Oprozomib

此前，研究人员报道了AR-01（一种不可逆的大环肽环氧酮）能选择性抑制免疫蛋白酶体催化亚基LMP2（低分子量多肽-2）。研究还表明，在阿尔茨海默病（AD）动物模型中，抑制LMP2可通过抑制小胶质细胞介导的炎症产生抗AD效应。因此，AR-01正被开发为一种潜在的AD治疗方法。通常，具有肽骨架的中枢神经系统药物由于不利于穿过血脑屏障的特性而面临重大挑战。在本报告中，作为早期药物开发的一部分，研究人员在健康小鼠和大鼠中评估了AR-01的药代动力学特性，包括脑渗透性（即脑-血浆分配系数）。研究人员还使用两种替代方法验证了AR-01在脑中的靶点结合：（i）LMP2活性测定和（ii）Western印迹检测由不可逆的LMP2:AR-01加合物形成引起的LMP2条带迁移。结果证实，单次静脉注射AR-01可剂量依赖性地使小鼠脑中的LMP2失活。多次给药AR-01导致小鼠脑中LMP2加合物累积形成，并改善了5xFAD小鼠（一种广泛使用的淀粉样变性模型）的认知功能。综上所述，结果表明AR-01作为一种AD治疗药物具有有前景的药物特性。**论文解读：免疫蛋白酶体亚基LMP2抑制剂AR-01的药代动力学、靶点结合及抗阿尔茨海默病效应研究** **研究背景与意义** 阿尔茨海默病（AD）是一种以进行性认知功能下降为特征的神经退行性疾病，其病理机制复杂，涉及β淀粉样蛋白（Aβ）沉积、Tau蛋白过度磷酸化以及持续的神经炎症。近年来，针对淀粉样蛋白的清除抗体药物虽获FDA批准，但其疗效有限且存在淀粉样蛋白相关影像学异常（ARIA）等风险，凸显了开发新作用机制药物的迫切需求。神经炎症，特别是由小胶质细胞和星形胶质细胞介导的慢性炎症，被认为是AD进展的关键驱动因素之一，成为继淀粉样蛋白之后AD药物研发的第二大靶向过程。 免疫蛋白酶体是构成型蛋白酶体的替代亚型，主要在免疫细胞中表达或在促炎刺激下于非免疫细胞中诱导产生。其催化亚基包括LMP2（低分子量多肽-2）、MECL1和LMP7。研究表明，在AD等多种神经退行性疾病的动物模型和患者中，免疫蛋白酶体亚基LMP2和LMP7表达上调。选择性抑制免疫蛋白酶体，尤其是LMP2，在临床前模型中显示出改善认知功能的益处，提示LMP2是一个潜在的治疗靶点。然而，开发能够有效穿透血脑屏障（BBB）并作用于中枢神经系统的蛋白酶体抑制剂面临巨大挑战，因为许多肽类药物难以跨越BBB。 基于此，本研究聚焦于AR-01，一种由线性LMP2抑制剂YU-102优化而来的不可逆大环肽环氧酮类LMP2选择性抑制剂。前期研究显示，AR-01相比其线性类似物（如已获批的卡非佐米）具有更长的半衰期和更低的外排比率，但其系统的药代动力学（PK）特性、脑渗透性以及在脑内的靶点结合程度尚需全面评估。本研究旨在详细表征AR-01在小鼠和大鼠中的脑内处置过程，评估其靶点结合，并探索其在AD转基因模型中的初步疗效，以期为AR-01作为AD候选药物的开发提供关键依据。本研究发表在《ACS Pharmacology》上。 **关键技术方法概述** 本研究综合运用了药代动力学评估、靶点结合验证和动物行为学测试等方法。药代动力学研究在健康BALB/c小鼠和SD大鼠中进行，通过静脉注射（i.v.）给药，利用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）测定血浆和脑组织中的药物浓度，计算脑-血浆分配系数（Kp, brain）等参数。靶点结合评估采用两种互补方法：一是使用LMP2靶向荧光底物（Ac-PAL-AMC）的蛋白酶体活性测定法，量化LMP2活性抑制程度；二是通过Western印迹法检测由不可逆LMP2:AR-01加合物形成导致的LMP2条带迁移，直观反映共价修饰情况。此外，研究在AD模型动物（5xFAD转基因小鼠）中进行了探索性药效学评价，通过莫里斯水迷宫（MWM）测试评估空间记忆功能，并利用免疫组织化学技术分析星形胶质细胞形态变化。样本队列来源明确：健康小鼠和大鼠购自Jackson Laboratory；5xFAD小鼠来源于MMRRC（编号34848-JAX）。 **研究结果** **1. AR-01在小鼠脑内的快速分布** 研究人员给健康BALB/c小鼠静脉注射高剂量（80 mg/kg）AR-01，并在早期时间点评估其脑分布。结果显示，AR-01在脑内可检测到长达1小时，其脑-血浆分配系数（Kp, brain）为0.017。从最早取样点（给药后5分钟）起，小鼠血液中的LMP2活性即被完全抑制，并持续至6小时。脑内LMP2活性也达到约70%的抑制，且在整个测试期间维持。Western印迹分析证实，给药小鼠脑内存在LMP2:AR-01加合物。值得注意的是，在给药后5分钟（即脑内药代动力学研究中达到峰浓度（Tmax）的时间点），就已观察到完全的LMP2加合物形成和活性抑制，表明AR-01能迅速分布至小鼠脑内并立即与靶点结合。 **2. AR-01在大鼠中的药代动力学和靶点结合** 在SD大鼠中单次静脉注射40 mg/kg AR-01后，其药代动力学特征与小鼠相似：血浆峰浓度高，但半衰期短（t1/2约28分钟），清除迅速（CL为3420 mL/h/kg），表现为高代谢和组织分布特性。