Rose Bengal disodium

大戟二萜（Euphorbia diterpenoids）是从中国传统药用植物大戟属（Euphorbia genus）中分离的一类天然产物，具有复杂碳骨架、密集立体中心和广泛生物活性，是全合成的热点目标。2016年，邱明华团队从传统草药斑地锦（E. peplus）中分离出Pepluanol A、B及Pepluacetal，并于2018年进一步发现了Pepluanol C、D（图1）。这些化合物结构独特，并可通过靶向Kv1.3通道展现免疫抑制活性，对自身免疫疾病有潜在治疗价值。由于该类天然产物复杂而独特的结构及良好的应用前景，Pepluanol二萜成为全合成的热点。2017年，丁寒锋团队通过钛介导自由基环化作为关键步骤，首次实现了Pepluanol A的全合成（22步）。2021年，Gaich团队以Diels-Alder反应为核心步骤，实现了Pepluanol A的10步全合成。2020年，厍学功团队利用烯烃复分解等策略首次合成Pepluanol B。该团队于2024年进一步通过Wolff重排和Rh催化C-H插入策略完成Pepluacetal的首次全合成（27步）。上述精彩的工作为该类天然产物的合成研究提供了重要的启示。 图1. Pepluanol家族天然产物 复旦大学孙域团队通过采用发散性合成策略，利用多种光化学反应，成功实现了天然产物Pepluanol A及 Pepluacetal的高效合成（图2）。其中，Pepluanol A的合成采用[4+2]Diels-Alder反应作为骨架合成的关键策略，而Pepluacetal采用光促进的[2+2]环加成反应构筑天然产物的核心骨架。两条合成路线均采用Mortita-Baylis-Hillman反应实现前体的构筑，并分别通过HWE烯化反应或Julia-Kocienski烯化反应实现片段链接，进而追溯到共同中间体醛14。14可通过臭氧化反应切断烯醇甲醚15，由Baran课题组合成的中间体16制备。值得一提的是，本工作与2021年Gaich团队Pepluanol A的合成采用了相同的起始原料，但其Diels-Alder策略采用了完全不同的切断方式。 图2. Pepluanol A及Pepluacetal的逆合成分析 根据逆合成方案，孙域团队开展了Pepluanol A的全合成（图3）。从商品化的(+)-3-蒈烯出发，经三步反应可制得Baran中间体16。将16经KHMDS/MeOTf处理制得烯醇甲醚15后，直接进行臭氧解反应，以54%两步收率得到关键醛中间体14。随后通过HWE反应将14与磷酸酯17连接，以89%收率和>98:2的E/Z选择性构建二烯化合物17。经DIBAL-H还原得到醛8，后者与烯酮18经Morita-Baylis-Hillman反应连接，再经Dess-Martin氧化原位生成[4+2]前体7。该产物可自发进行分子内Diels-Alder反应，以63%收率和>98%非对映选择性得到目标产物6。推测C16位的甲基的位阻取代对[4+2]转化的面选择性起到了关键作用。值得一提的是该反应需在低浓度（0.005 M）下进行以抑制分子间DA等副反应。 通过一锅法Saegusa-Ito氧化条件可顺利实现A环烯酮的构建，以81%收率得到19。但后续的光诱导烯反应遇到显著挑战：常规光催化剂（如TPP、Rose Bengal）均不能使19转化；亚甲基蓝仅导致微量烯烃异构体20生成（约10%）并伴随严重分解。采用光氧化还原催化剂Ir(dtbbpy)(ppy)2PF6时，在乙腈中反应转化率仅30%。受罗佗平课题组在vinigrol全合成中氘代溶剂效应的启发，研究团队将溶剂更换为氘代乙腈后，烯反应转化率提升至>98%，分别以24%和65%的收率获得目标产物Pepluanol A（1）及其异构体20。最后通过Shenvi团队的HAT异构化方法，可将20以84%收率转化为1。 图3. Pepluanol A的10步全合成 在完成对pepluanol A（1）的全合成后，研究团队进一步开展了pepluacetal（2）的合成研究（图4）。基于发散性设计，以共同中间体14为起点，经两步Julia−Kocienski烯基化/还原可得到醛11，总收率82%，E:Z选择性8:1。参照化合物1的合成路线，11与烯酮18经Morita−Baylis−Hillman反应后，用PDC原位氧化得到烯二酮10。该化合物室温易分解，需立即使用。在[2+2]光环加成中，254、365、390或450 nm照射均未得到目标产物，而310 nm照射可高效转化为单一非对映异构体9（两步收率47%）。该反应与合成1中的[4+2]环加成类似，具有立体专一性。值得一提的是，该反应未观察到竞争性的[5+2]型环加成产物。 