Open-Label, Single Ascending Dose Study to Evaluate the Safety, Tolerability, and Efficacy of EDIT-101 in Adult and Pediatric Participants With Leber Congenital Amaurosis Type 10 (LCA10), With Centrosomal Protein 290 (CEP290)-Related Retinal Degeneration Caused by a Compound Heterozygous or Homozygous Mutation Involving c.2991+1655A>G in Intron 26 (IVS26) of the CEP290 Gene ("LCA10-IVS26")

The purpose of this study is to evaluate the safety, tolerability and efficacy of a single escalating doses of EDIT-101 administered via subretinal injection in participants with LCA10 caused by a homozygous or compound heterozygous mutation involving c.2991+1655A>G in intron 26 of the CEP290 gene ("LCA10-IVS26").

开始日期2019-09-26

申办/合作机构

Editas Medicine, Inc.

100 项与核酸酶Cas9 相关的临床结果

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100 项与核酸酶Cas9 相关的转化医学

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项与核酸酶Cas9 相关的文献（医药）

2025-01-01·Synthetic and Systems Biotechnology

Establishment of the CRISPR-Cpf1 gene editing system in Bacillus licheniformis and multiplexed gene knockout

Article

作者: Li, Youran ; Shi, Guiyang ; Liu, Suxin ; Wang, Yanling ; Xiao, Fengxu ; Zhang, Yupeng

Bacillus licheniformis is a significant industrial microorganism. Traditional gene editing techniques relying on homologous recombination often exhibit low efficiency due to their reliance on resistance genes. Additionally, the established CRISPR gene editing technology, utilizing Cas9 endonuclease, faces challenges in achieving simultaneous knockout of multiple genes. To address this limitation, the CRISPR-Cpf1 system has been developed, enabling multiplexed gene editing across various microorganisms. Key to the efficient gene editing capability of this system is the rigorous screening of highly effective expression elements to achieve conditional expression of protein Cpf1. In this study, we employed mCherry as a reporter gene and harnessed P _mal for regulating the expression of Cpf1 to establish the CRISPR-Cpf1 gene editing system in Bacillus licheniformis. Our system achieved a 100 % knockout efficiency for the single gene vpr and up to 80 % for simultaneous knockout of the double genes epr and mpr. Furthermore, the culture of a series of protease-deficient strains revealed that the protease encoded by aprE contributed significantly to extracellular enzyme activity (approximately 80 %), whereas proteases encoded by vpr, epr, and mpr genes contributed to a smaller proportion of extracellular enzyme activity. These findings provide support for effective molecular modification and metabolic regulation in industrial organisms.

2024-12-01·Applied Microbiology and Biotechnology

Engineering Cas9: next generation of genomic editors

Review

作者: Karpov, Dmitry S ; Davletshin, Artem I ; Kovalev, Maxim A

AbstractThe Cas9 endonuclease of the CRISPR/Cas type IIA system from Streptococcus pyogenes is the heart of genome editing technology that can be used to treat human genetic and viral diseases. Despite its large size and other drawbacks, S. pyogenes Cas9 remains the most widely used genome editor. A vast amount of research is aimed at improving Cas9 as a promising genetic therapy. Strategies include directed evolution of the Cas9 protein, rational design, and domain swapping. The first generation of Cas9 editors comes directly from the wild-type protein. The next generation is obtained by combining mutations from the first-generation variants, adding new mutations to them, or refining mutations. This review summarizes and discusses recent advances and ways in the creation of next-generation genomic editors derived from S. pyogenes Cas9.Key points• The next-generation Cas9-based editors are more active than in the first one.• PAM-relaxed variants of Cas9 are improved by increased specificity and activity.• Less mutagenic and immunogenic variants of Cas9 are created.

2024-08-01·Molecular Cell

Engineering IscB to develop highly efficient miniature editing tools in mammalian cells and embryos

Article

作者: Han, Honghui ; Li, Yongmei ; Guan, Yuting ; Zhu, Yifan ; Wang, Qian ; Liu, Mingyao ; Li, Dali ; Zhang, Dan ; Hong, Dishan ; Xue, Niannian ; Hu, Chunyi ; Song, Gaojie ; Yang, Lei ; Chen, Xi ; Wang, Liren ; Zhang, Shun

The IscB proteins, as the ancestors of Cas9 endonuclease, hold great promise due to their small size and potential for diverse genome editing. However, their activity in mammalian cells is unsatisfactory. By introducing three residual substitutions in IscB, we observed an average 7.5-fold increase in activity. Through fusing a sequence-non-specific DNA-binding protein domain, the eIscB-D variant achieved higher editing efficiency, with a maximum of 91.3%. Moreover, engineered ωRNA was generated with a 20% reduction in length and slightly increased efficiency. The engineered eIscB-D/eωRNA system showed an average 20.2-fold increase in activity compared with the original IscB. Furthermore, we successfully adapted eIscB-D for highly efficient cytosine and adenine base editing. Notably, eIscB-D is highly active in mouse cell lines and embryos, enabling the efficient generation of disease models through mRNA/ωRNA injection. Our study suggests that these miniature genome-editing tools have great potential for diverse applications.

