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关注并星标CPHI制药在线 在细胞与基因疗法（CGT）这个被誉为医疗革命前沿的领域，正上演着一出冰火两重天的剧目。一方面，科技突破与治疗前景让无数创业者和投资者为之狂热，初创公司如雨后春笋般涌现，以创新的治疗方式引领下一代医疗科技的发展，每年吸引着大量的资本涌入。投资者相信，这些技术有潜力为罕见病患者带来前所未有的治愈希望，因而推动了大量的早期融资与并购潮流。 然而，另一方面，这些企业的命运却往往如流星般短暂而灿烂。尽管初期前景光明，但现实却异常残酷：临床试验的高昂成本、监管障碍和技术瓶颈接踵而至，导致大量企业在黎明前夭折。2024年，CGT领域的大规模裁员浪潮再次席卷而来，许多企业在资金链断裂和失败的临床研究中艰难挣扎，一些备受瞩目的公司甚至在融资高峰后迅速陷入困境，行业不稳定性显露无遗。 这种生死循环的动态，使得CGT行业如同一场资本与科技的豪赌：巨额投资与大规模裁员、创新突破与企业倒闭，交织出一幅独特且矛盾的景象。在这背后，既是行业发展的潜力无限，也是现实挑战的冰冷无情。 1. CGT企业2024大规模裁员不断 最近加入大规模裁员行列的CGT企业是SalioGen Therapeutics，他们筹集了1.35 亿美元开发新型基因编辑技术，但短暂的喜悦之后就是残酷的现实，兴尽而悲的SalioGen已开始大规模裁员，并正在缩减其发展目标。 SalioGen 成立于 2021 年，是全长基因插入技术的创始者之一，突破了基因编辑技术CRISPR的技术瓶颈。然而投资者对基因编辑的热情很快显露出兴致阑珊的迹象，尤其是开发基因插入的生物科技公司最受影响。这种譬如朝露般的热情变化的背后可能是一系列因素的协同作用，比如基因插入技术涉及复杂的科学和技术挑战；当前的宏观经济环境可能促使投资者更加谨慎，倾向于投资风险较低、市场路径更明确的技术；基因插入技术面临严格的监管要求，获得批准的过程可能漫长且昂贵；投资者可能对基因插入技术的长期投资回报持怀疑态度，尤其是在短期内难以看到显著的商业化成果的情况下。这些因素共同作用，可能导致投资者对基因插入技术的兴趣减弱。投资者可能更倾向于支持那些已经展示出明确临床差异化和市场潜力的项目。从事基因插入技术开发的Tome Biosciences 在 8 月就已宣布将大规模裁员，而不到一年前，他们还宣布筹集了 2.13 亿美元。基因编辑的低迷既受到对基础技术的质疑，也受到对其商业模式的担忧，这些模式通常专注于开发罕见疾病的治疗方法。 总部位于马萨诸塞州Lexington的 SalioGen 是几家专注于跳跃基因（jumping gene）的生物技术公司之一。跳跃基因也称为转座子（transposon），是一种可以在基因组中从一个位置移动到另一个位置的DNA片段。它们通过一种叫做转座（transposition）的过程实现这种移动。 跳跃基因分为两大类：DNA转座子直接从一个基因组位置跳到另一个位置；逆转录转座子通过转录成RNA，再逆转录成DNA插入到新位置。 这些跳跃基因可能通过插入新的基因组位置，打断或改变基因的功能，影响遗传特征，甚至导致突变。在进化过程中，跳跃基因对基因组的多样性和复杂性起到了重要作用，但它们的不规则跳跃有时也会引发基因组不稳定或疾病。 跳跃基因在科学研究和生物技术中有着重要的应用价值。在基因治疗中，跳跃基因可以作为一种载体，将外源基因插入患者的细胞中，以修复或替换有缺陷的基因。跳跃基因技术可能对囊性纤维化等疾病有用，这种疾病的患者受到 2000 多种不同突变的影响。修复一种突变的治疗方法可以帮助一些患者。而囊性纤维化正是SalioGen重点研究的适应症，除此之外，罕见病Stargardt 病也是Salio Gene的研究对象。SalioGen 一直在研究在跳跃基因中起到关键作用的转座酶（transposase），它可以帮助将转座子从一个位置剪切下来并插入到另一个位置。 然而同Tome一样，Salio Gene命运在获得了融资之后急转而下。今年5月，他们还公布了Stargardt病项目在小鼠和猴子身上的数据，并计划在2025年上半年开始临床试验。然而10月份，Salio就公布了即将大规模裁员的消息，并有可能缩减临床研究计划。 Salio Gene并不是CGT领域今年实施大规模裁员的孤例，相反，CGT在裁员指数上似乎制造出了哀鸿遍野的景象。