5% 提前停用 RIB 或 RIB+NSAI，20.7% 仍在使用 RIB。NSAI 组 68.5% 继续接受治疗。 结果显示，中位随访时间 33.3 个月，与单独 NSAI 治疗相比，RIB+NSAI 可显著降低 25.1% 的疾病复发风险（HR=0.749；95%CI：0.628-0.892；p=0.0006；RIB+NSAI 组、NSAI 组 3 年的 iDFS 率分别为 90.7% 和87.6%；且在所有次要疗效终点上的数据也是一致的，包括无远处转移生存期（DDFS）风险降低 25.1% 以及无复发生存期（RFS）风险降低 27.3%。安全性方面，未观察到新的安全信号。 2、强生：埃万妥单抗又一项新适应症获批 9 月 19 日，强生宣布，FDA 已批准其 EGFR/c-Met 双抗埃万妥单抗（Amivantamab，RYBREVANT®）与标准化疗的联合治疗方案，用于治疗 EGFR 外显子 19 缺失或 L858R 替代突变的 EGFR-TKI 治疗期间或进展的局部晚期或转移性 NSCLC 成人患者。 这一联用组合此前因头对头「狙击」阿斯利康的重磅炸弹奥希替尼而引起广泛关注，今年 8 月 20 日该药刚刚获 FDA 批准联用三代 EGFR-TKI 作为 EGFRm NSCLC 的一线治疗方案，而本次获批的是奥希替尼后线治疗，对此类肺癌的覆盖变得更加全面。 截图来自：强生制药官网 本次新适应症的获批是基于 MARIPOSA-2 研究（NCT04988295），这是一项埃万妥单抗（Rybrevant/Amivantamab）联合化疗治疗奥希替尼耐药后的 NSCLC 患者的 III 期试验，研究达到双重主要终点，这是首个对奥希替尼后线治疗带来具有临床意义 PFS 改善的 III 期研究。结果显示，相较于单独化疗，联合疗法降低了 52% 的疾病进展或死亡风险，这是该项试验的主要终点。PFS 分别为 6.3 个月 vs. 4.2 个月。联合疗法组的 ORR 为 53%，而单独化疗仅为 29%。 据 Insight 数据库显示，埃万妥单抗目前已经陆续在欧美获批上市多项适应症，仅仅今年，这就已经是 FDA 批准的第 3 项适应症，对于 EGFRm NSCLC 赛道可以说是全面包抄。而在中国，强生也已经提交了 3 项上市申请。    即将获批 1、复宏汉霖：PD-1 斯鲁利单抗获欧盟 CHMP 积极意见，近期有望获批 9 月 20 日，复宏汉霖宣布，欧洲药品管理局（EMA）人用药品委员会（CHMP）已发布推荐该公司自主开发的抗 PD-1 单抗 H 药 汉斯状®（斯鲁利单抗）获得上市许可的积极意见，建议批准其用于一线治疗广泛期小细胞肺癌（ES-SCLC）适应症。2022 年 12 月，H 药治疗 SCLC 获得欧盟委员会（EC）授予的孤儿药资格认定，并于 2023 年 3 月获 EMA 受理 H 药用于治疗 SCLC 的欧盟上市许可申请（MAA）。 2023 年，复宏汉霖与 Intas 达成合作，授权其 H 药在欧洲和印度共 50 多个国家的独家开发和商业化权益。此次获 CHMP 积极意见，标志着 H 药距离在欧洲实现更广泛的可及性更近一步。 此次 H 药获欧盟上市积极意见主要基于 ASTRUM-005 研究，ASTRUM-005 研究是一项随机、双盲、安慰剂对照的国际多中心 III 期研究，旨在评估斯鲁利单抗联合化疗对比安慰剂联合化疗用于 ES-SCLC 一线治疗的疗效和安全性。该试验在中国、欧盟波兰、土耳其、格鲁吉亚等多个国家共开设 128 个试验中心，入组 585 例受试者，其中约 31.5% 为白人。 ASTRUM-005 临床试验结果于 2022 年美国临床肿瘤学会（ASCO）年会以口头报告方式首次发布，并于全球四大顶级医学期刊之一的《美国医学会杂志》（JAMA）发表，成为全球首个登上 JAMA 主刊的 SCLC 免疫治疗临床研究。基于 ASTRUM-005 研究，H 药已在中国和东南亚多国获批用于一线治疗 ES-SCLC，成为全球首个获批一线治疗小细胞肺癌的抗 PD-1 单抗。 H 药的全球化步伐正不断加速，截至目前，该产品已在中国、印度尼西亚、柬埔寨、泰国等国家获批上市，对外授权覆盖美国、欧洲、东南亚、中东和北非等 70 多个国家和地区。 作为复宏汉霖首个自主研发的创新型单抗，H 药聚焦肺癌和消化道肿瘤等高发癌种，已在中国已获批用于治疗微卫星高度不稳定（MSI-H）实体瘤、鳞状非小细胞肺癌（sqNSCLC）、ES-SCLC 及食管鳞状细胞癌（ESCC），复宏汉霖同步在全球开展 10 余项以 H 药为核心的免疫联合疗法临床研究。此外，公司正在美国开展一项 H 药对比一线标准治疗阿替利珠单抗用于 ES-SCLC 的头对头桥接试验，以进一步支持 H 药在美国的上市申报。    重磅临床结果 1、肝脏脂肪减少高达 46.2%，MASH 新药 IIa 期结果积极 9 月 19 日，Aligos 宣布其甲状腺激素受体 β (THR-β) 激动剂 ALG-055009 在代谢功能障碍相关脂肪性肝炎 (MASH) 患者中的 IIa 期 HERALD 研究的积极顶线结果。第 12 周，肝脏脂肪相对减少中位数高达 46.2%，且剂量反应明显。 图片来源：企业官网 HERALD (NCT06342947) 是一项随机、双盲、安慰剂对照试验，招募了 102 名推测为 MASH 和 1-3 期肝纤维化的受试者。受试者随机接受 ALG-055009 四种剂量(0.3、0.5、0.7、0.9 毫克) 中的一种或安慰剂，每天口服一次，持续 12 周。其中，0.9 毫克剂量组仅招募体重 >85 公斤的受试者，其他剂量组没有体重限制。 主要终点是第 12 周时通过 MRI-PDFF 测量的肝脏脂肪含量相对变化。还评估了安全性、药代动力学 (PK) 和其他先前显示受甲状腺激素受体 β (THR-β) 激动剂治疗影响的非侵入性生物标志物/测试。 0.5 mg 至 0.9 mg 剂量的 ALG-055009 在第 12 周显示出肝脏脂肪显著减少，经安慰剂调整后，MRI-PDFF 测量的中位相对减少量高达 46.2%。与基线相比，多达 70% 的受试者肝脏脂肪相对减少量达到 ≥30%。 MRI-PDFF 结果总结如下图： 图片来源：企业官网 使用 ALG-055009 治疗可显著降低动脉粥样硬化脂质，包括 LDL-C、脂蛋白 (a) (LpA) 和载脂蛋白 B (ApoB)。此外，还观察到性激素结合球蛋白 (SHBG) 剂量依赖性增加，性激素结合球蛋白是肝脏中 THR-β 靶向参与的标志。 ALG-055009 是 Aligos Therapeutics 研发的一种潜在的同类最佳 THR-β 激动剂。2024 年 3 月，全球首个 MASH 创新药获 FDA 批准，罗氏的 Resmetirom，也是靶向 THR-β 激动剂，目前该药物尚未在国内获批。 2、第一三共/默沙东：HER3 ADC 达到临床终点，拟报上市 9 月 17 日，第一三共与默沙东共同宣布，HER3 ADC 药物 patritumab deruxtecan（HER3-DXd）在 HERTHENA-Lung02 临床 III 期研究中显示出具有统计学显著性的 PFS 改善（试验主要终点），这项研究评估了该药在既往经前线 EGFR-TKI 治疗后的 EGFR 突变 NSCLC 患者中的疗效。OS 暂不成熟，仍将继续评估。 第一三共表示，HERTHENA-Lung02 研究数据将在后续医学会议中进行展示，并与全球监管机构分享，以讨论下一步行动。这或许意味着这款 FIC 新药上市申报在即。 HER3-DXd 是第一三共继 Enhertu 和 Dato-DXd 之后进度位居第 3 的 ADC「得意之作」。进度上，它在同靶点 ADC 中遥遥领先；疗效上，既往数据也展现了它在 EGFR 突变 NSCLC 上的疗效，可能为 EGFR-TKIs 治疗后进展、或不同耐药突变的广大患者群体提供新的治疗方案。 HERTHENA-Lung02 是一项开放标签的全球多中心 III 期临床试验，在三代 EGFR-TKI 治疗失败后的 EGFR 突变局部晚期或转移性 NSCLC 患者中对比 HER3-DXd（5.6mg/kg Q3W）相较于化疗（培美曲塞+顺铂）四周期治疗的疗效和安全性，主要终点为 BICR 评估后的 PFS，次要终点包括 OS、ORR、DoR 等。 3、罗氏：玛巴洛沙韦新 3 期临床达主要终点 9 月 19 日，罗氏公布了 CENTERSTONE 临床 III 期研究的积极结果。这项临床试验评估玛巴洛沙韦（Xofluza）对呼吸道病毒性疾病在家庭内流感传播的影响，纳入了超过 4000 例参与者，结果显示，感染流感的人群单次口服 Xofluza 可显著降低同住家庭成员感染流感病毒的可能性。 