项与核酸酶Cas9 相关的新闻（医药）

2024-06-03

·生物探索

基因编辑新突破：张锋等团队合作揭秘Prime Editor精准基因编辑机制

引言由化脓性链球菌Cas9 nickase (nSpCas9)和Moloney小鼠白血病病毒逆转录酶(M-MLV RT)组成的先导编辑系统与先导编辑指导RNA (pegRNA)合作，促进活细胞中各种精确的基因组编辑。然而，由于缺乏结构信息，先导编辑器引导pegRNA逆转录的分子机制仍然知之甚少。 2024年5月29日，东京大学Osamu Nureki及博德研究所张锋等团队合作在Nature 在线发表题为“Structural basis for pegRNA-guided reverse transcription by a prime editor”的研究论文，该研究展示了SpCas9-M-MLV RTΔRNaseH-pegRNA-target DNA复合物在多种状态下的冷冻电镜结构。终止结构以及功能分析表明，M-MLV RT将逆转录延伸到预期位点之外，导致支架衍生的结合，从而在目标位点上引起不希望的编辑。对起始前、起始和延伸状态的结构比较表明，M-MLV RT在逆转录过程中相对于SpCas9保持一致的位置，而pegRNA合成的DNA杂化双链则沿着SpCas9表面建立。在结构见解的基础上，该研究合理地设计了pegRNA变体和先导编辑变体，其中M-MLV RT融合在SpCas9中。总的来说，该研究结果提供了对先导编辑逐步机制的结构性见解，并将为开发多功能先导编辑工具箱铺平道路。 CRISPR RNA引导的内切酶Cas9结合单向导RNA (sgRNA)并切割与向导RNA互补的双链DNA (dsDNA)靶标。因此，基于CRISPR-Cas9的方法已被用于真核细胞的基因组编辑。一种通用的基因组编辑方法——先导编辑——已经被开发出来，它允许几乎任何所需的碱基替换、小插入或小删除被安装到基因组的特定位置，而不需要双链断裂或供体DNA模板。因此，先导编辑可以潜在地纠正绝大多数已知的致病突变。事实上，先导编辑已经被广泛应用于在人类细胞和各种生物(如植物、斑马鱼、老鼠和果蝇)中植入精确的突变。先导编辑系统有两个组成部分：一个由化脓性链球菌Cas9酶(nSpCas9)和工程Moloney小鼠白血病病毒逆转录酶(M-MLV RT)组成的先导编辑器；以及具有sgRNA区和3 '延伸区的先导编辑引导RNA (pegRNA)。sgRNA区域由靶向特定位点的引导序列和与SpCas9相互作用的支架组成，而3 '扩展区域包括逆转录模板(RTT)和引物结合位点(PBS)。终端状态下的先导编辑器的Cryo-EM结构（Credit: Nature）PBS具有10-15个核苷酸(nt)序列，与非靶链(NTS)的3 '端互补，RTT编码所需的编辑。在先导编辑中，nSpCas9识别与sgRNA引导片段互补的dsDNA靶标序列，并识别NGG(其中N为任意核苷酸)相邻原间隔基序(PAM)，并切割NTS。然后，M-MLV RT与PBS-NTS杂化双链（heteroduplex）结合，并对RTT序列进行逆转录，将所需的编辑整合到目标位点中。然而，主要由于缺乏结构信息，先导编辑器识别PBS-NTS杂化双链（heteroduplex）启动和终止RTT序列逆转录的机制仍然知之甚少。为了解决这个问题，该永久在多种状态下测定了先导编辑器的冷冻电镜(cryo-EM)结构，为理解这一创新的基因组工程系统提供了一个结构框架。原文链接https://www.nature.com/articles/s41586-024-07497-8 内容来源于网络，如有侵权，请联系删除。

