Pneumococcal polysaccharide conjugate vaccine

摘要：抗生素耐药性（AMR）的全球蔓延正严重威胁公共健康，开发新型细菌疫苗成为当务之急。mRNA 疫苗在新冠疫情中展现出高效、快速研发的优势后，其应用正扩展至细菌感染领域。然而，细菌的生物学复杂性（如抗原多样性、翻译后修饰差异、免疫反应特殊性）为 mRNA 疫苗开发带来独特挑战，包括抗原选择困难、真核细胞中细菌蛋白表达效率低、免疫原性受糖基化等修饰影响等。本文系统梳理了细菌 mRNA 疫苗开发的核心挑战，详解抗原筛选、mRNA 构建优化等关键技术，综述当前临床前和临床研究进展，并展望未来通过技术创新突破瓶颈的潜力，为理解这一新兴领域提供全面视角。 一、引言：抗生素耐药性倒逼细菌疫苗升级 近几十年来，抗生素一直是对抗细菌感染的 “利器”，但抗生素耐药性（AMR） 的飙升已成为全球性危机。世界卫生组织数据显示，耐药菌每年导致数百万死亡，若不采取行动，到 2050 年这一数字可能突破千万。细菌疫苗被视为遏制 AMR 的关键手段：通过诱导保护性免疫，减少感染发生率，从而降低抗生素滥用，延缓耐药菌株的传播。 传统细菌疫苗已应用多年（如白喉、破伤风疫苗），但面对复杂或新兴耐药菌时逐渐显露出局限性。而 mRNA 疫苗在新冠疫情中的成功（如辉瑞、Moderna 疫苗）证明了其潜力：无需培养病原体，仅通过编码抗原的 mRNA 即可诱导免疫反应，研发周期短、生产灵活。这一技术正被寄予厚望，成为开发新一代细菌疫苗的重要方向。二、传统细菌疫苗：成绩与局限 在 mRNA 疫苗兴起前，传统细菌疫苗已形成多种技术路线，各有优劣：1. 全细胞疫苗 包括灭活疫苗（如百日咳全细胞疫苗）和减毒活疫苗（如卡介苗 BCG）。优势是可诱导针对多种细菌抗原的广谱免疫，减毒活疫苗因能复制，免疫应答更强。但缺点显著：减毒疫苗可能对免疫功能低下者造成风险；灭活疫苗免疫原性较弱，需多次接种。2. 多糖与糖缀合物疫苗 多糖疫苗（如肺炎球菌多糖疫苗）针对细菌荚膜多糖，但对婴幼儿效果差（多糖为 T 细胞非依赖性抗原）。糖缀合物疫苗通过将多糖与蛋白结合，激活 T 细胞依赖免疫，显著提升效果，成为里程碑式突破 —— 如 b 型流感嗜血杆菌（Hib）疫苗、肺炎球菌疫苗（PCV13）等，不仅降低感染率，还通过群体免疫减少传播。3. 蛋白亚单位疫苗 基于细菌毒素（如白喉类毒素）、毒力因子（如脑膜炎球菌 B 群疫苗）或组合抗原（如无细胞百日咳疫苗 DTaP）。优势是安全性高，但需精准筛选抗原，且可能因抗原单一导致保护范围有限。 尽管传统疫苗成效显著，但面对抗原变异（如肺炎球菌血清型转换）、胞内菌感染（如结核杆菌）等问题时，其开发难度大幅增加。mRNA 疫苗的灵活性（可快速编码多种抗原）为解决这些问题提供了新思路。三、细菌 mRNA 疫苗的核心挑战：从抗原到免疫应答 与病毒相比，细菌的生物学特性使 mRNA 疫苗开发面临更复杂的挑战，主要集中在以下方面：1. 抗原选择：在 “蛋白海洋” 中找到关键靶标 细菌可表达数千种蛋白，远超病毒，且存在抗原变异（如相位变异、血清型转换），导致抗原选择难度极大。理想的 mRNA 疫苗抗原需满足：在真核细胞中高效表达、正确折叠、能诱导保护性免疫。但细菌蛋白的特殊性带来多重障碍： 折叠依赖细菌环境：许多细菌蛋白（如多亚基蛋白）需细菌特有的分子伴侣辅助折叠，在哺乳动物细胞中可能折叠错误，丧失免疫原性。 无法编码非蛋白抗原：细菌荚膜多糖是重要保护性抗原（如肺炎球菌荚膜），但 mRNA 仅能编码蛋白，因此无法直接模拟糖缀合物疫苗的效果。 翻译效率低：细菌与哺乳动物的密码子偏好不同，未经优化的细菌 mRNA 在真核细胞中翻译效率低，需通过密码子优化改善。 图 1：细菌疫苗抗原发现方法（实验与计算手段结合） 为解决这一问题，研究者开发了多种筛选技术（图 1）： 免疫肽组学：通过质谱鉴定被宿主 MHC 分子呈递的细菌肽段（如李斯特菌感染细胞中发现的 LMON_0149 蛋白），直接锁定能激活 T 细胞的抗原。 计算免疫学：利用机器学习预测抗原的表面暴露性、保守性等特征（如 “反向疫苗学 3.0”），缩小候选范围。 图 2：mRNA 编码抗原的细胞内加工与呈递路径（MHC-I/II 呈递的信号引导）2. 翻译后加工：原核与真核的 “语言差异” 细菌（原核生物）与哺乳动物（真核生物）的蛋白加工系统差异显著，导致 mRNA 编码的细菌蛋白可能 “变形”，影响免疫效果： 糖基化干扰：哺乳动物细胞会对蛋白进行糖基化修饰，但细菌蛋白通常无糖基化。这种 “额外修饰” 可能掩盖 B 细胞表位，或引发错误免疫反应。例如，结核杆菌 Ag85A 蛋白在真核细胞中被糖基化后，免疫原性显著降低，需通过突变糖基化位点恢复功能。 分泌信号不兼容：细菌的分泌信号（引导蛋白分泌的短肽）在哺乳动物细胞中可能失效。例如，鼠疫耶尔森菌 F1 蛋白的细菌信号肽无法介导真核细胞分泌，需替换为哺乳动物信号肽（如 IgGκ 链信号肽）才能提升抗体应答。3. 免疫反应：平衡体液与细胞免疫的 “跷跷板” 细菌感染中，体液免疫（抗体）和细胞免疫（T 细胞）的重要性因菌而异： 胞外菌（如链球菌）主要依赖抗体清除，需诱导细菌蛋白分泌以激活 B 细胞。 胞内菌（如结核杆菌、李斯特菌）则需细胞免疫，依赖 CD8⁺ T 细胞裂解感染细胞。 