玛巴洛沙韦是一款抗流感新药，该药最初由日本药企盐野义开发。罗氏在 2016 年与盐野义达成了合作协议，共同负责该药在日本和台湾地区之外的研发工作，其中，罗氏拥有除日本和中国台湾以外地区的商业推广权利。2021 年 4 月，获 NMPA 批准在中国上市，商品名为速福达。 Xofluza 是一种具有全新的抗流感作用机制、单剂量口服药物，该药属于 Cap 依赖型核酸内切酶抑制剂，旨在抑制流感病毒中的 CAP 帽子结构依赖性内切核酸酶，而该酶对于流感病毒的复制必不可少。值得注意的是，该药是近 20 年来在美国首个获批的抗流感药物，是罗氏继达菲（奥司他韦）之后又一重磅抗流感药物。 目前广泛使用的抗流感口服用药为神经氨酸酶抑制剂类抗病毒药物（奥司他韦），需要每日服用两次，连续服用 5 天。而全新作用机制的玛巴洛沙韦（Xofluza）可以直接抑制病毒复制，患者在全病程只需服用一次，就能在 24 小时内停止病毒排毒。 国内创新药进展 本周国内共有 55 款创新药（含改良新）研发进度推进到了新阶段，其中 4 款申报上市，3 款启动 III 期临床，23 款新药获批临床，11 款申报临床。 本周国内首次获批临床的 4 款创新药（含改良新） 来自：Insight 数据库网页版 （下文如无特殊标注，为同一来源）    申报上市 1、恒瑞医药：全球首款 PD-L1/TGF-βRII 双功能融合蛋白报上市，一线治疗胃癌 9 月 19 日，恒瑞医药发布新闻稿称，其提交的 1 类新药抗 PD-L1/TGF-βRII 双功能融合蛋白「瑞拉芙普-α 注射液（SHR-1701）」的上市申请已获 NMPA 受理，适应症为联合氟尿嘧啶类和铂类药物用于局部晚期不可切除、复发或转移性胃及胃食管结合部腺癌的一线治疗。这也是继 HER2 ADC 之后，恒瑞本月又一申报上市的 1 类新药。 截图来源：恒瑞官微 瑞拉芙普-α 注射液是恒瑞医药自主研发的一款抗 PD-L1/TGF-βRII 双功能融合蛋白，可以促进效应性 T 细胞的活化，同时还可有效改善肿瘤微环境中的免疫调节作用，最终有效促进免疫系统对于肿瘤细胞的杀伤。目前，国内外尚无同类产品获批上市。 目前，研究人员正在开展瑞拉芙普-α 注射液在胃或胃食管结合部腺癌、直肠癌、非小细胞肺癌等多个适应症治疗领域的临床研究，以评估其在各类实体肿瘤中的抗肿瘤作用。 2024 年 6 月，瑞拉芙普-α 注射液已在针对胃癌的 Ⅲ 期临床试验 SHR-1701-III-307 中达到了方案预设的主要研究终点。这是一项随机、双盲、多中心的 Ⅲ 期研究，旨在晚期或转移性胃或胃食管结合部腺癌患者中评价瑞拉芙普-α 注射液联合化疗对比安慰剂联合化疗的有效性和安全性，由北京大学肿瘤医院沈琳教授担任主要研究者，全国 70 余家中心共同参与。主要研究终点是总生存期（OS）。次要研究终点包括无进展生存期（PFS）、客观缓解率（ORR）、缓解持续时间（DoR）、疾病控制率（DCR）和安全性等。 该 Ⅲ 期研究共入组 737 例受试者。研究结果显示，瑞拉芙普-α注射液联合化疗组在主要终点上显著优于安慰剂联合化疗组，可显著延长晚期胃或胃食管结合部腺癌患者的总生存期，且未发现新的安全性风险信号，安全性可接受。研究结果已在 2024 年欧洲肿瘤内科学会（ESMO）大会上发表。 2、欧康维视：白内障术后炎症新药申报上市 9 月 20 日，CDE 官网显示，欧康维视的 5.1 类进口新药「地塞米松植入剂」上市申请获受理（受理号：JXHS2400069），用于治疗白内障术后炎症。 截图来自：CDE 官网 地塞米松植入剂（研发代号：OT-502）是欧康维视在 2020 年 1 月从 EyePoint Pharmaceuticals 引进的一款药物。根据合作协议，EyePoint 将获得 200 万美元的预付款和分级销售提成，额外的开发、监管和商业销售里程碑合计高达 1200 万美元；而欧康维视则获得该产品在中国大陆、香港、澳门和台湾开发和商业化的独家权利。 OT-502 是一种新型、可生物降解的单次注射的缓释抗炎药物，可在注射后即刻释放活性成分地塞米松发挥抗炎作用，持续释放 21-22 天。可生物降解，无需取出。OT-502 利用 Verisome 药物输送技术将地塞米松递送至眼前房，直接抑制前房内炎症介质的合成和释放，能在术后持续、稳定地抑制前房炎症反应，避免频繁使用激素滴眼液，有效解决了部分白内障患者术后用药依从性不佳的严重问题，为白内障术后炎症管理提供了更好的选择。 2024 年 4 月 15 日，欧康维视宣布，治疗术后炎症新药 OT-502 已在中国完成 III 期临床试验。评价 9% 地塞米松植入剂治疗白内障术后炎症的有效性和安全性的随机、双盲、安慰剂对照、平行组、多中心 III 期临床结果显示，OT-502 达到预设的主要疗效终点，第 8 天时前房细胞分级为 0 级的受试者比例显著高于安慰剂组，证明了本品在控制白内障术后炎症方面安全有效。 欧康维视当前已拥有眼前及眼后段 33 种药物资产，建立起了完整的眼科药物产品线，20 款产品处于商业化阶段，3 款产品正处于 III 期临床试验，2 款产品已进入商业化注册阶段。 3、艾伯维：Bcl-2 抑制剂「维奈克拉」新适应症报上市 9 月 20 日，CDE 官网显示，艾伯维的 Bcl-2 抑制剂「维奈克拉」新适应症报上市（受理号：JXHS2400070/1/2）。这是该药在中国的第三项上市申请，目前尚未披露适应症。 截图来源：CDE 官网 维奈克拉（Venetoclax，研发代号：ABT-199）是艾伯维和罗氏共同开发的一款 Bcl-2 口服小分子靶向药，可通过结合并抑制 Bcl-2，释放促凋亡蛋白，从而杀灭癌细胞。Bcl-2 是调控细胞凋亡的关键蛋白之一，在人类的多种肿瘤组织和细胞中过表达，与肿瘤的发生、发展及耐药密切相关。 2016 年 4 月，维奈克拉获美国 FDA 批准用于治疗慢性淋巴细胞白血病（CLL）/小淋巴细胞淋巴瘤（SLL），成为全球首个获批上市的 Bcl-2 抑制剂；2020 年 12 月，维奈克拉首次在中国获批上市，与阿扎胞苷联合用于治疗因合并症不适于接受强诱导化疗或者年龄 75 岁及以上的新诊断成人 AML 患者。目前该药有两项国内上市申请正在审评审批中，值得期待。 据 Insight 数据库显示，维奈克拉 2023 年度全球销售额已达 22.88 亿美元，持续稳健增长。    拟优先审评 1、乐普生物：EGFR ADC 拟纳入优先审评 9 月 19 日，CDE 官网显示，乐普生物 EGFR ADC 新药维贝柯妥塔单抗（MRG003）拟纳入优先审评，用于既往经至少二线系统化疗和 PD-1/PD-L1 抑制剂治疗失败的复发/转移性鼻咽癌患者。 据 Insight 数据库显示，当前全球范围内尚没有 EGFR 靶向 ADC 获批上市，乐普有望拔得头筹，成为全球首个。 图片来源：CDE 官网 MRG003 是一种由 EGFR 靶向单抗与强效的微管抑制有效载荷 MMAE 分子通过 vc 链接子偶联而成的 ADC。本次拟纳入优先审评的适应症此前也曾获得 CDE 授予的突破性治疗药物品种，而在海外，美国 FDA 也曾授予 MRG003 孤儿药资格、快速通道资格、突破性疗法认定，用于治疗复发性或转移性鼻咽癌。 在 2024 年 ASCO 年会上，乐普生物曾公布了 MRG003 与 PD-1 抑制剂普特利单抗联合治疗 EGFR 阳性实体瘤患者的安全性和有效性的 I/II 期研究。截至 2024 年 1 月 30 日，33 名患者入组，I 期研究包括 9 名鼻咽癌患者、1 名头颈部鳞状细胞癌患者及 3 名其他实体瘤患者，II 期研究部分包括 14 名鼻咽癌患者、 6 名头颈部鳞状细胞癌患者。 试验数据显示，在 27 名可评价患者中，17 名患者达到 PR，7 名患者达到 SD，ORR 为 63.0%，DCR 为 88.9%。在 II 期临床中，9 名可评价的接受 PD-1 加铂类化疗的一线治疗后 EGFR 阳性鼻咽癌患者中，观察到 2 名患者达到完全缓解（CR），5 名患者达到 PR，2 名患者达到 SD，ORR 为 77.8%，DCR 为 100%。 Insight 数据库显示，EGFR ADC 领域研究最快的两款产品都来自中国。除了乐普的 MRG003 外，石药集团的 CPO301 是进度第二快的产品，已在国内进入 Ⅲ 期临床。此外，还有多款 EGFR ADC 已在国内进入临床，包括百力司康的 BB-1705、复宏汉霖/宜联生物的 HLX42、多禧生物 DXC004A 等。 2、北海康成：戈谢病 1 类新药拟优先审评 9 月 20 日，CDE 官网显示，北海康成酶替代疗法「注射用维拉苷酶β」（CAN103）拟纳入优先审评，适用于确诊为戈谢病 I 型（GD1）和Ⅲ型（GD3）患者的长期酶替代治疗（ERT）。 