Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

【导读】 雄激素受体信号抑制剂（ARSIs）已在转移性前列腺癌中显示出生存获益。 6月19日，上海中医药大学/安徽医科大学研究人员合作共同在期刊《Advanced Science》上发表了题为“Ezetimibe Engineered L14-8 Suppresses Advanced Prostate Cancer by Activating PLK1/TP53-SAT1-Induced Ferroptosis”的研究论文，本研究中，研究人员报道，L14-8能显著抑制晚期前列腺癌细胞的生长，其机制是通过诱导铁死亡实现的。从机制上讲，L14-8 与 PLK1 结合并促进其泛素介导的降解，从而增加下游 TP53 蛋白的磷酸化，该磷酸化进一步在 SAT1的启动子处富集，促进 SAT1 转录，从而引发铁死亡介导的癌细胞死亡。尤其是，体内研究进一步证明 L14-8 具有强大的抗肿瘤功效，且无明显毒性。 总的来说，这项研究开发了一种源自依折麦布的新型小分子，用于以雄激素受体（AR）非依赖的方式治疗致命性前列腺癌，并提供了其通过触发 PLK1-TP53-SAT1 轴介导的铁死亡在致命性前列腺癌模型中发挥作用的机制见解，且该过程独立于 AR 信号通路。 https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202504192 背景知识 01 前列腺癌（PCa）是全球男性中最常见的恶性肿瘤之一。鉴于雄激素受体（AR）信号通路在肿瘤发生中的关键作用，手术或药物去势治疗（ADT）是前列腺癌的主要治疗方法。然而，患者最终会进展为去势抵抗性前列腺癌（CRPC），这是导致大多数前列腺癌相关死亡的主要原因。由于在 ADT 治疗后睾丸外产生雄激素，以及肿瘤内 AR 扩增或过表达，AR 信号通路在相当一部分 CRPC 患者中持续激活，因此最近开发的 AR 信号抑制剂（ARSIs）在 CRPC 中具有显著的临床疗效。可是，这些药物的耐药性通过诸如 AR 转录重编程等机制发展。尤其是，在新型 ARSIs 时代，神经内分泌前列腺癌（NEPC）这一更为致命的前列腺癌类型的发生率有所增加。在许多情况下，雄激素受体（AR）的丧失与神经内分泌特征的激活同时发生，导致治疗诱导的神经内分泌前列腺癌（t-NEPC）。由于雄激素受体信号通路的失活，这些患者对雄激素受体抑制剂（ARSI）无反应，在进展为神经内分泌前列腺癌后不久就会死亡。因此，迫切需要找到新的治疗药物来治疗去势抵抗性前列腺癌（CRPC）和神经内分泌前列腺癌（NEPC）。 L14-8通过转录激活SAT1的表达诱导铁死亡 02 鉴于 L14-8具有显著的肿瘤抑制效果，研究人员接下来探究了 L14-8 是如何参与肿瘤生长抑制的。研究人员在 L14-8 处理后进行了转录组分析。差异基因富集分析（DGEA）和基因集富集分析（GSEA）表明铁死亡通路显著富集，这表明铁死亡参与了 L14-8 介导的肿瘤生长抑制。研究人员进一步使用 C11-BODIPY(581/591) 进行分析，这是一种用于检测活细胞中脂质过氧化和抗氧化功效的荧光探针，结果表明 L14-8 处理后铁死亡显著激活。进一步的脂质过氧化（LIP）实验表明，在 C4-2B 和 22Rv1 细胞中，L14-8 处理剂量依赖性地诱导了丙二醛（MDA）水平的升高。此外，补充铁死亡抑制剂 ferr-1 显著挽救了 L14-8 诱导的肿瘤细胞生长。这些数据共同揭示了 L14-8 在前列腺癌中的铁死亡效应。