图4. Pepluacetal的12步全合成 全合成研究的开展为后续的活性研究奠定了基础。项目团队获得了一系列具有复杂结构与潜在生物活性的天然产物及其类似物。通过与上海交通大学仁济医院杨帆课题组合作，项目团队证实了该类化合物具有抗肺纤维化活性（图5）。小鼠原代肺成纤维细胞中的抗纤维化活性测试表明：化合物20、9和21对纤连蛋白表达表现出强抑制活性（IC50分别为7.04 μM、6.53 μM和3.60 μM）；化合物2和19亦具显著效果（IC50为11.78 μM和14.66 μM）；其余化合物无明显活性（IC50 > 20 μM）。值得注意的是，天然产物1和2的活性弱于其合成衍生物20和21，这为该类化合物的结构优化与活性研究提供了重要依据。 图5. 构效关系与活性研究 小结 本工作从共同中间体14出发，完成了结构复杂的大戟烷型二萜pepluanol A（1）和pepluacetal（2）的发散性全合成。路线分别以10步通过分子内Diels−Alder [4+2]环加成策略构建1，以12步通过立体选择性光促进的[2+2]环加成制备2。两部分合成工作均体现了良好的路线简洁性与精准的立体化学控制。后续合作开展的活性研究首次揭示了该类化合物具有抗肺纤维化活性，这为该类中药提取物的活性成分研究及其药用价值的深入挖掘创造了有利条件。 J. Am. Chem. Soc., 2026, DOI: 10.1021/jacs.6c01271

研究背景： 代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是全球范围内最常见的肝脏疾病，其特征为肝细胞内脂质过度蓄积，常伴随炎症和纤维化进展。随着肥胖和代谢综合征发病率攀升，MASLD已成为重大公共卫生挑战，部分患者可进展为代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）、肝硬化甚至肝细胞癌。目前FDA唯一批准的治疗药物Resmetirom（2024年获批）存在腹泻、恶心等副作用，且长期疗效有待验证。肝细胞内脂质滴（Lipid Droplet, LD）作为储存中性脂质（如甘油三酯TAG、胆固醇酯）的细胞器，其过度蓄积是MASLD病理核心，但现有治疗策略多聚焦于间接调控，缺乏直接靶向脂滴降解的手段。 针对上述问题，韩国汉阳大学Joonseok Lee、Hyunbeom Lee团队联合韩国科学技术研究院（KIST）Jinyoung Park团队及汉阳大学医学院Dae Won Jun团队，构建了一种脂质滴抑制剂（Lipid Droplet Inhibitor, LDI），以超大孔二氧化硅纳米颗粒（pSiO₂）为支架，共价偶联蛋白激酶Cα的C1A结构域（PKCαC1A）与假丝酵母脂肪酶（Candida rugosa lipase, CRL），形成pSiO₂@C1A@CRL双功能纳米系统。C1A以高亲和力（Kd≈3.6±0.5 nM）捕获二酰甘油（DAG）阻断TAG合成，CRL则催化TAG水解为游离脂肪酸（FFA）与单酰甘油（MAG）；两亲性生物分子使LDI在脂-水界面形成Pickering乳液，确保稳定锚定并高效降解脂滴。该纳米平台在棕榈酸诱导的HepG2细胞模型中显著降低脂滴与甘油三酯水平，在高脂饮食诱导的MASLD小鼠模型中使肝损伤评分最高降低84%，脂质组学分析证实其有效调控肝脏脂质谱。该文章于于2025年10月4日以《LDI, A Lipid Droplet Inhibitor, Disrupts Lipid Accumulation and Modulates Hepatic Lipid Profiles in Fatty Liver》为题发表于《Advanced Materials》（DOI: 10.1002/adma.202506373）。 图1. 脂质滴抑制剂（LDI）开发示意图。超大孔二氧化硅纳米颗粒（pSiO₂）先经PKCαC1A结构域（C1A）功能化以捕获二酰甘油，再偶联假丝酵母脂肪酶（CRL）降解甘油三酯，形成最终LDI。该双功能系统捕获脂质并促进其分解。 （1）LDI的制备与表征 研究团队以CTAC/苯甲酸钠（摩尔比0.85）为反电荷表面活性剂，经蠕虫状胶束自组装合成孔径约20 nm、粒径约100 nm的pSiO₂，符合肝窦内皮细胞窗孔穿透尺寸（人≈100 nm，小鼠≈140 nm）；氮吸附-脱附分析显示其比表面积达627.929 m²/g、孔容1.34 cm³/g，分别为nSiO₂（31.194 m²/g）的20.1倍和4.3倍，Geodict模拟证实pSiO₂内部孔隙可产生纳米级涡流以增强脂质-生物分子接触（图2a-d）。