血液中的LMP2活性被完全抑制。虽然脑组织匀浆的LMP2活性测定仅显示部分抑制，但Western印迹法在相同脑组织中检测到了LMP2的完全修饰（加合物形成）。活性测定进一步验证了AR-01对LMP2的选择性靶向，对其他蛋白酶体催化亚基的影响极小。 **3. 脑内AR-01靶点结合的剂量依赖性** 在健康BALB/c小鼠中进行的剂量反应研究表明，单次静脉注射不同剂量的AR-01能剂量依赖性地抑制小鼠脑内LMP2活性并促进加合物形成，在大约40 mg/kg时达到饱和，显示出优异的体内靶点结合能力。然而，脑内LMP2活性抑制程度与LMP2:AR-01加合物形成程度并不成比例，两者差异倍数约为2.5。分析认为，这可能与LMP2活性测定过程中，小鼠脑组织匀浆内存在非LMP2催化的荧光底物（Ac-PAL-AMC）水解有关。研究还发现，Western印迹上约70%的脑LMP2占有率可能相当于血液中至少90%的LMP2活性抑制，提示血液LMP2活性抑制可作为预测脑内AR-01靶点结合的快速、可靠的初级生物标志物。 **4. LMP2活性测定与条带迁移测定之间的非比例性靶点结合** 为深入理解两种靶点结合测定方法在小鼠和大鼠脑组织中观察到的差异，研究人员在鼠源小胶质BV2细胞中进行了剂量依赖性概念验证实验。结果同样显示，LMP2活性抑制程度与加合物形成程度不一致（例如，在50 nM AR-01时，60%的活性抑制对应90%的加合物形成），表明这种非比例性结果并不仅限于啮齿动物脑组织。进一步实验证实，在脑组织匀浆中，确实存在蛋白酶抑制剂混合物（PIC）可抑制的、非LMP2催化的Ac-PAL-AMC水解（约40%）。尽管两种测定结果存在差异，但当对两种方法得到的数值进行归一化处理后，它们具有可比性，表明AR-01和Ac-PAL-AMC与LMP2的结合机制相同。综上所述，由于底物的非LMP2催化水解，LMP2活性测定可能无法准确反映AR-01在啮齿动物脑内的靶点结合程度；而Western印迹法虽然是耗时的方法，但对于测量AR-01等LMP2抑制剂引起的共价LMP2失活更为合适。 **5. AR-01在鼠体内的多种给药途径** 评估了腹腔注射（i.p.）和口服（p.o.）给药途径。在健康小鼠中，AR-01腹腔注射（150 mg/kg）的生物利用度（F）粗略估计约为54%，并在给药后6小时的小鼠脑中观察到完全的LMP2:AR-01加合物形成，支持了腹腔注射作为小鼠药效学研究中可接受的给药途径。尽管先前报道AR-01在健康BALB/c小鼠中的口服生物利用度约为10%，本研究发现口服给药（150 mg/kg）能在小鼠脑内实现约71%的LMP2加合物形成。与静脉注射类似，腹腔注射和口服给药后，脑匀浆中也观察到了非比例性的靶点结合测定结果。这些发现表明，AR-01可通过多种途径给药，并具有良好的脑渗透性和靶点结合能力。 **6. 多次给药AR-01引起的LMP2累积占有率** 在老年C57BL/6小鼠（作为5xFAD小鼠的野生型对照）中，每周两次腹腔注射AR-01（20 mg/kg），持续三周。结果显示，尽管脑和血液中的LMP2活性抑制程度在长达4天内似乎保持不变，但在给药间隔期间（第3-4天）观察到游离LMP2水平的轻微反弹。在最后测试时间点（第21天），约46%的脑LMP2形成了AR-01加合物。这表明，在老年C57BL/6小鼠中，通过多次给药AR-01可以实现LMP2的累积占有率，这为在AD小鼠模型中药效学研究的剂量选择提供了依据。 **7. AR-01改善5xFAD小鼠的记忆功能并挽救反应性星形胶质细胞** 在5xFAD AD小鼠模型中进行了初步药效学评价。4月龄5xFAD小鼠接受AR-01（20 mg/kg，腹腔注射，每周两次）或对照剂治疗3周后，进行莫里斯水迷宫测试。尽管两组小鼠随着训练进展，寻找隐藏平台的能力均有所提高（逃避潜伏期每日缩短），但接受AR-01治疗的5xFAD小鼠表现优于对照组，尤其是在第4天和第5天。尽管小鼠数量有限，但在第4天观察到到达平台的距离存在显著差异（AR-01组更短）。此外，研究评估了AR-01对反应性星形胶质细胞的影响。在对照组5xFAD小鼠中，靠近Aβ斑块的星形胶质细胞表现出反应性星形胶质细胞的典型形态：更粗、分支更多。而AR-01治疗显著减少了星形胶质细胞分支的数量和连接点，提示其对反应性星形胶质细胞可能具有挽救作用。总体表明，AR-01有效抑制了5xFAD小鼠的病理生理过程。 **讨论与结论总结** 本研究的讨论部分首先强调了针对AD神经炎症开发新疗法的重要性，并将免疫蛋白酶体定位为一个控制神经炎症的新靶点。研究人员开发的LMP2选择性大环肽环氧酮AR-01，在啮齿动物中的初步药代动力学/药效学研究表明，其能通过多种给药途径迅速分布至脑内并有效靶向脑LMP2。靶点结合使用两种替代方法进行评估：基于LMP2靶向荧光底物的蛋白酶体活性测定法和检测LMP2:AR-01加合物的Western印迹法。