China National Biotec Group Co., Ltd.

全球每年新诊断肝癌患者约75万 每年有约70万人被肝癌夺去生命 其中 中国的肝癌发病人数和死亡人数 均占到全球一半以上 成为严重威胁国人生命的梦魇 2024年五大革新疗法横空出世 为晚期肝癌点亮希望！ 一、GPC3 CAR-T让晚期肝癌无癌生存超8年 提到大名鼎鼎的CAR-T疗法几乎无人不知，它的研发成功，让人们看到了“治愈”癌症的希望。目前中美上市的9款CAR-T疗法，总体缓解率能达到80%以上，这些治疗方法已经在血液肿瘤证实可以诱发显着反应。同时，全球的科学家都在快马加鞭的研发能够在实体肿瘤中也发挥强劲的抗癌效果的CAR-T疗法。 GPC3是一种癌胚抗原，参与细胞增殖、分化、迁移和凋亡。正常组织中几乎未见表达，但在70-80%的肝细胞癌中表达。GPC3因其肿瘤特异性，被认为是能够精准打击肝癌细胞的“黄金”靶标！ 基于此，中国研究人员开发针对GPC3的 CAR-T 细胞疗法取得了重大突破，国研创新CAR-GPC3 T 细胞疗法治疗晚期肝细胞癌 (HCC) 的2例长期无病生存病例发表在国际知名免疫学期刊《Cancer Communications》杂志上，引起了巨大轰动！ 这两位幸运的患者是2015年入组时已出现下腔静脉癌栓，其中一名患者还出现腹膜后淋巴结转移，临床上已经没有更好的治疗方案，预后很差的晚期患者。让所有人喜出望外的是，2名患者在接受局部治疗和 CAR T 细胞联合治疗后的长期随访中均保持了无肿瘤状态。近日，2名患者返回医院复查，证实肿瘤完全缓解已长达7年和8年。 50岁男性肝细胞癌患者多种治疗后病情进展，并出现了下腔静脉癌栓，病情危急，接受CAR-GPC3 T细胞治疗6个月后的复查结果显示，AFP恢复正常，影像学也完全没有了肿瘤迹象。目前已无癌长达8年（2015年7月至2023年8月），回归了正常的生活。 54岁男性肝细胞癌术后3个月复发，多次治疗后下腔静脉癌栓和腹膜后淋巴结转移，临床上已无更好的治疗方案，入组了在中国进行的CAR-GPC3 T细胞临床试验，仅2周，达到了完全缓解，目前已实现7年以上无瘤生存（2016 年7月至2023 年 8 月）。 并且在长达7-8年的时间里，两名患者仅接受口服抗乙型肝炎病毒药物治疗，未接受其他癌症治疗。 二、完全缓解长达27个月！ 新型TCR-T疗法SCG101肿瘤缩小率高达74.5% 慢性乙型或丙型肝炎、大量饮酒、脂肪肝和其他黄曲霉素等毒性食物引起的肝损伤是导致肝癌的元凶，其中最为严峻的是HBV病毒性肝癌。据统计，全球每年有超过 42万人发生与 HBV 相关的 肝癌，至少占 50%全球病例，而亚洲最为严重，至少80%的患者是HBV相关的肝癌！ SCG101 是一种自体 T 细胞受体 (TCR) T 细胞疗法，是专门针对乙肝表面抗原 (HBsAg) 特定表位而设计的，这种全新的疗法可以特异性地靶向 HBV-HCC 肿瘤细胞，能够触发细胞溶解和非细胞溶解机制来消除肿瘤细胞和 HBV 感染的细胞，一箭双雕！ 2023年国际细胞与基因治疗学会 (ISCT) 会议上，同类首创自体 HBsAg 特异性 T 细胞受体工程化 T 细胞 (TCR-T) 疗法 - SCG101 的初步数据公布，引起巨大轰动！ 研究结果显示： SCG101 显示出显著的抗肿瘤活性，一位患者接受单剂量 SCG101 单药治疗后肿瘤缩小 74.5% （mRECIST）。数据截止报告显示，肿瘤反应可持续 6.9 个月以上。 更值得一提的是，这位患者治疗后的活检显示肝脏中 HBsAg+ 肝细胞 100% 被根除 ！ 