进一步构建三种功能化纳米颗粒：脂质清除剂（LS, pSiO₂@C1A）、脂质分解剂（LB, pSiO₂@CRL）及双功能LDI；BCA定量显示pSiO₂蛋白负载量为nSiO₂的4.79倍，LS、LB、LDI负载量依次为1.16、0.7、1.39 mg/mL，FTIR酰胺I/II带特征峰（1643.3/1536.6 cm⁻¹）及SDS-PAGE条带（LS: 6 kDa；LB: 58 kDa；LDI: 双条带）证实C1A与CRL成功偶联（图2e-m）。 图2. LDI及其他二氧化硅纳米结构的表征。a）使用Geodict软件对pSiO₂进行计算建模；b、c）在给定平均流速（1.0×10⁻⁶ m s⁻¹）下虚拟模型中流速场与流线的三维图像；d）虚拟模型中单脂质分子（黑色纳米颗粒）的分布；e-g）纳米颗粒示意图：LS携带C1A、LB装载假丝酵母脂肪酶（CRL）、LDI共固定两种生物分子；h-j）pSiO₂与非孔二氧化硅纳米颗粒（nSiO₂）的BCA测定；k）SiO₂纳米颗粒、C1A、CRL及其功能化形式LS、LB和LDI的FTIR光谱；l）生物分子及三种功能化纳米颗粒的变性还原凝胶电泳分析；m）LDI的SEM图像。所有数据以均值±标准差表示，n=3次独立实验。 （2）LDI与人工脂质滴的紧密结合及尺寸缩减 以三丁酸甘油酯制备人工脂质滴，光学显微镜监测显示：LS组与pSiO₂及BSA/酪蛋白/脱脂乳阴性对照类似，40分钟内脂滴尺寸无变化，证实C1A单独不与TAG直接作用；LB与LDI组脂滴分别缩减73.3%和97.5%，显著高于nSiO₂@C1A@CRL（45.4%），LDI中C1A捕获DAG使CRL持续作用于新底物，故降解率优于LB（图3a,b）。Rose Bengal标记LDI的CLSM显示脂滴外壳呈明亮橙色荧光环，2.5D/3D重建证实LDI包裹脂滴；SEM显示LDI包裹约6 μm人工脂滴维持球形结构，而裸脂滴在相同电子束电压下受损；界面张力由15.9降至8.7 mN/m，证实Pickering乳液效应使LDI自发锚定于脂-水界面（图3c-g）。 研究背景： 代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是全球范围内最常见的肝脏疾病，其特征为肝细胞内脂质过度蓄积，常伴随炎症和纤维化进展。随着肥胖和代谢综合征发病率攀升，MASLD已成为重大公共卫生挑战，部分患者可进展为代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）、肝硬化甚至肝细胞癌。目前FDA唯一批准的治疗药物Resmetirom（2024年获批）存在腹泻、恶心等副作用，且长期疗效有待验证。肝细胞内脂质滴（Lipid Droplet, LD）作为储存中性脂质（如甘油三酯TAG、胆固醇酯）的细胞器，其过度蓄积是MASLD病理核心，但现有治疗策略多聚焦于间接调控，缺乏直接靶向脂滴降解的手段。 研究背景： 研究背景： 代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是全球范围内最常见的肝脏疾病，其特征为肝细胞内脂质过度蓄积，常伴随炎症和纤维化进展。随着肥胖和代谢综合征发病率攀升，MASLD已成为重大公共卫生挑战，部分患者可进展为代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）、肝硬化甚至肝细胞癌。目前FDA唯一批准的治疗药物Resmetirom（2024年获批）存在腹泻、恶心等副作用，且长期疗效有待验证。肝细胞内脂质滴（Lipid Droplet, LD）作为储存中性脂质（如甘油三酯TAG、胆固醇酯）的细胞器，其过度蓄积是MASLD病理核心，但现有治疗策略多聚焦于间接调控，缺乏直接靶向脂滴降解的手段。 代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是全球范围内最常见的肝脏疾病，其特征为肝细胞内脂质过度蓄积，常伴随炎症和纤维化进展。随着肥胖和代谢综合征发病率攀升，MASLD已成为重大公共卫生挑战，部分患者可进展为代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）、肝硬化甚至肝细胞癌。目前FDA唯一批准的治疗药物Resmetirom（2024年获批）存在腹泻、恶心等副作用，且长期疗效有待验证。肝细胞内脂质滴（Lipid Droplet, LD）作为储存中性脂质（如甘油三酯TAG、胆固醇酯）的细胞器，其过度蓄积是MASLD病理核心，但现有治疗策略多聚焦于间接调控，缺乏直接靶向脂滴降解的手段。 