Infliximab

1 定义 强直性脊柱炎是一种慢性进行性疾病，主要侵犯骶髂关节、脊柱骨突、脊柱旁软组织及外周关节，可伴发关节外表现，严重者可发生脊柱畸形和关节强直，是严重危害人类健康的疾病。临床上多表现为炎性腰背(酸)痛、僵硬与活动受限，部分患者可有外周关节炎、肌键端病、虹膜炎及其他关节外表现。强直性脊柱炎以男性多发，男女比约为2:1，主要累及青壮年，通常在18-22岁发病。 2 病因 本病的发病率依种族的不同而异，但多为0. 2%-0. 4% ,我国发病率约为300/10万。近30年的研究表明，强直性脊柱炎在免疫医学领域与人类白细胞抗原B27 ( H LA - B27 )密切相关，并有家族聚集性，且HLA一B27的携带率与种族有关。流行病学调查显示，我国HLA一B27阳性率在强直性脊柱炎患者高达96%以上，欧洲和美白种人患者H LA - B27阳性率为71 % -100%，美国黑种人HLA一B27阳性率为48%,HLA一B27阳性者发病的相对危险度为36，因此目前以此作为诊断强直性脊柱炎的主要指标。 3 中医治疗   对于强直性脊柱炎的治疗，目前西医主要以消炎止痛和改善病情两方面为宗旨，常用药物包括非甾体类抗炎药(吲哚美辛、双氯芬酸类、塞来昔布等)、改善病情药物(柳氮磺吡啶、甲氨蝶吟)、生物制剂(依那西普、英夫利西单抗和阿达木单抗)。虽然这些药物可以较快改善、控制临床症状，但随着治疗的进展，剂量的增加，其不良反应也相应显现出来，包括心血管、胃肠道甚至内脏损害。另外，从临床大量文献来看，中医药治疗强直性脊柱炎的疗效肯定，无论是从客观实验室指标，还是主观患者临床症状，均有明显的改善，同时部分临床研究经长期观察，未出现明显不良反应。因此，根据患者的临床症状，合理运用中西医结合疗法，既可快速改善患者症状，又可避免长期大量服用西药带来的不良反应。 在配合中医综合疗法的基础上，运用针灸、推拿手法可改善强直性脊柱炎患者局部微循环、调节血液流变、促进炎症吸收、缓解肌肉痉挛，从而达到一定的治疗效果。根据病情的轻重，可选择医院就诊和自我调养。 (1)针刺治疗:针刺治疗强直性脊柱炎具有明显的镇痛效果，其机制在于调整经络，调理气血，增强机体抵御外邪的能力，改善肌肉的血液循环，加速代谢和机体功能恢复。临床常选用督脉、夹脊及膀胱经(脊柱正中，脊柱旁开0. 5, 1. 5, 3寸)作为强直性脊柱炎的治疗主穴。这些经脉、穴位沿着整段脊柱循行分布，从尾骸部(骶髂关节)至颈项部，通过刺激可达到调节脊柱的作用。现代医学研究表明，夹脊穴局部有相应的脊神经后支及其伴行的动静脉，通过针灸可畅通督脉经气，调节机体免疫功能，直接阻断局部炎症介质，增加局部血流量，改善体内气血循环，改善周围组织营养，并刺激交感神经释放疼痛相关化学递质，进而缓解疼痛感。常用的穴位包括:夹脊、大椎、大杆、陶道、身柱、灵台、悬枢、至阳、筋缩、肝俞、中枢、脊中、肾俞、腰阳关、大肠俞、次髎、上髎、中髎、下髎，以上穴位在每次治疗时可选择加减使用;另外可配合相应远端穴位，如足三里、委中、阳陵泉、三阴交、太溪等。 (2)艾灸治疗:艾灸的温热具有增加小血管通透性、增强细胞吞噬炎症因子、提高机体免疫的功能，从而起到活血化疲、温经通络、强筋壮骨的效果。温针灸具有针刺和艾灸的双重作用，又增强了两者的协同作用。温针灸可通过针灸针，使艾灸的热量更好地渗透至施术部位，促使毛细血管扩张，改善局部血液循环，松弛痉挛的肌肉组织，提高人体的体液免疫和细胞免疫能力，加速机体的修复，可预防、延缓各椎体间骨桥的形成，避免脊柱畸形。 “铺灸”是从传统和民间方法中挖掘、总结出来的一种灸疗方法，即长蛇灸、督灸。具有温补督脉、强壮真元、温通气血、调和阴阳之功，具有调节机体免疫功能的作用。适合于督脉诸证和慢性、虚寒性等多种疾病，包括强直性脊柱炎、慢性腰肌劳伤、增生性脊柱炎等。以暑夏三伏天为宜。  具体操作:患者俯卧，裸露背部。督脉(脊柱)上常规消毒后，涂以蒜汁或姜汁，从大椎至腰俞处铺一单层棉纸或无菌纱布，再在棉纸、纱布上铺5- 10厘米宽、2-3厘米高蒜泥或姜泥1条，其上再铺以圆柱状艾灶1条，点燃艾灶头、身、尾3点，让其自然烧灼，燃尽后，更换艾灶灸治。灸2 -3壮，灸毕移去蒜泥、姜泥，用湿热纱布轻轻揩干。