2024年的欧洲肝病研究协会（EASL）大会上，SCG101公布了首次人体的临床试验结果，非常振奋人心！ SCG101在晚期HBV 相关肝细胞癌 (HCC) 患者中展现出良好的抗病毒和抗肿瘤双重活性。在 6 例晚期HBV-HCC患者中，患者接受 5.0×10^7 ~ 1.0×10^8 TCR+ T细胞/kg 的 SCG101 治疗，客观缓解率 (ORR) 为 33% 。所有获得部分缓解( PR) 的患者均维持缓解超过 6 个月，其中 1名幸运的患者靶病灶完全缓解并维持无进展生存期 27 个月 。 目前，SCG101 已获得美国食品药品监督管理局 (FDA)、中国国家药品监督管理局 (NMPA) 和新加坡卫生科学局 (HSA) 的临床试验批准，用于治疗 HBV 相关 HCC 患者。目前正在进行一项评估 SCG101 的 1/2 期临床试验。（好消息是，这款革命性的疗法目前正在中国进行临床试验，已经有大量病友通过全球肿瘤医生网成功入组逆转病情，想申请的病友可以提交基因检测报告至医学部评估） 三、总生存期延长3倍！80%的亚洲肝癌患者迎来全新TCR-T疗法 LioCyx-M是一种全球首创的将经过修饰以表达 HBV 特异性 TCR 的自体 T 细胞用于肝细胞癌的 TCR-T疗法。这是一种通过转染编码 HBV 抗原特异性 TCR 的 mRNA 的自体 T 细胞疗法，经过改造的T细胞能够 精准识别杀伤表达 HBV 的肿瘤细胞 ，已在临床实验中用于治疗 HBV 相关肝癌和肝移植后复发性 HBV 相关肝癌。 “在两名肝移植患者身上成功进行了 20 多次 T 细胞输注，没有一名患者出现与治疗相关的不良反应，其中一名患者的肝癌远处转移瘤的肿瘤大小减小！”Thinesh Lee Krishnamoorthy博士说。 LioCyx-M在1 期研究 (NCT03899415)中用于治疗不可切除的乙型肝炎病毒 (HBV) 相关的肝细胞癌 (HCC)的卓越临床数据在2021年最佳肝癌峰会上震撼全场！ 截至 2020 年 4 月 30 日，共8 名没有治愈性治疗选择的不可切除的 HBV 相关肝细胞癌 (HCC) 患者接受了LioCyx-M疗法。 结果显示，在可评估的 7 名患者中，3 名患者病情稳定，其中1名患者肝脏肿瘤的大小显着减少 30％ 以上，并维持了 30个月 ！ 更值得振奋的是，LioCyx-M疗法的中位总生存期为 33.57 个月，而 FDA 批准的一线药物索拉非尼的中位总生存期仅为 10.7 个月（Llovet 等，N英国医学杂志，2008），翻了3倍多！ 此外，随访期为 47.9 个月，4名患者在数据截止时还活着。 研究人员兴奋的说， 鉴于目前亚洲 80% 的 肝细胞癌病例与 HBV 相关，这种方法可能会在改善患有这种疾病的患者的生存率和生活质量方面取得重大突破 。 好消息是，2021年12月，FDA授予乙型肝炎病毒 (HBV) 相关肝细胞癌 (HCC) 患者的潜在一流疗法 LioCyx-M004快速通道指定！有望加快在全球的上市步伐，我们期待这一显著改善 HBV相关肝细胞癌预后的创新疗法早日获批上市，造福更多患者。（这款革命性的来疗法目前正在中国进行临床试验，已经有大量病友通过全球肿瘤医生网成功入组逆转病情，想申请的病友可以提交基因检测报告至医学部评估，4006667998） 四、全球首个！可用于治疗所有类型肝癌的TIL疗法进入临床阶段！ BST02是一种新型过继免疫细胞疗法，涉及扩增源自患者自身细胞的肿瘤浸润淋巴细胞。该疗法专门用于治疗 肝癌，包括肝细胞癌和胆管癌 。 TIL疗法是从患者自身的肿瘤组织中采集并富集对肿瘤细胞抗原具有特异性识别的淋巴细胞，然后通过细胞因子诱导这些淋巴细胞在体外快速增殖，同时保持淋巴细胞的干细胞特性，以最大程度地扩增具有抗肿瘤功能的T细胞，随后将这些T细胞重新输入患者体内，从而有效消灭肿瘤。