值得注意的是，尽管在 RNA-seq 差异表达基因分析中也富集了细胞凋亡通路，但通过流式细胞术测定，在前列腺癌细胞模型中，只有在较高剂量的 L14-8 作用下才观察到显著的细胞凋亡，但 PC3 细胞除外，在该细胞系中，低剂量的 L14-8 即显著诱导了细胞凋亡。 为了进一步确定介导 L14-8 诱导铁死亡的基因，研究人员接下来分析了 L14-8 处理后铁死亡相关基因的表达谱。通过利用前沿的 CRISPR-Cas13 技术敲低 SAT1有效地消除了 L14-8 引发的肿瘤生长抑制作用。这些发现共同表明，L14-8 通过激活 SAT1 表达诱导铁死亡。 转录组分析表明 L14-8 可诱导前列腺癌发生铁死亡 结论 03 综上所述，这些发现证明了L14-8通过诱导铁死亡而发挥强大的抗肿瘤作用，无论是在AR阳性的癌症类型中联合ARSIs，还是单独在AR阴性的癌症中（如NEPC）。 参考资料： https://advanced.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/advs.202504192 【关于投稿】 转化医学网（360zhyx.com）是转化医学核心门户，旨在推动基础研究、临床诊疗和产业的发展，核心内容涵盖组学、检验、免疫、肿瘤、心血管、糖尿病等。如您有最新的研究内容发表，欢迎联系我们进行免费报道（公众号菜单栏-在线客服联系），我们的理念：内容创造价值，转化铸就未来！ 转化医学网（360zhyx.com）发布的文章旨在介绍前沿医学研究进展，不能作为治疗方案使用；如需获得健康指导，请至正规医院就诊。 责任声明：本稿件如有错误之处，敬请联系转化医学网客服进行修改事宜！ 微信号：zhuanhuayixue 热门推荐活动 点击免费报名 🕓 线上｜2025年6月25日 ▶ 云端论道：破局人群大队列，赋能精准医学——2025队列多组学研究前沿高峰论坛 🕓 北京｜2025年6月28日 ▶ 微驭万物-第二届单细胞&时空组学技术前沿与临床应用研讨会 🕓 北京｜2025年9月19-20日 ▶ 第六届单细胞技术应用研讨会暨空间组学前沿研讨会 🕓 上海｜2025年11月14-15日 ▶ 第二届中国类器官转化医学大会 点击对应文字 查看详情

【导读】 ICC是一种起源于肝内胆管的恶性肿瘤，症状隐匿，预后差。 6月18日，上海中医药大学/复旦大学研究人员合作共同在期刊《Journal of Experimental & Clinical Cancer Research》上发表了研究论文，题为“The DCDC2/ENO1 axis promotes tumor progression and immune evasion in intrahepatic cholangiocarcinoma via activating FGL1-LAG3 checkpoint”，本研究证明，肝内胆管癌（ICC）患者血清中抗 DCDC2 自身抗体水平升高，表明其可能作为诊断标志物。全面的体外和体内分析表明，DCDC2 促进 ICC 细胞增殖、转移和免疫逃逸。从机制上讲，DCDC2 稳定 ENO1，从而增强 AKT 磷酸化并增加 FGL1 的表达。值得注意的是，FGL1 水平升高通过 FGL1-LAG3 轴显著损害 CD8+ T 细胞的功能。 本研究结果表明，抗 DCDC2 自身抗体是诊断 ICC 的一种很有前景的生物标志物，与不良预后相关，并阐明了其通过与 ENO1 相互作用在肿瘤生长和免疫逃逸中的关键作用。 https://jeccr.