mRNA 疫苗需根据目标细菌 “定制” 免疫应答：若编码蛋白留在胞内，易被蛋白酶降解并通过 MHC-I 呈递，激活 CD8⁺ T 细胞（适合胞内菌）；若通过信号肽引导分泌，则更易激活 B 细胞（适合胞外菌）。但实际操作中常遇矛盾，例如：为提升分泌替换信号肽后，可能因糖基化掩盖表位，反而削弱抗体反应。 图 3：mRNA 构建优化策略（信号肽、 trafficking 信号等元件）四、突破瓶颈：细菌 mRNA 疫苗的优化策略 针对上述挑战，研究者已开发多种技术手段优化 mRNA 疫苗设计，核心是让细菌蛋白在真核细胞中 “正确表达、精准呈递”。1. 抗原工程：改造蛋白以适应真核环境 密码子优化：根据哺乳动物细胞的密码子偏好调整 mRNA 序列，提升翻译效率。例如，沙门菌抗原通过优化后，在小鼠中表达量提升 3 倍以上。 去糖基化突变：利用生物信息工具（如 NetNglyc）预测潜在糖基化位点，通过基因突变去除，避免修饰干扰。例如，结核杆菌 Ag85A 的 N - 糖基化位点突变后，小鼠免疫原性恢复至天然水平。 信号肽替换：用哺乳动物信号肽（如人组织纤溶酶原激活物 h-tPA 的信号肽）替换细菌信号肽，提升蛋白分泌效率。例如，铜绿假单胞菌 PcrV 抗原融合 h-tPA 信号肽后，小鼠抗体滴度提高 2 个数量级。2. mRNA 构建设计：引导免疫应答的 “导航系统” 通过在 mRNA 中加入特定序列，引导抗原进入目标细胞通路，精准激活所需免疫反应（图 2）： MHC-I 呈递增强：融合泛素或 MHC-I trafficking 信号（如 LAMP1），促进抗原降解和 MHC-I 呈递，增强 CD8⁺ T 细胞应答（适合胞内菌）。例如，李斯特菌疫苗中，不含信号肽的 LMON_0149 蛋白因快速降解，激活强效 CD8⁺ T 细胞反应，使小鼠感染率降低 90%。 MHC-II 呈递增强：融合 Fc 片段或 invariant chain 信号，引导抗原进入内体 - 溶酶体，通过 MHC-II 呈递激活 CD4⁺ T 细胞（辅助 B 细胞和 CD8⁺ T 细胞）。例如，新冠疫苗中 Fc 融合设计使抗体应答提升 5 倍。3. 多价疫苗：应对抗原变异的 “组合拳” 细菌常通过抗原变异逃避免疫，多价 mRNA 疫苗可同时编码多个抗原，覆盖变异株。例如： Moderna 的莱姆病疫苗 mRNA-1975 编码 7 种 OspA 血清型，覆盖欧美主要致病菌株。 BioNTech 的结核疫苗编码 Ag85A、ESAT6 等 8 种抗原，覆盖结核杆菌感染的不同阶段。五、当前研发进展：从实验室到临床的跨越 细菌 mRNA 疫苗已进入临床前和早期临床阶段，涵盖多种致病菌（表 1）。 表 1：细菌 mRNA 疫苗的研发状态（临床前与临床阶段的目标菌、抗原设计等） 1. 临床前研究：多种细菌模型验证潜力 李斯特菌：通过免疫肽组学筛选出 LMON_0149 抗原，mRNA 疫苗在小鼠中诱导强效 CD8⁺ T 细胞反应，致死剂量攻击后存活率达 100%。 鼠疫耶尔森菌：编码 F1 荚膜蛋白的 mRNA 疫苗（含 IgGκ 信号肽）在小鼠中诱导细胞免疫，虽抗体应答弱，但仍能提供部分保护；而去除信号肽后，反而诱导高滴度 IgG，实现完全保护（可能通过非传统分泌途径避免糖基化）。 百日咳杆菌：Moderna 的多价 mRNA 疫苗编码 pertactin、毒素等抗原，小鼠中诱导 Th1/Th2 平衡免疫（优于传统 DTaP 疫苗的 Th2 偏向），保护效果与全细胞疫苗相当。2. 临床阶段：首个细菌 mRNA 疫苗进入人体试验 莱姆病：Moderna 的 mRNA-1982（OspA 血清型 1）和 mRNA-1975（7 价）已进入 Ⅰ/Ⅱ 期试验（NCT05975099）。临床前数据显示，单剂疫苗诱导的抗体可在蜱虫中中和细菌，阻断传播，保护效果优于传统蛋白疫苗。 结核病：BioNTech 的 BNT164a1（未修饰 mRNA）和 BNT614b1（m1Ψ 修饰 mRNA）进入Ⅰ期试验，评估对结核杆菌的保护效果。疫苗编码多种抗原，采用不同递送系统（脾脏靶向脂质复合物 vs LNP），探索修饰对免疫原性的影响。六、未来展望：技术创新与现实挑战 细菌 mRNA 疫苗的前景广阔，但仍需突破多重障碍：1. 抗原发现的技术革新 高通量筛选：结合免疫肽组学和类器官模型，可在感染过程中动态捕捉细菌抗原，提升筛选效率。例如，结核杆菌感染的免疫肽组学研究已发现 ESAT6 等新型抗原。 AI 预测：机器学习模型（如 Vaxign-ML）可整合基因组、蛋白组数据，预测保护性抗原，减少实验验证成本。2. 疫苗设计的个性化与适应性 菌株定制：针对医院内流行的耐药菌株（如 ESKAPE 致病菌），可快速设计匹配的 mRNA 疫苗，保护免疫低下患者。 联合免疫：mRNA 疫苗与传统疫苗联用（如 mRNA prime + 蛋白 boost）可增强免疫记忆，例如结核 mRNA 疫苗与 BCG 联用可能提升成人保护率。3. 公平性与可及性 mRNA 疫苗的冷链需求（如 - 20℃储存）和生产成本限制了在低收入国家的应用。目前研究聚焦于热稳定配方（如冻干 LNP）和本地化生产，例如非洲首个 mRNA 疫苗工厂已启动建设，有望降低成本。结语 细菌 mRNA 疫苗是对抗 AMR 的 “新武器”，其灵活性和高效性为复杂细菌感染的防控提供了新思路。尽管面临抗原选择、翻译后修饰、免疫调节等挑战，但通过抗原工程、mRNA 设计优化和技术创新，这些瓶颈正逐步被突破。随着首个临床项目推进，我们有望在未来十年看到更多细菌 mRNA 疫苗上市，为终结抗生素耐药性危机提供关键支撑。 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观不本站。