代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是全球范围内最常见的肝脏疾病，其特征为肝细胞内脂质过度蓄积，常伴随炎症和纤维化进展。随着肥胖和代谢综合征发病率攀升，MASLD已成为重大公共卫生挑战，部分患者可进展为代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）、肝硬化甚至肝细胞癌。目前FDA唯一批准的治疗药物Resmetirom（2024年获批）存在腹泻、恶心等副作用，且长期疗效有待验证。肝细胞内脂质滴（Lipid Droplet, LD）作为储存中性脂质（如甘油三酯TAG、胆固醇酯）的细胞器，其过度蓄积是MASLD病理核心，但现有治疗策略多聚焦于间接调控，缺乏直接靶向脂滴降解的手段。 代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是全球范围内最常见的肝脏疾病，其特征为肝细胞内脂质过度蓄积，常伴随炎症和纤维化进展。随着肥胖和代谢综合征发病率攀升，MASLD已成为重大公共卫生挑战，部分患者可进展为代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）、肝硬化甚至肝细胞癌。目前FDA唯一批准的治疗药物Resmetirom（2024年获批）存在腹泻、恶心等副作用，且长期疗效有待验证。肝细胞内脂质滴（Lipid Droplet, LD）作为储存中性脂质（如甘油三酯TAG、胆固醇酯）的细胞器，其过度蓄积是MASLD病理核心，但现有治疗策略多聚焦于间接调控，缺乏直接靶向脂滴降解的手段。 代谢功能障碍相关脂肪性肝病（MASLD）是全球范围内最常见的肝脏疾病，其特征为肝细胞内脂质过度蓄积，常伴随炎症和纤维化进展。随着肥胖和代谢综合征发病率攀升，MASLD已成为重大公共卫生挑战，部分患者可进展为代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）、肝硬化甚至肝细胞癌。目前FDA唯一批准的治疗药物Resmetirom（2024年获批）存在腹泻、恶心等副作用，且长期疗效有待验证。肝细胞内脂质滴（Lipid Droplet, LD）作为储存中性脂质（如甘油三酯TAG、胆固醇酯）的细胞器，其过度蓄积是MASLD病理核心，但现有治疗策略多聚焦于间接调控，缺乏直接靶向脂滴降解的手段。 针对上述问题，韩国汉阳大学Joonseok Lee、Hyunbeom Lee团队联合韩国科学技术研究院（KIST）Jinyoung Park团队及汉阳大学医学院Dae Won Jun团队，构建了一种脂质滴抑制剂（Lipid Droplet Inhibitor, LDI），以超大孔二氧化硅纳米颗粒（pSiO₂）为支架，共价偶联蛋白激酶Cα的C1A结构域（PKCαC1A）与假丝酵母脂肪酶（Candida rugosa lipase, CRL），形成pSiO₂@C1A@CRL双功能纳米系统。C1A以高亲和力（Kd≈3.6±0.5 nM）捕获二酰甘油（DAG）阻断TAG合成，CRL则催化TAG水解为游离脂肪酸（FFA）与单酰甘油（MAG）；两亲性生物分子使LDI在脂-水界面形成Pickering乳液，确保稳定锚定并高效降解脂滴。该纳米平台在棕榈酸诱导的HepG2细胞模型中显著降低脂滴与甘油三酯水平，在高脂饮食诱导的MASLD小鼠模型中使肝损伤评分最高降低84%，脂质组学分析证实其有效调控肝脏脂质谱。该文章于于2025年10月4日以《LDI, A Lipid Droplet Inhibitor, Disrupts Lipid Accumulation and Modulates Hepatic Lipid Profiles in Fatty Liver》为题发表于《Advanced Materials》（DOI: 10.1002/adma.202506373）。 图1. 脂质滴抑制剂（LDI）开发示意图。超大孔二氧化硅纳米颗粒（pSiO₂）先经PKCαC1A结构域（C1A）功能化以捕获二酰甘油，再偶联假丝酵母脂肪酶（CRL）降解甘油三酯，形成最终LDI。该双功能系统捕获脂质并促进其分解。 （1）LDI的制备与表征 研究团队以CTAC/苯甲酸钠（摩尔比0.85）为反电荷表面活性剂，经蠕虫状胶束自组装合成孔径约20 nm、粒径约100 nm的pSiO₂，符合肝窦内皮细胞窗孔穿透尺寸（人≈100 nm，小鼠≈140 nm）；氮吸附-脱附分析显示其比表面积达627.929 m²/g、孔容1.34 cm³/g，分别为nSiO₂（31.194 m²/g）的20.1倍和4.3倍，Geodict模拟证实pSiO₂内部孔隙可产生纳米级涡流以增强脂质-生物分子接触（图2a-d）。