然而，传统TIL药物的应用受到一定的限制，例如这些药物的生产必须在临床中心附近进行，并且临床使用需要大剂量的白细胞介素-2，这可能会带来一定的安全风险。 BST02 克服了上述限制——通过低温保存，它解决了距离的限制，并且无需高浓度的白细胞介素-2。探索性临床试验的初步结果已证明其安全性和有效性。 目前，BST02获得美国FDA临床试验批准。BST02是细胞和基因治疗领域的突破性产品，代表着全球首个用于治疗所有类型肝癌的TIL疗法进入临床阶段！ 五、兼具CAR-T和TCR-T优势！全新实体瘤STAR-T疗法横空出世 中国生物公司成功研发出一款全新的具有自主知识产权的双链嵌合受体，称为合成性T细胞受体抗原受体( Synthetic TCR and Antigen Receptor), STAR-T细胞治疗技术平台。 浸润能力强，敏感度高，以及能打造多靶点、多功能的形式 是STAR-T技术平台的三大优势。 2021年，新的细胞疗法STAR-T技术在Science Translational Medicine上发表。研究表明，STAR-T能很好地平衡免疫杀伤能力及持久性，且未发现在非抗原刺激下自我激活的情况；同时，在实体瘤的治疗中，与当前细胞治疗领域常用的CAR-T技术相比，STAR-T更具有天然T细胞的特性，具有天然双靶点，毒性低，耗竭慢，浸润性强的特点，更有可能实现对实体瘤治疗的突破。 好消息是，一项GPC3 STAR-T细胞治疗晚期实体瘤的安全性与有效性的探索性临床研究正在国内多家权威肿瘤中心开展，想寻求细胞疗法及其他国内外治疗新技术帮助，且经济条件允许的情况下，患者可以先将病历提交至全球肿瘤医生网医学部进行初步评估。 中国肝癌患者迎来春天，更多新疗法加速解锁中！ 除了上面介绍的新疗法，还有钇90微球治疗、电场疗法、质子治疗等新疗法也均在肝癌中取得重大突破，还有更多疗法加速解锁中，相信肝癌患者的未来会越来越好！ 肝癌其实是一个全身性疾病。对于晚期肝癌患者，现在医学界更提倡通过多种治疗手段进行综合治疗，包括局部放化疗、靶向和免疫等，需要针对患者的具体情况综合考虑，量身定制。而这些新型免疫疗法的研究无疑为走投无路的晚期肝癌患者提供了新的选择和希望。除此之外，众多国内外已上市及在研的靶向药物、免疫治疗药物及联合疗法目前正在国内进行临床研究，想参加的患者可以致电全球肿瘤医生网医学部进行申请及评估。期待这些新疗法能早日上市造福患者！ 参考文献： https://www.businesswire.com/news/home/20220823005373/en/ https://cancerprogressreport.aacr.org/report/survivor-journeys/jennifer-ficko-thriving-thanks-to-a-melanoma-clinical-trial/

2024年10月24日，据国家药品监督管理局药品审评中心显示，智飞生物全资子公司智飞龙科马的流感病毒裂解疫苗上市申请获受理，受理号为CXSS2400114。 目前，智飞生物已构建起多糖和多糖蛋白结合技术平台、基因重组技术平台、灭活技术平台及多联多价技术平台等九大技术研发平台，广泛覆盖多种疫苗开发路径。而围绕这九大技术平台，公司形成了结构清晰、布局合理的八大产品矩阵，包括流脑疫苗矩阵、肺炎疫苗矩阵、肠道疫苗矩阵、成人疫苗矩阵等。 公司本次申报上市的流感病毒裂解疫苗为其成人疫苗矩阵中的产品。