摘要：随着全球人口老龄化加剧，为老年人研发有效的疫苗已成为公共卫生领域的优先事项。免疫衰老（即免疫功能随年龄增长而逐渐衰退）降低了疫苗效力，因此需要新的策略来增强该人群的免疫反应。本文综述了老年人疫苗的现状，包括针对流感、肺炎球菌病、新冠病毒、呼吸道合胞病毒和带状疱疹的疫苗，并探讨了老年人疫苗的最新进展。佐剂能够增强免疫原性，在近期的疫苗研发中发挥了重要作用。本文强调，需要持续创新以改进现有疫苗、研发针对其他感染（包括医院病原体）的疫苗，并加强疫苗接种计划的实施，以确保老年人群获得最佳的传染病防护。一、引言：老龄化背景下的疫苗需求1.1 全球人口老龄化现状老年人（65 岁及以上）是当今世界增长最快的年龄组。2018 年，全球老年人数量首次超过 5 岁以下儿童。在过去 10 年中，欧盟 65 岁以上人口的比例增加了 3 个百分点，达到 21.3%，且预计将进一步上升。从现在到 2100 年，80 岁以上人口的比例预计将增长 2.5 倍（从 6.0% 增至 15.3%）。这种人口快速老龄化给社会带来了复杂而多方面的挑战，包括对长期护理服务的需求增加、医疗基础设施的压力增大，以及养老金和社会保障系统的财务负担加重。同时，劳动年龄人口的减少可能会削弱支持这些系统的经济基础。因此，促进和维护老年人的身心健康和社会健康不仅是公共卫生的优先事项，也是减轻人口老龄化带来的更广泛社会影响的关键策略。使老年人能够独立生活、保持社会参与、管理或预防慢性病，有助于降低医疗成本并提高整体生活质量。这些努力支持积极健康的老龄化，使老年人能够尽可能长时间地保持自主性。1.2 感染对老年人的影响传染病是老年人群发病和死亡的主要原因。2021 年，在欧盟，仅新冠病毒就是 65 岁以上人群的第三大死因（占所有死亡人数的 10.9%），仅次于循环系统疾病（34.7%）和癌症（20.0%）。尽管由于疫苗接种、人群免疫力增强和治疗方法的改进，新冠病毒导致的死亡人数已大幅减少，但这些数字仍然凸显了传染病对老年人群可能造成的毁灭性影响。合并症，如慢性心脏或肺部疾病以及糖尿病，进一步增加了严重感染的风险。在欧洲，慢性阻塞性肺疾病（COPD）患者的社区获得性肺炎（CAP）发病率（每 1000 人年 22.4 例）是普通人群（每 1000 人年 1.07-1.2 例）的 20 倍以上。随着年龄的增长，患一种或多种合并症的风险增加。一项系统综述得出结论，尽管不同研究中的绝对数量有所不同（主要是由于对合并症的定义不同），但合并症的患病率，特别是多种合并症的患病率，随着年龄的增长而增加。老年人传染病的总体发病率常常被低估。除了急性疾病的直接影响外，该年龄组的感染还存在其他一些风险和后遗症。许多老年人在急性感染发作后无法完全康复。加拿大的一项研究报告，65 岁及以上因流感感染住院的患者死亡率为 12%，20% 的患者在康复后功能状态下降（9% 为中度下降，11% 为灾难性残疾）。因其他急性呼吸道感染住院的患者死亡率为 6%，17% 出现功能下降。在急性感染期间，慢性合并症的恶化很常见。例如，肺炎链球菌和其他细菌病原体可导致 COPD 急性加重。带状疱疹（HZ）患者也经常出现长期后遗症。皮疹出现后疼痛发生或持续超过 3 个月被称为带状疱疹后神经痛（PHN）。这种神经痛的治疗管理困难，对日常生活活动和生活质量的影响可能很大。总之，老年人感染引起的疾病负担远远超过急性感染发作本身。它常常导致长期后遗症和其他非感染性事件（如心肌梗死），或导致整体健康状况、功能和独立性的恶化。因此，预防传染病是确保健康老龄化和维持生活质量的重要措施。针对流感和肺炎球菌病的疫苗早已问世。本综述重点关注老年人疫苗的新进展，包括改进和推进现有疫苗的策略，以及针对其他病原体（如呼吸道合胞病毒）的疫苗的最新研发。对于老年人来说，还有许多其他病原体的疫苗是非常需要的。与年龄相关的免疫系统变化会损害疫苗的免疫原性和保护作用，因此有必要采取特定策略来保护这一脆弱人群。二、常见传染病疫苗的研发进展2.1 流感疫苗每年，季节性流感在欧盟 / 欧洲经济区（EU/EEA）导致多达 5000 万例有症状病例，15,000-70,000 名欧洲公民死于与流感相关的原因。在许多国家，接种疫苗通常是推荐的，但对老年人和其他高危人群尤为重要。流感病毒的遗传变异性很高。病毒基因组片段的交换（抗原转换）可导致具有大流行潜力的新型毒株出现。点突变（抗原漂移）导致毒株内的变异性，因此需要每年调整季节性疫苗。世界卫生组织根据持续的全球监测数据，每年确定年度疫苗的确切成分。传统上，疫苗包括两种甲型流感毒株和一种乙型流感毒株（三价），但由于两种乙型流感谱系（ Yamagata 和 Victoria）同时流行，四价疫苗被引入。然而，自新冠疫情以来，未检测到 B/Yamagata，世卫组织现在建议恢复使用三价疫苗，一些制造商已经采用了这一变化。抗流感病毒表面蛋白血凝素（HA）的抗体被广泛用作流感疫苗保护的替代标志物，血凝抑制（HAI）滴度高于 40 被认为具有保护作用。然而，特别是在老年人中，这可能不是最佳指标。研究表明，尽管老年人的抗体滴度低于年轻人，但记忆 B 细胞和浆母细胞仍被保留，这可能是由于记忆 B 细胞向浆细胞分化存在缺陷。