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近日，正大天晴药业集团全资子公司连云港润众制药以“零缺陷”通过美国食品药品监督管理局（FDA）的现场检查，意味着公司质量管理体系再次得到国际权威药监机构认可。此前，润众制药于2014年、2018年已两次零缺陷通过FDA现场检查。 FDA是公认的全球药品质量监管最权威、最严格的机构之一。2024年1月22日至1月26日，FDA对润众制药两个抗肿瘤药产品进行批准前检查，同时对氨磷汀、福沙匹坦二甲葡胺、膦甲酸钠、氟维司群四个美国市场商业化产品实施监督检查。在1月26日的末次会议上，检查官现场宣布，润众制药零缺陷通过检查。 据了解，这次现场检查期间，FDA检查官对公司的质量保证系统、设施与设备系统、物料系统、生产系统、包装与贴签系统、实验室控制系统等六大系统进行了全面、严谨、专业的检查，对润众制药质量体系的有序运行、关键工艺的有效控制、迎检资料的快速响应给予高度评价。 连云港润众制药是中国生物制药旗下正大天晴药业集团的全资子公司，主要从事化学原料药、无菌原料药的研发、生产和销售，目前不仅有数十个产品在国内销售，还有十余个产品在美国及欧盟市场上市或处于审评阶段。此外，润众制药成立至今，已经通过近50次中国国家药品监督管理局（NMPA）的现场检查。 “中国生物制药和正大天晴始终将药品质量放在至关重要的地位，因为严守药品质量关就是对生命线的守护。” 中国生物制药首席执行长、正大天晴药业集团董事长谢承润表示，能够连续三次零缺陷通过FDA现场检查，标志着润众制药质量体系建设和质量管理能力得到了国际认可，将有助于公司产品进一步开拓国内外市场。

迄今为止，针对暴露前预防（PrEP）和暴露后预防（PEP）的抗逆转录病毒联合治疗（cART）有效地减少了艾滋病死亡和HIV-1传播。然而，尽管具有有效的cART，但由于HIV-1潜伏的持续存在，自20世纪80年代发现艾滋病及其病原体HIV-1以来，针对HIV-1感染的完整或无底物的病毒学控制依旧是一个巨大的挑战。此外，HIV-1遗传多样性促进了抵抗cART药物的突变逃逸变异体的形成，导致临床上病毒控制的失败，大量的病毒变异体也阻碍了艾滋病疫苗的开发。确定新的疫苗接种策略，包括诱导广谱中和抗体和强大的交叉反应性T细胞反应，将有效对抗HIV/艾滋病大流行。本研究将基于PD-1的DNA疫苗策略应用于恒河猴上，结果显示成功抑制HIV病毒，若深入临床研究，将有希望开拓在人群达到功能性治愈的创新疗法。数十种HIV-1候选疫苗目前正在进行临床前测试和试验。一些临床试验因其对人类的预防效果不佳而不得不停止。本文描述了一种基于程序性死亡-1（PD-1）的DNA疫苗策略的疫苗技术，即由DNA质粒载体编码，将表达目标抗原的重组抗原融合到可溶性PD-1结构域中。小鼠研究已经证明了重组PD-1融合抗原的树突状细胞靶向能力，基于PD-1的DNA疫苗对病毒感染和肿瘤发生的免疫原性和保护能力，并且能激发强大的多功能效应-记忆CD8+T细胞反应，优于传统疫苗设计。一项恒河猴研究评估了基于PD-1的抗猿人免疫缺陷病毒（SHIV）DNA疫苗的潜力。用编码恒河可溶PD-1融合SIV Gag-p27抗原（即pRhPD1-p27）的DNA疫苗接种恒河猴，通过强大的多功能疫苗诱导的效应记忆CD8+T反应，对致病性SHIVSF162P3CN感染进行持续的病毒血症控制。在这项研究中，作者对先前报道的pRhPD1-p27疫苗接种/SHIVSF162P3CN感染恒河猴在感染后6年的病毒血症水平和T细胞免疫反应进行了随访调查。在没有cART的情况下，4只感染SHIVSF162P3CN并接种pRhPD1-p27疫苗的恒河猴中，2只长时间出现无法检测到的病毒血症在关于pRhPD1-p27 DNA疫苗中，对三组中国恒河猴进行了研究：A组（A01-A04）的4只恒河猴每隔6-13周肌内电穿孔间隙4次pRhPD1-p27疫苗；B组（B01-B03）的3只恒河猴肌肉注射pRhPD1-p27疫苗4次，每隔6周一次；未接种组9只为对照组。恒河猴静脉注射5000 TCID50 CCR5-tropic，2级致病性SHIVSF162P3CN。