手握数款上市基因疗法的龙头企业Bluebird今年9月宣布将裁减25%的员工，而之前的2022年他们已经裁减了当时三分之一的员工。另一家基因疗法先驱BioMarin也于今年8月裁撤了225名工作岗位，这是继今年5月裁减170名员工后短时间内的又一次大规模裁员。由Bluebird拆分创立的2seventy bio也在今年进行了多次重组。今年2月份2seventy bio将临床前和临床细胞疗法项目转移给 Regeneron并裁员55人。2023年底刚刚成立的基因编辑初创公司 Tome Biosciences 今年8月也宣布将于 11 月裁员 131 人，之前不久他们刚获得了2.13亿美元的A轮和B轮融资。另一家专注于基因疗法的初创公司Intergalactic Therapeutics则在8月宣告破产。Intergalactic宣布破产的前一周，基因编辑生物技术公司 Homology Medicines 表示将裁员 87%，停止研究并寻找买家。根据最新的消息，开发肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）的疗法的Turnstone Biologics公司宣布战略重组，将裁员约60%，约影响48名员工，并进行领导层调整。公司将把资源集中于其I期TIDAL-01项目的肿瘤浸润淋巴细胞（TIL）疗法。预计现金流可持续到2026年第二季度。TIDAL-01正在针对结直肠癌、头颈癌和葡萄膜黑色素瘤等进行多项I期试验。包括首席医疗官、技术官和财务官在内的三位高管将离职，其他高管职位也有调整。 2. CGT融资显著复苏，制药巨头纷纷加入 与CGT公司大规模裁员形成鲜明对比的是，同是这一阵营中的弄潮儿，很多CGT公司却在融资方面取得了快速的成果，为CGT领域制造了令人关注的悖论现象。 根据 GlobalData 的数据，与去年同期相比，2024 年第二季度制药行业细胞和基因治疗相关交易的数量下降了 38%，制药公司提交的细胞和基因治疗相关专利申请也减少了，但大型制药公司对于CGT的兴趣却并没有衰退。今年上半年相关投资达到了109亿美元，超过了2019年全年的98亿美元。 虽然CGT行业自2020和2021年的高水平以来面临投资逆风，但复苏的迹象可能正在显现。CGT行业经历了非常艰难的两三年。对处于临床前阶段的小型组织来说，这种挑战尤其明显。然而今年上半年近110亿美元的融资几乎赶超了2023年的总额（117亿美元），而且融资主要流向了拥有后期临床试验的公司。而美联储9月份的降息似乎也对CGT领域的融资的复苏产生了推动作用。2024年截至目前（10月14日），已经有22家生物技术公司实现了IPO融资，其中包括Kyverna Therapeutics于2月份进行的3.19亿美元的IPO，支持其抗CD19 CAR-T候选药物的研发。除此之外， Capstan Therapeutics 3月份进行的超额认购1.75亿美元的B轮融资和ArsenalBio 9月份的3.25亿美元的C轮融资也都与CAR-T疗法开发有关。这种不急不徐的状态比每年50笔以上的IPO要来得更加健康。 除了IPO和其它融资之外，大型制药公司的直接收购或是投资也是CGT复苏的重要动力。最近在美国Mesa召开的2024 年细胞与基因会议上，大型制药公司对于扩展其CGT影响的意图表现得非常明显。不同于CGT初期生物科技公司把持朝纲的状态，如今大型制药公司通过收购和内部开发的手段已经成为了CGT领域的主力。人们逐渐达成共识，资源丰富的大型制药公司在将CGT商业化方面具有不可比拟的优势，而这对于面临无数障碍的小型生物技术公司来说是可望而不可即的。大型制药公司正在塑造CGT行业的未来。 CGT开发商面临的最大挑战之一是融资环境，尤其是对于早期创业公司而言，资金稀缺。大型制药公司可以解决他们的燃眉之急。3 月，Capstan Therapeutics 完成了 1.75 亿美元的 B 轮融资，投资者包括强生、拜耳、BMS、礼来、诺华和辉瑞，所有这些制药巨头都在努力推动 Capstan 的体内 CAR-T（in-vivo CAR-T） 候选药物进入自免疫疾病的早期临床概念验证研究。9月份，ArsenalBio 在 C 轮融资中筹集了 3.25 亿美元，投资方包括再生元和BMS，通过ArsenalBio专有 T 细胞工程技术平台开发实体瘤候选药物。 