T 细胞参数（如 IFN-γ 和 IL-10 的产生、颗粒酶 B 活性）被认为是替代的保护相关指标。尽管如此，关于流感疫苗免疫原性的绝大多数数据仍然基于 HAI 抗体滴度。标准三价灭活疫苗（TIV）在老年人中的免疫原性低于年轻人，并且有研究表明，老年人的流感特异性抗体滴度下降更快，导致血清保护作用更早丧失。除年龄外，虚弱和合并症与流感疫苗接种后较低的抗体反应相关。在纳入年轻人的安慰剂对照试验中，TIV 对实验室确诊的流感的有效率高达 70%，但在老年人中观察到较低的 efficacy。对流感疫苗效力和效果的荟萃分析很困难，因为疫苗成分每年都在变化，临床终点各不相同（流感样疾病、实验室确诊流感、住院等），并且队列之间的感染史和既往接种史可能不同。尽管存在这些不确定性，但人们一致认为，标准流感疫苗在老年人中的免疫原性和有效性低于年轻人，因此需要为老年人群改进疫苗。提高疫苗免疫原性的一个潜在方法是增加每种疫苗的抗原剂量。更大的抗原剂量应能导致抗原呈递细胞更多地摄取和呈递，从而改善适应性免疫细胞的激活。然而，更高的抗原剂量也可能导致更高的反应原性，并且在许多情况下，免疫反应存在平台期，更高的剂量无法进一步提高。此外，还需要考虑生产成本和物流。因此，优化剂量是疫苗研发的重要组成部分。尽管如此，特定人群，如老年人，可能仍然受益于更高的抗原剂量。在美国、加拿大、巴西、澳大利亚和英国等国家，三价高剂量流感疫苗（HD-TIV）已使用多年。这种疫苗每个毒株包含 60μg 血凝素，而标准疫苗为 15μg。研究表明，HD-TIV 比标准 TIV 产生更高的抗体和 T 细胞反应。对老年人 HD-TIV 与标准 TIV 临床疗效的荟萃分析表明，实验室确诊流感的风险降低（相对风险 0.76），在预防肺炎（24.3%）、流感相关住院（17.8%）和流感样疾病（19.5%）方面有更好的相对疗效。最近，与标准四价疫苗（QIV）相比，高剂量四价疫苗（HD-QIV）的有效性也得到了证实。在法国基于保险数据的研究中，HD-QIV 与标准 QIV 相比，预防流感住院的相对有效性为 23.3%；在丹麦的一项实用性开放标签试验中，预防肺炎或流感住院的相对有效性为 30%，该试验还显示对全因死亡有更高的保护作用。增强疫苗诱导的免疫反应的另一种方法是加入佐剂。佐剂是添加到疫苗制剂中的物质，可增强免疫反应的强度和持久性，并可能诱导 “靶向” 免疫反应，如 Th1 与 Th2 或 CD8⁺T 细胞反应。它们通过各种途径增强和调节注射部位和引流淋巴结中先天免疫细胞的激活，从而影响抗体和 T 细胞反应。一般来说，佐剂可分为递送系统（如乳剂、脂质体或聚合物颗粒）、免疫调节剂（如 Toll 样受体激动剂、皂苷等）或两者的组合。每种佐剂通过多种途径发挥作用，并可能在不同的细胞类型和生理环境中发挥作用。研究佐剂作用方式的细胞培养模型无法充分反映体内情况，因为先天免疫细胞的流入和迁移以及它们与适应性免疫的相互作用是佐剂功能的关键因素。因此，全面理解其作用机制并合理设计具有预定功能的佐剂是困难的。MF59 是最早的现代佐剂之一，是一种水包油乳剂，于 1997 年被批准用于为老年人设计的佐剂三价流感疫苗（aTIV）。从那时起，它也被批准用于其他年龄组和大流行性流感疫苗。MF59 含有角鲨烯以及表面活性剂吐温 80 和司盘 85。它促进注射部位促炎性趋化因子和细胞因子的释放，吸引先天免疫细胞并增强抗原摄取。此外，它支持淋巴结中树突状细胞的分化，并在塑造生发中心反应中发挥作用。与标准 TIV 相比，aTIV 诱导的抗体水平略高，CD4⁺T 细胞反应更强。值得注意的是，aTIV 诱导的抗体能更好地识别漂移的流感毒株，通过靶向 HA 蛋白上的其他表位，例如 HA 蛋白的茎部成分。一项荟萃分析报告，aTIV 在预防实验室确诊流感方面比标准 TIV 更有效（调整后的优势比 0.37；95% 置信区间：0.14-0.96），并减少与肺炎或流感相关的住院（调整后的风险比 0.75；95% 置信区间：0.57-0.98）。自 2021/2022 季节以来，已有 MF59 佐剂季节性流感疫苗的四价制剂，一项结合 aTIV 和 aQIV 数据的荟萃分析报告，与非佐剂疫苗相比，佐剂疫苗在预防流感相关医疗就诊（门诊和急诊就诊、住院）方面的相对有效性为 13.9%（95% 置信区间：4.2-23.5）。在对老年人佐剂流感疫苗与高剂量非佐剂流感疫苗的荟萃分析中，未发现一种疫苗比另一种疫苗有一致的有效性优势。目前所有可用的流感疫苗的有效性仍然不令人满意，特别是在老年人中，并且需要每年更新加强剂。因此，下一代流感疫苗的研发仍在继续，有望产生更通用的流感疫苗，具有更持久的有效性。其他佐剂已与流感抗原一起测试，AS03 已用于 2009 年的大流行性流感疫苗。2012 年首次提出并在动物模型中测试了使用 mRNA 疫苗对抗流感。SARS-CoV-2 的出现加速了基于 mRNA 的疫苗的开发，在 mRNA 疫苗成功用于新冠病毒后，针对流感的 mRNA 疫苗的临床试验正在进行中。与基于鸡蛋或细胞培养的流感疫苗相比，更快的生产过程将使延迟决定季节性成分成为可能，从而增加与即将到来的季节良好匹配的机会。mRNA 疫苗候选物 mRNA-1010 的初步结果显示，与标准流感疫苗相比，对甲型流感的抗体反应略高，但对乙型流感毒株的抗体反应没有更高。一种针对流感和新冠病毒的组合 mRNA 疫苗（mRNA-1083，NCT06097273）显示出有希望的免疫原性数据，而另一家公司的类似制剂（NCT06178991）未达到乙型流感的免疫原性目标。