灸后皮肤潮红，如有水泡，不要挑破，注意防止感染。2-3日后换药处理，直至灸疤结痂脱落皮肤愈合。 (3)推拿治疗:推拿治疗可理筋正骨，滑利关节，疏通恢复肌肉之血液供应，改善血液流变学相关指标，调节肌肉营养代谢，主要强调督脉、膀胱经背部第1侧线的治疗，以提高患者的疫功能，辅以运动类手法有助于防止或延缓脊柱关节的粘连和强直。 版权声明：本文来源网络。我们分享文章、图片来自网络，版权归原作者及原出处所有。此文出于学习分享、传播更多资讯之目的，无商业用途。若涉及作品内容、版权或其他问题，敬请原作者联系我们，立即处理。 点击『分享』转发至您的朋友圈 在点下方‘再看’支持我们

1.吐温在生物制品中的应用 聚山梨酯常被称为吐温，通常用作表面活性剂。聚山梨酯是一类两亲性非离子型表面活性剂家族，其中聚山梨酸酯80和20（吐温80和20）是生物药物制剂中使用最广泛的表面活性剂，其亲水部分帮助表面活性剂在水相中分散，而疏水部分则与油相或疏水性分子相互作用，能够有效保护蛋白质，防止其在储存和运输过程中发生变性、聚集、表面吸附以及絮凝现象。吐温能够降低表面张力，减少蛋白质在液体中的聚集，帮助维持蛋白质的生物活性1。 对131个商业化产品的分析显示，大多数生物制剂的处方中含有吐温，其中吐温80占63%，共计82个产品；吐温20占24%，共计32个产品。Poloxamer 188出现在4种产品中，PEG 3350出现在1种产品中，12个产品则不含表面活性剂。初代制剂产品中，吐温80的使用更为普遍。然而，由于吐温80的不稳定性和易氧化性，后续项目逐渐转向使用吐温20，例如曲妥珠单抗和雷马珠单抗。 在膜工艺开发过程中，吸附是指所过滤料液中的某些成分粘附在滤膜上的过程，这可能会影响料液的成分和浓度。一个过滤器中的吸附性材料不仅包括滤膜，还包括硬件和支撑材料。吸附试验的条件应根据实际生产情况进行确定，流速、过滤时间、料液浓度、防腐剂浓度、温度和pH值等因素均可能影响吸附效果。在一个过滤器中，滤膜对聚山梨酯（吐温）存在一定的非特异性吸附现象。大多数生物制剂中吐温的含量较低，通常在0.1%以下，最低可达0.001%。因此，低浓度吐温溶液的膜吸附研究至关重要2。 点击查看大图 图1- 聚山梨酸酯80和20 结构示意图 点击查看大图 表1-已上市生物产品表面活性剂浓度 2.滤膜的蛋白吸附研究 在膜工艺步骤中，由于聚合物微孔膜的内表面积是正面表面积的100到600倍，膜材料可能导致蛋白质的非特异性结合（NSB），这可能会影响产品的收率。默克实验室研究了两种蛋白质的吸附特性：牛血清白蛋白（BSA）和羊免疫球蛋白G（IgG）。研究采用了静态暴露期间的伽马计数和动态无菌过滤法进行分析。在实验中，比较了四种膜材料：聚偏二氟乙烯（PVDF）、尼龙、聚醚砜和混合纤维素酯，并与这四种参考蛋白质进行了对比。其中尼龙膜和纤维素混合酯膜对蛋白的吸附较大，PVDF和PES膜的吸附略小，PVDF在几种膜材中吸附最小3。其次，不同的铸膜工艺对膜吸附能力有较大影响，默克研究了不同PES 膜材的吸附情况，如图2所示。 点击查看大图 表2-种常见膜材的蛋白吸附 点击查看大图 图2-不同膜材的IgG吸附研究 （由上至下分别为默克Express® PES膜材，默克PVDF膜材，其他PES膜材，醋酸纤维素膜材，尼龙膜） 3.滤膜的吐温吸附研究 在抗体行业中，吐温80（PS-80）被广泛用于第一代抗体药物，如Remicade。同时，PS-80也被用作气雾剂配方中的稳定剂。实验证据表明，PS-80能够有效防止蛋白质颗粒的形成。然而，由于其分子内的不饱和双键，PS-80比吐温20（PS-20）更容易被氧化。因此，后来的单克隆抗体治疗药物，包括Herceptin和Xolair，选择使用PS-20作为其配方成分。常用的表面活性剂PS-20（Tween-20）的临界胶束浓度在5.5×10⁻⁵ M（0.007%）至5.9×10⁻⁵ M（0.0077%）范围内（分子量：1227.54）。或许正因如此，许多抗体候选药物和治疗药物的浓度通常在0.007%以下。 美国Amgen公司4研究了低浓度吐温20（低于0.007%）在不同膜材料中的非特异性结合吸附和吸附饱和情况。