据研究人员所知，这是首次证明蛋白酶体抑制剂能快速脑分布并验证其靶点结合的研究。研究还显示AR-01能改善5xFAD小鼠的记忆功能并挽救反应性星形胶质细胞。 与半衰期长、清除率低的传统药物不同，肽类环氧酮蛋白酶体抑制剂家族（如卡非佐米、奥普佐米）虽然半衰期短、清除率高，但通过共价修饰蛋白酶体催化亚基的N-末端苏氨酸残基，实现了持久的靶点结合和药效学效应。大环结构的AR-01作为该家族的最新成员，同样表现出延长的靶点结合（3-4天）和改善的药代动力学特性。其在脑内的LMP2占有率不仅持久，还能通过重复给药累积。因此，AR-01的药代动力学特性与其药效学反应并非直接关联。 关于靶点结合评估方法，研究指出，使用Ac-PAL-AMC的蛋白酶体活性测定法是一种快速测量LMP2抑制程度的高效方法，但必须考虑脑组织匀浆中存在的非LMP2催化底物水解，这可能导致活性读数人为升高，从而高估残留的蛋白酶体活性。相比之下，Western印迹法能检测不可逆抑制剂引起的LMP2共价修饰，虽然耗时，但能更准确地评估共价抑制剂的靶点结合程度。对于其他不可逆蛋白酶体抑制剂，使用其他亚基选择性荧光底物时，也可能需要仔细验证以调和抑制率与共价加合物形成程度之间的差异。 在药效学方面，与先前在其他AD模型（如Tg2576转基因小鼠）中使用其他LMP2抑制剂的研究结果一致，AR-01在5xFAD转基因小鼠中减轻了AD相关的行为障碍。尽管使用未优化的AR-01给药方案获得的效果令人鼓舞，但可能需要进一步验证以确认AR-01在优化剂量和间隔下的疗效。此外，莫里斯水迷宫测试是使用有限数量小鼠进行的初步研究，未来需要足够数量的队列以及评估潜在的性别依赖性治疗效应，以确立AR-01疗效的稳健性。 最后，研究显示，重复给予20 mg/kg AR-01（与体内药效学研究中使用的剂量相同）可实现最大约50%的累积脑LMP2修饰。鉴于有研究表明，卡非佐米需要至少抑制60%的蛋白酶体糜蛋白酶样（CT-L）活性才能达到理想的抗癌疗效，因此，研究约50%的脑LMP2抑制是否足以实现最大的抗AD疗效将是一个有趣的课题。更深入地了解暴露-反应关系并优化给药方案，可能在临床前和临床研究中产生AR-01的最佳疗效。 **研究结论（翻译）**： 总之，本研究提供了关于评估肽类环氧酮蛋白酶体抑制剂（包括AR-01）作为中枢神经系统候选药物的重要见解。AR-01表现出有前景的药代动力学特性和有效的脑靶点结合能力。在5xFAD小鼠模型中，AR-01改善了记忆功能并显示出对反应性星形胶质细胞的挽救作用。这些发现支持了进一步开发AR-01作为一种通过靶向免疫蛋白酶体LMP2亚基来调节神经炎症的潜在阿尔茨海默病治疗策略。

天然产物化学在药物发现中的作用：过去二十年的进展与未来展望 大家好，今天我给大家分享的文章是2025年发表在Journal of Natural Products 杂志上的一篇文章，题目是：The Role of Natural Product Chemistryin Drug Discovery: Two Decades of Progressand Perspectives（天然产物化学在药物发现中的作用：过去二十年的进展与未来展望） DOI:10.1021/acs.jnatprod.5c01368 摘要 天然产物在医药领域一直发挥着关键作用，是多个治疗领域中获批药物的核心组成部分。本研究采用数据驱动方法评估天然产物当前在药物发现中的作用，研究识别出2000年1月至2025年9月间全球首次获批的119种天然产物衍生（NP-derived，NP-D)药物（含16种抗体药物偶联物，（antibody-drug conjugates ，ADCs），并分析了其研发周期、来源、制备途径、适应症及给药途径。本文重点介绍了6个从发现到临床应用均取得成功的天然产物衍生药物案例。 这些研究表明，天然产物的研发增长虽较为缓慢，但仍是具有重要临床价值的活性药物成分，临床影响显著。对于许多近期验证的治疗靶点，天然产物衍生化学类型的探索仍不充分，因此针对药物研发的天然产物研究仍存在巨大机遇。 引言 2004年，《天然产物化学在药物发现中的作用》综述阐述了天然产物对药物发现的历史影响、当时工业界药物发现中天然产物的应用方式以及面临的问题。 本研究旨在揭示天然产物研发从临床前研究、临床试验到获批后阶段的演变历程，批判性评估2000年以来上市的天然产物及天然产物衍生药物。通过6个从发现到成药的案例展开分析，探讨天然产物是否仍对医药市场产生影响。本文论述了过去二十年天然产物在药物发现领域的发展演变，展望其未来发展前景。 获批情况分析 本研究首先对2000年1月1日至2025年9月1日期间获批用于临床的天然产物衍生治疗药物进行统计，收集了119种全球首次上市的天然产物衍生药物的相关数据，整理成电子表格并在图1中进行图形化展示，清晰概述了119种药物的关键信息，直观呈现了从早期发现到临床应用各阶段的核心参数。 