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13046-025-03436-1#Sec2 背景知识 01 胆管癌（CCA）是一种起源于胆管上皮的恶性肿瘤。它可进一步分为肝内胆管癌（ICC）、肝门部胆管癌（PHCC）和远端胆管癌（DCC）。PHCC 和 DCC 也被称为肝外胆管癌（ECC）。ICC 是原发性肝癌的第二大常见病因。ICC 在早期阶段症状不明显，60% - 70% 的患者没有手术机会。另一方面，ICC 对放化疗不敏感，一线治疗后的中位总生存期（OS）仅约 1 年，二线治疗后仅 6 个月。免疫治疗改善了多种肿瘤的预后，但 ICC 患者中近一半对免疫检查点抑制剂（ICIs）的反应率较低。ICC 免疫抑制微环境促进肿瘤免疫逃逸是免疫治疗在 ICC 中疗效不佳的重要原因之一。因此，迫切需要找到更多早期诊断方法和治疗靶点，以改善 ICC 患者的预后。 DCDC2 通过激活 AKT 通路促进 ICC 进展 02 研究人员检测了 CCA 细胞系中 DCDC2 的表达。体内实验证实了 DCDC2 对 ICC 细胞致瘤性的促进作用，表现为肿瘤体积和肿瘤重量均增加。另一方面，DCDC2 在体外和体内均促进了 ICC 细胞的转移。迁移实验表明，Lenti-DCDC2 组的迁移和侵袭细胞增多。生物发光成像显示 DCDC2 在体内促进了 ICC 细胞的转移。对小鼠肝脏进行的 H&E 染色证实了 ICC 细胞转移灶的增加。 为了探究 DCDC2 促进 ICC 进展的分子机制，研究人员对源自 Lenti-vector/Lenti-DCDC2 稳定细胞的异种移植 RNA-seq 数据集进行了基因集富集分析（GSEA），同时对按 DCDC2 高表达或低表达分类的 TCGA-CHOL 数据集也进行了分析。结果表明，高水平的 DCDC2 显著激活了 ICC 细胞中的 PI3K-AKT 信号通路，得分最高的生物学过程包括 Hallmark PI3K-Akt-MTOR 信号通路、KEGG CXCR-GNB/PI3K-Akt 信号通路和 KEGG KSHV vGPCR 至 GNB/G-PI3K-Akt 信号通路。通过蛋白质印迹法证实了 PI3K-AKT 信号通路的激活，结果显示 DCDC2 过表达促进了 HCCC-9810 和 HuCC-T1 细胞中 AKT 的磷酸化。为了探究 PI3K-AKT 信号通路对 DCDC2 促进 ICC 增殖和转移的影响，研究人员使用了 AKT 磷酸化抑制剂培利福新。CCK8 检测显示，当 Akt 被培利福新抑制时，DCDC2 过表达无法促进增殖或迁移。持续的迁移实验表明，培利福辛还能消除 DCDC2 过表达的 ICC 细胞迁移和侵袭能力的增强。 DCDC2 促进 ICC 的增殖和转移 结论 03 总之，本研究揭示了 DCDC2 是一种显著的 ICC 相关抗原，在 ICC 中高表达且与不良预后相关。抗 DCDC2 自身抗体的存在可能作为 ICC 的诊断生物标志物。此外，DCDC2 促进了 ICC 的进展和免疫逃逸。 参考资料： https://jeccr.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13046-025-03436-1#Sec2 【关于投稿】 转化医学网（360zhyx.com）是转化医学核心门户，旨在推动基础研究、临床诊疗和产业的发展，核心内容涵盖组学、检验、免疫、肿瘤、心血管、糖尿病等。如您有最新的研究内容发表，欢迎联系我们进行免费报道（公众号菜单栏-在线客服联系），我们的理念：内容创造价值，转化铸就未来！ 