有数据显示，市值排名前15位的制药巨头中有13家正在积极参与CGT开发。由于很多制药巨头的支柱型产品专利即将到期，面临失去独占权的风险，各大制药公司正在寻求细胞和基因疗法来填补迫在眉睫的空白。例如拜耳和强生的重磅血液稀释剂 Xarelto 的美国专利将于 2025 年到期。拜耳高级副总裁兼全球生物制剂开发负责人 Nuno Fontes 在会议上表示，拜耳目前的临床产品线在生物制剂和小分子之间平均分配，但在生物制剂中，细胞和基因疗法约占其产品线的三分之二。 安斯泰来也在寻求CGT的早期临床产品线。其首席战略官 Yoshitsugu Shitaka 透露他们已与总部位于伦敦的 AviadoBio 达成独家授权协议，使用后者 I/II 期的基因疗法治疗前颗粒蛋白基因突变的额颞叶痴呆症患者。安斯泰来将对AviadoBio进行2000万美元的股权投资。此外，AviadoBio还可能获得高达21.8亿美元的许可费、里程碑付款和版税，为此安斯泰来将预付3000万美元。 3.“CGT悖论”的背后力量 CGT开发领域今年营造出的东边日出西边雨的独特景象，背后有着多股力量协同作用，使得CGT领域一边不断地大规模裁员，另一边却有资金不断地注入，即给人一种乘雷上天般的鱼化为龙之感，却造成了譬如朝露一样的兴尽而悲之叹。 行业技术发展与市场适应性 CGT行业正处于快速变化之中，技术的成熟度和市场的适应性决定了企业的生存与发展。许多公司在追求技术突破的过程中，面临着临床试验的失败和市场接受度的挑战。 CGT行业的技术创新虽然日新月异，但不同公司在技术研发上的进展差异显著。一些企业，尤其是拥有强大研发团队和丰富临床试验经验的公司，能够较快地将其技术推向市场，获得市场认可和融资支持。相对而言，初创企业往往在资金、技术和资源方面处于劣势，缺乏成熟的产品线和足够的临床数据来支撑其融资需求。这导致那些未能实现技术突破或进展缓慢的公司，面临着被市场淘汰的风险。更有甚者，一些公司在获得初轮融资后，发现其技术未能如预期般成功，最终不得不通过裁员来降低成本并寻求生存。 临床试验是CGT行业中至关重要的环节，但也是最 具挑战性的部分。企业需要投入大量资源来设计和实施临床试验，确保其产品的安全性和有效性。然而，临床试验的复杂性以及高失败率常常导致投资者的信心动摇。许多CGT项目在进入临床阶段后，因未能达到预期结果而停滞不前。对于那些未能成功推动关键疗法的企业，裁员成为降低成本、维持运营的必要手段。这种情况在公司财务状况持续恶化时尤为明显，管理层可能面临巨大的压力，选择通过裁员来减轻负担，从而确保企业的生存。 融资环境的变化 2024年，CGT相关企业成功上市的案例逐渐增多，这为行业注入了新鲜血液。投资者对这一领域的热情恢复，这种现象不仅体现在融资金额的增加上，更重要的是，它反映了市场对CGT行业未来增长潜力的再评估。 资本市场的回暖促使投资者重新审视CGT的潜在回报，推动了更多风险投资流入这一领域。尤其是投资者更青睐于那些处于后期开发阶段的项目，认为这些项目在临床试验和市场准入方面的风险较低，回报预期更为明确。 在CGT行业，战略合作与收购成为企业拓展业务的重要手段。大型制药公司通过收购和合作的方式，增强了对CGT的投资，促进了资源的有效配置。这种合作不仅限于资金的投入，还包括技术的共享和市场渠道的互通。大型制药公司通过收购CGT企业获得前沿技术，进一步扩展其产品线，不仅实现了资源的整合与共享，还加速了创新的落地和商业化。 随着市场环境的变化，投资者变得更加谨慎，尤其是在经历了2021年的投资高峰和随后的市场调整之后。投资者开始重新评估其投资组合，倾向于减少高风险项目的比例，转而支持那些已经展示出明确临床差异化和市场潜力的项目。这种策略调整反映了投资者对风险管理的重视。投资者越来越青睐于后期项目，因为这些项目通常经过了初步的临床试验验证，成功概率较高，市场前景更为明确。一些企业拥有更先进的技术平台和丰富的临床试验经验，使得它们在吸引投资者和合作伙伴时具备更强的竞争力。反之，早期项目常常面临较高的失败风险，吸引投资者的难度加大，这种现象在CGT领域表现得尤为明显。这种趋势使得企业在规划研发路线时，需更加关注项目的进度和市场需求，确保在融资和投资者关系中保持竞争力。投资者开始采用更长远的视角，关注那些具有长期增长潜力的公司，而不仅仅是短期的市场表现。 市场竞争的加剧 在CGT行业，资本的集中化趋势愈加明显。