进一步构建三种功能化纳米颗粒：脂质清除剂（LS, pSiO₂@C1A）、脂质分解剂（LB, pSiO₂@CRL）及双功能LDI；BCA定量显示pSiO₂蛋白负载量为nSiO₂的4.79倍，LS、LB、LDI负载量依次为1.16、0.7、1.39 mg/mL，FTIR酰胺I/II带特征峰（1643.3/1536.6 cm⁻¹）及SDS-PAGE条带（LS: 6 kDa；LB: 58 kDa；LDI: 双条带）证实C1A与CRL成功偶联（图2e-m）。 图2. LDI及其他二氧化硅纳米结构的表征。a）使用Geodict软件对pSiO₂进行计算建模；b、c）在给定平均流速（1.0×10⁻⁶ m s⁻¹）下虚拟模型中流速场与流线的三维图像；d）虚拟模型中单脂质分子（黑色纳米颗粒）的分布；e-g）纳米颗粒示意图：LS携带C1A、LB装载假丝酵母脂肪酶（CRL）、LDI共固定两种生物分子；h-j）pSiO₂与非孔二氧化硅纳米颗粒（nSiO₂）的BCA测定；k）SiO₂纳米颗粒、C1A、CRL及其功能化形式LS、LB和LDI的FTIR光谱；l）生物分子及三种功能化纳米颗粒的变性还原凝胶电泳分析；m）LDI的SEM图像。所有数据以均值±标准差表示，n=3次独立实验。 （2）LDI与人工脂质滴的紧密结合及尺寸缩减 以三丁酸甘油酯制备人工脂质滴，光学显微镜监测显示：LS组与pSiO₂及BSA/酪蛋白/脱脂乳阴性对照类似，40分钟内脂滴尺寸无变化，证实C1A单独不与TAG直接作用；LB与LDI组脂滴分别缩减73.3%和97.5%，显著高于nSiO₂@C1A@CRL（45.4%），LDI中C1A捕获DAG使CRL持续作用于新底物，故降解率优于LB（图3a,b）。Rose Bengal标记LDI的CLSM显示脂滴外壳呈明亮橙色荧光环，2.5D/3D重建证实LDI包裹脂滴；SEM显示LDI包裹约6 μm人工脂滴维持球形结构，而裸脂滴在相同电子束电压下受损；界面张力由15.9降至8.7 mN/m，证实Pickering乳液效应使LDI自发锚定于脂-水界面（图3c-g）。 图3. 人工脂质滴降解可视化及LDI稳定界面形成。a）不同条件下人工三丁酸甘油酯滴降解过程的光学显微镜图像（比例尺10 μm）；b）对应a图的柱状图，显示40分钟后不同条件下人工脂滴的降解百分比（n=3）；c、d）Rose Bengal标记LDI稳定的Pickering乳液CLSM图像（比例尺5 μm）；e）LDI在人工脂滴表面组装的SEM图像；f）纳米颗粒存在下水-三丁酸甘油酯双相体系的界面张力（n=4）；g）LDI稳定Pickering乳液形成示意图，显示脂-水界面的脂质分解与清除。所有数据以均值±标准差表示。 （3）LDI体外减少脂质滴蓄积 LS、LB、LDI在20 μg/mL浓度下对HepG2细胞活力无显著影响；TMR标记LDI于30分钟内高效内化，2小时与早期内体（EEA1阳性）共定位达峰值43%，随后逐渐逃逸至胞质（51%），溶酶体共定位维持于≈20%。棕榈酸（PA）诱导的MASLD细胞模型中，BODIPY 493/503染色显示PA显著增加脂滴水平，LS与LB可降低脂滴面积，LDI效果最显著；TAG定量显示LS、LB有效降低TAG，LDI降幅最大；FFA测定显示LB与LDI组FFA蓄积增加，与TAG/脂滴水平呈负相关，LS无CRL故不影响FFA水平；游离CRL与LDI均显著提高脂酶活性，LDI组略高于游离CRL，证实纳米载体可维持酶活性并延长胞内滞留（图4a-d）。 图3. 人工脂质滴降解可视化及LDI稳定界面形成。a）不同条件下人工三丁酸甘油酯滴降解过程的光学显微镜图像（比例尺10 μm）；b）对应a图的柱状图，显示40分钟后不同条件下人工脂滴的降解百分比（n=3）；c、d）Rose Bengal标记LDI稳定的Pickering乳液CLSM图像（比例尺5 μm）；e）LDI在人工脂滴表面组装的SEM图像；f）纳米颗粒存在下水-三丁酸甘油酯双相体系的界面张力（n=4）；g）LDI稳定Pickering乳液形成示意图，显示脂-水界面的脂质分解与清除。所有数据以均值±标准差表示。 （3）LDI体外减少脂质滴蓄积 LS、LB、LDI在20 μg/mL浓度下对HepG2细胞活力无显著影响；TMR标记LDI于30分钟内高效内化，2小时与早期内体（EEA1阳性）共定位达峰值43%，随后逐渐逃逸至胞质（51%），溶酶体共定位维持于≈20%。棕榈酸（PA）诱导的MASLD细胞模型中，BODIPY 493/503染色显示PA显著增加脂滴水平，LS与LB可降低脂滴面积，LDI效果最显著；TAG定量显示LS、LB有效降低TAG，LDI降幅最大；FFA测定显示LB与LDI组FFA蓄积增加，与TAG/脂滴水平呈负相关，LS无CRL故不影响FFA水平；游离CRL与LDI均显著提高脂酶活性，LDI组略高于游离CRL，证实纳米载体可维持酶活性并延长胞内滞留（图4a-d）。 