Fluorescein Sodium

一、VIAFLO 384 文献应用案例 1、文献标题：A universal cell‑based method for high‑throughput analysis of viroporin function and inhibition （基于荧光外泄法的viroporin功能高通量筛选平台） 文章概述 该文章发表于Pharmacological Research，开发 VipoFluX 全新细胞荧光检测平台，用于viroporin 功能表征与抑制剂高通量筛选。viroporin 为 RNA 病毒编码的成孔跨膜蛋白，是极具价值的抗病毒靶点。传统研究手段依靠蛋白重组纯化、双电极电压钳（TEVC）电生理，存在通量低、成本高等痛点，无法开展大规模化合物筛选，阻碍抗病毒药物研发进程。 VipoFluX 以 FDA 作为检测探针：无荧光的 FDA 穿过细胞膜，经胞内酯酶水解生成 fluorescein；viroporin 开放孔道促使 fluorescein 释放到胞外；抑制剂封堵孔道则会抑制该外泄过程。在 384 孔板上通过两次荧光读数，计算 fluorescein 释放百分比，即可定量 viroporin 成孔活性以及药物抑制效果。实验使用 HEK293T 细胞，可完成野生型 / 突变体蛋白功能验证、小分子抑制剂筛选；筛选得到的 hit 化合物，再通过 TEVC 电生理完成金标准交叉验证。 研究覆盖 M2、E_SARS‑CoV‑2、SH 等多病毒家族靶点，完成 1139 个离子通道化合物文库筛选，证实该平台可用于抗病毒候选药物挖掘。 INTEGRA VIAFLO 384 多通道移液设备文献原文 “10 µL compound at 1X concentration in HBSS++ or HBSS++ alone was added to each well using Integra 384 VIAFLO multi‑pipette and incubated at 37 °C with 5% CO₂ for 20 min. ……FDA ……added to a transparent 384‑well ligand plate from where 1 µL could be added to the cell plate using the Integra VIAFLO 384 pipette.” 移液设备具体操作 a)、向 384 孔细胞板分配 10 μL 1× 工作浓度抑制剂 / 对照缓冲液； b)、将 1 μL FDA 荧光探针，从配体板转移至细胞测定板。 VIAFLO 384 核心应用价值 a)、实现 384 孔高通量筛选：摆脱 TEVC 电生理低通量局限，一次性完成整板试剂分配，支撑千级规模化合物文库筛选，实现 viroporin 抑制剂细胞水平的高通量初筛。 b)、降低板内孔间变异，保障荧光定量结果可靠：VipoFluX属于荧光比率定量实验，释放率计算高度依赖两次荧光读数的微小差值，移液体积偏差极易引发假阳性、假阴性结果。文中明确说明该设备用于提升实验速度、降低板内变异。孔间试剂加样均一，是突变体对比、抑制剂药效评价，以及ANOVA、t‑test 统计学分析的数据基础。 c)、精准处理微量体积：可稳定转移1μL FDA探针，无需额外稀释中转，减少试剂损耗与人为操作误差，适配荧光检测严苛的微量反应体系。 d)、符合药物筛选标准工作流：采用（源配体板→细胞板）转板模式，化合物预先在配体板完成配制，再批量转至细胞板，规避板内梯度稀释引入的误差，满足本研究≥5次独立生物学重复的实验要求。 e)、提升筛选效率，降低人力投入：整板批量移液替代手动操作，大幅压缩筛选实验耗时，也为后续拓展至数万级别化合物库筛选提供硬件支撑。 总结 该文章核心科学贡献为建立VipoFluX 高通量 viroporin 功能检测体系；INTEGRA VIAFLO 384 是该方法落地的关键硬件保障。 设备完成抑制剂、FDA 探针的 384 孔批量分配，缩短操作时长、压低板内移液变异、实现微量液体精准转移，保障荧光定量数据质量，支撑生物学重复、剂量‑效应曲线测定以及大规模化合物筛选，将传统低通量电生理研究升级为面向药物早期发现的高通量细胞筛选平台。 原文链接： https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1043661826003129 二、ASSIST PLUS、VIAFLO 384 文献应用案例 1、文献标题：Characterization of T‑cell Engaging Bispecific Antibodies and Combination Therapies with a High‑Throughput Multiparametric Automated Assay and Data Analysis Platform（T细胞重定向双特异性抗体的自动化多参数药效评价平台） 文章概述 该文章发表于Molecular Cancer Therapeutics，搭建自动化高通量多参数 TDCC（T 细胞依赖性细胞毒性）筛选平台，用于 T 细胞重定向双特异性抗体（TCB）单药及共刺激激动抗体联合疗法的药效评估。