随着技术的不断进步，资本逐渐向那些表现优异的项目倾斜。这种资源的集中化导致一些小型企业面临更大的生存压力，特别是那些在技术研发和市场推广上未能取得实质性突破的公司。为了在竞争中脱颖而出，这些企业不得不削减开支、裁员或甚至寻求并购，以寻求在行业中的立足之地。与此同时，大型企业则在市场中占据越来越重要的地位，能够通过收购和整合迅速增强自身的市场份额。 近年来，全球对罕见病和遗传性疾病的关注度显著增加，使得相关项目受到重视。这些领域的需求相对较高，但同时也是技术挑战较大的领域。那些能够提供有效解决方案的企业将更容易吸引投资。这些成功的项目往往能够获得快速的市场反馈和融资支持，推动其快速成长。而对于处于技术边缘的公司，则可能面临融资困难和市场压力，导致企业不得不采取裁员等措施来生存。 4.前景展望 在经历了2024年的融资复苏和行业挑战后，CGT行业展现出其独特的韧性与潜在的增长动力。尽管面临裁员与经济不确定性双重压力，资本市场的回暖和投资者对后期项目的青睐为行业注入了新的资金流动与创新机会。 资本市场的复苏，不仅体现在成功上市案例的增加，还反映了投资者对CGT领域潜在回报的重新评估。后期项目由于其更高的成功率和明确的市场需求，成为投资者关注的重点。这种趋势促使企业在融资策略上更加务实，选择那些在临床试验中已获得初步成果或接近市场的项目，从而降低风险并提高投资效率。 此外，大型制药公司的战略合作与收购活动，为行业发展带来了重要的推动力。这些企业通过整合资源，不仅增强了对CGT领域的投资力度，还促进了技术共享与市场渠道的互通。小型生物技术企业借助大型公司的成熟研发体系和市场网络，能够更快速地推进产品的临床试验和上市进程。这种良性循环进一步提升了行业整体的创新能力和市场竞争力。 然而，值得注意的是，不同CGT开发者之间的命运差异也日益显著。成功的企业往往具备强大的研发能力、明确的市场定位以及高效的运营策略，而面临困境的企业则可能缺乏这些关键要素。因此，了解这一行业内部的复杂性与动态，能够更深入地把握其未来发展趋势。 总的来看，CGT行业正处于一个关键的发展阶段，投资者的关注与支持将为其未来的创新与市场扩展提供强有力的保障。随着技术的不断进步和政策环境的优化，CGT行业在全球生物医药领域中的战略地位将愈加凸显，成为推动医疗变革的重要力量。 参考文献 1.Mast, J. SalioGen Therapeutics hit by layoffs, as gene-editing biotechs continue to struggle. STAT. 13. 10. 2024. 2.Gabriel, A. Turnstone Biologics to Lay Off 60% of Workforce, Overhaul C-Suite. Biospace. 11. 10. 2024. 3.Slabodkin, G. Big Pharma’s Interest Grows in Evolving Cell and Gene Therapy Sector. Biospace. 09. 10. 2024. 4.Slabodkin, G. Cell and Gene Therapy Investment Ticks Up After Hard Few Years. Biospace. 08. 10. 2024. 5.Jackson, M. Finance Watch: 2024 Has Now Beaten 2023’s Total Of 21 IPOs. Scrip. 11. 10. 2024. END 来源：CPHI制药在线 声明：本文仅代表作者观点，并不代表制药在线立场。本网站内容仅出于传递更多信息之目的。如需转载，请务必注明文章来源和作者。 投稿邮箱：Kelly.Xiao@imsinoexpo.com ▼更多制药资讯，请关注CPHI制药在线▼ 点击阅读原文，进入智药研习社~