转化医学网（360zhyx.com）发布的文章旨在介绍前沿医学研究进展，不能作为治疗方案使用；如需获得健康指导，请至正规医院就诊。 责任声明：本稿件如有错误之处，敬请联系转化医学网客服进行修改事宜！ 微信号：zhuanhuayixue 热门推荐活动 点击免费报名 🕓 线上｜2025年6月25日 ▶ 云端论道：破局人群大队列，赋能精准医学——2025队列多组学研究前沿高峰论坛 🕓 北京｜2025年6月28日 ▶ 微驭万物-第二届单细胞&时空组学技术前沿与临床应用研讨会 🕓 北京｜2025年9月19-20日 ▶ 第六届单细胞技术应用研讨会暨空间组学前沿研讨会 🕓 上海｜2025年11月14-15日 ▶ 第二届中国类器官转化医学大会 点击对应文字 查看详情

2025年6月4日，中国科学院上海药物研究所郑明月/张素林团队联合盐城市第一人民医院耿炜团队，在Science Translational Medicine杂志在线发表了题为“Methotrexate exerts antitumor immune activity and improves the clinical efficacy of immunotherapy in patients with solid tumors”的研究论文。该研究揭示经典免疫抑制药物甲氨蝶呤（MTX）可以通过选择性诱导肿瘤细胞中cGAMP生成，同时抑制ENPP1介导的cGAMP水解，发挥抗肿瘤免疫作用。低剂量MTX治疗不仅在小鼠模型中显著增强了免疫疗法与放射疗法的抗肿瘤效果，在初步临床试验中也观察到了类似的增效作用。本研究揭示了MTX此前未被报道的免疫激活功能，并为在临床实践中将其与肿瘤免疫治疗及放疗联合应用提供了理论基础。1.背景近年来，尽管肿瘤免疫治疗取得了重大进展，但原发性与获得性耐药问题仍然存在。cGAS-STING通路激活可以诱导肿瘤微环境中免疫细胞浸润和抗原呈递，增强免疫疗法的敏感性。然而，由于STING蛋白在全身组织中广泛表达，直接使用STING激动剂可能导致全身性免疫毒性。ENPP1通过水解cGAMP负向调控STING信号，且在多种肿瘤组织中高表达，因此选择性抑制ENPP1有望实现肿瘤微环境特异性STING信号激活，避免全身性免疫毒性。在前期工作中，蒋华良/郑明月团队开发了一种利用微扰转录组数据预测药物-靶标相互作用的孪生谱图卷积网络（SSGCN）模型，并且利用该模型预测甲氨蝶呤（MTX）具有ENPP1抑制作用（人工智能助力药物研发：基于基因表达谱和孪生谱图卷积网络的药物靶标预测算法）。MTX最初作为二氢叶酸还原酶抑制剂被发现，通过抑制核酸合成来发挥抑制肿瘤生长作用。目前，MTX还被用作免疫抑制剂，是治疗类风湿性关节炎的临床一线用药。本研究发现，MTX在肿瘤微环境中表现出此前未被报道的免疫激活特性：既能选择性诱导肿瘤细胞生成cGAMP，又可抑制ENPP1介导的cGAMP水解，从而在体内发挥抗肿瘤免疫作用。针对不可切除或转移性实体瘤患者的初步临床试验显示，低剂量MTX作为免疫治疗和放疗的辅助手段展现出良好的疗效与安全性。这些发现为MTX作为免疫调节剂应用于肿瘤临床治疗提供了新的研究方向。2.结果与讨论2.1 叶酸拮抗剂作为ENPP1抑制剂的发现与鉴定鉴于MTX属于叶酸拮抗剂，研究人员也评价了其他叶酸类似物是否也同样具有ENPP1抑制活性。结果显示，这些叶酸类似物对人源ENPP1（hENPP1）和鼠源ENPP1（mENPP1）表现出不同程度的抑制活性，其中MTX的抑制活性最强，IC50分别为0.16 μM和0.57 μM（图1B-F）。以商品化的ENPP1抑制剂ENPP1-IN-1（E1）作为阳性对照。