图片来源：CDE 官网 CAN103 是北海康成开发的用于治疗 I 型和 III 型戈谢病患者的重组人源脑苷脂酶替代疗法，大多数戈谢病患者为 I 型和 III 型，分别为慢性非神经病变型和慢性神经病变型。CAN103 通过静脉输注特异性地补充戈谢病患者体内溶酶体中缺乏的葡萄糖脑苷脂酶。 8 月 19 日，北海康成宣布 CAN103 在 12 岁及以上初治的 I 型和 III 型戈谢病受试者中进行的 CAN103 关键性临床试验取得了积极的顶线结果。 CAN103 的关键性临床试验是一项随机、双盲、剂量比较研究，旨在评估静脉滴注 CAN103 每 2 周一次在初治戈谢病患者中的有效性、安全性和药代动力学，并设有开放标签的扩展期。结果表明，该研究在 60U/kg 剂量组（P<0.0001）和较低的 30U/kg 剂量组（P<0.001）都成功达到了其主要疗效终点，即治疗 9 个月后受试者脾脏体积较基线的平均缩小百分比；所有关键次要疗效终点，即在 60U/kg 剂量组，与基线相比肝脏体积的缩小、血红蛋白水平的升高和血小板计数的升高也都达到了统计学显着性改善。 据了解，CAN103 是北海康成与药明生物在罕见病领域的首个合作项目，是中国首个针对戈谢病开发的酶替代疗法（ERT）。CAN103 旨在长期治疗 I 型和 III 型戈谢病的成人和儿童患者。据弗若斯特沙利文统计，2020 年中国约有 3000 名戈谢病患者。    启动 III 期临床 1、恒瑞医药：帕金森病新药启动 III 期临床 9 月 19 日，恒瑞在 Clinicaltrials 网站登记一项 III 期临床，评估 HRG2010 治疗帕金森病的疗效和安全性（NCT06598735）。 图片来源：Insight 数据库 HRG2010 胶囊是恒瑞自主研发的卡比多巴+左旋多巴新型复方缓释胶囊，本次 3 期临床以卡比多巴-左旋多巴缓释片为对照，主要终点指标为第 21 周「停药」时间与基线相比的变化。 帕金森病是一种常见的中老年神经退行性疾病，其病理特征为中枢神经系统的黑质-纹状体多巴胺能神经受损，临床特征有静止性震颤、运动迟缓、肌强直、共济失调等症状。  目前国内外已上市的同类产品主要包括多巴丝肼片（商品名：美多芭）、恩他卡朋双多巴片（商品名：达灵复）和卡左双多巴缓释片（商品名：息宁）。 据 Insight 数据库显示，目前国内已有卡左双多巴缓释片的仿制药获批上市，此外还有多家正在申请上市中，胶囊剂目前只有恒瑞一家。 2、艾伯维：CD20×CD3 双抗国内启动 Ⅲ 期临床，一线治疗滤泡性淋巴瘤 9 月 19 日，药物临床试验登记与信息公示平台显示，艾伯维在国内登记一项 Ⅲ 期临床试验，以在既往未接受过治疗的滤泡性淋巴瘤受试者中，评估 Epcoritamab + 利妥昔单抗和来那度胺对比化学免疫疗法的安全性和有效性。 Epcoritamab 是全球第 3 款获批的 CD20×CD3 双抗，也是国内研究进度较快的 CD20×CD3 双抗产品之一。该药曾被行业媒体 Evalute 列为 2023 年的十大潜在重磅疗法之一。 截图来自：药物临床试验登记与信息公示平台 Epcoritamab 最初由 Genmab 公司开发 ，艾伯维在 2020 年与 Genmab 达成一项总额达 39 亿美元的合作，以共同开发和商业化 Genmab 的三种下一代双抗产品，其中就包括 Epcoritamab。 Epcoritamab 采用 Genmab 公司的 DuoBody 专利技术生产，该公司的 DuoBody-CD3 技术旨在将细胞毒性 T 细胞选择性导向肿瘤，以诱发对恶性肿瘤细胞的免疫反应。作为一款双特异性抗体，Epcoritamab 可同时与 T 细胞上的 CD3 和 B 细胞上的 CD20 结合，并诱发 T 细胞介导的淋巴瘤 B 细胞杀伤。 Epcoritamab 于 2023 年 5 月 19 日全球首批，获美国 FDA 批准治疗高级别 B 细胞淋巴瘤（三线）、弥漫性大 B 细胞淋巴瘤（DLBCL）。去年 9 月，该药又在日本获批上市，并于同月获得欧盟 EMA 批准。2023 年，上市仅 6 个月的 Epcoritamab 为艾伯维贡献了 3100 万美元的销售额。 2024 年以来，Epcoritamab 又获得了新的适应症拓展。今年 6 月和 8 月，该药分别获得 FDA 和 EMA 批准治疗滤泡性淋巴瘤（三线、末线）。根据艾伯维财报，2024 上半年，Epcoritamab 的全球销售额已达到 6300 万美元。随着新适应症的拓展，Epcoritamab 今年销售额突破 1 亿美元应该不是问题。 Epcoritamab 研究历史时光轴 截图来自：Insight 数据库 在中国，Epcoritamab 尚未获批。此前，艾伯维和 Genmab 已在国内启动三项 Epcoritamab 的 Ⅲ 期临床；本次新登记的是一项多中心、随机、开放性试验（EPCORE™FL-2，CTR20243120），旨在既往未接受过治疗的滤泡性淋巴瘤受试者中评价 Epcoritamab + 利妥昔单抗和来那度胺对比化学免疫疗法的安全性和疗效。研究拟在国内入组 162 人，国际入组 1080 人。    获批临床 1、贝达药业：PROTAC 新药获批临床，深化肺癌领域布局 9 月 19 日，贝达药业和 C4 Therapeutics, Inc.（C4T）合作开发的 CFT8919 胶囊获得国家药品监督管理局签发的《药物临床试验批准通知书》（通知书编号：2024LP02116、2024LP02117）, 拟用于携带 EGFR 突变的非小细胞肺癌（NSCLC）患者。 图片来源：CDE 官网 CFT8919 是一种具有口服生物利用度的变构 BiDAC™ （双功能蛋白）降解剂，在临床前研究中，CFT8919 在 EGFR L858R 驱动的 NSCLC 的体内外模型中具有活性，可靶向广泛的在靶耐药突变并有颅内活性，具有预防或治疗患者脑转移的潜力。CFT8919 通过与 L858R 突变的变构位点结合，展示出良好的选择性，同时对像 T790M 或 C797S 突变的 EGFR 继发耐药突变有效。2023 年，CFT8919 片获得美国 FDA 临床试验（IND）许可。 多个大型随机对照试验亚组分析结果显示，一代、二代和三代 EGFR-TKI 治疗 19del 和 21L858R 突变患者显示出了不同的疗效，总体来看，19del 突变患者的获益要明显高于 21L858R 突变的患者。对于携带 21L858R 突变 NSCLC 患者，临床上仍存在较大的未满足需求，期待更好的治疗方案。 贝达在 2023 年 5 月 29 日宣布与 C4 Therapeutics, Inc. 合作引进这一项目的大中华区开发、制造和商业化独家权利和上述区域以外的约定比例的销售提成。该笔交易涉及首付款 1000 万美元，及最高 3.57 亿美元里程碑付款，以及在授权区域的销售提成同时，贝达拟通过全资子公司贝达投资（香港）有限公司以 2500 万美元认购 C4 Therapeutics 增发的 5,567,928 股普通股。 内容来源：药企官方发布新闻/资料、Insight 数据库 封面来源：站酷海洛 Plus 免责声明：本文仅作信息分享，不代表 Insight 立场和观点，也不作治疗方案推荐和介绍。如有需求，请咨询和联系正规医疗机构。 PR 稿对接：微信 insightxb 投稿：微信 insightxb；邮箱 insight@dxy.cn 点击卡片进入 Insight 小程序 国内审评进度、全球新药开发… 随时随地查！ 多样化功能、可溯源数据…… Insight 数据库网页版等你体验 点击阅读原文，立刻解锁！