靶向SMARCA2分子开发有两条主要的途径: 一是基于溴结构域的蛋白降解剂(见前期文章:合成致死靶点SMARCA2: PROTAC蛋白降解剂 (专利综述))。另一条是靶向 SMARCA2 的ATP酶小分子抑制剂，这里将分析靶向 SMARCA2 的ATP酶小分子抑制剂的研发进展。 1. 背景介绍 如前所述，最初抑制SMARCA2的方向是针对DNA 结合的溴结构域的抑制剂。然而，遗传学及细胞活性研究表明，抑制ATP酶结构域是抗增殖作用的关键，而不是溴结构域。开发选择性的高效的小分子ATP酶抑制剂将是一种更直接的方法来抑制SMARCA2的功能，并以合成致死机制治疗SMARCA4突变的肿瘤。此外，选择性/非选择性ATP酶抑制剂 还有可能转化为选择性SMARCA2 降解剂。 2. 专利评估 这里总结了针对SMARCA2 和/或 SMARCA4的小分子ATP酶抑制剂和PROTAC降解剂的专利文献汇总，见表1和表2，表1 总结了靶向 SMARCA2 的ATP酶抑制剂，表2 总结了基于ATP酶抑制剂的PROTAC降解剂。 表1. 靶向 SMARCA2 ATP酶的抑制剂专利 表2. 靶向 SMARCA2 基于ATP酶抑制剂的PROTAC蛋白降解剂。 3. 小分子ATP酶抑制剂 在过去的几年中已经看到了少量不同的靶向SMARCA2 和/或 SMARCA4的ATP酶抑制剂的骨架结构。总体来说，总结了4个申请机构发布的11份专利文件。 3.1. Bayer AG 2020年，拜耳报道了一项专利，有94个例子描述了N，N‘-二芳基脲化合物为SMARCA2 ATP酶抑制剂，如 图1。化合物1-3 中显示的2-氯吡啶基团存在于94个例子中的93个中，其余一个为2-氟吡啶基，这表明这个卤素取代对效力是必要的。这个骨架在诺华的一篇重要文献中报道过(JMC,2018,10.1021/acs.jmedchem.8b01318)，与化合物1 相似的化合物作为起点。 诺华化合物14 I 图１.　N，N-二芳基脲 SMARCA2 ATP酶抑制剂。 3.2. Epizyme, Inc Epizyme报道了一个有764个例子的专利，探索重点集中在杂环酰胺部分和吡啶酮环上的取代基。对SMARCA2的选择性适中，对SMARCA2的抑制活性一般小于SMARCA4的10倍，化合物4-5 (例139 和82c )（图2）。对全长SMARCA2（IC50=0.0099µM）和SMARCA4（IC50= 0.0661µM）具有较强抑制活性的。最高水平的肿瘤生长抑制为66%，前10天以50 mg/kg每日剂量，然后第11到13天是空窗期，和最后的低剂量30mg/kg的研究，可能表明由于抑制剂双重抑制导致缺乏耐受性。 图2. Epizyme 的 SMARCA2/SMARCA4 ATP酶抑制剂。 3.3. Foghorn Therapeutics, Inc Foghorn公司是目前对SMARCA2/SMARCA4 ATP酶抑制剂研究最为领先的公司，今年其选择性抑制剂FHD-909已进入临床。2019年， Foghorn Therapeutics报道了241个例子(WO2019152437)，描述了取代的2-酰胺乙酰胺衍生物为SMARCA2/SMARCA4 ATP酶抑制剂，这是围绕该核心骨架的一系列专利中的第一个（图3）。噻唑-2-烷基 是2-酰胺乙酰胺核上首选的N-取代基，2-酰胺取代基、噻唑取代基和亚甲基取代基是构效关系探索的重点。代表性的化合物6 (实例87，化合物A）和化合物7（WO2020160180，化合物B, 实例67，也称为FHT-1015）是有效的SMARCA2/SMARCA4 ATP酶抑制剂，并有效抑制葡萄膜黑色素瘤和血液瘤细胞系的生长。FHT-1015 在多个葡萄膜黑色素瘤细胞系（92-1、MP41、MP38、MP46）中表现出较强的生长抑制作用，GI50值约为0.010µM至0.100µM。 图3. 来自 Foghorn Therapeutics的基于酰胺乙酰胺骨架的SMARCA2/SMARCA4 ATP酶抑制剂 随后的2020年专利描述了47个化合物，重点是末端酰胺上不同取代的五元杂环基团(WO2020160100，WO2020106915)。此后，该骨架发表了两个专利，其中一个包括444个例子，如化合物10 (实例254，WO2021155316)，该专利中的部分化合物表现出一定选择性的SMARCA2抑制作用。2021年的专利US20210230154，其中的化合物11(实例1)，为他们的临床候选者（FHD-286）。该化合物于2021年年中进入 I 期临床试验，用于治疗复发/难治性急性髓性白血病（AML）、骨髓增生异常综合征（MDS）和转移性葡萄膜黑色素瘤。 FHD-286对葡萄膜黑色素瘤细胞系的体外生长抑制作用最强，其中92-1细胞系的绝对半抑制浓度为0.3 nM。该化合物在小鼠模型中也显示出显著的肿瘤生长抑制作用。