图1：2000年1月1日至2025年9月1日期间获批的119种药物物质列表 图1以表格形式展示了119种获批药物物质，每种药物均列出化合物名称（药物物质，左列）与药品名称（右列）。其中蓝色与紫色标记的药品名称将在后续图3至图8中重点呈现。首次获得临床批准的国家以二字母或三字母缩写进行标注。右侧的直方图直观展示了药物来源、制备工艺、疾病适应症及给药途径的分布，图例位于右页底部。时间轴清晰显示了从各天然产物家族成员首次发现到最终获批上市的历程，其中每年首个获批品种以白色文字突出标注。紧随其后的图表展示了每种药物物质所对应的分子量信息。 药物生产途径分析 在当前新获批药物中，化学合成仍是最主要的生产途径，共51个；半合成为第二大常用方法，共计44个，其原料主要来源于发酵产物（32 个）和植物细胞提取物（12个）。在 119个新获批药物中，仅8个采用直接发酵法制备，包括carrimycin、daptomycin、epothilone、 fidaxomicin等； 仅3个通过植物直接提取获得。 抗体药物偶联物（16个）的制备路线呈现相似特征。其中12个抗体药物偶联物的活性药物成分为化学合成来源，如anthramycin、camptothecin、dolastatin 10衍生物等；4个（maytansine、calicheamicin γ1I）的活性药物成分来源于发酵产物。 目前全球尚无完全采用合成生物学技术制备的活性药物成分获批上市，化学合成、半合成及传统生物质加工仍是药物工业化生产的主流技术。随着生物合成基因簇改造与工艺级酶催化技术不断进步，预计未来二十年药物制造领域将迎来重大变革。基因组挖掘与相关基因组数据的系统积累，将为新型活性药物成分的发现与高效合成提供关键支撑。 图2. 119种获批药物的可视化概览  图2中分项展示了：(a) 各年份获批的药物数量；(b) 治疗疾病及/或适应症；(c) 首次获批国家；(d) 药物来源；(e) 发现方法；(f) 制备方法；(g) 给药途径。使用的缩写包括：抗体药物偶联物（ADC）、生物活性导向分离（BAG）、肌肉注射（IM）、静脉注射（IV）、组分导向分离（FG）、天然产物分离（NPI）、全合成（syn）及皮下注射（SQ）。各项数据旁的数值表示对应的获批药物数量。 给药途径和治疗领域分析 大多数药物活性成分被制备为口服（55种）和静脉注射（54种）制剂（图2g），6种药物同时获批多种给药方式，通常为口服和静脉注射。仅获批静脉注射的药物中，多数为抗感染药（20种）或抗肿瘤药（30种），4种为抗溃疡药。口服制剂的适应症分布广泛，其中心血管/代谢性疾病（23种）占比最高，其次为抗感染药（13种）、免疫调节/抗炎药（8种）、神经系统药物（6种）、抗肿瘤药（2种）和抗溃疡药（2种）。其余制剂（17种）获批的给药途径包括外用（7种）、支架涂层（3种）、皮下注射（2种）、肌内注射（2种）、鞘内注射（1种）和透皮贴剂（1种）。 这些给药途径的选择，旨在使药物靶向作用于病变部位，或满足无法耐受口服或静脉注射治疗患者的需求。 外用皮肤病药物有瑞他莫林（reta pamulin）、斑蝥素（cantharidin）、吡美莫司（pimecrolimus）等，其中ingenol mebutate 因皮肤癌风险于 2020 年退市；zotarolimus,    umirolimus and novolimus 等3种免疫抑制剂用作支架涂层，预防血管再狭窄；蒿乙醚用于重症疟疾。 研发周期分析 本文介绍了多种研发周期漫长的药物，其中阿考曲蒙（acoltremon）研发周期最长（132 年），2025年获批用于治疗干眼症，由薄荷醇衍生而来；利右苯丙胺次之（ lisdexamfetamine，118 年），2007年获批，与麻黄碱（ephedrine）及其类似物研发相关。此外，扎诺美林和曲司氯铵（xanomeline + trospium，117年）、麦芽酚铁（ferricmaltol，111年）、斑蝥素（cantharidin，109年）这三种药物研发周期也超 100年，分别用于不同病症，其研发均与早期相关物质的结构确定或应用历史相关。 与长研发周期药物相反，部分药物研发速度极快，4种药物从结构确定/发现到获批不足15年。其中伊沙匹隆（Ixempra）研发周期最短，仅12年；吡美莫司（pimecrolimus）、吉妥珠单抗奥佐米星（gemtuzumab ozogamicin）均为13年。此外，罗米地辛（exenatide）、艾塞那肽（exenatide）也是研发周期不足15年的重要药物。 研发途径分析 药物研发途径可分为三类：首创新药类别（全新药理学机制）、全新药物类别（已知药理学机制）和已知药物类别（已知药理学机制）。为阐释天然产物衍生药物研发路径的多样性，本研究重点介绍了6种从发现成功转化为临床治疗药物的天然产物衍生药物，这些案例为过去二十年的研发工作提供了宝贵的经验和启示，也展现了天然产物衍生药物研发的创新性。 