在流感疫苗方面，智飞生物的相关产品还包括四价流感病毒裂解疫苗和四价流感病毒裂解疫苗（ZFA02佐剂）。 四价流感病毒裂解疫苗：该产品已于2022年6月获得Ⅲ期临床试验总结报告，并于2023年7月获得国家药品监督管理局出具的申请生产注册《受理通知书》。不过，今年8月，公司主动撤回了四价流感病毒裂解疫苗（西林瓶包装）的注册申请，保留四价流感病毒裂解疫苗（预灌封包装）的注册申请，公司将持续积极推动预灌封包装产品的上市许可。公司称这是基于流感疫苗产品线创新性差异化的考虑，为进一步优化公司资源配置，更好地匹配市场需求。 四价流感病毒裂解疫苗（ZFA02佐剂）：该产品含公司自主研制的ZFA02佐剂，目前其已在国内获临床试验默示许可。 据中检院披露的生物制品批签发情况显示，2024年上半年国内流感疫苗批签发181批次。其中，以流感裂解疫苗为主，共批签发173批次，与去年同期相比增长8.6倍。另外，据药时空统计，目前国内布局流感疫苗的企业已超过20家。 同时，今年以来，降价潮席卷整个疫苗行业，多家疫苗企业纷纷跟进，一些疫苗产品价格连续创出历史新低，其中就包括流感疫苗。 国药集团在今年打响了流感疫苗自费市场价格降价的第一枪，随后四价流感疫苗的中标价一路从128元降至88元，10月19日，武汉生物制品研究所四价流感疫苗中标价更是降至折合每支38元。这相当于在上半年的价格大战之后，四价流感疫苗的价格再次腰斩不止。 至于三价流感疫苗，价格也在快速坠落。今年9月，根据浙江省公共资源交易服务平台发布的一份中标公告，上海生物制品研究所的3价流感疫苗中标单价为9.4元。在最近的深圳一次3价流感疫苗招标中，虽然最终中标价是10.5元/支，相比于9月的浙江招标价格略有上升，但是已经有企业报出6.5元/支的最低投标价。 对于流感疫苗企业而言，其利润空间在不断被压缩。回到智飞生物，其目前虽有三款流感疫苗，但还未有一款上市，在这拼杀激烈的国内赛场，待到产品上市时是否还能分到一杯羹呢？ 参考资料： [1]国家药品监督管理局药品审评中心、药物临床试验登记与信息公示平台、智飞生物公告、2023年财报等. [2]大降价！集体跳水，跌破10元！.中国无锡.2024年10月25日. [3]单价不敌半杯奶茶，流感疫苗价格再创新低.医药投资部落.2024年10月20日. 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。

中文摘要 目的   建立检测重组戊型肝炎疫苗宿主DNA残留量的荧光染色法，并进行方法验证。 方法   采用λDNA作为标准品建立标准曲线，重组戊型肝炎疫苗纯化后原液作为样品，进行线性、准确度以及精密度的验证。 结果   该方法在1.250~80.000 ng/ml范围内有良好的线性，决定系数大于0.99；准确性验证中DNA残留量加标回收率在90.00%~110.00%之间，且加标回收率相对标准偏差均小于15.00%。重复性验证和中间精密度验证的相对标准偏差分别为6.62%和10.30%，均小于15.00%。 结论   该方法快速、灵敏、准确，可以检测重组戊型肝炎疫苗宿主DNA残留量。 正文 戊型肝炎（戊肝）病毒为单股正链RNA病毒，主要通过粪-口途径传播，可引起戊肝。全球每年约发生2 000万例戊肝病毒感染，其中约330万戊肝病例，7万例与戊肝病毒感染相关的死亡病例。我国属于戊肝高发国家，近年来戊肝已成为急性病毒性肝炎的常见类型之一，发病人数已超过甲型肝炎，戊肝疫苗（hepatitis E vaccine，HepEV）的研发显得尤其重要。 近年来，随着基因工程技术的发展，基因重组疫苗的研发已愈发成熟，大肠埃希菌、酵母以及哺乳动物细胞等都已成为重组蛋白疫苗的宿主细胞。