最近发表了一篇关于流感和其他传染病 mRNA 疫苗开发的更详细综述。正在努力开发针对流感、新冠病毒和呼吸道合胞病毒的组合 mRNA 疫苗。此外，结合流感和新冠病毒抗原与佐剂的基于蛋白质的疫苗候选物也在开发中。然而，这些发展并没有解决保护的持久性和广度问题。如上所述，佐剂流感疫苗可以诱导更广泛反应的抗体，但距离作为通用流感疫苗还有很远。目前，各种方法，如基于 HA 保守茎区的抗原、嵌合 HA 蛋白、HA 以外的保守蛋白、肽和核酸平台，正在临床试验中进行测试。HA 特异性抗体以外的免疫反应对保护的贡献程度仍不清楚。在评估替代疫苗技术时，必须考虑针对其他病毒蛋白（如神经氨酸酶）的抗体、黏膜抗体和 T 细胞。现有流感疫苗技术和当前发展的系统综述，包括 DNA 疫苗、病毒载体和类病毒颗粒，可在其他地方找到。2.2 肺炎球菌疫苗肺炎链球菌（肺炎球菌）可引起非侵袭性疾病（肺炎、中耳炎、鼻窦炎、结膜炎）或侵袭性疾病（败血症、菌血性肺炎、脑膜炎）。侵袭性肺炎球菌疾病（IPD）的发病率在婴儿和老年人中最高，肺炎球菌是老年人社区获得性肺炎（CAP）的最常见原因。在美国，估计 50 岁及以上人群每年发生近 30,000 例侵袭性肺炎球菌疾病（IPD）和超过 500,000 例非菌血性肺炎球菌肺炎，导致超过 25,000 例与肺炎球菌相关的死亡。流感患者中常见细菌合并感染或继发感染。尽管不同研究中合并感染的患病率有所不同，但一项荟萃分析发现，11% 至 35% 的流感病例发生细菌感染，其中肺炎链球菌是最常见的病原体，占所有细菌合并感染的 35%（95% 置信区间：14%-56%）。肺炎链球菌有 100 种不同的血清型，通过其多糖荚膜来区分，但只有相对较少的血清型会导致疾病。免疫反应在很大程度上是血清型特异性的，因此选择要包含在疫苗中的血清型至关重要。第一种肺炎球菌疫苗是多糖疫苗（PPV），包含 23 种血清型的纯化细菌荚膜多糖（PPV-23，Pneumovax，默克公司），并对致病性血清型提供了很好的覆盖。纯化的多糖是 T 细胞非依赖性抗原。没有 T 细胞的帮助，B 细胞的激活和分化独立于生发中心，导致短期抗体产生（主要是 IgM 和 IgG2），并且缺乏 B 细胞记忆。多糖不能在婴儿中诱导有效的免疫反应，因此 PPV-23 仅被批准用于成人。它已使用了几十年，在许多国家仍被推荐。肺炎球菌结合疫苗（PCV）是为儿童接种而开发的，第一种 PCV 包含 7 种血清型（PCV-7，Prevenar 7，惠氏 / 辉瑞公司）。多糖与载体蛋白化学结合，最常见的是白喉类毒素。这促进了 T 细胞依赖性免疫反应，其中载体特异性 T 细胞为多糖特异性 B 细胞提供 T 细胞帮助。可以发生类别转换和亲和力成熟，产生记忆 B 细胞，并且结合疫苗（PCV）在婴儿中具有免疫原性。PCV-7 仅被批准用于儿童，不用于成人，其在儿童接种计划中的使用大大降低了儿童肺炎球菌疾病的发病率。老年人中 IPD 的发病率也有所下降，可能是由于儿童向老年人的传播减少，因为 PCV 不仅可以预防疾病，还可以预防肺炎球菌的携带。然而，在几年内，观察到血清型替换，由 PCV-7 中未包含的血清型引起的肺炎球菌疾病发病率增加。包含更多血清型的 PCV 取代了儿童接种计划中的 PCV-7。PCV-13（Prevenar 13）是第一种也被批准用于成人的 PCV，如今，PCV-15（Vaxneuvance，默克公司）和 PCV-20（Prevenar 20）已上市。这些疫苗的血清型组成与 PPV-23 非常相似（表 1）。在一项广泛的荟萃分析中，PPV-23 的汇总疫苗效力 / 效果（VE）在不同类型的研究中计算得出，从临床试验中针对 IPD 的 73% 到队列研究中的低于 50% 不等。在一项包括超过 84,000 名老年人的大型 IV 期随机、安慰剂对照试验中测试了 PCV-13 的临床效力。PCV-13 对疫苗型菌株引起的社区获得性肺炎（CAP）首次发作的有效率为 45.6%（95% 置信区间：21.8-62.5%），对疫苗型 IPD 的有效率为 75.0%（95% 置信区间：41.1-90.8%）。在欧洲和美国，更高价疫苗 PCV-15 和 PCV-20 的许可关键试验没有调查临床效力，但证明了对于常见血清型，抗体反应不劣于其他 PCV 和 PPV-23。功能性抗体通过调理吞噬试验（OPA）来测量，这是检测肺炎球菌抗体的金标准，特别是在老年人和免疫功能低下的患者中，因为 OPA 滴度与 ELISA 测定的抗体水平没有很强的相关性。最近的一项系统综述和荟萃分析确定了几项比较 PCV-15 与 PCV-13 或 PPV-23 的免疫原性的研究，并证实了在不同环境中的非劣效性，但仍没有临床有效性数据。欧洲的疫苗接种建议差异很大。一些国家推荐 PCV 或 PPV-23，或者有时推荐 PCV 之后接种 PPV-23。许多国家最近调整了他们的建议，在更高价疫苗可用时用 PCV-15 或 PCV-20 取代了 PCV-13。国家建议的不确定性和不一致性可能导致许多国家的肺炎球菌疫苗接种覆盖率仍然很低。哪种肺炎球菌疫苗接种策略能提供最佳的疾病保护仍然存在争议。关于 PPV 和 PCV 联合接种或任一疫苗重复接种的临床效力数据缺乏。如上所述，在广泛开展儿童结合疫苗接种后出现了血清型替换。研究表明，儿童和成人的血清型流行率不同，部分原因是血清型替换事件。