随着时间的推移进行病毒学和免疫学分析。图1 恒河猴感染SHIV并接种pRhPD1-p27疫苗的血浆病毒血症抑制情况（之前发表的结果以灰色突出显示）（A）实验设计。（B-D）A组、B组和未接种疫苗组恒河猴在病毒感染后的血浆病毒载量。（E）接种pRhPD1-p27疫苗（A组、B组）和未接种疫苗的恒河猴在SHIVSF162P3CN感染后的长期生存分析。A组恒河猴在感染后17周接种抗CD8β消耗抗体，并在感染后103周再次接种pRhPD1-p27疫苗。直到实验结束时，A组的4只恒河猴在病毒感染后保持了长达2年的持续病毒血症抑制（图1B）。在最初的研究中，B组恒河猴在病毒感染后的20周观察期结束时未检测到病毒血症（图1C）。相比之下，在同一时期，大多数未接种疫苗的恒河猴的每毫升血浆病毒载量始终＞104copies RNA病毒，67%未接种疫苗的恒河猴由于临床状况不佳，出现体重明显减轻/持续腹泻现象，因此执行安乐死。对病毒感染后的恒河猴进行长达6年的连续观察，由于2只未接种疫苗的恒河猴被用于其他研究，从后续观察中移除。7只未接种疫苗的恒河猴中，只有1只在20周感染期间存活下来。随着时间的推移，这只恒河猴表现出低水平的病毒血症，在感染60周后无法存活（图1D）。在接种疫苗的B组中，所有恒河猴感染病毒后至少存活了49周（图1C）。由于临床状况恶化，B03、B02和B01恒河猴分别在感染后第49、77和121周时被安乐死。恒河猴B02、B03在安乐死时未检测到血浆病毒载量，推测临床病情恶化可能不是由SHIVSF162P3CN感染引起的。同样，在100周感染时采集的恒河猴B01血浆样本中未检测到病毒载量。在接种疫苗的A组中，由于身体健康状况不佳，A01、A03恒河猴在146和194周感染时被安乐死。A01在CD8+T细胞耗竭后和死亡前出现病毒复发，而A03在死亡前没有检测到病毒血症，不幸的是死于其他原因（图1B）。然而，A02、A04恒河猴至今仍存活，在没有任何cART的情况下，这两只恒河猴在病毒感染后的327周内血浆病毒载量均未检测出（图1B），同时CD4+T细胞和CD4+/CD8+比值在291至327周感染期之间呈上升趋势（图3C-D）。总的来说，与未接种疫苗的对照组相比，pRhPD1-p27疫苗组具有显著的生存优势。这些结果表明，在没有cART的情况下，基于PD-1的pRhPD1-p27 DNA疫苗通过抑制SHIVSF162P3CN病毒复制提高生存率。在病毒感染后6年，2只感染SHIVSF162P3CN并接种pRhPD1-p27疫苗的恒河猴体内存在多功能效应记忆抗原特异性T细胞图2 在恒河猴感染SHIV并接种pRhPD1-p27疫苗后，存在持续的功能性p27特异性效应记忆T细胞反应（A）A组恒河猴在感染122周时的T细胞反应。（B）A组和未接种疫苗/未感染的健康恒河猴的T细胞反应。（C-D）CD4+T细胞（C）和CD8+T细胞（D）在体外单独使用培养基（图上部分）或p27肽池（图下部分）刺激后产生各种细胞因子。（E-F）p27肽池刺激后CD4+T细胞（E）和CD8+T细胞（F）产生IFN-γ、TNF-α和IL-2细胞因子不同组合的频率。（G）p27特异性CD4+（图上部分）和CD8+（图下部分）T细胞的表面表型。（H-I）在CD4+T细胞（H）和CD8+T细胞（I）群体中，总体细胞和产生IFN-γ的细胞的效应记忆T细胞的频率。研究表明，pRhPD1-p27疫苗诱导的CD8+T细胞反应是抑制SHIV复制所必需的步骤。通过IFN-γ ELISpot试验测定A组恒河猴感染122周的Gag-p27和Nef特异性T细胞情况（图2A）。除A01没有出现病毒特异性T细胞反应外，其他3只均检测到了Gag-p27和Nef特异性T细胞反应（图2A）。因此推断出病毒复发与抗病毒T细胞反应的消失有关。进一步测定A02、A04恒河猴在327周感染时的抗原特异性T细胞反应，与A04相比，A02中检测到的Gag-p27和Nef特异性T细胞的频率相对较高，而在未接种疫苗/未感染的健康恒河猴中几乎没有发现SHIV特异性T细胞应答（图2B）。