【导读】 卵巢癌(OC)的诊断和治疗仍然是一个巨大的挑战，超过70%的患者在诊断时已处于晚期，预后极差。磁共振成像(MRI)在OC的术前评估中显示出优于其他检查的结果，而以顺铂为基础的化疗是OC的一线治疗方法。然而，之前很少有研究将这两个快速发展的领域结合在一起。 9月17日，南方医科大学研究团队在期刊《Advanced Science》上发表了研究论文，题为“Highly Efficient Synergistic Chemotherapy and Magnetic Resonance Imaging for Targeted Ovarian Cancer Therapy Using Hyaluronic Acid-Coated Coordination Polymer Nanoparticles”，本研究利用顺铂前体药物(Pt-COOH)、Fe3+和天然多酚(棉酚)构建了结构稳定、药物释放行为可控、载药量高的纳米粒(HA@PFG NPs)。肿瘤部位的酸性pH值有利于HA@PFG NPs释放Fe3+、Pt-COOH和棉酚。消耗谷胱甘肽的Pt-COOH和以顺铂为基础的化疗加具有促凋亡作用的棉酚显示出杀伤肿瘤细胞的协同作用。此外，Fe3+在肿瘤部位的释放促进铁死亡，并使OC的MRI成像成为可能。在患者来源的肿瘤异种移植(PDX)模型中，HA@PFG NPs减轻了肿瘤活性。 RNA测序分析表明，HA@PFG NPs主要通过IL-6信号通路改善OC症状。这项工作将MRI成像与以顺铂为基础的化疗相结合，为OC的诊断和协同治疗提供了巨大的希望。 https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202309464 背景知识 01 卵巢癌(OC)是一种预后极差的隐匿性疾病，超过70%的OC确诊时已处于晚期，5年总生存(OS)率低于30%。高病死率和相对较低的生存率主要是由于缺乏早期诊断和有效治疗干预的方法。早期发现和诊断OC可显著改善患者的预后。超声、CT和MRI是术前诊断OC的常用方法。在这些影像学技术中，MRI具有高空间分辨率和软组织对比度，是目前最强大的诊断工具之一，广泛应用于诊断，尤其是鉴别诊断和术前治疗方案的选择。钆造影剂广泛应用于临床MRI。然而，在肾功能不全的患者中，钆造影剂与肾源性系统性纤维化相关。因此，开发新型造影剂是非常迫切的需求。Fe3+不仅是生物体必需的元素，而且是一种顺磁性物质，因此可以用MRI非侵入性地测量。这使得Fe3+有望成为一种安全的对比剂。 顺铂为基础的化疗是OC的一线治疗方案。基于顺铂的各种形式的纳米药物已经得到了广泛的研究。然而，它们的应用总是受到载铂量低的限制，这增加了顺铂的剂量并导致了诸如肾毒性等副作用。金属基纳米粒子（NPs）的出现为解决这一问题提供了新的机会。金属基NPs通过过渡金属离子与化疗药物之间的配位键连接，已成为纳米医学领域的热点。由配位键形成的无载体NPs具有高药物负载能力、方便的药物比例调节和良好的肿瘤微环境响应性。最近，由于其出色的物理化学性质，这种NPs在生物成像、药物递送和表面涂层方面吸引了广泛的关注，为抑制肿瘤生长提供了一种优越的方法。针对顺铂前药与金属多酚NPs的组合研究较少。 体外细胞毒性及其机制 02 受纳米粒子增强摄取可以增强对化疗药物的细胞毒性反应这一想法的启发，研究人员研究了HA@PFG纳米粒子对A2780细胞的抗肿瘤作用。研究显示，顺铂的IC50值为11.56±1.42 µM。PFG纳米粒子的IC50值为5.48±2.81 µM，HA@PFG纳米粒子的IC50值为1.31±0.37 µM。随后的实验证实，在治疗48小时后，PBS组的凋亡细胞比例仅为6.69%，棉酚组为8.50%，顺铂组为13.77%，Pt-COOH组为8.24%。PFG纳米粒子组的凋亡细胞比例达到50.90%。对于HA@PFG纳米粒子，凋亡细胞的比例达到55.38%。进一步的活/死细胞实验也表明，与其他组相比，HA@PFG纳米粒子导致大量红色荧光，表明在此期间死亡细胞数量显著增加。HA@PFG纳米粒子对A2780细胞具有很强的毒性，这与MTT和凋亡结果一致。 受到HA@PFG纳米粒子体外抗肿瘤效果的鼓舞，研究人员进一步探究了其可能的作用机制。图1A展示了HA@PFG纳米粒子协同治疗的细胞毒性机制的示意图。在细胞内摄取后，HA@PFG纳米粒子在酸性条件下会释放出大量的Fe3+、Pt-COOH和游离的棉酚。在Fe3+和Pt-COOH的共同作用下，内源性还原剂GSH被大量消耗，扰乱了氧化还原平衡并诱导铁死亡。如图1B所示，在A2780细胞中观察到了浓度依赖性的GSH水平降低。此外，HA@PFG纳米粒子组的细胞内GSH水平显著低于其他各组，表明纳米粒子具有更强的GSH耗竭能力。相反，细胞内脂质过氧化物（LPO）水平呈现相反的趋势。此外，与其他处理相比，HA@PFG纳米粒子处理的A2780细胞显示出更强的绿色荧光，表明其产生了更多的活性氧。由Fe3+和ROS介导的脂质过氧化导致的GSH耗竭是铁死亡的两个基本特征。这些结果支持铁死亡是HA@PFG纳米粒子对癌细胞毒性的主要机制。 图1：HA@PFG纳米粒子引起的细胞毒性机制 为了进一步探究HA@PFG纳米颗粒的细胞毒性的潜在分子机制，研究人员通过蛋白质免疫印迹实验检测了相关功能蛋白。如图1H、I所示，在Fe3+（PFG纳米颗粒和HA@PFG纳米颗粒）存在下，GPX4表达显著下调，而PBS组表达正常。此外，HA@PFG纳米颗粒处理后，A2780细胞中也观察到了GPX4表达的降低，因为棉酚可作为Bcl-2的抑制剂。A2780细胞暴露于HA@PFG纳米颗粒后，出现了显著升高的与细胞凋亡相关的蛋白质。总之，HA@PFG纳米颗粒通过Fe3+诱导的铁死亡和棉酚抑制Bcl-2来引起细胞凋亡。 研究小结 03 在这项工作中，研究人员利用Fe3+、羟基和多酚之间的配位，开发了稳定的NPs HA@PFG NPs。NPs在生理条件下稳定可靠，对肿瘤部位的pH值敏感。内化后，HA@PFG NPs通过协同化疗和铁死亡发挥其细胞毒性作用。通过RNA-seq进行的全基因组测序显示，参与HIF-1, PI3K-Akt, MAPK和铁死亡通路的基因被HA@PFG NPs显著影响。此外，磁性金属离子(Fe3+)被成功掺杂到纳米粒子中，使HA@PFG纳米粒子具有MRI成像能力。尤其是，由于增强的肿瘤靶向性和血管通透性，HA@PFG NPs在OC PDX模型中表现出强大的肿瘤抑制作用。综上所述，通过一体化诊疗系统实现了肿瘤生长抑制和MRI增强，为HA@PFG NPs的临床转化提供了可能。 【参考资料】 https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202309464 【关于投稿】 转化医学网（360zhyx.com）是转化医学核心门户，旨在推动基础研究、临床诊疗和产业的发展，核心内容涵盖组学、检验、免疫、肿瘤、心血管、糖尿病等。如您有最新的研究内容发表，欢迎联系我们进行免费报道（公众号菜单栏-在线客服联系），我们的理念：内容创造价值，转化铸就未来！ 转化医学网（360zhyx.com）发布的文章旨在介绍前沿医学研究进展，不能作为治疗方案使用；如需获得健康指导，请至正规医院就诊。 热门推荐活动 点击免费报名 🕓 上海｜11月15日-16日 ▶ 2024第一届中国类器官转化医学大会 点击对应文字 查看详情

摘要：在有利的人造环境中培养细胞已成为细胞和分子生物学中的一种多功能工具。培养的原代细胞和连续细胞系在基础、生物医学和转化研究的调查中不可或缺。然而，尽管它们扮演着重要的角色，但细胞系经常被其他细胞、细菌、真菌、酵母、病毒或化学物质污染或误认。此外，处理和操作细胞与特定的生物学和化学危害相关，需要特殊的防护措施，如生物安全柜、封闭容器和其他专门的防护设备，以最小化暴露于有害物质的风险，并保证无菌工作条件。这篇综述简要介绍了细胞培养实验室中最常见的问题以及一些预防或解决相关问题的指导方针。 1.引言 细胞培养实验在生物医学研究、再生医学和生物技术生产中被广泛使用。由于动物保护法律对实验室动物使用的限制，以及威廉·拉塞尔和雷克斯·伯奇提出的3R原则（替代、减少和细化）的严格执行，以改善动物福利，可以预期在未来几年中，细胞系的普遍使用将进一步增加，以替代基于动物的研究。然而，值得注意的是，如果操作不当，细胞培养实验容易出错。因此，至关重要的是，细胞培养研究应采用良好的细胞培养实践（GCCP）来确保体外实验的可重复性。 特别是，种间和种内交叉污染和细胞误认、遗传漂变、细菌、真菌、酵母、病毒或化学物质的污染，以及缺乏质量控制测试，是普遍存在的致命细胞培养问题，这些问题使得文献充斥着虚假和不可重复的结果。粗略估计表明，使用问题细胞系发表的论文数量约为16.1%。此外，国际细胞系鉴定委员会（ICLAC）在其2021年6月发布的最新登记册中列出了576种被误认或交叉污染的细胞系。 尽管很难估计有多少误导性文章实际上受到影响，但仍迫切需要更好地提高科学家对这个问题的敏感性。此外，当使用细胞系时，生物安全和伦理方面并不在公众意识中，甚至被忽视。例如，一些连续生长的细胞系是通过使用猴病毒40（SV40）大T抗原（SV40T）或其他具有致癌潜力的因子转化建立的，通过引入端粒酶逆转录酶（TERT）活性来实现永生化，来自基因修饰动物，或通过CRISPR/Cas9基因编辑等新技术。因此，许多细胞系需要被归类为需要充分安全关注的转基因细胞系（GMCLs）。 在过去的几十年中，科学家们制定了许多关于良好细胞和组织培养实践（GCCP）的指导方针，这些指导方针不断更新，提供了在进行细胞培养时应考虑的主要原则的指导。GCCP指导方针强调了质量管理问题、培养系统背景、文件记录和报告、一般安全指示、教育和培训信息，以及与细胞培养实验相关的伦理问题。