兰州生物制品研究所有限责任公司（兰州公司）第四研究室研发的HepEV由重组大肠埃希菌表达的病毒抗原经纯化冻干后制成，尽管经过多步纯化去除杂质，但宿主细胞大肠埃希菌的DNA仍有微量残留。不同宿主细胞DNA进入人体后可造成多种多样的后果，如致癌性和感染性。考虑到宿主细胞残留DNA的潜在安全风险，建立残留DNA定量测定方法并对其进行方法学的验证十分重要。本研究拟选用荧光染色法对HepEV原液中残余宿主DNA的含量进行定量测定。特异性荧光染料PicoGreen与双链DNA结合成的复合物在480 nm波长激发下产生荧光信号，检测波长在520 nm。由于一定DNA浓度范围内荧光强度与DNA浓度成正比，因此可根据荧光信号强度计算重组HepEV供试品中的DNA残留量。同时，根据中国药典2020年版三部（药典三部）中分析方法验证指导原则对建立的残余DNA定量方法进行方法学验证。 1 材料与方法 1.1 供试品 重组HepEV吸附前原液，由兰州公司第四研究室制备。 1.2 主要试剂及仪器 Quant-iTTM PicoGreenTM dsDNA试剂盒购自美国英杰生命技术有限公司，黑色酶标板购自美国康宁公司；酶标仪购自美国美谷分子仪器有限公司。 1.3 方法建立 将20×三羟甲基氨基甲烷-乙二胺四乙酸〔tris（hydroxymethyl） aminomethane-ethylenediamine-tetraacetic acid，TE〕用灭菌注射水稀释为1×TE缓冲液。用稀释好的TE缓冲液将DNA标准品配成80.000、40.000、20.000、10.000、5.000、2.500及1.250 ng/ml的标准品溶液。将DNA标准品溶液和供试品溶液加至黑色96孔酶标板中，每孔100 μl，做3个复孔。用TE缓冲液200倍稀释双链DNA荧光染料，然后于黑色96孔酶标板中加入稀释的荧光染料，每孔100 μl。避光操作，混匀后于室温静置5 min。用酶标仪在激发波长480 nm、发射波长520 nm处测定荧光强度，读值在5 min内完成。以1×TE缓冲液测得的荧光强度为本底，测定标准品溶液和供试品溶液的荧光值。以标准品溶液的浓度对其相应的荧光强度作直线回归，求得直线回归方程。将供试品溶液的荧光强度代入直线回归方程即求得供试品DNA浓度。 1.4 方法验证 1.4.1　线性关系　用稀释好的TE缓冲液将λDNA标准品配制成80.000、40.000、20.000、10.000、5.000、2.500及1.250 ng/ml的标准品溶液，每个浓度各6份。以标准品溶液的浓度对其相应的荧光强度作直线回归，得出线性决定系数（R2）。 1.4.2　准确度　考察不同浓度的供试品在加标量低、中、高3种不同浓度水平下的回收率。取不同浓度的3份供试品溶液按1∶1比例各加入3种不同浓度的标准品，共制备9份供试品，高、中、低理论加标浓度分别为40.000、20.000以及10.000 ng/ml。每份供试品做3个复孔，结果取均值。根据标准曲线计算实际浓度，计算样品加标回收率。回收率=（实测值﹣供试品中被测成分量）÷加入标准品量×100%。 1.4.3　精密度 1.4.3.1　重复性　将供试品重复检测6次，计算6次残留DNA结果及其相对标准偏差（relative standard deviation，RSD）。HepEV吸附前原液宿主细胞DNA残留量（ng/μg）=吸附前原液宿主细胞残留DNA浓度（ng/ml）÷吸附前原液的蛋白浓度（μg/ml），其残留DNA浓度的质量标准为不超过0.1 ng/μg。每剂HepEV的DNA残留量（ng）=吸附前原液宿主细胞残留DNA浓度（ng/μg）×每剂抗原含量（μg）。 