首创新药类别：奥马洛酮（omaveloxolone） 全新药物类别：非达霉素（fidaxomicin）、艾瑞芬净（ibrexafungerp）、环氧霉素（epoxomicin）、艾日布林（eribulin） 已知药物类别：钠-葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂类家族 每种药物均体现了其所属研发路径的独特挑战和机遇，为天然产物基药物研发的发展提供了更全面的视角。 1 奥马环酮：源自经典化学结构、历经漫长临床验证的生物学洞见 第一阶段：基础与起点 (1995年前) 天然产物的潜力：齐墩果酸和熊果酸（图3）作为广泛存在的三萜类化合物，因其具有保肝、抗炎等多种活性，成为传统药物的重要成分，并已有临床应用（如齐墩果酸用于肝病治疗）。 研发动机：科学家们希望利用这些天然产物作为起点，通过化学修饰开发出活性更强、更具成药性的新型药物。 第二阶段：早期探索与结构优化 (1995年 - 2000 年代初) 项目启动：1995年，达特茅斯学院的研究团队启动项目，目标是合成抗炎活性增强的齐墩果酸类似物。 先导化合物发现：通过构效关系（SAR）研究，从大量衍生物中筛选出关键的先导化合物 TP-46、TP-82 和 TP-139。 关键突破：巴多索隆（bardoxolone）的诞生：基于先导化合物，最终确定了巴多索隆的结构。其 A 环和 C 环的精准化学修饰，使其抗炎活性相比齐墩果酸提升了10,000倍，并展现出显著的抗肿瘤活性。这是从天然产物到创新化合物的关键一步。 第三阶段：临床转化的挑战与挫折 (2000年代 - 2021年) 研发主体变更：巴多索隆的知识产权转让给瑞塔制药，开启了产业化研发之路。 适应症探索与调整：巴多索隆最初尝试用于癌症治疗（I 期），后研究重点转向其甲基衍生物巴多索隆甲酯，并针对慢性肾病、阿尔波特综合征等多种疾病开展了 II/III 期临床试验。 重大挫折：2021年，巴多索隆甲酯治疗阿尔波特综合征的新药申请（NDA）被美国 FDA 拒绝，欧洲上市许可申请也随后撤回。这表明即使是活性显著的化合物，在临床转化过程中也可能遭遇失败。 第四阶段：新一代突破与机制创新 (与巴多索隆研发并行) 新一代衍生物：在巴多索隆研发的同时，新一代类似物奥马环酮进入研究视野。 机制创新：奥马环酮的作用机制与巴多索隆不同，它是Nrf2（核因子红细胞 2 相关因子 2）的激活剂。这一机制的发现是关键的生物学新发现，为治疗弗里德赖希共济失调等氧化应激相关疾病提供了新的思路。 精准定位罕见病：研究发现弗里德赖希共济失调患者的细胞中，Nrf2 调控的抗氧化系统存在缺陷，奥马环酮的机制恰好能针对性地修复这一缺陷，使其成为治疗该罕见病的理想候选药物。 2023年2月：获美国 FDA 批准，成为首个治疗弗里德赖希共济失调的药物。 2024年2月：获欧盟批准。 商业化：2023年9月，渤健（Biogen）收购瑞塔制药，负责奥马环酮的全球市场推广，标志着该药物正式进入市场，惠及患者。 总结： 过去几十年，天然产物化学的研究日益聚焦于结构独特的化合物，这类化合物更易获得科学界的关注。这一研究重点虽情有可原，但对经典化合物的生物活性研究也具有重要价值。奥马环酮的研发历程既展现了研发团队的执着和专业的科学素养，也强调了分子的临床价值取决于其生物活性，而非仅仅是结构。 图3. 奥马环酮的结构、性质与转化时间线 2 非达霉素：通过非线性路径获批的发酵来源抗菌药物首研同类 第一阶段：发现与早期研究 源头：非达霉素（fidaxomicin，图4）最初由艾伯维（Abbott Laboratories）实验室发现，被命名为 tiacumicin B。它是一种来源于放线菌的大环内酯复合物，与lipiarmycins和clostomicins密切相关。 结构确证：后续通过核磁共振（NMR）和 X 射线晶体学研究证实，tiacumicin B 与已知的脂霉素 A3 为同一物质。 制备方法：非达霉素通过细菌发酵法制备，其发现过程及与其他天然产物的亲缘关系已有详细报道。 第二阶段：研发权的多次转让与曲折历程 1987年，首次放弃：艾伯维实验室因经济考量，放弃了非达霉素的研发项目，并将其授权给发病机制公司（Mechanism-Geropharm）。 1995年，发病机制公司后被凯龙公司（Chiron Corporation）收购。 2000年，凯龙公司又将非达霉素的研发权转让给奥普蒂默制（OptimerPharmaceuticals）。 2011年，奥普蒂默制药成功推动非达霉素获得监管批准后，被库比斯特制药（Cubist Pharmaceuticals）收购。 2014年，库比斯特制药随后又被默克公司（Merck & Co.）收购。 最终归属：目前，默克公司负责非达霉素的全球市场推广。 第三阶段：临床获批与应用 2011年5月：获美国食品药品监督管理局（FDA）批准，商品名Dificid。 2011年12月：获欧洲药品管理局（EMA）批准，商品名Dificlir。 适应症：用于治疗艰难梭菌感染（CDI）和相关腹泻。 临床优势：其疗效优于此前的标准治疗药物万古霉素，且具有全身吸收低、临床耐药性发生率低的特点，使其成为艰难梭菌感染的一线治疗药物。 