在最高剂量（1.5 mg/kg）时，可观察到肿瘤消退，但体重无显著变化。另一项专利WO2021236080表明，在携带DNMT3A突变的OCI-AML2异种移植小鼠模型中，FHD-286抑制肿瘤生长。随后的专利(WO2022192365，WO2022198043)披露了FHD-286晶体形式以及配方、体外转运体和CYP谱数据。 2021年，同时发表了两项专利申请，以单酰胺骨的ATP酶抑制剂（图4）。第一个专利WO2021155264包含83个例子，探索了核心噻唑酰胺部分，用取代双环杂环，如苯并咪唑和萘啶。第二个专利WO2021155320是一个更广泛的526个实例，有两个不同的系列，第一个描述了六元杂环，主要是取代吡啶，作为噻唑酰胺替代品。本文还介绍了9元或10元杂环的其他实例，如萘啶和相关衍生物作为噻唑酰胺的替代物。根据提供的效价关系，它们是比SMARCA4更有效的SMARCA2抑制剂。 图4.  Foghorn Therapeutics的基于单酰胺的SMARCA2/SMARCA4 ATP酶抑制剂。 2022年，发表了856个例子的专利WO2022103899，探索了具有环状和非环芳基砜的酰胺与取代的9元或10元杂环核的结构。双环芳基砜酰胺与萘啶衍生的核心是在专利中最常见的特点。化合物15(实例15) 代表了化学物质和最具选择性的化合物，根据生化分析中的半抑制浓度值，其对SMARCA2的抑制选择性接近94倍。报道的例子的选择性差异显著，似乎很大程度上受到萘啶核心上的取代基的影响。 3.4. Novartis AG 2020年诺华报道了的八个例子的专利WO2020035779，将1-(isothiazol-5-yl)-3-(2-halo-pyridin-4-yl) ureas描述为有效的，SMARCA2/SMARCA4 双ATP酶抑制剂。2018年发表了一篇描述这些新型ATP酶抑制剂的报道，报道了N，N‘-二吡啶脲类 化合物16(实例1) 作为初始先导分子（图5）(见上文，10.1021/acs.jmedchem.8b01318)。化合物16对含有ATP酶和SnAC结构域的SMARCA2（636-1331）结构具有3.8µM的半抑制浓度，对含类似SMARCA4（658−1361）结构具有类似的效力(1.7µM 半抑制浓度)。优化后发现了化合物17(实例7)，这是一种有效的双抑制剂: SMARCA2/SMARCA4 IC50的<0.005µM。此外，在SMARCA2依赖的SMARCA4突变的黑色素瘤细胞系SK-MEL-5（绝对AAC50 = 0.004µM），而在SMARCA4正常细胞系SBC5（AAC50 = >10µM）中仅观察到微弱的抗增殖活性。在SMARCA4突变的人肺癌异种移植小鼠模型中，化合物17的体内活性，口服20 mg/kg连续3周，肿瘤生长抑制55%。然而，化合物受到了更高剂量时的耐受性问题的限制。化合物18与SMARCA2 ATPase结构域(705− 960）组成的晶体数据显示，抑制是通过在ATP结合位点附近与蛋白变构结合来实现的，脲与催化谷氨酸（Glu852）进行关键接触（图6，PDB：6EG3）。 图5. 诺华的二芳基脲骨架的SMARCA2/SMARCA4 ATP酶抑制剂。 图6. MBP-hSMARCA2[705–960] 与 化合物18 配合物的晶体结构（PDB：6EG3）。 4. ATP酶靶向PROTAC降解剂 4.1. Dana-Farber Cancer Institute (DFCI) 2021年，DFCI披露了一份SMARCA2ATP酶靶向PROTAC专利WO2021163302，包括14个实例。基于诺华报道的N，N‘-二芳基脲的ATP酶抑制剂基团，大部分连接点是通过末端的羧酸基序发生的。这些ATP酶结合物主要通过不同长度和灵活性的连接物与CRBN配体结合。本文还报道了两个使用 VHL E3连接酶配体的例子。通过ATPlite发光试验报告了化合物的细胞生长抑制数据，化合物19-22(实例 4、8、7和12）在人MV411细胞系中半抑制浓度≤为0.1µM（图7）。在A549和MOLM13细胞系中也有降解。 图7. DFCI的代表性PROTACs。 4.2. Foghorn Therapeutics, Inc 2021年， Foghorn Therapeutics公布了一份297个描述PROTACs的专利申请，利用它们的SMARCA2/4ATP酶抑制剂。