成人的肺炎球菌疾病由目前用于儿童和成人的疫苗中包含的一些血清型引起，但也由现有疫苗未涵盖的一些血清型引起。因此，考虑在不同年龄组的疫苗中包含不同的血清型可能是明智的。过去几年一直遵循这种方法，专门为成人人群开发了 21 价结合疫苗（PCV-21，Capvaxive，默克公司），其血清型组成有很大不同。它包含 8 种 PPV-23 或任何其他 PCV 中未包含的独特血清型（表 1），以提供对成人肺炎球菌疾病致病血清型的最广泛覆盖。PCV-21 于 2024 年在美国和 2025 年在欧洲获得许可。与其他高价结合疫苗类似，其许可基于临床试验，这些试验表明对于常见血清型，其免疫原性不劣于其他 PCV 和 PPV。在美国，免疫实践咨询委员会（ACIP）已推荐 PCV-21 作为有肺炎球菌疫苗接种指征的成人的选择之一。下一代肺炎球菌疫苗的几种替代策略正在推进中。克服血清型特异性免疫反应和血清型替换限制的通用肺炎球菌疫苗将是非常理想的。正在开发几种利用全细胞制剂、肺炎球菌蛋白质或肽的疫苗候选物，其中许多使用不同的佐剂。此外，减毒活疫苗选项也在评估中。其中一些疫苗候选物在早期临床试验中显示出有希望的安全性和免疫原性特征。已考虑将佐剂与多糖或结合疫苗结合使用，但明矾不能改善 T 细胞非依赖性多糖特异性免疫反应，并且与多糖结合物结合使用也没有益处。几种 TLR 激动剂与肺炎球菌多糖联合测试，但没有改善抗体反应，而其他佐剂（如 IC31 或 MPL + 油包水乳液中的合成索因子）在动物模型中显示出令人鼓舞的结果，但尚未进行临床测试。鉴于肺炎链球菌的 antimicrobial resistance 潜在问题，持续推进有效的疫苗以预防肺炎球菌疾病至关重要。2.3 新冠病毒疫苗老年人、有潜在合并症的人和肥胖者患新冠病毒重症和死亡的风险最高。有效的疫苗对于控制疫情至关重要，老年人过去是、现在仍然是新冠病毒疫苗接种的重要目标群体。病毒载体和 mRNA 疫苗平台已经研究了很长时间，但在 SARS-CoV-2 疫情期间首次获得许可。此外，还开发了更多 “传统” 类型的疫苗，如含佐剂的亚单位疫苗。本节涵盖在欧洲和美国使用最广泛的疫苗类型，即 mRNA 疫苗 BNT162b2（Comirnaty，BioNTech / 辉瑞公司）和 mRNA-1243（Spikevax，Moderna 公司）、腺病毒载体疫苗 AZD1222（ chimpanzee 腺病毒 ChAdOx1nCoV-19，Vaxzevria，牛津 / 阿斯利康公司）和 Ad26-COV2（人类腺病毒 26，Jansen / 强生公司），它们都编码 SARS-CoV-2 刺突蛋白的遗传信息，以及亚单位疫苗 NVX-CoV2373（Nuvaxovid，诺瓦瓦克斯公司），其中包含组装成纳米颗粒的刺突蛋白和基于皂苷的佐剂 Matrix M。在不同国家，更多的疫苗已获得许可和使用。对所有新冠病毒疫苗的全面综述超出了本文的范围。新冠病毒疫苗的临床开发迅速从年轻人、健康成人的早期临床试验转向纳入老年人。I/II 期试验纳入了老年人，并证明 mRNA 疫苗在老年人群中保留了良好的体液和 CD4⁺T 细胞介导的免疫原性。AZD1222 疫苗接种后的抗体水平和中和滴度以及 T 细胞反应在 18-55 岁、56-69 岁和≥70 岁年龄组中相似。65 岁以上成人接种一剂 Ad26-COV2 疫苗后的抗体和 CD4⁺T 细胞反应略低于年轻年龄组，并且与年龄相关的免疫原性下降在 CD8⁺T 细胞反应中尤为明显。接种 NVX-CoV2373 后，老年人的抗体反应也略低，但仍然足够。在 mRNA 疫苗的关键 III 期试验中，针对有症状或严重新冠病毒的临床效力在老年人群（如 > 60 岁）中保持良好，但这些试验没有纳入足够多的高龄（>75 岁）参与者。NVX-CoV2373 在年轻人和老年人（>65 岁）中的效力也相似。AZD1222 的早期研究仅纳入了极少数老年参与者，没有提供按年龄分层的分析，导致一些国家在疫苗接种运动开始时仅推荐该疫苗用于年轻人。后来的研究结果表明，AZD1222 在 65 岁以上成人中也有效。Ad26-COV2 的关键 III 期试验未显示 60 岁以下和 60 岁以上参与者在预防严重新冠病毒疾病的效力方面存在差异。疫苗推出后不久，收集的第一批真实世界数据显示，即使在最高年龄组中，疫苗的有效性也很高，特别是针对严重疾病。关于疫苗推出后早期阶段疫苗效力和有效性的全面综述可在其他地方找到。在接下来的几年中，新冠病毒疫苗接种面临几个挑战。中和抗体对新出现的病毒变体的效力较低，并且很明显，对感染和轻中度疾病的保护仅持续很短时间，这导致公众认知的不确定性。尽管如此，至少接种三剂疫苗后，对严重疾病、住院和死亡的保护率很高。真实世界数据显示，额外的加强剂降低了严重和致命疾病的风险，也（尽管程度较轻且持续时间较短）降低了感染风险。已经开发了几种针对新出现变体的更新疫苗，并依次取代了原始疫苗。世界大多数人口已接种一剂或在大多数情况下多剂新冠病毒疫苗，并且也（反复）被感染。尽管如此，特别是老年人仍然面临严重或致命疾病的风险，许多国家建议风险人群（例如老年人）定期（例如每年）使用最新的变体疫苗进行接种。尽管定期加强剂可提供对变体的保护，并且（至少暂时）提高抗体水平和 T 细胞免疫力，但额外剂量的接种率有所下降。在疫情期间，人们预计新冠病毒将演变为季节性呼吸道感染，类似于流感和呼吸道合胞病毒。