临床挑战：尽管疗效显著，但产毒能力增强的艰难梭菌菌株引发的感染暴发，仍为临床治疗带来挑战。 第四阶段：作用机制的深入阐明与潜在扩展应用 核心机制：非达霉素通过靶向 RNA 合成的起始阶段，抑制细菌 RNA 聚合酶的转录过程。 结构生物学研究：埃布赖特（Ebright）团队通过冷冻电镜技术研究发现，非达霉素结合在艰难梭菌 RNA 聚合酶 “钳状结构” 的底部，使其处于开放状态，从而抑制转录起始。这一发现也解释了其抗菌谱较窄的原因。 潜在扩展应用：洛克菲勒大学的研究团队证实，非达霉素对结核分枝杆菌的 RNA 聚合酶也具有抑制作用，表明其潜在的治疗应用不仅限于艰难梭菌感染，未来可能扩展至结核病等其他领域。 总结： 天然产物来源：源于细菌发酵，是天然产物药物研发的典型案例。 曲折的商业化路径：经历了多次研发权转让，从雅培到默克，体现了药物研发中商业合作与资源整合的重要性。 显著的临床价值：作为新型抗生素，为艰难梭菌感染提供了更优的治疗选择。 机制研究的深入：通过结构生物学手段阐明了其作用机制，并为潜在的新适应症开发奠定了基础。 图4. 非达霉素的结构、性质与转化时间线 3 艾瑞芬净：口服有效的新型半合成抗真菌药物开发典范 第一阶段：先导化合物的发现与早期评估 (2000 年) 源头：艾瑞芬净（商品名Brexafemme，图5）的原始先导化合物为enfumafungin，由默克公司于2000年从Humicola fuscoatra中分离得到。 化学类别：enfumafungin属于三萜糖苷类化合物。 作用机制：作为1,3-β-D - 葡聚糖合酶抑制剂，通过抑制真菌细胞壁的关键成分合成发挥抗真菌作用。 早期挑战：尽管enfumafungin在体外展现出良好的抗真菌活性，但其药代动力学特征不佳（如口服生物利用度低），无法直接进入临床研发阶段。 第二阶段：结构优化与临床候选物确定 (2000 年后) 第一轮修饰：研究人员对enfumafungin进行结构修饰，包括将半缩醛还原为醚，并将 D - 葡萄糖基替换为 C3 - 乙醇胺衍生物，得到先导化合物2。该化合物在口服给药的念珠菌病体内模型中显示出疗效。 构效关系研究：初步研究表明，口服活性与 C3 侧链碱性氨基周围的空间环境密切相关。对 C2 - 乙酰基的进一步修饰发现，三萜 α- 面的部分杂芳基结构（如先导化合物3）可显著提升体外广谱杀真菌活性和效价。 候选物筛选：通过系统的结构优化，研究人员确定了两个临床候选药物：MK-5204和艾瑞芬净。 最终选择：选择艾瑞芬净推进后续研发，因其具有更强的抗真菌活性和更高的口服生物利用度。 制备方法：艾瑞芬净以发酵法生产的enfumafungin为起始原料，经化学合成制得，属于半合成抗真菌药。 第三阶段：作用机制的深入阐明 结构生物学研究：近期的冷冻电镜结构研究揭示了艾瑞芬净、enfumafungin和棘白菌素类药物与真菌膜整合酮合酶（β-1,3 - 葡聚糖合成酶的关键组分）的结合机制。 作用方式：真菌酮合酶通过 β-1,3 - 糖苷键将尿苷二磷酸葡萄糖中的葡萄糖转移至延伸的葡聚糖链，并将聚合后的葡聚糖转运至细胞外。艾瑞芬净通过抑制这一过程发挥抗真菌作用。 第四阶段：临床获批与应用 (2021年 - 2022年) 2021年6月：获美国 FDA 批准，商品名Brexafemme，用于治疗外阴阴道念珠菌病（VVC）。 2022 年12月：获 FDA 批准，用于降低复发性外阴阴道念珠菌病（RVVC）的发病率。 临床优势： 口服生物利用度良好：与仅能静脉注射的棘白菌素类药物不同，艾瑞芬净可口服给药，方便患者使用。 抗耐药性：对棘白菌素耐药菌株具有活性，为耐药真菌感染提供了新的治疗选择。 全新类别：成为 2001年棘白菌素类药物卡泊芬净获批后，首个全新类别的抗真菌药物（芬格普类）。 总结 天然产物来源：源于真菌发酵产物，是天然产物药物研发的成功案例。 结构优化的重要性：通过系统的化学修饰和构效关系研究，成功将药代动力学不佳的先导化合物优化为具有良好口服生物利用度的临床药物。 机制创新：作为全新类别的抗真菌药物，阐明其作用机制为后续研发提供了重要基础。 临床价值显著：解决了现有抗真菌药物的部分局限性，为临床治疗提供了新的选择。 图5. 艾瑞芬净（ibrexafungerp）的结构、性质与转化时间线 4 卡非佐米：源自环氧霉素的"非类药性"先导化合物 第一阶段：发现与早期搁置 (1992年) 源头：环氧霉素（Epoxomicin）于1992年由百时美施贵宝研究所的日本研究团队从Goodfellowia coeruleoviolacea中分离得到。 早期活性：在小鼠 B16黑色素瘤模型中展现出体内抗肿瘤活性。同一菌株还分离出了另一种抗癌化合物埃坡霉素（Epothilone）。 搁置原因：研究实验室关闭，研究人员对环氧霉素的环氧化物基团可能存在非特异性活性、肽链稳定性存在担忧，因此未对其进行进一步研发。 第二阶段：关键科学发现与机制阐明 (耶鲁大学时期) 重新关注：耶鲁大学的克鲁斯团队（Crabtree group）被环氧霉素的强效活性吸引，对其进行深入研究。 