SMARCA2 ATP酶结合剂是基于2-酰胺乙酰胺骨架，包括CRBN和VHL E3连接酶结合剂。第一个连接点附着在取代的氨基噻唑部分上，第二个是中心酰胺部分的亚甲基上（图8(a)）。以HeLa HiBiT检测了所有化合物的SMARCA2和SMARCA4降解数据。一些化合物表现出选择性的SMARCA2降解，有代表性的化合物23-25 (实例141,163和166）（图8(b)）。 图8. 针对 Foghorn Therapeutics的PROTAC降解剂。 4.3. Kymera Therapeutics, Inc 在2020年底，Kymera公司发表了一份538个实例的专利申请，描述了SMARCA2 PROTAC降解剂。虽然在此专利中绝大多数的化合物针对SMARCA2溴域，但有32个化合物利用了诺华报道的N，N‘-二芳基脲ATP酶抑制剂基团，并结合CRBN和VHL E3连接酶配体。代表性化合物26(实例301 )（图9）。 图9.　Kymera公司的PROTAC 降解剂。 2022年，Kymera公司随后披露了两项描述SMARCA2 ATP酶结合PROTACs的专利申请。第一个专利WO2022125800描述了40个化合物，基于2-酰胺乙酰胺SMARCA2 ATP酶结合剂，类似于早期 Foghorn Therapeutics。描述了三种不同的接入点：第一个是被取代的氨基噻唑部分（黑色箭头）；第二个是中心酰胺部分的亚甲基（蓝色箭头）；第三个来自末端杂芳酰胺部分（红色箭头）。40个化合物中有3个具有VHL E3连接酶配体，并利用黑色箭头表示的出口载体，其余具有CRBN E3连接酶配体。第二项专利WO2022178532申请描述了另外100种化合物，其中67种是PROTACs，33种是ATP酶抑制剂。CRBN和VHL E3连接酶结合剂都是一个例子。许多化合物包含一个单酰胺吡啶吡啶核心，与邻近吡啶的接入点（图10）。 图10.　Kymera公司的代表性2-酰胺乙酰胺和单酰胺SMARCA2/SMARCA4 ATP酶靶向PROTAC支架（箭头:接入点）。 参考：https://doi.org/10.1080/13543776.2024.2338111 声明：发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要，并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断，后果自负。若有侵权，告知必删！ 长按关注本公众号  粉丝群/投稿/授权/广告等 请联系公众号助手 觉得本文好看，请点这里↓

【导读】葡萄膜黑色素瘤（UM）是主要的眼部原发性恶性肿瘤，常进展为肝转移，且治疗手段有限。 10月18日，中山大学研究团队在期刊《Advanced Science》上发表了研究论文，题为“Neuropeptide Precursor VGF Promotes Liver Metastatic Colonization of Gαq Mutant Uveal Melanoma by Facilitating Tumor Microenvironment via Paracrine Loops”，本研究中，研究人员阐明了神经生长因子诱导基因（VGF），一种分泌型神经肽前体，在Gαq突变UM中的作用。研究人员采用多组学方法，包括转录组和分泌组分析，揭示了VGF在UM进展中的复杂作用。VGF在Gαq突变型UM细胞中表达上调，且与UM患者不良预后相关。靶向VGF可显著抑制UM在体内外的生长。进一步的证据表明，Gαq通过MAPK/CREB通路调控VGF。联合抑制Gαq和MEK可显著降低UM移植瘤的肿瘤负荷。值得注意的是，VGF通过自分泌和旁分泌环路触发UM的肝脏转移定植，并激活肝星状细胞（HSCs）的纤维化，创造有利的微环境。此外，VGF直接结合TGFBR2，调控TGF-β-SMAD信号通路，从而调控内皮-间充质转化（EMT）相关基因，促进肿瘤转移。综上所述，这些发现证实了VGF是Gαq突变UM进展和转移的关键驱动因素，并为UM患者提供了一个有前景的治疗靶点和策略。 https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202407967 背景信息  01  葡萄膜黑色素瘤（UM）是成人最常见的原发性眼内恶性肿瘤，主要发生于脉络膜（90%）、睫状体（6%）和虹膜（4%）。