图4. LS、LB和LDI体外脂质降解。HepG2细胞经PA-BSA处理后，用20 μg/mL LS、LB和LDI处理24小时。a）BODIPY 493/503染色后脂滴的代表性图像（绿色），细胞核用DAPI染色（蓝色）（比例尺50 μm）；b）BODIPY 493/503染色面积相对于对照组（pSiO₂-BSA）的定量分析（n=5）；c）胞内TAG水平（n=9）；d）胞内FFA水平（n=4）。数据采用Student's t检验比较。所有数据以均值±标准差表示（*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001；与指示组比较，#P<0.05, ##P<0.01, ###P<0.001；与PA+pSiO₂-BSA比较）。ns，无显著性差异。 （4）LDI在MASLD模型中的疗效评估 高脂饮食（HFD）诱导12周后，经尾静脉注射生理盐水、pSiO₂-BSA或LDI治疗4周；LDI组体重低于两阴性对照组，摄食饮水无差异，肝重及肝体比呈降低趋势。H&E染色显示生理盐水组显著脂肪变性、气球样变及炎症浸润，pSiO₂-BSA组无改善，LDI组脂滴蓄积与炎症明显减轻；Oil Red O染色显示LDI组脂质蓄积显著减少；NAS评分显示LDI组脂肪变性评分降低58%、气球样变评分降低84%、总NAS评分降低56%，无主要器官组织学毒性（图5）。体内荧光成像显示LDI主要蓄积于肝脏，其次为脾和肺，脑内无信号；qRT-PCR显示脂质合成（SREBP1、FASN、ACC1）、氧化（CPT1、ACOX1、PPAR）、摄取（FATP5、CD36、FABP1）及转运（ABCA1、MTP、ApoB）相关基因表达无显著变化，提示LDI不通过抑制摄取或上调氧化/输出途径发挥作用。 图4. LS、LB和LDI体外脂质降解。HepG2细胞经PA-BSA处理后，用20 μg/mL LS、LB和LDI处理24小时。a）BODIPY 493/503染色后脂滴的代表性图像（绿色），细胞核用DAPI染色（蓝色）（比例尺50 μm）；b）BODIPY 493/503染色面积相对于对照组（pSiO₂-BSA）的定量分析（n=5）；c）胞内TAG水平（n=9）；d）胞内FFA水平（n=4）。数据采用Student's t检验比较。所有数据以均值±标准差表示（*P<0.05, **P<0.01, ***P<0.001；与指示组比较，#P<0.05, ##P<0.01, ###P<0.001；与PA+pSiO₂-BSA比较）。ns，无显著性差异。 （4）LDI在MASLD模型中的疗效评估 高脂饮食（HFD）诱导12周后，经尾静脉注射生理盐水、pSiO₂-BSA或LDI治疗4周；LDI组体重低于两阴性对照组，摄食饮水无差异，肝重及肝体比呈降低趋势。H&E染色显示生理盐水组显著脂肪变性、气球样变及炎症浸润，pSiO₂-BSA组无改善，LDI组脂滴蓄积与炎症明显减轻；Oil Red O染色显示LDI组脂质蓄积显著减少；NAS评分显示LDI组脂肪变性评分降低58%、气球样变评分降低84%、总NAS评分降低56%，无主要器官组织学毒性（图5）。体内荧光成像显示LDI主要蓄积于肝脏，其次为脾和肺，脑内无信号；qRT-PCR显示脂质合成（SREBP1、FASN、ACC1）、氧化（CPT1、ACOX1、PPAR）、摄取（FATP5、CD36、FABP1）及转运（ABCA1、MTP、ApoB）相关基因表达无显著变化，提示LDI不通过抑制摄取或上调氧化/输出途径发挥作用。 图5. MASLD模型中肝脏脂质蓄积与损伤评估。a）体内治疗时间线；b）各组小鼠体重变化；c）肝重/体重比；d）肝重差异；e）小鼠肝脏组织H&E染色；f）脂肪变性、气球样变、炎症及NAS评分测量与比较。统计学分析采用单因素方差分析，显著性阈值设为*P<0.05。所有数值以均值±标准差表示，n≥4次独立实验。 （5）LDI治疗的肝脏脂质组学分析 非靶向脂质组学（UHPLC-HRMS）鉴定出135种脂质，3D-PCA显示三组明显分离；热图显示LDI组PC(16:0/20:5)、PC(O-16:0/18:1)、SM(d18:1/24:0)、SM(d18:1/24:1)、SM(d18:1/16:0)、PE(P-16:0/20:4)显著上调，DG(16:0/18:2)显著下调。EPA富集的PC(16:0/20:5)具有抗炎、抗氧化及脂质调节作用；浆质醛前体PC(O-16:0/18:1)升高可能促进抗氧化浆质醛PE(P-16:0/20:4)形成；神经鞘磷脂SM(d18:1/24:0)与SM(d18:1/24:1)有助于维持膜完整性（图6）。