蛋白热迁移实验显示，MTX、氨基蝶呤（AP）、雷替曲塞（RTD）和E1也能增强hENPP1和mENPP1的热稳定性（图1G）。相比之下，培美曲塞（PTD）或叶酸（FA）对ENPP1热稳定性影响较小（图1G）。此外，核磁共振显示，MTX和RTD与hENPP1存在剂量依赖性结合（图1H）。这些结果表明包括MTX、AP和RTD在内的叶酸拮抗剂可直接结合ENPP1并抑制其催化活性，而PTD既不抑制ENPP1活性也不与其相互作用，因此后续研究选择PTD作为阴性对照。图1.叶酸拮抗剂作为ENPP1抑制剂的发现与鉴定2.2 MTX与RTD通过占据底物结合口袋竞争性抑制ENPP1催化活性研究人员采用等温滴定量热实验进一步证明了MTX和RTD能特异性结合hENPP，解离常数（KD）分别为0.27μM和0.38μM（图2A-C），而PTD无结合活性（图2D）。酶动力学实验分析表明，MTX和RTD通过与底物竞争结合发挥作用，提示结合于ENPP1的底物结合口袋（图2E）。通过氢氘交换质谱（HDX-MS）技术，研究人员发现MTX和RTD结合显著降低了hENPP1底物结合口袋（肽段289-300和320-326）的氢氘交换速率（图2F）。分子对接模拟显示，MTX的嘧啶环与Phe257/Tyr340形成π-π堆积，并通过多个氢键网络与活性中心结合（图2G）。关键位点突变实验证实，Lys295、Asp326和Phe257/Tyr340对MTX结合至关重要（图2H-J）。值得注意的是，MTX和RTD对同源蛋白ENPP2/3无抑制活性（图2K），表明其对ENPP1具有高度选择性。这些结果从分子水平阐明了MTX通过特异性占据ENPP1底物结合口袋发挥竞争性抑制作用的机制。 图2.MTX与RTD通过占据底物结合口袋竞争性抑制ENPP1催化活性2.3 MTX通过抑制细胞外cGAMP水解增强STING通路信号在免疫细胞上，MTX能有效抑制ENPP1介导的细胞外cGAMP水解，显著提升细胞内cGAMP浓度（图3A-B），这一作用依赖于外源性cGAMP的存在（图3C-D）。深入研究发现，MTX通过特异性阻断ENPP1活性来维持细胞外cGAMP水平，从而显著增强cGAMP诱导的STING通路活化，表现为STING信号关键蛋白磷酸化水平升高、IFNB1和CXCL10等基因表达上调（图3E-G）。并且转录组学分析显示，MTX可增强干扰素相关信号通路的显著激活（图3H-I）。ENPP1敲低实验进一步证实，MTX对cGAMP代谢的调控依赖于ENPP1的抑制作用（图3J-K）。这些结果表明：MTX通过特异性抑制ENPP1催化活性，减缓细胞外cGAMP水解，促进更多cGAMP进入细胞，从而增强STING信号通路激活。 图3.MTX通过抑制细胞外cGAMP水解增强STING通路信号2.4 叶酸拮抗剂通过诱导肿瘤细胞cGAMP生成激活免疫细胞中STING信号通路研究人员发现MTX、RTD和PTD均能剂量依赖性地上调肿瘤细胞中Ifnb1、Cxcl10和Il6的mRNA表达（图4A-B）。值得注意的是，这种激活作用并非完全依赖ENPP1抑制，因为不抑制ENPP1的PTD同样表现出激活效应。机制研究表明，叶酸拮抗剂通过诱导DNA损伤（表现为γH2A.X水平升高和胞质dsDNA积累）来激活肿瘤细胞中cGAS-STING通路（图4C-E）。转录组分析进一步证实，这些药物能显著上调干扰素和炎症相关基因的表达（图4F）。而在cGAS、STING缺失或TBK1抑制的肿瘤细胞内，叶酸拮抗剂诱导的炎症因子上调表型完全消失（图4G-I），这证明了是通过cGAS-STING通路发挥作用。研究人员还发现MTX可以激活共培养系统中免疫细胞的STING信号通路。