此外，这些专家文件试图促进实验室实践的协调、合理化和标准化，包括制造和测试，以促进研究人员的工作符合法律、法规和伦理原则。此外，这些指导方针提供了关于建立和配备细胞培养实验室环境的基本、有益和有用的附加设备的信息，重点是国家和国际公认的标准。这些指导方针相当复杂和全面，因此它们将主要对有多年细胞培养实验经验的受过训练的研究人员感兴趣。 在本文中，将在更简化的层面上讨论使用细胞系的一些一般方面。特别是，总结了细胞系鉴定的测试、潜在的细胞培养污染物，以及生物医学研究中使用细胞系的伦理问题和生物安全指南的简要信息。因此，所提供的信息对于即将开始进行细胞培养实验的人来说应该是有用的。 2.细胞培养类型的分类  细胞系大致可以分为三组，即（i）有限细胞系，（ii）连续细胞系，也称为永生化或无限细胞系，以及（iii）干细胞系。有限细胞系通常来源于原代培养，生长缓慢。因此，它们可以在体外培养有限数量的细胞代数，然后最终经历衰老和衰老，这一过程表现为失去典型的细胞形状和细胞质脂质的富集。重要的是，有限细胞系是接触抑制的，在形成单层后在G0、G1或G2阶段停止。 相比之下，连续生长的细胞系通常来自转化或癌细胞，并且快速分裂，在体外培养中达到比有限细胞系更高的细胞密度。在某些情况下，这些细胞系表现出非整倍性（即，一个或多个染色体的数量多于或少于其他染色体）或异倍性（即，染色体数量不是单倍体数量的简单倍数）。它们通常可以在降低的血清浓度下生长，不接触抑制，并且可能形成多层。干细胞是一种未分化或部分分化的多能细胞类型，起源于多细胞生物。这些细胞可以扩展为相同类型的无限多的细胞，或者在适当的条件下被触发产生具有特殊功能的细胞。因此，它们可以作为许多不同细胞类型的多能前体。 在所有情况下，来自不同来源的细胞的生长需要一个人工但受控的环境，在这种环境中，有时需要高度专业化的培养基、补充剂和生长因子以确保适当的细胞生长。一种细胞类型可以生长附着（附着在表面），需要一个分离剂进行传代，或者可以自由悬浮。附着细胞可以进一步分为具有长形状的成纤维细胞样细胞和具有多边形形状的上皮样细胞。同样，每种细胞培养在形态、活性、倍增时间和遗传稳定性方面都有独特的属性，它们的处理和维护可能需要不同的培养基、培养条件和添加剂或处理剂，包括抗生素、分离溶液或细胞附着的表面涂层。非附着或悬浮细胞要么作为单个细胞生长，要么作为自由悬浮的团块在液体培养基中生长，这些细胞在传代过程中不需要酶促或机械分离。然而，在某些情况下，这些细胞需要摇晃或搅拌以进行适当的气体交换和适当的生长。非附着细胞的典型例子是来自血液、脾脏或骨髓的造血细胞系，它们在不附着在基质上的情况下增殖。尽管如此，一些附着细胞系也可以适应悬浮生长，这允许在特殊应用中以更大的规模和更高的产量进行更易于管理的细胞培养。此外，与附着细胞相比，悬浮培养的细胞通常更容易处理。例如，当需要通过分析流式细胞术或荧光激活细胞分选（FACS）分析附着细胞时，细胞必须首先从其基质上分离。然而，酶促消化或使用非酶细胞解离缓冲液可能导致表面蛋白的降解，这可能阻止它们在相应的协议中的后续识别和细胞分离。这使得使用流式细胞术对附着细胞进行表型和特征分析极为困难。例如，胰蛋白酶通常用于分离附着细胞。它依赖时间地降解大多数细胞表面蛋白，通过在不跟随脯氨酸的赖氨酸或精氨酸残基后切割肽键。这导致细胞解离过程中大多数表面蛋白的降解。类似地，其他酶如特异性胶原蛋白酶、丝氨酸蛋白酶弹性蛋白酶切割C末端中性、非芳香族氨基酸残基的肽键、肽酶Dispase水解非极性氨基酸残基的N末端肽键，以及许多其他分离剂引发蛋白质的显著降解。 因此，已经引入了几种较温和的酶混合物，如Accutase和Accumax，或非酶细胞解离试剂，如乙二胺四乙酸（EDTA）和氨三乙酸（NTA）混合螯合二价金属阳离子，用于常规细胞传代和敏感细胞的操作。这些配方毒性较小，保留了大多数表位，以便后续流式细胞术分析。 最近，细胞在三维微环境中的培养已成为研究人员关注的焦点。这些3D细胞培养要么是通过在定义的支架内培养细胞产生的，如来自细胞外基质蛋白或琼脂糖或聚合物材料的水凝胶，要么是作为自组装系统，在这些系统中细胞以团簇或球状体生长。人们普遍认为，这些体外细胞模型提供了在封闭系统中研究细胞反应的可能性，这种系统比依赖于二维的细胞培养技术更接近生理情况。因此，这些模型对于那些研究细胞间相互作用、肿瘤形成、药物发现、干细胞研究和代谢相互作用的人来说特别有趣。与2D系统相比，3D模型有潜力彻底改变药物效力测试、疾病建模、干细胞研究和组织工程研究的方式。最后，这些系统将大幅减少某些研究领域对实验动物的使用，这是3R原则的一个关键方面。 3.培养基  适当的细胞培养基对维持和促进细胞培养的生长以及确保实验结果的可重复性至关重要。一些细胞还需要非必需氨基酸（丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、脯氨酸和丝氨酸）以有效生长并减轻细胞的代谢负担。用于保存和维持广泛哺乳动物细胞类型的最常见标准培养基，例如，Dulbecco改良的Eagle培养基（DMEM）和Roswell Park纪念研究所（RPMI）培养基。通常，这些培养基包含碳水化合物、氨基酸、维生素、盐和pH缓冲系统（表1）。常见的培养基如DMEM可提供现成的液体形式，或者以粉末形式出售，以便于储存和延长保质期。此外，许多培养基可以提供不同葡萄糖浓度（低或高葡萄糖）以及有无L-谷氨酰胺或稳定的谷氨酰胺的配方。最后，它们可以带或不带pH指示剂如酚红出售。重要的是，基础培养基通常不含蛋白质、脂质、激素或生长因子。因此，这些培养基需要添加胎牛血清（FBS），通常称为小牛血清（FCS），通常浓度为5-20%（体积/体积）。FBS是从健康的产前牛的胎儿血液中获得的。最终的血清通过离心凝固的血液去除细胞、纤维蛋白和凝血因子。值得注意的是，不同来源的FBS在生长因子和激素谱、病毒含量、内毒素负荷、渗透压、总蛋白和金属含量、糖类以及最终处理（例如，过滤、检测潜在污染）方面可能有所不同。因此，大多数科学家更喜欢购买可追溯的FBS批次，以获得可靠的批次间一致性，以在实验期间获得可重复的结果。此外，新生儿小牛血清（NBCS）来自20天以内的小牛，小牛血清（CBS）来自3至12个月大的小牛，以及从12个月以上的成年牛中分离的成年牛血清（ABS）经常用于补充细胞培养基。一些研究人员常规地在56℃下加热灭活血清15-30分钟，以灭活补体并破坏潜在的细菌污染物。然而，在大多数情况下，这不是必要的，应该省略，因为热灭活也会降低生长因子的浓度或生物活性，而这些生长因子是细胞正常生长所必需的。 然而，值得注意的是，含血清的培养基有许多缺点。血清是复杂的，具有不确定的成分，导致批次间变化，增加了污染的风险，并且使用血清通常与避免胎儿和动物痛苦的伦理问题有关。因此，血清免费培养基（SFM）的开发已成为过去几十年的研究热点。原则上，SFM可分为五种类型，即（i）普通SFM，（ii）含有人类来源但无动物成分的异种免费培养基，（iii）无动物培养基，（iv）无蛋白质培养基，以及（v）化学定义培养基。所有这些培养基都含有关键成分（例如，能源、维生素、氨基酸、脂质、微量元素和无机盐离子），并经常添加特殊补充剂，如抗剪切保护剂、核酸和其他需要改善某些细胞类型或应用的培养性能的成分。不幸的是，某些SFM的公司和供应商经常提供不完整或根本没有关于其培养基成分的信息。因此，研究人员十年前就开始建立一个在线无血清数据库，用于交流有关SFM的信息和经验。 通过向细胞培养基中添加抗生素和抗真菌剂，可以更好地预防由细菌、酵母、真菌和支原体引起的生物污染。它们中的大多数通过抑制细胞壁合成（例如，青霉素）、干扰膜通透性（例如，两性霉素B）或通过阻止细菌起始复合体在mRNA和细菌核糖体之间的组装来抑制蛋白质合成（例如，链霉素）。然而，常规使用抗生素可能会发展缓慢生长的持久/耐药细菌污染物，这可能导致细胞分化和行为的微妙变化。 此外，青霉素、链霉素和庆大霉素等抗生素可以显著改变基因表达和调控，可能会修改聚焦于药物反应、细胞调控和分化研究的结果。例如，最近的一项简洁回顾强调了众多出版物显示的抗生素和抗真菌剂如青霉素/链霉素、庆大霉素和两性霉素B对体外细胞特性（包括增殖、分化、存活和遗传稳定性）的影响。同样，一项全面的文献搜索发现了由不同抗生素引起的许多报告的副作用，再次支持在可能的情况下推荐使用无抗生素培养基，以确保细胞培养发现的可靠性和可重复性。因此，研究人员应避免在细胞培养中永久使用抗生素，并应更好地尝试实施严格的无菌工作条件，以防止细胞培养中的细菌污染。4.酚红 酚红，也称为苯磺酞，是细胞培养中最常用的pH指示剂。这种水溶性染料在低pH值时呈黄色两性离子，而在更碱性的条件下则变为红色阴离子或紫红色双阴离子（图1）。