首次合成：首次完成了环氧霉素的化学合成，为后续的结构修饰奠定了基础。 靶点发现：发现生物素化的环氧霉素类似物可靶向蛋白酶体，并具有抗炎活性。 机制解析：通过 X 射线晶体结构研究，阐明了环氧霉素的作用机制：其环氧酮基团可与 20S 蛋白酶体 β5 亚基活性位点的 N 端苏氨酸形成七元 1,4 - 恶氮杂环庚烷加合物。 选择性验证：证实环氧霉素对蛋白酶体具有高度选择性，不会抑制其他蛋白酶（如钙蛋白酶、胰蛋白酶等）。 第三阶段：结构优化与临床候选物确定 设计与优化：基于早期的结合研究结果，研究人员设计了YU-101，并引入吗啉基团以提升其水溶性。 最终发现：通过进一步的结构优化，最终发现了卡非佐米（Carfilzomib）。 第四阶段：临床获批与商业成功 (2012年至今) 获批历程：2012年7月，卡非佐米（商品名：Kyprolis）获美国 FDA 批准，用于治疗至少接受过两种既往治疗的多发性骨髓瘤患者。 商业表现：取得了显著的商业成功，2024年成为全球销量第118位的药物，总销售额达16.26 亿美元。 同类药物对比：另一种类似物奥普佐米（Oprozomib）曾进入多项临床试验，但研发最终终止，体现了药物研发的高风险性。 第五阶段：衍生药物的研发与探索 抗炎活性开发：基于环氧霉素的抗炎活性，研究人员发现ONX-914可强效抑制免疫蛋白酶体，阻断炎症细胞因子产生，改变促炎 T 细胞可塑性，且无抗增殖作用。 新型免疫候选药物：通过结构优化发现了zetomipzomib，该药物于2025年4月完成了自身免疫性肝炎的 Ⅱ 期临床试验（NCT05569759），但因出现严重不良事件，其治疗狼疮性肾炎的研发于2024年终止（NCT05781750）。 总结 环氧霉素的成功转化是天然产物药物研发“反直觉设计”的典型范例：其环氧官能团虽被传统研发逻辑当作成药性的不利因素，但晶体结构研究表明（R）-环氧化合物是保障其选择性抑制活性的关键药效团。卡非佐米等相关药物的研发与应用，也印证了非常规挑战性骨架的分子创新价值。该案例启示研究者，不应将传统“类药”规则作为筛选候选化合物的绝对标准，不可因结构看似不符就否定其开发潜力。 图6. 卡非佐米（carfilzomib）的结构、性质与转化时间线 5 艾日布林：艰巨的全合成突破揭示低丰度海洋海绵代谢物 第一阶段：天然产物的发现与挑战 (1981年- 1990年代初) 源头：研究始于对分布于日本太平洋沿岸的软海绵（Halichondria okadai）的研究。该海绵因含有冈田酸（一种丝氨酸 / 苏氨酸蛋白磷酸酶抑制剂，具有抗癌活性）而受到关注。 关键发现：上村团队从600千克海绵原料中分离得到了抗癌活性极强的诺海鞘素 A（norhalichondrin A）和海鞘素 B（halichondrin B，图7），以及另外六种类似物，其体外活性达纳摩尔级别。 结构确证：通过 X 射线晶体学和圆二色谱分析，确定了诺海鞘素 A 的结构和绝对构型。 分布与来源：海鞘素类化合物也从全球其他地区的海绵中分离得到（如新西兰、帕劳、科摩罗、楚克等地）。但其原始产生生物尚未确定，可能与甲藻有关，存在生物富集的可能性。 供应挑战：大多数海洋无脊椎动物无法进行规模化人工养殖，天然来源的海鞘素难以满足临床研发和工业化生产的需求。尽管尝试了大规模采集和浅海水产养殖，但供应问题依然严峻。 第二阶段：全合成的突破与关键中间体发现 (1992年) 全合成研究：由于天然来源受限，全球多个顶尖研究团队（如岸义人、菲利普斯、尼科拉乌等团队）致力于海鞘素的全合成研究。 首次合成：1992年，岸义人团队首次完成了海鞘素 B 和诺海鞘素 B 的全合成，为后续研究奠定了坚实基础。 关键合作：1992年，岸义人向卫材研究所提供了合成的海鞘素 B 及多种中间体，用于生物活性评估。 意外发现：在评估过程中，研究人员发现其中一种合成中间体展现出强效的细胞毒性，活性仅比海鞘素 B 低10倍，且对微管稳定性的影响相似。这一发现成为后续结构优化的关键起点。 第三阶段：结构优化与临床候选物确定 优化方向：基于关键中间体的活性，卫材公司的研究人员对其进行结构优化，旨在开发出具有更好成药性的化合物。 最终发现：通过结构修饰，成功研发出大环酮类似物艾日布林（Eribulin）。 第四阶段：临床获批与应用 (2010年 - 2016年) 获批历程： 2010年：艾日布林（商品名：Halaven）获美国 FDA 批准，用于治疗晚期乳腺癌，目前已在 80 多个国家上市。 2016年：获美国 FDA 批准，用于治疗脂肪肉瘤。 作用机制：艾日布林特异性结合在微管（+）端的 β- 微管蛋白亚基，抑制微管延伸，破坏有丝分裂纺锤体的形成，使细胞分裂停止，从而发挥抗肿瘤作用。 第五阶段：衍生药物的研发与未来展望 抗体药物偶联物（ADC）：法瑞替尼艾日布林（Farletuzumab eribulin），将艾日布林连接至靶向叶酸受体 α 的单克隆抗体法瑞替尼，目前正处于治疗卵巢癌等的 Ⅱ 期临床试验阶段（NCT05613088）。 