1.4.3.2　中间精密度　考察不同分析人员、不同日期对精密度的影响。取供试品6份，3 d内由2人测定DNA残留量，每次测定2份供试品，同时每份供试品做3个复孔，结果取3个复孔的均值。结合6份供试品残留量试验数据，计算6次结果的RSD。 2 结果 2.1 线性关系 线性验证共制备6份不同浓度的标准品溶液绘制标准曲线，共进行6次检测。以标准品溶液的浓度为纵坐标，荧光强度值为横坐标作线性回归。由表1可知，标准品溶液在1.250~80.000 ng/ml范围内有良好的线性关系，R2均＞0.99。 2.2 准确度 供试品的加标回收率见表2，供试品加标10.000、20.000、40.000 ng/ml的回收率均在90.00%~110.00%之间，且加标回收率RSD均小于15.00%，表明该方法准确度符合要求。 2.3 精密度 2.3.1　重复性　将供试品重复测定6次后，测试结果平均残留DNA浓度为0.019 ng/μg，重复性RSD为6.62%（表3），所有结果均符合质量标准（≤0.1 ng/μg）。 2.3.2　中间精密度　由表4可知，不同人员和不同时间测量的供试品DNA残留量均符合质量标准，均值为0.018 ng/μg，RSD为10.30%，表明本方法中间精密度检测符合要求。 3 讨论 生物制品在生产过程中，尽管经过下游工艺去除了大量的宿主细胞DNA，但是仍有微量的DNA残留，导致有致癌和感染的风险。为了保证生物制品的安全性，各监管机构对生物制品中的残留外源DNA制定了严格的标准。药典三部规定，以中国仓鼠卵巢细胞生产的生物制剂中DNA残留量不能超过10 pg/剂，以真菌和细菌生产的疫苗中DNA残留量不能超过10 ng/剂。如今，宿主细胞残留DNA已作为生物制品安全性评价的重要指标，药典三部中介绍了3种外源性DNA残留量测定的方法：DNA探针杂交法、荧光染色法和定量PCR法。 本研究中建立了检测重组HepEV残余宿主DNA荧光染色法，并对建立的方法进行了线性、准确性以及精密度的验证。由验证结果可知残余DNA含量线性R2均＞0.99；准确性验证高中低浓度的加标回收率均在90.00%~110.00%范围内；重复性和中间精密度RSD均在＜15.00%的可接受范围内，表明该方法线性良好、准确性和精密度高，可用于检测重组HepEV残余DNA的含量。荧光染色法同DNA探针法相比，不受工程菌种类限制，且简便、快速；与定量PCR法相比，其操作简单，耗时短，也不需要设计特异性引物。 需要注意的是，由于荧光染色法荧光信号易受干扰，特异性较差，因此所有使用的材料和试剂都必须不含DNA，避免环境DNA污染。 作者 张巧玲1  张志豪2  秦海艳1  杨林鹏1  杨俊杰1 1兰州生物制品研究所有限责任公司第四研究室， 兰州  730030；2兰州生物制品研究所有限责任公司中试研究室， 兰州  730030 通信作者：杨俊杰， Email：jjyang@vacmic.com 引用本文：张巧玲, 张志豪, 秦海艳, 等. 重组戊型肝炎疫苗宿主细胞残余DNA荧光染色法检测方法的建立和验证 [J]. 国际生物制品学杂志, 2024, 47(4): 203-206.   DOI: 10.3760/cma.j.cn311962-20240105-00002 识别微信二维码，添加生物制品圈小编，符合条件者即可加入 生物制品微信群！ 请注明：姓名+研究方向！ 版 权 声 明 本公众号所有转载文章系出于传递更多信息之目的，且明确注明来源和作者，不希望被转载的媒体或个人可与我们联系(cbplib@163.com)，我们将立即进行删除处理。所有文章仅代表作者观点，不代表本站立场。