因此，这种染料被用作许多组织培养基中的惰性pH指示剂，用于检测pH变化、死亡细胞的废物产物，或通常会导致培养基酸化的污染物的过度生长。然而，由于其结构与某些非甾体雌激素相似，它具有与雌激素受体结合的能力，亲和力为雌二醇的0.001%，从而刺激雌激素受体阳性细胞的增殖。因此，在与雌激素反应性细胞系统工作时，建议在实验过程中避免使用酚红。 图1. 通过酚红监测细胞培养中的pH变化。酚红（Phenolsulfonphthalein）是一种三苯甲烷染料，用于细胞培养中监测pH变化。随着pH值的升高，其颜色逐渐从黄色过渡到红色和紫红色。 5.细胞污染  生物和化学因素都可能导致细胞培养中的污染（表2）。在大多数情况下，细胞生长缓慢、形态变化、培养基pH值快速变化以及培养中死亡或漂浮细胞数量增加是污染的后果。因此，应常规筛查细胞培养中可能的污染物，以防止结果不一致和其他严重后果。下表讨论了最重要的污染物。 5.1.支原体污染 支原体是细菌类摩洛哥菌纲中最小的自复制生物。它们由脂蛋白质膜、核糖体和一个由大小从580到2200 kb的环状双链DNA分子组成的基因组组成（图2A）。支原体的生物合成能力有限，需要进入适当的宿主，在其中繁殖并长时间存活。它们的微小尺寸（约0.1-0.2微米）使得在标准明场显微镜下无法识别，这也是它们在许多实验室中经常未被检测到的原因。它们缺乏细胞壁，对许多在细胞培养中使用的常见抗生素（如青霉素或链霉素）具有抗性。最重要的是，支原体污染不会产生其他细菌或真菌污染所特有的浑浊度。 图 2. 在细胞培养上清中检测支原体。(A) 支原体是最小的自复制细菌，没有细胞壁。它们由脂蛋白质膜、核糖体和一个由圆形双链DNA分子组成的基因组组成。(B) 一个被支原体污染的大鼠细胞系单层用DAPI染色，并在荧光显微镜下用适当的紫外线滤光片包(340/380 nm 激发)在400倍放大下进行分析。请注意那些非常小的明亮的细胞外核点，这是支原体的典型特征（由箭头标记）。比例尺代表50μm。(C) 在描述的分析中，2μL正常对照培养基（Medium(-)）和2μL从支原体感染的细胞系中取出的培养基（Medium(+)）使用Venor®GeM OneStep试剂盒（#11-8050, Minerva biolabs GmbH, Berlin, Germany）根据制造商的说明进行支原体感染测试。作为阳性对照，试剂盒系统内包含的2μL阳性对照也被共同扩增。每个样本中的内部控制在PCR反应中产生191 bp大小的扩增子，证明了PCR反应的功能，而265-278 bp大小的扩增子表明有支原体污染。PCR产物在含有乙二胺四乙酸的2%标准琼脂糖凝胶上分离，并通过标准凝胶成像仪可视化扩增子。 系统性研究已经确定了支原体进入细胞培养的典型方式。这些方式包括从其他研究实验室或商业供应商那里获得的受感染培养物、培养基、血清或试剂的交叉污染。此外，使用非无菌用品、实验室人员作为支原体携带者的感染、孵化器或生物安全柜中支原体的扩散、液氮罐中细胞培养的污染、通过空气传播的颗粒和气溶胶、过度使用抗生素以及培养皿密封不当也是有利于支原体污染的来源。 尽管支原体与宿主细胞竞争生物合成前体和营养物质，但受影响的细胞培养中观察到的生长速率变化通常很小，这就是为什么相应的污染不容易被检测到的原因。然而，支原体可以广泛影响宿主的DNA、RNA和蛋白质代谢，影响细胞内氨基酸和可用ATP水平，改变细胞表面抗原，并可能引起DNA断裂和其他重大染色体变化。因此，定期检测和快速识别这些污染物对于防止研究结果失真、误导性出版物和研究资金浪费至关重要。为了实现这一点，开发了许多敏感和特定的测试方法，这些方法允许检测相应的感染，通常不考虑来源或物种。在检测支原体污染的金标准中，首先将培养上清样本添加到支原体培养的液体培养基中，并在肉汤、琼脂或指示细胞上孵育几天。然而，这种方法耗时且其他更快的检测方法已经被引入。它们包括，除其他外，使用40,6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI）或Hoechst 33342（图2B）等荧光染料进行特异性DNA染色、酶联免疫吸附试验（ELISA）、用支原体特异性核糖体探针标记RNA、酶法程序、流式细胞术方法、比色法或基于条带的支原体检测试验、检测细菌16S rRNA的敏感PCR基础检测和复杂的傅里叶变换红外（FITR）显微光谱法。荧光染料染色相当非特异性，而大多数其他检测具有高分析灵敏度（即测试识别污染物的能力）和特异性（即测量支原体而不是密切相关的非支原体物种的能力）。特别是，依赖于常规（或终点）PCR的商业化试剂盒通常具有同时检测70-90种支原体的能力，因为这些试剂盒中包含的引物集通常设计为专门针对并扩增支原体基因组中高度保守的16S rRNA编码区域（图2C）。 支原体可以在受感染的培养物中产生几乎无限多的效果。因此，开发了广泛的消除相应污染物的代理和方法。有不同物理、化学、免疫和化疗治疗方法可用于消除支原体污染物。然而，许多这些方法不切实际，因为它们要么耗时，需要特殊设备，只捕获有限数量的支原体物种，或者总体效率低。最初，引入了几种抑制支原体生长的抗生素，但它们大多数效果一般，对真核细胞有害，或者由于对相应药物产生抗性而效果有限。尽管如此，现在有几种更具选择性和有效的抗支原体药物可用，这些药物通常允许在一轮治疗中就消除支原体感染（表3）。在大多数情况下，这些去除剂含有大环内酯类、四环素类、喹诺酮类或这些药物的组合。 常见的化合物Baytril®、Ciprobay®和Zagam®中包含的不同喹诺酮具有相似的化学结构（图3）。它们通过阻断细菌核酸合成来发挥抑制活性，通过破坏细菌拓扑异构酶II，抑制拓扑异构酶IV和DNA旋转酶的催化活性，并导致细菌染色体断裂。BM-Cyclin中包含的大环内酯类Tiamulin通过靶向细菌核糖体的50S亚基来抑制蛋白质合成，并进一步是肽酰转移酶的强抑制剂。它对支原体的活性通过四环素显著增强。其他现成的去除剂包含抗生素和抗菌作用肽的组合或属于不同抗生素家族的三种不同杀菌成分的组合。 图 3. 用于去除或预防支原体污染的选定化合物。(A) 贝尼尔（CAS号：93106-60-6），(B) 环丙沙星（CAS号：85721-33-1），(C) 扎加姆（CAS号：110871-86-8），以及 (D) 含有盐酸米诺环素（CAS号：13614-98-7）和富马酸替米考星（CAS号：55297-96-6）的BM-Cyclin是强大的抗支原体剂，用于消除或预防支原体污染。有关所描绘化合物的生物活性，请参考表3。 不同的杀菌成分在消除支原体感染方面具有高效性。通常，这些物质在施用两到三周后对所有常见的支原体菌株都有效。例如，图4展示了通过电子显微镜评估的大鼠细胞系中支原体的完全根除。 图 4. 通过电子显微镜评估大鼠细胞培养中支原体污染的清除情况。一个受污染的细胞培养物用Plasmocin处理了2周。展示的是处理前（A-C）和处理后（D）细胞的代表性电子显微镜图像，这些图像显示了广谱抗支原体试剂成功地从培养物中清除了支原体。图像的原始放大倍数为4646倍至27800倍。请注意（A）中支原体膜与宿主细胞质膜的特征性融合。 然而，使用这些产品治疗或预防支原体感染可能会引起显著的细胞毒性和遗传毒性效应。例如，米诺环素被证明能诱导Bcl-2的表达，Bcl-2在线粒体中积累，并与包括Bax、Bak和Bid在内的促死亡分子相互作用，从而保护细胞免于死亡。同样，替米考星通过阻断催化嘌呤5'单核苷酸转化为核苷的5'-核苷酸酶（CD73）的活性，抑制了人乳腺癌细胞系MDA-MB-231和小鼠乳腺癌细胞系4T1的生长和转移。因此，用于去除支原体感染的化合物的应用是实验研究结果的一部分。 5.2.病毒污染 与支原体感染相比，细胞培养中的病毒污染物构成了更严重的威胁，因为检测它们的困难和缺乏治疗受影响细胞培养的方法。此外，一些病毒有能力将其基因组整合到宿主细胞中，这在某些情况下会导致新病毒颗粒的永久性产生。这对操作员来说是一个潜在的健康风险，并且可能是水平病毒传播到其他细胞系的源头。因此，这对受感染细胞系的生物安全分类有直接影响。不幸的是，用于系统评估病毒污染物的通用测试相当复杂且无针对性。没有对病毒真实性的确切了解，这些检测方法仅限于电子显微镜和逆转录病毒逆转录酶的测定。特别是，当怀疑有传染性病毒因子时，电子显微镜的多功能性是一种有效、通用且无偏见的手段。这种技术适用于获取高分辨率图像，从而提供细胞感染状态和病毒形状的即时概览。观察到的形态和大小进一步允许对病毒类型进行即时初步分类。例如，成熟的逆转录病毒通常是球形包膜颗粒，平均直径在100到200纳米之间，显示出与六个逆转录病毒属不同的独特形态。