值得注意的是，pRhPD1-p27疫苗中没有编码Nef抗原，因此，恒河猴A02、A04中诱导针对Nef的T细胞应答代表了对SHIVSF162P3CN感染的新生免疫应答。为了更清晰地了解恒河猴A02、A04体内的T细胞免疫应答，用细胞内细胞因子染色法（ICS）测定了IFN-γ、TNF-α和IL-2的表达。产生IFN-γ和TNF-α的双功能T细胞形成了大多数Gag-p27特异性CD8+和CD4+T细胞（图2C-F）。此外，在体外Gag-p27刺激后，仍有超过70%产生IFN-γ的CD8+或CD4+T细胞具有效应记忆T细胞表型（CD95hiCCR7loCD28hi/lo）（图2G-I）。综上所述，上述结果表明长期且多功能的效应记忆的抗原特异性T细胞在A02、A04两只存活的恒河猴体内存在。pRhPD1-p27免疫恒河猴在控制病毒血症和疫苗诱导的长期T细胞应答方面具有优势图3 在感染SHIV后接种pRhPD1-p27疫苗的恒河猴与在SHIV感染后1天接受双特异性中和抗体BiIA治疗的恒河猴病毒学和细胞免疫学比较。（A-B）接受pRhPD1-p27疫苗的A02、A04和C05、C06的血浆病毒载量(A)和原病毒载量(B)的比较。（C-D）恒河猴A02、A04和C05、C06 CD4+细胞占CD3+T细胞的百分比（C）和CD4+/CD8+ T细胞的比值(D)。（E-F）恒河猴诱导Gag -p27特异性(E) CD4+和CD8+T(F)细胞反应的多功能分析。（G-H）在恒河猴中诱导的Gag-p27特异性(G) CD4+和CD8+T(H)细胞的表型表明。由于感染SHIV并且未接种疫苗的对照组中没有存活恒河猴，因此，将上述两只恒河猴A02、A04与在感染后第1天接受双特异性中和抗体BiIA-SG治疗的两名恒河猴C05、C06作对比，C05、C06恒河猴在相同剂量的5000 TCID50 SHIVSF162P3CN感染后，存活了284周以上。在最近的采样时间点，A02、A04、C05和C06皆没有检测到血浆病毒载量（图3A）。就原病毒载量而言，A02的原病毒载量最低，为每1×106个单核细胞中0.05 copies，其他3只恒河猴的前病毒载量保持在每1×106单核细胞中0.25-0.81copies（图3B）。在最后的测量时间点，发现RhPD1-p27免疫恒河猴的CD4+T细胞改善和CD4+/CD8+T细胞比率比BiIA处理的恒河猴具有更好的趋势（图3C-D）。总体而言，与高效并广泛使用的中和抗体实验性治疗结果相比，pRhPD1-p27疫苗接种显示出类似甚至更好的病毒控制。恒河猴对病毒抗原的T细胞免疫原性结果表明，A02、A04显示出比C05、C06更高频率的p27特异性效应记忆CD4+和CD8+T细胞反应（图3E-F）。A02具有针对Gag-p27和Nef的多功能CD4+和CD8+T细胞的比例最高。与Gag-p27相比，A02中发现了相似水平的功能性Nef特异性效应记忆T细胞应答（图3E-F）。结果表明，A02、A04组在CD4+和CD8+T细胞亚群中的效应记忆Gag-p27特异性T细胞比例均高于C05、C06组（图3G-H）。因此，与BiIA-SG治疗相比，pRhPD1-p27疫苗接种呈现出更好的长期T细胞应答的趋势，有助于抑制病毒。图4 感染SHIV并接种pRhPD1-p27疫苗的恒河猴Gag-p27抗原的T细胞表位定位分析Gag特异性T细胞反应的广度与抑制HIV-1病毒血症有关。先前研究发现，pRhPD1-p27诱导的T细胞在免疫恒河猴中针对病毒Gag-p27衣壳抗原的不同区域。根据ELISpot和ICS的联合分析，A02、A04在感染327周发现了3个最小的T细胞表位，小于免疫阶段检测表位，并且在两只恒河猴中都发现了匹配的T细胞表位。这些结果表明，以PD-1为基础的DNA疫苗诱导的T细胞应答在病毒感染后6年仍有反应。在这项后续研究中，证明了基于PD-1的pRhPD1-p27 DNA疫苗在恒河猴中具有长期的病毒抑制作用，恒河猴在SHIVSF162P3CN感染后存活期超过6年。基于PD-1的DNA疫苗接种在没有抗病毒药物或中和抗体治疗的情况下，通过激发强大的多功能效应记忆抗原特异性T细胞反应，在恒河猴中实现了无cART的病毒抑制。