然而，到目前为止，新冠病毒的季节性仍然不可预测，在一年中的不同时间会出现发病率增加的浪潮。这种现象使得加强疫苗接种运动的最佳时机相当困难。目前，这可能至少限制了正在开发的联合疫苗（如新冠病毒 + 流感）的有用性（见上文）。改进的新冠病毒疫苗的开发正在进行中。黏膜免疫（例如通过鼻内疫苗诱导）可能是除预防严重疾病外预防感染的关键。持久免疫仍然是一个需要实现的目标，泛冠状病毒疫苗将解决病毒变体的问题，并能在另一种冠状病毒可能引发新疫情时提供保护。2.4 带状疱疹疫苗初次感染通常发生在儿童时期，表现为水痘（水痘），水痘 - 带状疱疹病毒（VZV）在感觉神经节中建立终身潜伏。再激活通常由特异性细胞免疫反应（CMI）控制，并且保持无症状。然而，如果病毒特异性 CMI 受损（例如在免疫抑制下或老年时），再激活无法控制，并表现为带状疱疹（带状疱疹）。研究表明，VZV 特异性 T 细胞反应随年龄下降，≥70 岁人群的 T 细胞反应低于 60-69 岁人群，而抗体水平与年龄无关，且与 CMI 不相关。病毒发生复制，并沿着感觉神经扩散到相应的皮节，导致节段性、通常为单侧的皮疹。50 岁以上人群以及接受免疫抑制治疗的人群（如骨髓和实体移植受者以及自身免疫性疾病患者）的带状疱疹发病率显著增加。基于 Oka 默克病毒株的减毒活疫苗用于儿童接种，预防初次感染（水痘）。相反，成人 VZV 疫苗旨在恢复初次感染期间产生的 VZV 特异性免疫反应，从而预防再激活的临床症状（带状疱疹）。相同的减毒活菌株（剂量高 14 倍）被用作第一代疫苗来预防带状疱疹（Zostavax，MSD）。在关键的 III 期随机、双盲、安慰剂对照试验中，该疫苗在老年人中预防带状疱疹的效力为 51%，预防 PHN 的效力为 67%。然而，在年龄最大的参与者中观察到 T 细胞反应降低，这也反映在较低的效力中（60-69 岁：64%；70-79 岁：41%；≥80 岁：低于 20%）。疫苗的保护作用会随着时间的推移而减弱，在接种后约 10 年消失。减毒活疫苗不适合高风险患带状疱疹的免疫功能低下患者。第二代重组带状疱疹疫苗于 2017 年在美国首次获得许可（Shingrix，GSK）。现在在许多国家，它被优先使用。该疫苗包含病毒包膜糖蛋白 E（gE）和佐剂系统 AS01B，后者由 3-O - 去酰基 - 4'- 单磷酰脂质 A（MPL，脂多糖的衍生物）和 QS-21（一种来源于 Quillaja Saponaria 树树皮的皂苷）组成，配制在脂质体中作为抗原递送系统。佐剂系统能够有效摄取抗原并激活先天免疫细胞。与不含佐剂的 gE 制剂相比，AS01 佐剂制剂诱导显著更高水平的抗原特异性 T 细胞和抗体水平，特别是在老年人中。在两项关键的 III 期随机安慰剂对照试验中，佐剂重组疫苗（两剂，间隔 8 周）在 50 岁以上人群中的临床效力分别为 97.2%（95% 置信区间：93.7-99.0），在 70 岁以上人群中的临床效力为 89.8%（95% 置信区间：86.8-94.5）。综合分析显示效力没有显著的年龄相关下降。在这些研究中，即使在虚弱和体弱的亚队列中，效力也约为 90%。长期随访表明，效力仅略有下降，并在 10 年后保持。关于有效性的真实世界数据证实了这些发现，并强调需要第二剂才能获得保护，但延迟接种第二剂不会损害有效性。如上所述，接受免疫抑制的人患带状疱疹的风险很高，与减毒活疫苗相比，重组疫苗适合这些患者。在接受免疫抑制治疗或血液系统恶性肿瘤化疗的患者、肾移植后的患者以及 HIV 感染者的临床试验中，已证明了其安全性和免疫原性。一项荟萃分析报告，在随机对照试验中，总体效力为 60%（95% 置信区间：49-69），在免疫功能低下患者中的真实世界有效性为 65%（95% 置信区间：57-72）。2.5 呼吸道合胞病毒疫苗呼吸道合胞病毒（RSV）在婴儿中引起严重的呼吸道感染，并且越来越认识到它也是导致老年人（特别是体弱人群）严重疾病的原因。根据荟萃分析的估计，在工业化国家，RSV 在 50 岁及以上成人中引起 150 万例疾病发作（95% 置信区间：30 万 - 690 万例），其中估计 14.5%（214,000 例，95% 置信区间：100,000-459,000 例）住院，1.6%（95% 置信区间：0.7-3.8%）死亡。与其他呼吸道感染类似，RSV 增加心血管事件的风险，可导致肺功能下降，并可能与整体健康状况恶化有关。20 世纪 60 年代的第一种 RSV 疫苗与婴儿中抗体介导的疾病增强风险相关，这阻碍了疫苗开发数十年。第二代用于成人的佐剂蛋白疫苗候选物已进入临床试验，但尽管有令人鼓舞的安全性和免疫原性数据，仍未能证明临床效力。最近，三种新型 RSV 疫苗被批准用于老年人。使成功的 RSV 疫苗开发成为可能的科学突破是阐明了表面 F 蛋白的融合前和融合后构象，并认识到只有稳定的融合前 F 蛋白才是合适的抗原性疫苗抗原。这些疫苗包含 RSV-A 和 RSV-B 的 pre-F 蛋白（RSVpreF，Abrysvo，辉瑞公司）、佐剂 AS01E 的 RSV-A 的 pre-F 蛋白（GSK3844766A，Arexvy，GSK 公司），或编码脂质纳米粒中 RSV-A 的 pre-F 蛋白的 mRNA（mRNA-1345，mRESVIA，Moderna 公司）。添加佐剂 AS01E 增强了老年人的多功能 CD4⁺T 细胞反应，并导致更广泛的中和抗体反应，不仅识别疫苗株，还识别抗原性遥远株的 F 蛋白变体。