在4T1肿瘤细胞与BMDCs免疫细胞的共培养实验中，MTX显著增强BMDCs中Ifnb1、Cxcl10等细胞因子的表达（图4J-L），而RTD和PTD无此效应。深入研究表明，MTX一方面选择性诱导肿瘤细胞DNA损伤促进cGAMP生成，另一方面通过抑制ENPP1减少cGAMP水解，从而促进其在微环境中的积累（图4M）。当BMDCs与cGAS缺失的4T1肿瘤细胞共培养时，MTX的免疫激活作用完全消失（图4N-P），说明肿瘤细胞来源的cGAMP是激活免疫细胞STING信号的关键介质。由于ENPP1在肿瘤细胞中高表达，这些机制促使MTX能够选择性激活肿瘤微环境中的STING信号，同时避免对正常组织的非特异性激活。 图4.抗叶酸药物可选择性激活多种癌细胞中的cGAS-STING通路2.5 MTX通过抑制胞外腺苷生成抑制肿瘤转移目前，低剂量甲氨蝶呤（MTX）作为经典的免疫抑制剂，是类风湿性关节炎的一线治疗药物。其作用机制之一是通过抑制腺苷脱氨酶（ADA）活性，导致腺苷蓄积。而本研究发现MTX还具有另一个重要特性：作为ENPP1抑制剂，它可以阻断cGAMP和ATP水解生成AMP的过程，从而从源头上减少细胞外腺苷的生成。在肿瘤微环境中，当存在cGAMP和ATP时，MTX预处理能够显著降低由此引发的腺苷浓度升高（图5A-C）。通过构建ADA缺陷、ENPP1缺陷及双缺陷的4T1细胞模型，研究人员进一步证实了MTX主要通过抑制ENPP1而非ADA来调控肿瘤微环境中的腺苷代谢（图5D-F）。腺苷能够通过与肿瘤细胞表面的A2B受体结合促进肿瘤转移。而MTX处理可以有效阻断cGAMP和ATP诱导的肿瘤细胞迁移（图5G）。在B16.F10小鼠肺转移模型中，低剂量MTX治疗显著减少了肺部转移灶的形成，同时表现出良好的安全性，未观察到明显的毒性反应（图5H-I）。 图5.MTX通过抑制胞外腺苷生成抑制肿瘤转移2.6 MTX增强肿瘤对放射疗法的敏感性鉴于MTX能通过抑制cGAMP水解提高其胞外浓度并降低腺苷水平，研究人员在4T1原位乳腺肿瘤模型中评估了MTX联合放疗（IR）的抗肿瘤免疫效果。IR可诱导肿瘤细胞DNA损伤并激活cGAS-STING信号通路，促进cGAMP生成，而MTX可以进一步强化该效应（图6A-D）。而PTD因无法抑制ENPP1活性，不能增强IR诱导的cGAMP积累或细胞因子上调。在4T1原位肿瘤模型中，MTX与IR联用显著抑制肿瘤生长并大幅延长生存期，75%的小鼠肿瘤完全消退且存活至第80天，其他组小鼠则在58天内全部死亡（图6E-G）。流式细胞术分析显示，MTX与IR联用显著增加了肿瘤微环境中CD3+ T细胞、CD8+ T细胞、活性的CD8+ T细胞（CD25+CD8+）以及CD11c+CD45+的树突状细胞（DCs）的比例（图6H-K）。而IR与PTD联用未见上述免疫细胞群变化。这些数据表明，低剂量MTX通过抑制ENPP1增强IR诱导的cGAMP积累，进而激活抗肿瘤免疫应答，最终实现肿瘤消退。 图6.MTX增强肿瘤对放射疗法的敏感性2.7 MTX增强免疫疗法的抗肿瘤效果为探究低剂量MTX是否能改善免疫检查点阻断（ICB）治疗效果，研究人员首先采用对ICB治疗敏感的MC38皮下肿瘤模型进行研究。实验结果显示，单独使用低剂量MTX或抗PD-1抗体可使肿瘤体积缩小约40%，而联合治疗则显著抑制肿瘤生长并延长小鼠生存期（图7A-B）。流式细胞术分析发现，联合治疗组中CD45+ T细胞和CD8+ T细胞数量显著增加（图7C-D），同时Gzm B+ CD8+ T细胞中比例升高而PD-1+ CD8+ T细胞比例降低（图7F-G），表明联合治疗促进了活性CD8+ T细胞的增殖。