基因疗法寡核苷酸核酸药物

2024-02-14

·药明康德

首款！CRISPR基因编辑疗法再获批准

Vertex Pharmaceuticals宣布，欧盟委员会（EC）已授予其CRISPR/Cas9基因编辑疗法Casgevy（exagamglogene autotemcel，exa-cel）有条件上市许可，用于治疗12岁及以上镰刀型细胞贫血病（SCD）伴复发性血管闭塞危象（VOCs）患者，以及无法获得人类白细胞抗原（HLA）匹配造血干细胞移植治疗的输血依赖性β地中海贫血（TDT）患者。根据新闻稿，这是欧盟首款获批上市的CRISPR基因编辑疗法。在Casgevy用以治疗SCD和TDT患者的两项全球临床试验中，试验达到了各自的主要终点，即患者至少连续12个月没有发生重度VOC或不需进行输血。此前公布的临床试验结果显示Casgevy具有一次治疗，提供功能性治愈的潜力。在接受治疗的44名TDT患者中，42名在随访时间为1.2-37.2个月时，不再需要接受输血，剩余两名患者接受的输血水平分别降低75%和89%。此外，所有31名接受治疗的严重SCD患者在随访时间为2.0-32.3个月时，均未出现血管闭塞性危象。在这些正在进行的研究中，迄今为止接受Casgevy治疗的97例SCD和TDT患者的安全性特征与白消安清髓性预处理和造血干细胞移植基本一致。去年3月，在第三届人类基因组编辑国际峰会上，首位接受Casgevy疗法的镰状细胞贫血病患者维多利亚·格雷（Victoria Gray）女士分享了她的经历。在接受治疗近一年后，她血液中约46%的血红蛋白仍然是胎儿血红蛋白，并且在99.7%的红细胞中携带这种蛋白。此外，维多利亚的骨髓细胞活检显示，超过81%的细胞含有产生胎儿血红蛋白所需的遗传变化，这表示基因编辑过的细胞在她的体内持续存活和运作着。自从维多利亚接受移植以来，她不再需要接受输血治疗，疼痛情形也消失了。 Casgevy是一款自体细胞疗法，它利用CRISPR/Cas9基因编辑系统，在体外对来自患者的造血干细胞进行编辑，使血红细胞生产高水平的胎儿血红蛋白（HbF）。HbF是携带氧气的血红蛋白的一种形式，在出生时自然存在，随着婴儿的长大，血液中的血红蛋白转换为成人形式的血红蛋白。通过Casgevy治疗，可以提高HbF水平，有可能缓解输血依赖性β地中海贫血患者的输血需求，并减少镰刀型细胞贫血病患者的疼痛和使人衰弱的血管闭塞性危象。Casgevy曾获FDA授予治疗镰刀型细胞贫血病和输血依赖性β地中海贫血的再生医学先进疗法认定、快速通道资格、孤儿药资格和罕见儿科疾病认定。 2023年11月，Casgevy获英国药品和健康产品管理局（MHRA）有条件上市许可，用于治疗12岁及以上SCD与TDT患者，成为全世界首款获批上市的CRISPR基因编辑疗法。美国FDA并于2023年12月与今年1月先后批准该疗法用于治疗SCD与TDT患者。 2015年，Vertex公司和CRISPR Therapeutics达成战略研究合作，专注于利用CRISPR/Cas9发现和开发针对人类疾病潜在遗传原因的潜在新治疗方法。根据修订后的合作协议，Vertex公司正领导Casgevy的全球开发、制造和商业化。参考资料： [1] European Commission Approves First CRISPR/Cas9 Gene-Edited Therapy, CASGEVY™ (exagamglogene autotemcel), for the Treatment of Sickle Cell Disease and Transfusion-Dependent Beta Thalassemia. Retrieved February 13, 2024 from https://news.vrtx.com/news-releases/news-release-details/european-commission-approves-first-crisprcas9-gene-edited [2] More than 200 people have been treated with experimental CRISPR therapies. Retrieved November 9, 2023, from https://www.technologyreview.com/2023/03/10/1069619/more-than-200-people-treated-with-experimental-crispr-therapies/ [3] Frangoul et al., (2020). CRISPR-Cas9 Gene Editing for Sickle Cell Disease and β-Thalassemia. NEJM, DOI: 10.1056/NEJMoa2031054. 内容来源于网络，如有侵权，请联系删除。

基因疗法细胞疗法临床结果上市批准

2023-10-19

·医药笔记

Intellia体内CRISPR基因编辑疗法获批开展三期临床

2023年10月18日，Intellia Therapeutics宣布FDA已经批准其体内CRISPR基因编辑疗法NTLA-2001开展关键三期临床，治疗甲状腺素转运蛋白淀粉样变（ATTR）。 NTLA-2001为Intellia的首发管线，也是全球首款体内CRISPR基因编辑疗法。一期临床中，NTLA-2001可以剂量依赖性地降低TTR水平，药效维持至少6-12个月。 NTLA-2001采用LNP肝脏递送系统，携带靶向人TTR基因的sgRNA和经过优化的化脓性链球菌Cas9蛋白的mRNA序列。 NTLA-2001的体外编辑效率如下图所示。 NTLA-2001在食蟹猴体内基因编辑的药效如下图所示。体内基因编辑将从根本上改变许多疾病的治疗方式，有望达到一次治疗终生有效的目标。NTLA-2001直接获批开展三期临床，意味着体内基因编辑疗法进入后期临床阶段，很快将看到这一领域的突破性进展。内容来源于网络，如有侵权，请联系删除。