即使在接种疫苗后6年，恒河猴A02、A04依旧具有效应记忆表型的抗原特异性T细胞。此外，从疫苗接种阶段鉴定出的几个T细胞表位在SHIV感染后很长时间内仍保持免疫原性。与BiIA-SG抗体治疗的恒河猴C05、C06相比，A02、A04恒河猴的抗病毒T细胞免疫水平有更高的趋势。此外，恒河猴A02、A04在Gag-p27刺激后，超过70%的应答CD8+T细胞至少产生两种细胞因子，而来自恒河猴C05、C06的应答CD8+T细胞分别有0%和60%能够表达至少两种细胞因子，结果表明恒河猴A02、A04有更好的T细胞功能的趋势。基于PD-1的DNA疫苗的有利作用也表现在SHIV感染后抗Nef T细胞反应的重新产生和长期维持上，表明接种疫苗的恒河猴在病毒感染后保留了反应性T细胞。消除病毒感染的抗原、产生持久T细胞反应已被评估为治疗性HIV疫苗的主要策略。最近一项关于HIVACAT T细胞免疫原(HTI)疫苗方案的1期试验表明，在抗逆转录病毒治疗中断(ATI)期间，抗原特异性T细胞应答诱导疫苗接种的时间延长，并且在ATI结束时病毒血症水平较低，这结果证明基于PD-1的治疗性T细胞疫苗有利于HIV-1的临床开发。此项研究的一个局限性是接受基于PD-1的DNA疫苗的恒河猴数量较少。然而，对恒河猴的长期随访表明，使用基于PD-1的DNA疫苗有可能诱导病毒特异性T细胞反应，从而实现对HIV的无cART病毒抑制。在A组的4只感染SHIV并接种pRhPD1-p27疫苗的恒河猴中，A02、A04两只猴子继续存活，病毒载量未检测到。相比之下，A01、A03恒河猴需要安乐死。由于该事件发生在COVID-19大流行的封锁期间，因此无法进行病毒载量检查和尸体解剖。通过A组、B组结果推断pRhPD1-p27疫苗接种方案的差异可能影响长期临床结果。此外，A组的动物已接受抗CD8β抗体治疗以消耗CD8+T细胞，并在约2年后再次接种pRhPD1-p27疫苗。感染后2年的加强疫苗接种增强了抗Gag-p27 CD8+T细胞反应。这种加强疫苗接种旨在评估慢性阶段疫苗接种的结果，原则上可能会延长恒河猴的病毒血症，这一发现有助于指导治疗性疫苗剂量策略的设计。功能性治愈是当前艾滋病领域重大难题，目前全世界有限的几个细胞疗法成功的都是个案。本研究若能在人体中得到重现，将开拓一个有可能在人群达到功能性治愈的创新疗法。为了支持人类临床应用，已经开发了一种基于PD-1的DNA疫苗，编码PD-1连接的二价马赛克HIV-1 Gag抗原，即ICVAX。通过结合基于PD-1的DNA疫苗技术和该疫苗中使用的马赛克抗原设计策略，已经证明在临床前恒河猴研究中可以引起强烈的、广泛反应的、多功能的抗原-Gag T细胞反应。ICVAX疫苗目前正在进行1期临床试验，以评估这种新型治疗性疫苗平台对HIV患者的安全性和免疫原性。这项研究提供了进一步的证据，表明基于PD-1的DNA疫苗接种是一种可行策略，可以通过产生持久的病毒特异性T细胞反应来开发潜在的治疗性艾滋病疫苗，从而达到无cART的病毒学控制状态。文献来源：A follow-up study: 6-year cART-free virologic control of rhesus macaques after PD-1-based DNA vaccination against pathogenic SHIVSF162P3CN challenge医克生物是一家总部位于香港科学园的生物科技集团。该公司专注于由香港大学艾滋病研究所研发并授予专利之PD-1增强型DNA疫苗和抗-Δ42-PD1的癌症、炎症和传染病的疫苗和免疫疗法阻断抗体技术平台；其部分产品已经进入临床研究阶段。欲了解更多关于医克生物的信息，请浏览 http://www.immunocure.hk识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入生物制品微信群！请注明：姓名+研究方向！版权声明本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。