特别是，透射电子显微镜（TEM）适用于在不需要事先对传染性因子进行假设的情况下直接观察生物样本中的病毒。例如，广泛用于肝病研究的连续生长的小鼠肝星状细胞系GRX的逆转录病毒负荷首次通过TEM得到证实。经过这么多年，这个细胞系仍然能够大量产生逆转录病毒颗粒（图5）。 图 5. 小鼠细胞系GRX中的逆转录病毒污染。(A) 逆转录病毒的一般结构。逆转录病毒是直径约100纳米的包膜颗粒。由env基因编码的包膜由糖蛋白组成，这些糖蛋白在出芽过程中从宿主细胞的质膜中获得脂质的包裹。逆转录病毒基因组进一步由两个长度为7-9 kb的相同单链RNA分子组成。病毒衣壳的主要组成部分是群特异性抗原（gag），而逆转录酶（pol）对合成病毒DNA是必需的。(B) 通过电子显微镜分析评估的小鼠肝星状细胞系GRX中未指定逆转录病毒的发生。逆转录病毒颗粒可以在培养基和细胞质中找到。(C,D) 逆转录病毒的高倍图像显示了典型的球形结构。(E) 这幅电子显微镜图像显示了一个出芽过程，其中一个逆转录病毒颗粒通过扩散穿过宿主的质膜获得其包膜。放大倍数分别为10,000倍（B），100,000倍（C），27,800倍（D）和21,560倍（E）。 5.3.化学污染 任何在细胞培养中引起不良影响的非活性化合物都需要引起密切关注。即使是必需的营养物质，在浓度足够高时也可能产生毒性。杂质可能通过培养基、血清和水引入细胞培养。然而，塑料管道、细胞培养皿和储存瓶中的增塑剂，以及荧光或紫外线照射下在培养基中形成的自由基，或玻璃器皿和移液管上的沉积物，都可能导致污染。此外，CO2气流中的杂质以及用于消毒孵化器或生物安全柜的杀菌剂或杀虫剂残留物可能至关重要。最关键的是内毒素，它们来源于大多数革兰氏阴性细菌的外细胞膜。这些由相当稳定的脂多糖（LPS）组成，它们从细菌中脱落，并在细菌溶解过程中大量释放。因此，从玻璃器皿中去除热原需要在高温下进行广泛的加热，而这些物质对高压灭菌相当有抵抗力。因此，大多数市售的现成细胞培养基和补充剂都是以这种方式准备的，它们不含或含有非常低水平的内毒素。此外，可靠的细胞培养基和补充剂生产商会提供分析证书，表明相应溶液或化合物中的内毒素水平。 一些培养条件（例如，低血清浓度、高光照暴露）会促使形成高活性的自由基，可能导致DNA损伤、蛋白质交联、脂质过氧化物和诱导细胞凋亡。因此，通常向细胞培养基中添加具有自由基清除活性的抗氧化剂，如抗坏血酸、N-乙酰-L-半胱氨酸或维生素（维生素E、维生素A、维生素C），以防止氧化应激及其后果。或者，可以将微量元素硒作为抗氧化剂酶的辅因子，如谷胱甘肽过氧化物酶，添加到培养基中以消灭活性过氧化物。 此外，铅、镉和汞等重金属的高浓度对许多细胞类型是有毒的。因此，重要的是在准备培养基或补充剂之前，要对用于水和溶剂进行重金属测试。或者，如果实验室水不适合细胞培养，应使用提供分析证书的商业供应商的纯水。 5.4.种内和种间交叉污染 同一物种（种内污染）或另一物种（种间污染）的无关细胞污染细胞系是一个常见且反复出现的问题。特别是，当污染物是一种快速分裂的细胞系时，它会过度生长并取代原始培养物。如果污染未被检测到，这可能导致不可靠和不可复制的结果，从而歪曲生物医学文献。细胞系交叉污染的问题已经众所周知数十年，始于1960年代围绕HeLa细胞的争议。2010年发表的第一份综合分析引用了68个参考文献，列出了360个交叉污染的细胞系。随后，在2021年，旨在引起研究人员对这一问题关注的国际细胞系认证委员会（ICLAC）列出了来自不同物种的576个因交叉污染或其他方式而误认的细胞系（表4）。交叉污染的来源多种多样，包括通过气溶胶或未堵塞的移液管的不想要的传播，不同细胞系之间共享培养基和试剂，以及不注意使用条件培养基。 如今，有不同方法可用于确定细胞系交叉污染。种间交叉污染可以通过同工酶分析检测，该分析利用电泳结合模式检查物种间在一组细胞内酶的个别同工型结构和迁移性方面的微小差异。人类细胞的种内交叉污染可以通过人类淋巴细胞抗原（HLA）位点分型识别，这是一组位于第6染色体上的基因，编码参与免疫系统调节的高度多态性的细胞表面蛋白。此外，分子血清学方法、使用合成探针或引物的遗传测试以及基于直接DNA测序的序列分型可以区分不同的HLA基因型。 5.5.细胞误识别 类似于细胞交叉污染，细胞系的误识别导致数千篇误导性和错误的论文。在常规操作过程中由于注意力不集中、操作员工作量大或实验工作分心而引起的难以辨认的标签和细胞培养容器的误标记是误识别的最直接原因。可以理解的是，与更快速分裂的污染物细胞的污染可以迅速在几次传代中过度生长原始培养物，并在后续步骤中引起细胞系误识别。当使用同一移液管或同时进行多次培养的重新饲养操作和操作，作为不同细胞类型有意共同培养的结果，或在与饲养细胞工作时缺乏意识时，可能会导致这种过度生长。 6.短串联重复序列分析  如今，识别交叉污染和细胞误识别的最常用方法是短串联重复序列（STR）分析。该方法可以比较不同样本在DNA中特定位点的等位基因重复次数。尽管这些重复的相应等位基因变异相当多态性，但等位基因的数量非常小。因此，为了使不同的STR配置文件对识别或区分目的具有高区分统计能力，通常在多重PCR检测中同时分析多个STR位点。 在STR分析中，从模板DNA获得的扩增的可变微卫星区域在遗传分析仪上分离，然后使用软件进行分析，该软件计算每个变体位点的重复次数。如今，为许多物种建立了有效和标准化的STR小组。在这方面，建立包含19个鼠STR标记的多重PCR检测的鼠细胞系认证联盟是开创性的。这种多重PCR为不同的小鼠细胞系，包括密切相关的细胞系，提供了独特的STR配置文件。图6展示了广泛使用的永生化小鼠细胞系AML12获得的四个STR标记的代表性色谱图。 图 6. 小鼠细胞系的典型短串联重复（STR）标记色谱图。使用CellCheckTM Mouse系统（IDEXX, Kornwestheim, Germany）对小鼠AML12细胞的基因组DNA进行STR分析，该系统扩增分布在17条染色体上的19个物种特异性STR标记。在这张图中，展示了来自第17、18、19号染色体和X染色体的四个代表性STR配置文件。有关该细胞系的完整STR配置文件，请参考表5。 重要的是，当比较三种不同的小鼠细胞系之间的19个鼠STR标记时，每个细胞系都有独特的组合，允许明确区分每个细胞系（表5）。 如今，已有数据库可供存取用于小鼠、猫、狗、牛、马、人类等STR测试设置的引物信息。此外，Cellosaurus资源提供了大量信息，并提供了诸如STR相似性搜索工具（使用STR进行细胞系认证，CLASTR）等程序，用于比较STR配置文件。 7.细胞系变化和过度传代  通常，实验室中培养的永生化细胞系会经过许多代。然而，高传代次数或长时间培养的细胞系可能会出现染色体复制或重排、突变和表观遗传变化。这种现象通常被称为遗传漂变。因此，细胞的形态、增殖率、代谢能力或总体健康状况可能会发生显著变化，影响实验结果。因此，在进行实验时，记录细胞系传代次数（反映细胞被亚培养到新容器的次数）是一个重要考虑因素。 也有报道指出，传代次数的增加可能会增加病毒污染的风险。此外，过度传代的细胞会选择生长速度更快的细胞，这些细胞在某些情况下表现出降低的分泌率、介导转运和细胞旁通透性，而细胞通透性则增加。因此，当传代次数相差数百代时，不同实验室进行的类似或相同研究可能会得出完全不同的实验结果。尽管没有关于最佳传代范围的具体指南，但通常的做法是在使用20至30代后不再使用细胞。不幸的是，尤其是当细胞来自细胞库以外的来源时，通常无法准确知道传代次数，因为细胞库通常会提供细胞传代次数的数据。 在某些情况下，研究人员认为即使传代次数也不准确，因为不同实验室在传代过程中可能使用不同的初始细胞种植密度或分裂率，这会影响细胞在培养中的分裂次数。因此，引入了一个用于计算精确的人口倍增水平（PDL）的公式，该公式与细胞代时间同义，特别用于原代细胞。在相应的公式中，PDL是自体外初次分离以来细胞群中细胞翻倍的总次数，计算如下：PDL = 3.32 (log Xe − log Xb) + S，其中Xb是孵化时间开始时种植的细胞数，Xe是孵化时间结束时的细胞数，S是分裂前的起始PDL。 8.使用细胞工作的生物安全方面 细胞培养可能对人类健康和环境造成伤害，需要被指定到一个考虑多种因素的生物安全级别。在使用细胞系之前，必须准确了解这些风险，考虑到其内在属性、（遗传）操作类型，以及由于污染病原体而可能显著增加的相应细胞系的生物危害。尽管这些估计必须逐个案例进行，但有一些一般指南需要遵循。首先，被研究细胞与人类的遗传关系越近，对人类的风险就越高，因为污染病原体通常具有特定的物种屏障。然而，应该注意，因为一些污染生物体有潜力跨越通常的物种屏障。其次，细胞系的肿瘤诱导潜力强烈依赖于其来源。例如，上皮细胞和成纤维细胞的肿瘤诱导潜力较低，而造血细胞则显著更高。