在本研究中，使用含有0.004% PS-20的不同蛋白浓度的抗体制剂，通过PES双层膜滤器进行过滤。过滤后发现PS-20的水平显著降低，这种减少可能是由于滤器的吸附作用所致。 为了确认未来过滤研究中使用配方缓冲液的可行性，实验中降低了吐温20的浓度，使用含有0.004% PS-20的溶液进行了相同方式的测试，考察PES和PVDF滤器对PS-20的吸附情况。结果显示，在吐温浓度为0.004%的条件下，PES膜的非特异性吸附较大，吸附了73%的吐温；而PVDF膜的吸附较少，仅吸附了14%的吐温。 点击查看大图 表3- PES和PVDF的吐温吸附 为了进一步评估不同膜材料滤器的吸附情况，实验还进行了PS-20的动态结合曲线研究。测试对象包括尼龙膜、Durapore® 滤器（PVDF膜）、Express® SHC滤器（PES双层膜）以及其他品牌的PES滤器，所使用的缓冲液中PS-20的浓度在0.0045%至0.0065%之间。如图3所示，横坐标为过滤载量，纵坐标为PS-20浓度。在初始阶段，膜部分吸附了PS-20，导致浓度较低；随着吸附的饱和，PS-20浓度趋于平稳。研究发现，Durapore® PVDF滤器的最小吸附饱和点（MSP）最低，估计为10 L/m²，而Express® SHC（PES双层膜）的MSP约为40 L/m²。相比之下，友商PES的MSP所需的时间最长，估计大于50 L/m²。 点击查看大图 图3-不同膜材的IgG吸附研究 为了进一步确定膜材料对PS-20的非特异性吸附的绝对值，分别使用了两种PES双层膜滤器和Durapore® PVDF滤器进行测试。采用过饱和吸附和冲洗的方法，以确保每个膜样本都被PS-20分子饱和，并提取膜片中的PS-20进行三次重复测定（n = 3）。 结果如图4所示，Durapore® PVDF滤膜的结合量显著低于所有其他滤器，仅为9.57 µg/cm²。在PES膜滤器中，Express® SHC（PES双层膜）滤膜的PS-20结合量为36.33 µg/cm²，而友商的PES双层膜则为68.80 µg/cm²。Durapore®滤器由单层PVDF膜制成，而Express® SHC和友商的PES滤器则由双层PES膜组成。换算得知，Durapore® PVDF滤膜的吐温吸附量为9.57 µg/cm²，Express® PES滤膜的吐温吸附量为18.17 µg/cm²，友商PES滤膜的吐温吸附量为34.4 µg/cm²。从膜材料的角度来看，PVDF材质的吸附量最低，其次是PES。然而，由于不同厂家的膜材料铸膜工艺不同，吸附能力会存在差异。 点击查看大图 图4- 不同滤膜上PS-20非特异性结合量（n = 3） （第1列为阴性对照；第2列为Durapore®膜（单层PVDF膜）；第3列为友商（双层PES膜）；第4列为SHC膜（双层PES膜）；第5列为SHC单层结合量（第4列的值除以2）。 4.滤膜吸附吐温差异性可能原因 从滤膜的结构来看，PES（聚醚砜）由于具有多个苯基环作为骨架，其疏水性比聚偏二氟乙烯（PVDF）更强，而PVDF的骨架则由多个二氟碳单位组成。推测非特异性疏水结合能力，亲水化修饰工艺等因素可能导致这些滤器在吸附PS-20方面表现不同。 为了考察蛋白质的疏水性对吐温吸附的影响，测试选择了三种不同的抗体分子，包括mAb A、mAb B和mAb C，浓度均为70 g/L，基于它们的不同疏水性进行测试（A蛋白疏水性 < B蛋白疏水性 < C蛋白疏水性）。将含有0.004% PS-20的配方缓冲液中的蛋白样品应用于PES滤器，过滤时分段收集，以测试PS-20的吸附情况。 如图5所示，三种蛋白分子的PS-20动态结合曲线和吸附饱和点特征相似，没有受到蛋白质疏水性质的影响。在低吐温浓度的制剂缓冲液中，初始过滤阶段会吸附吐温，导致吐温浓度降低。吐温在制剂配方中起到保护作用。在本实验中，C蛋白的疏水性非常强，稳定性差，常温环境下数小时内会产生沉淀。遇到此类蛋白时，吐温的吸附可能对蛋白质产生较大影响。 点击查看大图 图5- 3种不同抗体分子PS-20吸附动态结合曲线 5.如何改善吐温吸附现象？ 如果PS-20浓度较低（如低于0.007%），可以通过在料液过滤前对滤器进行预饱和冲洗来克服滤膜的微量吸附。