机制研究表明，MTX的抗肿瘤免疫效应主要依赖于CD8+ T细胞而非CD4+ T细胞（图7J-K）。在Rag1基因敲除的免疫缺陷小鼠中，MTX单药或联合治疗的抗肿瘤效果几乎完全消失（图7L）。此外，CD11c+细胞（DCs）的耗竭会逆转MTX与PD-1单抗联合治疗的抗肿瘤效果（图7M），证实DCs在这一过程中起关键作用。值得注意的是，MTX治疗还能降低Foxp3+ CD4+调节性T细胞（Tregs）的比例（图7I），这些细胞通过产生腺苷促进肿瘤免疫抑制。综上，低剂量MTX通过多重机制增强抗肿瘤免疫：激活CD8+ T细胞应答、增加DCs浸润以及减轻Tregs介导的免疫抑制。为进一步验证MTX能否克服ICB治疗耐药，研究人员选用对ICB治疗高度抵抗的4T1原位乳腺癌模型。结果显示，虽然单药治疗效果有限，但MTX与PD-1单抗联合治疗可实现80%的肿瘤生长抑制率，并显著延长荷瘤小鼠生存期（图7N）。在Cgas或Sting基因敲除的4T1肿瘤模型中，MTX联合PD-1单抗的治疗效果显著降低（图7O），表明MTX的抗肿瘤免疫活性依赖于肿瘤细胞内cGAS-STING通路的激活。图7.MTX增强免疫疗法的抗肿瘤效果2.8 MTX联合免疫治疗与放疗的临床转化研究基于MTX在动物模型中展现的抗肿瘤免疫活性，研究人员开展了一项单臂II期临床试验（NCT05522582），旨在评估MTX联合PD-1单抗及放疗治疗晚期实体瘤的疗效（图8A）。研究纳入了38例转移性食管鳞癌患者，35例完成疗效评估，其中27例患者达到部分缓解（PR），8例疾病稳定（SD），客观缓解率（ORR）达77.1%，显著优于历史对照组的41.2%（图8B-E）。机制研究表明，PR患者外周血中IFNα/β/γ等免疫刺激因子显著升高（图8F-G）。蛋白质组学分析发现，PR组肿瘤组织干扰素反应相关通路显著激活（图8H），且cGAS和ENPP1高表达患者疗效更佳（图8I-J），提示这两个分子可能作为疗效预测标志物。安全性方面，联合治疗未加重放疗/免疫治疗的已知毒性，且CD8+ T细胞在治疗后3周呈现上升趋势，证实了低剂量MTX治疗的安全性。 图8. MTX增强了临床试验中免疫治疗联合放疗的抗肿瘤疗效3.结论本研究揭示了甲氨蝶呤（MTX）在肿瘤微环境中此前未被认识到的免疫激活作用（图7P）：首先通过选择性诱导肿瘤细胞DNA损伤、cGAS-STING通路激活以及cGAMP生成，同时抑制ENPP1介导的胞外cGAMP水解和腺苷生成，从而显著增强树突状细胞浸润并促进CD8+ T细胞活化。这一发现不仅为MTX联合放疗或免疫治疗提供了理论依据，更开拓了靶向ENPP1/DNA损伤双重通路的新型抗肿瘤药物研发思路，具有重要的临床转化价值。国科大杭州高等研究院副研究员杨瑞瑞、上海药物研究所和南京中医药大学联合培养研究生王蓓博士为本文的共同第一作者。上海药物研究所郑明月研究员、张素林副研究员、以及盐城市第一人民医院放疗科耿炜主任为论文通讯作者。本研究得到了国家自然科学基金、国家重点研发计划、中国科学院战略性先导科技专项、中科院青年创新促进会会员项目、上海市自然科学基金、上海药物研究所与上海中医药大学中医药创新团队联合研究项目、中国科协青年人才托举工程项目以及江苏省卫健委科技项目的资助。参考文献https://www.science.org/doi/10.1126/scitranslmed.adn6921本文转自【人工智能药物设计】公众号--------- End ---------感兴趣的读者，可以添加小邦微信加入读者实名讨论微信群。添加时请主动注明姓名-企业-职位/岗位或姓名-学校-职务/研究方向。