第三，已经在许多实验室中使用多年的、得到良好表征的细胞系，比未表征的持续生长细胞系或原代细胞的风险总体较低。在识别和评估潜在风险后，通过遏制、限制人员和设备进出细胞培养实验室、按照标准操作程序（SOPs）工作、避免在工作期间形成气溶胶或飞溅、定期进行细胞培养培训、以及实施和遵循良好实验室规范（GLP）的一般指南来定义避免或最小化这些风险的方法是至关重要的。此外，建议在与原代人类细胞培养工作时接种乙型肝炎病毒疫苗。然而，不同国家之间的生物安全和生物安全全球规范和国际标准往往差异很大，开始工作前应注意。 9.来自患者的细胞系、类器官、异种移植模型和条件重编程 如前所述，已建立的细胞系在长期传代后可能会发生遗传漂变或表型变化。因此，它们可能不再忠实地代表它们最初来源的细胞类型所特有的所有分子特征。因此，科学家们已经开发了允许从健康供体或患有特定疾病的受试者的组织或血液中建立原代细胞的技术。对人类而言，这些来自患者的细胞系具有高度的临床转化相关性。 然而，自发永生化通常是一个罕见的事件，过去通常通过用病毒癌蛋白转化部分解除细胞周期调控或通过过表达TERT替换在细胞复制过程中丢失的短DNA片段（这些片段参与控制细胞衰老）来建立相应细胞。同样，CRISPR-Cas9介导的靶向癌基因，可以用于体外永生化细胞，已被确定为建立永生化细胞系的有效工具。 然而，应批判性地指出，这些操作可能会产生转录和细胞周期效应，此外，相应代理通过抑制DNA损伤信号通路导致突变的积累。最近，条件重编程（CR）已成为建立原代细胞长期培养的强大工具。CR技术最初于2012年建立，允许许多组织的正常和肿瘤上皮细胞无限期地在体外增殖。在这项技术中，可以通过与辐照成纤维细胞饲养层细胞和Rho激酶抑制剂Y-27632共同培养，使细胞条件性重编程。这项技术现在被广泛用于建立来自正常和病变细胞的患者源性细胞培养。在这个过程中，上皮细胞被重编程以获得成人干细胞特性，通过将细胞从标准培养基转移到CR培养基，逆转它们的分化状态，并允许大量产生用于患者衍生模型的细胞。因此，CR在精准医疗、再生医疗、药物测试、基因表达分析、异种移植研究以及确定从正常细胞表型向肿瘤细胞表型转变过程中发生的遗传、表观遗传和代谢变化方面提供了激动人心的可能性。重要的是，现在有复杂的协议进一步允许使用CR快速高效地扩展非上皮细胞，包括来自神经、神经内分泌、内分泌和间充质起源的细胞，这些细胞可以在条件下长期生长。 在个性化医疗中，类器官——通常源自多能性胎儿或成人干细胞的自组织3D组织——已引起了极大的兴趣。它们是器官的微型化和简化版本，形成于包含一组生长因子的选择性3D培养基中。特别是，来自患者的类器官(PDOs)已在癌症研究中被广泛引入。它们重现了原发肿瘤的基本特征，包括组织学的复杂性和遗传特征，因此理想地用于预测对抗癌药物的敏感性或肿瘤进展的方面。 同样，来自患者的异种移植(PDX)模型是动态实体，在其中可以实验性地监测癌症的演变。PDXs是通过在合适的动物宿主中植入并培养患者的肿瘤细胞而建立的癌症模型。在大多数情况下，接受者是植入了人类免疫系统的免疫缺陷小鼠。这些模型已成为研究人类免疫与癌细胞之间分子相互作用的有用实验工具。特别是，这些模型在基础研究中变得非常吸引人，以了解癌症进展和转移的方面。此外，PDXs经常用于临床前癌症研究，以识别新的预测性癌症生物标志物，测试癌症药物的效力，调查肿瘤内异质性和克隆动态，评估个性化治疗选择，并测试一般的转化假设。 所有这些更紧密地模拟细胞微环境的先进细胞培养技术如今已成为基础和临床研究的一个组成部分。然而，使用这些来自患者的模型(PDMs)需要广泛的专业知识、培训和质量控制。为了促进相应模型的发展，已建立了几个国际财团，旨在生成具有相关基因组和临床数据的新型人类肿瘤衍生的培养模型。国家癌症研究所(NCI)和人类癌症模型倡议(HCMI)已启动代表性倡议。 10.清洁和消毒  生物安全取决于实验室的清洁度。一般指南是严格遵循所有可能的安全规则。忽视或未能遵守任何安全规定可能导致与实验室相关的感染和环境污染。因此，需要通过对在实验室操作中使用的生物制剂进行消毒来降低生物风险。 在适当的废物管理中，应尽可能适当验证灭活方法。原则上，消毒有四个主要类别，即(i)通过热量进行消毒，(ii)用液体消毒，(iii)通过蒸汽和气体消毒，以及(iv)暴露于紫外线辐射。 高压蒸汽灭菌是消毒实验室材料和灭活或消毒生物制剂的最有效和可靠方法。这是一种使用高压水蒸汽进行消毒的方法，是培养基、玻璃器皿和移液管尖端消毒的首选方法。然而，必须保持足够的高温和压力一段时间，这也保证了孢子的灭活。通常，在121°C下高压蒸汽灭菌60-90分钟足以实现废物温度至少115°C持续20分钟。此外，只有受过培训的个人才能操作和维护高压蒸汽灭菌器，并且应定期通过生物指示剂检查高压蒸汽灭菌的成功。重要的是，接受高压蒸汽灭菌的废物或材料应放置在容器或密封的高压蒸汽灭菌袋中，以允许良好的热量穿透[98]。不应将危险化学品或放射性废物进行高压蒸汽灭菌。在防穿刺容器中收集受污染的解剖刀片、皮下注射针头、刀具和碎玻璃，并盖上盖子。在卫生水处理前，应先对大量液体废物和受污染的培养基进行消毒。 化学消毒通常是表面和家具消毒的首选方法。为了获得消毒剂的最佳效果，必须考虑几个因素。首先，消毒剂应对要去除的生物制剂具有特异性。第二，消毒剂应适合应用领域，因为当应用于表面或液体时可能会有显著的活动差异。最后，消毒剂在一般应用条件（例如，所需的接触时间、工作浓度）以及在其他影响因素（例如，酸、有机负荷）存在时的有效性可能会有所不同。 在封闭系统中应用的类似蒸汽和气体可以提供出色的消毒效果。一些实验室使用过氧化氢、二氧化氯、戊二醛、对甲醛、环氧乙烷和过氧乙酸的气溶胶来消毒生物安全柜或孵化器。然而，所有这些化学品都是危险的，使用这些物质进行消毒应只有经验丰富的受过培训的人员进行。 最后，暴露于紫外线(UV)辐射可以有效地破坏大多数微生物。特别是，UV-C光（光谱范围：100-280纳米），被大气吸收，对广泛范围的微生物具有最大的破坏力。因此，这个UV区域通常用于生物安全柜中，以减少表面污染。然而，暴露于UV可能导致操作员的眼睛和皮肤灼伤，因此应谨慎使用。因此，对于细胞培养初学者来说，在开始使用UV-C辐射设备进行清洁和消毒之前，建议接受专家的理论和实践培训。 11.结论  细胞培养在生物医学研究中扮演着重要角色。然而，细胞误识别、种内和种间交叉污染以及细菌感染、真菌、酵母或病毒的污染可能导致致命后果和科学文献的污染。因此，在每个使用细胞培养的实验室中，应强制进行定期污染检测和细胞鉴定测试。通过多种具有杀菌或杀菌作用的组分，可以有效地去除细菌、霉菌和酵母的生物污染。ICLAC错误识别细胞系的登记册和相关的Cellosaurus知识资源是极其重要的知识资源，并提供了诸如CLASTR等有用的搜索工具，用于比较STR配置文件。此外，实施良好的细胞培养实践和无菌技术对于提高细胞培养安全性、促进可复制的科学数据的产生以及促进不同实验室建立的结果的可比性至关重要。此外，适当的员工培训和标准化文档记录和报告细胞培养程序是进一步提高细胞培养实验室工作质量和安全的有效手段。最近，在生成更具生理相关性的PDMs，如PDOs和PDXs方面的进展已经彻底改变了常见的细胞培养方法，并帮助更好地理解人类生物学和病理生理学。在这方面，CR是一种有吸引力的技术，可以用于快速高效地建立来自患者的细胞培养，用于基础和临床研究，并进一步显著替代基于动物的研究。然而，应该记住，设计得最好、工程最精良的细胞培养实验室也只和其中最不胜任的工作者一样好。 为促进抗体行业的交流与创新，2024年10月16-17日第七届金秋十月抗体产业发展大会如约而至。会议旨在为研究人员提供一个互动交流的平台，有助于推动抗体产业的进一步发展。 会议内容 时间：2024年10月16-17日 地点：上海张江（酒店定向通知） 规模：600-800人 主办单位：生物制品圈、抗体圈 演讲支持：Entegris、瑞孚迪、AS ONE CORPORATION 会议费用：免费FREE!（仅收取100元报名定金，含参会学习、茶歇、会议手册，定金概不退还），先到先得，报完即止！ 报名方式：扫描下方二维码或点击文章最底部“阅读原文”→ 填写表格 → 报名成功（报名志愿者，承担一定工作，请慎重考虑，免交定金）！ 组委会获得报名信息后，根据报名信息进行初筛，并进一步与报名者沟通确认，实现精准邀请。最终有机会进入大会微信群（严格审核通过）。 日程安排 更多嘉宾正在邀请中 第一届精彩回顾 第二届精彩回顾 第三届精彩回顾 第四届精彩回顾 第五届精彩回顾 第六届精彩回顾 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。