正常小鼠模型中，pSiO₂-BSA给药后脂质组学 landscape基本不变，仅PC(O-16:0/18:1)与Cer(d18:1/18:0)在8小时轻度升高，证实载体安全性。 图5. MASLD模型中肝脏脂质蓄积与损伤评估。a）体内治疗时间线；b）各组小鼠体重变化；c）肝重/体重比；d）肝重差异；e）小鼠肝脏组织H&E染色；f）脂肪变性、气球样变、炎症及NAS评分测量与比较。统计学分析采用单因素方差分析，显著性阈值设为*P<0.05。所有数值以均值±标准差表示，n≥4次独立实验。 （5）LDI治疗的肝脏脂质组学分析 非靶向脂质组学（UHPLC-HRMS）鉴定出135种脂质，3D-PCA显示三组明显分离；热图显示LDI组PC(16:0/20:5)、PC(O-16:0/18:1)、SM(d18:1/24:0)、SM(d18:1/24:1)、SM(d18:1/16:0)、PE(P-16:0/20:4)显著上调，DG(16:0/18:2)显著下调。EPA富集的PC(16:0/20:5)具有抗炎、抗氧化及脂质调节作用；浆质醛前体PC(O-16:0/18:1)升高可能促进抗氧化浆质醛PE(P-16:0/20:4)形成；神经鞘磷脂SM(d18:1/24:0)与SM(d18:1/24:1)有助于维持膜完整性（图6）。正常小鼠模型中，pSiO₂-BSA给药后脂质组学 landscape基本不变，仅PC(O-16:0/18:1)与Cer(d18:1/18:0)在8小时轻度升高，证实载体安全性。 图6. 肝脏样本脂质组学分析。a）PCA 3D得分图显示各组分布：生理盐水、pSiO₂-BSA和LDI；b）热图展示上调与下调脂质，红色表示上调，蓝色表示下调；c）组间统计学显著代谢物箱线图：生理盐水vs pSiO₂-BSA或LDI，以及pSiO₂-BSA vs LDI。数据采用单因素方差分析比较。所有数据以均值±标准差表示（*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001）。ns，无显著性差异（n=3次独立实验）。 图6. 肝脏样本脂质组学分析。a）PCA 3D得分图显示各组分布：生理盐水、pSiO₂-BSA和LDI；b）热图展示上调与下调脂质，红色表示上调，蓝色表示下调；c）组间统计学显著代谢物箱线图：生理盐水vs pSiO₂-BSA或LDI，以及pSiO₂-BSA vs LDI。数据采用单因素方差分析比较。所有数据以均值±标准差表示（*p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001）。ns，无显著性差异（n=3次独立实验）。 「 研究小结 」本研究构建的LDI（pSiO₂@C1A@CRL）纳米平台通过双功能协同机制直接降解脂滴：PKCαC1A结构域捕获DAG阻断TAG合成，CRL催化TAG水解，两亲性生物分子介导的Pickering乳液效应确保脂-水界面高效作用。在棕榈酸诱导的HepG2细胞中，LDI显著降低脂滴面积与TAG水平，增加FFA释放；在高脂饮食诱导的MASLD小鼠中，LDI治疗使脂肪变性评分降低58%、气球样变评分降低84%、总NAS评分降低56%，脂质组学显示EPA富集磷脂PC(16:0/20:5)、浆质醛前体PC(O-16:0/18:1)及膜保护性神经鞘磷脂SM(d18:1/24:0/24:1)显著上调，促炎脂质DG(16:0/18:2)下调。该研究为MASLD治疗提供了直接靶向脂滴降解的新策略，揭示了纳米酶-生物分子偶联系统在代谢性疾病中的精准调控潜力，后续需在遗传肥胖模型中验证疗效并评估长期安全性。 「 研究小结 」本研究构建的LDI（pSiO₂@C1A@CRL）纳米平台通过双功能协同机制直接降解脂滴：PKCαC1A结构域捕获DAG阻断TAG合成，CRL催化TAG水解，两亲性生物分子介导的Pickering乳液效应确保脂-水界面高效作用。在棕榈酸诱导的HepG2细胞中，LDI显著降低脂滴面积与TAG水平，增加FFA释放；在高脂饮食诱导的MASLD小鼠中，LDI治疗使脂肪变性评分降低58%、气球样变评分降低84%、总NAS评分降低56%，脂质组学显示EPA富集磷脂PC(16:0/20:5)、浆质醛前体PC(O-16:0/18:1)及膜保护性神经鞘磷脂SM(d18:1/24:0/24:1)显著上调，促炎脂质DG(16:0/18:2)下调。该研究为MASLD治疗提供了直接靶向脂滴降解的新策略，揭示了纳米酶-生物分子偶联系统在代谢性疾病中的精准调控潜力，后续需在遗传肥胖模型中验证疗效并评估长期安全性。 