在针对 60 岁以上人群的三项疫苗的关键 III 期安慰剂对照试验中，评估了对下呼吸道感染（LRTI）的临床效力。参与者队列、研究设计和临床终点略有不同，这使得直接比较效力数据变得困难。对于佐剂蛋白疫苗，60 岁及以上人群的 RSV 相关 LRTD 效力为 82.6%（95% 置信区间：57.9-94.1），严重 RSV 相关 LRTI 的效力为 94.1%（95% 置信区间：62.4-99.9），RSV 相关急性呼吸道感染病例的效力为 71%（95% 置信区间：56.2-82.3），并且对 RSV A 和 B 的效力相似。在所有年龄组（60-69 岁、70-79 岁）和有潜在合并症的参与者中都观察到高疫苗效力。非佐剂双价蛋白疫苗对 LRTI 的效力为 66.7%（95% 置信区间：28.8-85.8），对严重 LRTI 的效力为 85.7%（95% 置信区间：32.0-98.7），并且对 RSV A 和 B 未观察到主要差异。mRNA 疫苗对 LRTI 和严重 LRTI 的效力分别为 83.7%（95% 置信区间 66.0-92.2）和 82.4%（95% 置信区间：34.8-95.3）。在所有 III 期试验中，80 岁及以上的参与者数量太少，无法显示具有统计学意义的结果。几项研究调查了美国蛋白质疫苗推出后的有效性。例如，一项大型测试阴性设计研究显示，针对 RSV 相关住院的临床有效性为 80%（95% 置信区间：52-92），证实了临床试验的数据。还表明，尽管接种了疫苗，但接种疫苗减少了感染 RSV 的患者的疾病严重程度。RSV 疫苗接种中的一个重要考虑因素是保护持续时间。两种蛋白质疫苗都有两个季节的保护数据，并显示在两个季节内具有强大的效力。佐剂蛋白疫苗第三个季节的随访初步结果令人鼓舞，但尚未发表。可能需要考虑的是，与流感疫苗相比，更长的保护持续时间可能使 RSV 疫苗不必严格按季节使用，而是能够在一年中任何有机会的时候进行接种。初步数据显示，一年后再次接种佐剂疫苗与单剂相比提供了额外的保护。其他两种疫苗的再次接种效力数据尚未获得。因此，目前无法就定期加强疫苗接种的必要性和益处得出结论，国家建议通常只包括单剂。三、疫苗研发的挑战与未来方向3.1 现有疫苗存在的问题尽管目前针对多种传染病的疫苗已投入使用，但在老年人中的效果仍有不足。例如，流感疫苗的有效性在老年人中相对较低，且需要每年更新加强剂，保护的持久性和广度也有待提升。肺炎球菌疫苗虽然不断更新换代，增加了血清型 coverage，但血清型替换问题依然存在，且不同国家的接种建议存在差异，影响了接种效果。新冠病毒疫苗则面临病毒变体不断出现的挑战，对感染和轻中度疾病的保护持续时间较短，需要定期接种加强剂，而加强剂的接种率却在下降。3.2 未来疫苗研发的重点未来的疫苗研发需要在多个方面努力。一方面，要提高现有疫苗的有效性和保护持续时间，例如研发更通用的流感疫苗，克服病毒变异带来的问题。另一方面，要拓展疫苗的 coverage，针对更多病原体开发疫苗，如诺如病毒、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌等医院感染病原体，以及人偏肺病毒、副流感病毒等呼吸道病原体。在技术方面，多组学方法、机器学习或人工智能方法为疫苗研发提供了新的可能，有助于深入理解疫苗作用的潜在原理，加速疫苗的合理设计。例如，利用这些技术可以更好地筛选抗原和佐剂的最佳组合，提高疫苗的免疫原性和针对性。此外，对于不同年龄组，应考虑开发适合其特点的疫苗。由于儿童和成人的血清型流行率存在差异，且老年人的免疫系统存在衰老现象，因此针对不同年龄组设计包含不同血清型或采用不同佐剂的疫苗，可能会提高疫苗的保护效果。四、疫苗接种的实施与推广4.1 接种现状与问题近年来，成人疫苗接种的重要性日益得到认可，老年人可用的疫苗数量稳步增加。然而，在大多数国家，成人疫苗在常规医疗中的实施、财政覆盖和接种率都低于儿科疫苗。这主要是由于多种因素导致的，如接种机会不足、公众对成人疫苗的认知不足、疫苗犹豫以及信息传播不畅等。4.2 改进措施为了提高老年人的疫苗接种率，需要采取一系列措施。首先，要为老年人提供便捷的接种条件，不仅包括财政覆盖，还包括合理的物流安排，如增加接种点（全科医生、专科医生、医院、社区护士、药店或接种中心等），根据医疗系统的具体架构发挥不同机构的作用。其次，联合疫苗可能是一种高效的策略，可以同时预防多种病原体感染。但需要确保不同抗原组合时免疫原性和效力不受影响，反应原性和安全性良好，且接种时间表（季节性、保护持续时间等）兼容。再者，疫苗接种记录至关重要，不仅有助于个人做出接种决策和接收提醒，还能监测人群中的疫苗安全性和有效性。最后，要应对日益增长的疫苗犹豫和虚假信息问题。需要向不同目标群体（包括接种医疗人员和公众）有效传播可靠的科学信息，医疗人员应做好准备回答问题和揭穿虚假信息。同时，需要投资于特定的信息宣传活动以及一般的健康和科学素养教育，以抵制虚假信息。五、结论疫苗已被证明有潜力拯救许多生命，改善老年人群的健康状况。它们是提高生活质量、降低发病率和死亡率，从而节省健康和社会系统成本的重要策略。我们需要在基础研究、疫苗研发、疫苗接种计划的实施和信息宣传活动方面继续努力，以充分发挥疫苗的潜力，为不断增长的老年人群提供最佳保护。识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观不本站。