TCB 通过 CD3 招募 T 细胞杀伤肿瘤细胞，是肿瘤免疫治疗重要研发方向。传统体外 TCB 评价多采用终点检测法，难以捕获 T 细胞杀伤、活化、细胞因子释放的动态过程；常规实验通量低，很难并行评估多种效应靶比 (E:T)、多个免疫细胞供体与联合用药组合，制约双抗候选分子的筛选评估。 该平台基于 384 孔板开展实验：Echo 声学移液加入梯度 TCB / 联合抗体；INTEGRA ASSIST PLUS按照不同 E:T 比例接种珍贵原代 PBMC 或 pan‑T 效应 T 细胞；Incucyte S3 活细胞成像持续 2‑13 天动态追踪肿瘤细胞死亡。INTEGRA VIAFLO 384承担时序取样工作，在多个预设时间点直接从 384 孔测定板抽取微量培养上清，用于 Luminex 细胞因子动力学检测。后续结合流式检测 T 细胞活化标志物，依靠 Genedata Screener、TIBCO Spotfire 等工具完成杀伤、细胞因子、活化表型多维度数据分析。 研究覆盖 HER2、Ly6G6D、FcRH5 多种肿瘤抗原靶点 TCB，同时评估抗‑CD137、抗‑CD28 共刺激抗体协同效果；可兼容贴壁实体瘤与悬浮血液肿瘤细胞模型，能够区分不同 CD3 亲和力 TCB 药效差异，证实低 E:T 模拟冷肿瘤环境中共刺激抗体可显著增强 TCB 杀伤活性；通过细胞因子 AUC 时间积分策略消除单时间点取样带来的评价偏差，实现候选双抗分子的多维度横向对比。 INTEGRA 设备文献原文 “An equal volume of immune cells (35 µL) was immediately added to treated tumor cells with the appropriate E:T ratio by an ASSIST PLUS pipetting robot (Integra, RRID: SCR_027988).” “The supernatants were collected at 0, 24, 48, 72, and 144 hours … using a VIAFLO 384 (Integra) and immediately frozen for cytokine analysis.” 移液设备具体操作 ASSIST PLUS 自动化移液工作站：向 384 孔板批量分配 35 μL 原代效应免疫细胞，构建多种 E:T 效应靶比例共培养体系； VIAFLO 384 多通道移液设备：多个时间点从 384 孔测定板抽取微量上清样本，用于后续细胞因子动力学检测。 核心应用价值 a)、保障珍贵原代免疫细胞实验质量：原代 PBMC/pan‑T 细胞样本稀缺，ASSIST PLUS 自动化整板加样，消除手动铺细胞的人为偏差，保证不同 E:T 体系细胞接种密度高度均一，是剂量‑效应曲线、多供体药效对比的实验基础。 b)、实现同板时序动态取样：VIAFLO 384 可在多个时间点直接从同一块 384 孔测定板吸取上清，无需额外设置多套平行实验板，规避板间系统误差，高效获取细胞因子完整动力学时序数据。 c)、支撑高通量多复孔筛选：384 孔整板批量处理，并行开展不同 TCB 分子、多个供体、多 E:T 比例、联合用药组别，满足生物学重复的严苛实验要求。 d)、降低共培养体系扰动：移液操作温和，减少 T 细胞‑肿瘤细胞共培养体系扰动，避免靶细胞脱落，保障 Incucyte 长时间活细胞成像的杀伤动力学数据真实可靠。 e)、节约珍贵实验耗材：微量精准吸取上清，孔内共培养细胞可继续留存孵育成像，单块孔板即可同步获得杀伤动力学、细胞因子、T 细胞活化表型三类核心数据，大幅减少原代细胞消耗。 总结 该文章核心科学贡献是建立多参数自动化 TDCC 平台，实现 TCB 及联合疗法的动力学药效评价。INTEGRA ASSIST PLUS 与 VIAFLO 384 是整套高通量工作流落地的关键硬件。ASSIST PLUS 完成原代 T 细胞标准化铺板，VIAFLO 384 实现时序微量上清取样；二者共同降低人为操作与板间误差，节约原代细胞耗材，实现在单块 384 孔板同步采集多维度时序药效数据，助力免疫双抗早期药物发现阶段的候选分子筛选与药效分层。 原文链接： https://doi.org/10.1158/1535-7163.MCT-25-1360