此外，可以通过预先提高吐温的浓度进行补偿，过滤后再搅拌混匀，以弥补吐温的吸附。在生产过程中，还可以排出一些初始过滤的料液，以减少膜吸附带来的影响。 在生物药领域，通常采用预饱和冲洗的方式来润洗滤器，以减少吸附的影响。在实验中，首先使用PS-20制剂缓冲液在40 L/m²的条件下对Express® SHC滤器进行冲洗，然后排空滤器后再进行料液的过滤。值得注意的是，这种操作应尽量选择死体积较小的滤器，以最小化药物的稀释效应。建议生产过程中选择2倍的MSP进行冲洗，确保更大的安全边际。 点击查看大图 图6- PS-20饱和冲洗示意图 6.吐温对除菌滤器气泡点的影响 非离子表面活性剂如吐温通过可逆吸附与PES（聚醚砜）膜强烈结合，降低了膜的表面张力，从而降低了泡点。默克的内部研究表明，由PES膜组成的Millipore Express® SHF（0.29 m²）和Millipore Express® SHC（0.23 m²）设备在经过17-18小时的吐温接触后，其气泡点降低了16%-19%。为了去除吐温的吸附影响，需要更多的水进行润洗，Millipore Express® SHC和Millipore Express® SHF的水冲洗体积分别为170 L/m²和120 L/m²，这样泡点才能恢复至初始值的≥95%。默克提供全面的完整性测试解决方案，如客户在吐温完整性测试中遇到问题，可以联系当地技术支持。 点击查看大图 图7-吐温接触后对PES滤器泡点影响 本文结论汇总 a) 如果制剂配方缓冲液中吐温的含量非常低，滤器可能会非特异性地结合PS-20，这可能导致药物产品中PS-20的分布不均，从而影响制剂中的蛋白稳定性。 b) 使用不含蛋白的低浓度PS-20配方缓冲液进行吸附研究，观察到的PS-20吸附效果与含有蛋白样品的结果相似，PS-20的吸附率不易受到蛋白浓度、温度和流速的影响。 c) Durapore® PVDF滤膜的吐温吸附量为9.57 µg/cm²，Express® PES滤膜的吐温吸附量为18.17 µg/cm²。从膜材料的角度来看，PVDF材料的吸附量最低，其次是PES。然而，由于不同厂家的膜材料铸膜工艺不同，吸附能力可能存在差异，这需要在工艺开发过程中进行考虑。 d) 可以在料液过滤前对滤器进行预饱和冲洗，以克服滤膜的微量吸附，但在初期阶段需要测试最小吸附饱和点（MSP）。如果采用PVDF滤器进行过滤，由于其吸附较小，可以不进行预冲洗步骤。然而，缓解措施应集中在改善无菌过滤过程中的产品均匀性，尽量搅拌混匀，以减少初始过滤阶段的PS-20吸附。 e) 对于其他低浓度物质，如低浓度重组蛋白、低浓度辅料氨基酸和低浓度P188等辅料，可能存在相似的吸附行为。因此，在工艺开发中，不仅应测试载量，还建议进行除菌过滤的吸附实验。 参考文献： 1. Surfactant-Stabilized Protein Formulations: A Review of Protein-Surfactant Interactions and Novel Analytical Methodologies. 2. A review of formulations of commercially available antibodies. 3. Non-specific Protein Binding of microporous membranes Merck in house test. 4. Non-specific binding and saturation of Polysorbate-20 with aseptic filter membranes for drug substance and drug product during mAb production. 关于默克工艺解决方案 默克工艺解决方案，凭借可信赖的产品、丰富的制药工艺专业知识和卓越的法规支持，为制药客户提供全方位支持，以应对各种工艺挑战。 微信公众号矩阵 工艺解决方案 工艺服务平台 微信生态 微网站 视频号 默课堂 服务平台 自媒体矩阵 小红书 抖音 SAFC® Millipore®