「 研究小结 」本研究构建的LDI（pSiO₂@C1A@CRL）纳米平台通过双功能协同机制直接降解脂滴：PKCαC1A结构域捕获DAG阻断TAG合成，CRL催化TAG水解，两亲性生物分子介导的Pickering乳液效应确保脂-水界面高效作用。在棕榈酸诱导的HepG2细胞中，LDI显著降低脂滴面积与TAG水平，增加FFA释放；在高脂饮食诱导的MASLD小鼠中，LDI治疗使脂肪变性评分降低58%、气球样变评分降低84%、总NAS评分降低56%，脂质组学显示EPA富集磷脂PC(16:0/20:5)、浆质醛前体PC(O-16:0/18:1)及膜保护性神经鞘磷脂SM(d18:1/24:0/24:1)显著上调，促炎脂质DG(16:0/18:2)下调。该研究为MASLD治疗提供了直接靶向脂滴降解的新策略，揭示了纳米酶-生物分子偶联系统在代谢性疾病中的精准调控潜力，后续需在遗传肥胖模型中验证疗效并评估长期安全性。 「 研究小结 」本研究构建的LDI（pSiO₂@C1A@CRL）纳米平台通过双功能协同机制直接降解脂滴：PKCαC1A结构域捕获DAG阻断TAG合成，CRL催化TAG水解，两亲性生物分子介导的Pickering乳液效应确保脂-水界面高效作用。在棕榈酸诱导的HepG2细胞中，LDI显著降低脂滴面积与TAG水平，增加FFA释放；在高脂饮食诱导的MASLD小鼠中，LDI治疗使脂肪变性评分降低58%、气球样变评分降低84%、总NAS评分降低56%，脂质组学显示EPA富集磷脂PC(16:0/20:5)、浆质醛前体PC(O-16:0/18:1)及膜保护性神经鞘磷脂SM(d18:1/24:0/24:1)显著上调，促炎脂质DG(16:0/18:2)下调。该研究为MASLD治疗提供了直接靶向脂滴降解的新策略，揭示了纳米酶-生物分子偶联系统在代谢性疾病中的精准调控潜力，后续需在遗传肥胖模型中验证疗效并评估长期安全性。 「 研究小结 」 「 研究小结 」 「 研究小结 」 本研究构建的LDI（pSiO₂@C1A@CRL）纳米平台通过双功能协同机制直接降解脂滴：PKCαC1A结构域捕获DAG阻断TAG合成，CRL催化TAG水解，两亲性生物分子介导的Pickering乳液效应确保脂-水界面高效作用。在棕榈酸诱导的HepG2细胞中，LDI显著降低脂滴面积与TAG水平，增加FFA释放；在高脂饮食诱导的MASLD小鼠中，LDI治疗使脂肪变性评分降低58%、气球样变评分降低84%、总NAS评分降低56%，脂质组学显示EPA富集磷脂PC(16:0/20:5)、浆质醛前体PC(O-16:0/18:1)及膜保护性神经鞘磷脂SM(d18:1/24:0/24:1)显著上调，促炎脂质DG(16:0/18:2)下调。该研究为MASLD治疗提供了直接靶向脂滴降解的新策略，揭示了纳米酶-生物分子偶联系统在代谢性疾病中的精准调控潜力，后续需在遗传肥胖模型中验证疗效并评估长期安全性。 本研究构建的LDI（pSiO₂@C1A@CRL）纳米平台通过双功能协同机制直接降解脂滴：PKCαC1A结构域捕获DAG阻断TAG合成，CRL催化TAG水解，两亲性生物分子介导的Pickering乳液效应确保脂-水界面高效作用。在棕榈酸诱导的HepG2细胞中，LDI显著降低脂滴面积与TAG水平，增加FFA释放；在高脂饮食诱导的MASLD小鼠中，LDI治疗使脂肪变性评分降低58%、气球样变评分降低84%、总NAS评分降低56%，脂质组学显示EPA富集磷脂PC(16:0/20:5)、浆质醛前体PC(O-16:0/18:1)及膜保护性神经鞘磷脂SM(d18:1/24:0/24:1)显著上调，促炎脂质DG(16:0/18:2)下调。该研究为MASLD治疗提供了直接靶向脂滴降解的新策略，揭示了纳米酶-生物分子偶联系统在代谢性疾病中的精准调控潜力，后续需在遗传肥胖模型中验证疗效并评估长期安全性。 本研究构建的LDI（pSiO₂@C1A@CRL）纳米平台通过双功能协同机制直接降解脂滴：PKCαC1A结构域捕获DAG阻断TAG合成，CRL催化TAG水解，两亲性生物分子介导的Pickering乳液效应确保脂-水界面高效作用。在棕榈酸诱导的HepG2细胞中，LDI显著降低脂滴面积与TAG水平，增加FFA释放；在高脂饮食诱导的MASLD小鼠中，LDI治疗使脂肪变性评分降低58%、气球样变评分降低84%、总NAS评分降低56%，脂质组学显示EPA富集磷脂PC(16:0/20:5)、浆质醛前体PC(O-16:0/18:1)及膜保护性神经鞘磷脂SM(d18:1/24:0/24:1)显著上调，促炎脂质DG(16:0/18:2)下调。该研究为MASLD治疗提供了直接靶向脂滴降解的新策略，揭示了纳米酶-生物分子偶联系统在代谢性疾病中的精准调控潜力，后续需在遗传肥胖模型中验证疗效并评估长期安全性。