新一代类似物：E7130，由卫材公司和哈佛大学的矢田团队合作发现，是全合成的 C52 海鞘素 B 胺类似物，已完成治疗实体瘤的 Ⅰ 期临床试验（NCT03444701）。该化合物具有更强的微管作用和肿瘤微环境调控活性，且已实现超过10千克的 GMP 级合成。 总结 海洋天然产物的潜力：源于海洋海绵的海鞘素展现出极强的抗肿瘤活性，是药物研发的重要源泉。 全合成的突破：全合成技术成功解决了天然产物供应不足的瓶颈，为药物研发提供了稳定的原料来源。 结构优化的价值：从天然产物到临床药物，结构优化是关键环节，能够显著改善化合物的成药性。 多学科合作的成功：涉及海洋生物学、有机合成化学、药理学等多个学科的合作，是药物研发成功的重要保障。 图7. 艾日布林（eribulin）的结构、性质与转化时间线 6 根皮苷家族：优化植物来源二氢查尔酮的药代动力学与靶点选择性 第一阶段：早期发现与初步研究 (1835年 - 20世纪30年代) 发现与结构鉴定：根皮苷（Phlorizin，图8）于 1835年由洛朗 - 纪尧姆・德・科宁克和让 - 塞尔韦・斯塔斯首次从苹果树树皮中分离得到，其化学结构于1929年首次被报道。 早期药理活性：最初被研究作为潜在的解热药。1886年，弗莱赫尔・冯・梅林发现其可诱导犬产生糖尿，后续研究证实其对人类也有同样作用，因此成为研究肾功能的重要工具药。 早期应用局限：20世纪30年代，根皮苷已可通过静脉注射给药，但其胃肠道吸收差，生物利用度低，无法开发为口服药物。 第二阶段：机制阐明与结构优化 (20世纪后期- 2012年) 作用机制发现：后续研究揭示了根皮苷的作用机制，它是钠 - 葡萄糖协同转运蛋白（SGLT）的强效但选择性较低的抑制剂。 结构修饰与优化：研究人员针对根皮苷的药代动力学缺陷和靶点选择性问题进行了系统的结构修饰。 改善药代动力学：优化化合物结构，提高其口服生物利用度。 提升靶点选择性：重点提升对钠 - 葡萄糖协同转运蛋白2（SGLT2）的选择性，以减少对 SGLT1的抑制带来的副作用。 临床候选药物开发：通过结构优化，成功研发出一系列具有改善药代动力学特征和高 SGLT2 选择性的根皮苷类似物。 第三阶段：临床获批与商业成功 (2012年至今) 药物上市：自2012年以来，全球已有13种源于根皮苷的抗糖尿病药物获批上市，这类药物被统称为钠 - 葡萄糖协同转运蛋白2抑制剂（SGLT2 抑制剂）。 联合用药拓展：部分 SGLT2抑制剂还获批与二甲双胍、二肽基肽酶 4（DPP-4）抑制剂等其他降糖药联用，进一步拓展了临床应用。 商业成功：恩格列净（Empagliflozin）：2024年位列全球药物销量第6位，总销售额达127.98亿美元。达格列净（Dapagliflozin）：2024年位列全球药物销量第16位，总销售额达82.18亿美元。 市场格局演变：尽管已有多种药物上市，但2021年以来，亚洲和北美市场仍有五种新的 SGLT2抑制剂获批。随着达格列净等药物专利保护到期，通用名药物的上市将重塑市场格局。 第四阶段：研发启示与未来展望 边际效益与持续创新：尽管已有多种 SGLT2 抑制剂上市，但持续的研发仍带来了新的药物和临床价值，表明基础构效关系数据的价值是长期的，为未来研发提供了重要的 “研发指南”。 临床价值的多样性：临床和商业成功并非仅局限于少数重磅炸弹级药物，多种药物均可产生重要的临床影响，尤其是在开拓新市场、满足未被满足的医疗需求方面。 天然产物的潜力：根皮苷家族的成功研发表明，天然产物衍生药物在治疗领域和商业价值兼具吸引力的疾病中，具有巨大的开发潜力和商业可行性。 总结 天然产物的起点：源于植物提取物根皮苷，展示了天然产物作为药物研发重要源泉的潜力。 机制驱动的优化：基于对作用机制（抑制 SGLT）的深入理解，进行精准的结构优化，显著改善了化合物的成药性和靶点选择性。 商业价值的实现：多款药物取得了巨大的商业成功，证明了天然产物衍生药物在现代医药市场中的竞争力。 持续创新的动力：即使在已有多种药物上市的情况下，持续的研发仍能带来新的突破和临床价值，体现了药物研发的持续性和重要性。 图8. 达格列净（dapagliflozin）的结构、性质与转化时间线 天然产物在全球药物市场中的地位 过去二十年，天然产物衍生药物在全球销量前200品牌药中的占比从10%略降至8%，但在顶级畅销药（前35）中占比稳定（8.6%），销售额持续增长。同时，生物药崛起，天然产物在ADC（天然产物小分子与生物大分子的融合创新）药物中作为细胞毒性载荷的应用日益重要，展现出持续的市场价值和创新潜力。 总结 过去二十年的实践已充分证明天然产物仍是新型治疗药物不可或缺的结构来源，其进化形成的化学多样性难以被替代。如今，合成生物学、人工智能与基因组学的深度融合，正推动化学与生物学紧密结合。通过与靶向筛选模型结合，能更高效地从天然产物中发现新药先导化合物。因此，现代药物研发决策者应战略性地将天然产物纳入整体研发战略，使其创新潜力和治疗影响力最大化。 ——END—— 文献学习|余海杏 审核校对|马雨果 孙嘉忻 指导老师|陈辉