UM患者起病隐匿，早期症状易被忽视，确诊时多已处于晚期。不仅如此，近50%的UM患者会发展为转移性疾病，通常在1年内死亡。肝脏是最常见的转移部位，肝转移患者的1年和2年总生存率分别为13%和8%。虽然对原发肿瘤的治疗有效，但UM转移瘤对化疗和靶向治疗的应答较差，通常对免疫检查点抑制剂无应答。目前，还没有有效的治疗方法来预防肿瘤的转移。因此，迫切需要探索潜在的机制，并开发新的有效的治疗方法，以预防和治疗致死性UM转移。 超过85%的UM由GNAQ或α 11 （GNA11）突变引起，其中95%为Q209P/L单位点突变，是UM发病和进展的关键致癌因素。突变型Gαq蛋白有望成为发现抗UM新型化合物的治疗靶点。遗憾的是，直接抑制Gαq的药物，如YM-254890和FR900359，无法区分野生型和突变型Gαq，且难以从天然来源分离和合成，使其具有毒性，不适合临床应用。此外，目前G蛋白通路下游效应分子的抑制剂（如MEK和PKC）在UM治疗中显示出有限的临床获益。因此，迫切需要探索驱动Gαq突变UM进展和转移的新靶点和机制，以改进UM治疗。 VGF触发肝星状细胞纤维化和活化促进UM肝转移  02  多项研究表明，HSC是肝纤维化中重要的纤维化细胞类型之一，并可能通过重塑肝转移前微环境促进肝转移。鉴于之前的研究发现VGF调节TGF-β信号通路，而TGF-β信号通路与纤维化密切相关，研究人员下一步研究VGF是否通过活化HSC促进UM细胞在肝脏的定植。 qRT-PCR和免疫印迹分析显示，从Gαq突变的UM细胞（MP41和92.1）获得的CM（同样富含vgf）比从MUM2B细胞获得的CM显著增加LX-2细胞的纤维化相关标志物α-平滑肌作用（α-SMA）和FN的表达。研究人员观察到LX-2细胞被MP41细胞和过表达vgf的MUM2B细胞获得的CM刺激激活。此外，过表达VGF或rVGF处理LX-2细胞后，α-SMA和FN的蛋白水平也增加。α-SMA免疫荧光染色进一步证实了在富含VGF的CM或rVGF处理下LX-2细胞的活化。提示VGF可激活HSC，为UM肝转移提供有利的微环境。 图1：VGF触发肝星状细胞纤维化和活化，促进葡萄膜黑色素瘤肝转移 LX-2细胞全细胞裂解物的免疫印迹分析显示，过表达VGF或rVGF处理也轻微增加了TGFBR2的表达和SMAD3的磷酸化。考虑到VGF是一种分泌蛋白，可以刺激hsc的活化，研究人员想知道UM细胞分泌的VGF是否与HSC中的TGFBR2结合。进一步，研究人员在LX-2细胞中强制表达TGFBR2，然后将LX-2细胞（OE-HA-TGFBR2）暴露于过表达Flag-VGF的MUM2B细胞制备的CM。免疫荧光染色显示UM细胞分泌的VGF也与LX-2细胞表达的TGFBR2相互作用，提示VGF也可能通过旁分泌环通过TGF-β-SMAD信号通路激活HSC。 既往研究发现癌细胞诱导HSC活化，活化的HSC在肿瘤转移过程中进一步反馈促进肿瘤生长和转移。然后，研究人员探索活化的HSC是否会触发UM细胞的生长。在迁移共培养体系中，将UM细胞暴露于LX-2细胞（失活的命名为qLX-2或活化的命名为αLX-2，经TGF-β预处理24 h）的培养环境中，如图1H所示。MP41、92.1细胞与qLX-2、αLX-2细胞共培养后侵袭能力增强，与αLX-2细胞共培养后侵袭能力更强。相比之下，这种治疗对MUM2B没有诱导这样的促进作用。 综上所述，本研究结果表明，VGF可能通过TGF-β-SMAD信号通路，通过自分泌和旁分泌环路触发HSC的活化，活化的HSC进一步反馈增强Gαq突变型UM细胞的侵袭能力，从而促进UM的肝转移定植。本研究加深了我们对UM复杂转移过程的理解，并可能为转移性UM提供新的靶点和治疗策略。 【参考资料】 https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202407967 声明：发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要，并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断，后果自负。若有侵权，告知必删！ 长按关注本公众号  粉丝群/投稿/授权/广告等 请联系公众号助手 觉得本文好看，请点这里↓