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来源：诊断科学 在呼吸道疾病检测领域，精准、高效的检测手段至关重要。 罗氏（Roche）的cobas Respiratory 4 - flex for use on the cobas 5800/6800/8800 Systems是一款备受关注的检测产品。 Cobas® Respiratory 4-flex可与Cobas® 5800、6800和8800系统一起使用 在今天这篇文章当中，我将基于该产品审评报告全文，为大家拆解其技术细节与临床价值。 产品概述 cobas® Respiratory 4-flex用于在罗氏公司的全自动分子诊断平台——cobas® 5800、6800和8800系统上运行，可同时检测并区分四种常见的呼吸道病原体：甲型流感病毒（Influenza A）、乙型流感病毒（Influenza B）、呼吸道合胞病毒（RSV）以及新型冠状病毒（SARS-CoV-2），同时包含内参RNA（RNA IC）用于监控检测流程的可靠性。 该系统采用高度自动化的检测流程，从样本处理到结果报告一气呵成。 首先，系统会对患者样本中的核酸以及加入的内参RNA分子进行同步提取。 提取过程中，通过加入蛋白酶和裂解试剂释放样本中的核酸，这些核酸随后会结合到外加的磁性玻璃颗粒的硅表面，而样本中的杂质如变性的蛋白质、细胞碎片及潜在的PCR抑制物等，则会在后续的清洗步骤中被去除。 最终，纯净的核酸会在高温条件下从磁性玻璃颗粒上洗脱下来，以供后续的PCR扩增使用。 外部阳性与阴性对照样本也采用相同的处理流程。 在核酸提取完成后，系统利用针对各目标病毒基因组保守区域设计的特异性引物，对目标核酸进行选择性扩增。 其中，甲型流感检测的是基质蛋白1（M1）基因，乙型流感检测非结构蛋白NS1/NEP，RSV检测基质蛋白（M），SARS-CoV-2则同时检测ORF1ab和ORF1a两个多聚蛋白基因。 内参RNA的扩增则使用与其病毒目标基因无同源性的特异性引物，确保其扩增过程独立于病毒目标。 扩增后的目标核酸通过荧光标记的寡核苷酸探针进行检测。 该系统采用了罗氏独有的温度辅助信号生成技术（TAGS），该技术通过对不同温度下荧光信号的捕捉，实现每个荧光通道区分多个目标，从而在一个反应孔内最多可检测多达14个目标（包括内参）。 TAGS技术依赖于温度依赖性的荧光激活机制，即只有在DNA聚合酶的核酸外切酶活性切割探针、并伴随反应温度升高时，原本处于“休眠”状态的荧光基团才会被激活并发出信号。 因此，在每个PCR循环中，该技术能够在五个荧光通道与三个不同的温度点（T1、T2、T3）上捕捉荧光信号，从而显著提升了多目标检测的精准度与区分能力。 该检测所使用的master mix（反应预混液）中包含针对四种病毒目标及内参RNA的特异性探针，并以脱氧尿苷三磷酸（dUTP）替代常规的脱氧胸苷三磷酸（dTTP）用于新合成DNA链的构建。 预混液中还含有尿嘧啶-N-糖基化酶（AmpErase酶），可在PCR第一轮热循环时通过高温灭活之前残留的扩增子，从而有效防止污染。 但新合成的扩增子不会被破坏，因为AmpErase酶在温度超过55°C时会失活。 最终，系统可对四种呼吸道病毒（甲型流感、乙型流感、RSV和SARS-CoV-2）进行定性检测与区分，并同步报告内参RNA的结果，以监控检测过程是否正常。 该系统还支持RESP-4FLEX ASAP功能，允许用户根据需要对每个样本灵活选择检测四种病毒目标中的任意组合，并可在cobas® 5800系统上进一步进行数字反射计算，以获取额外的目标分析数据。 预期用途 注册资料主要描述了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在临床使用中的用途与限制，重点说明了其设计目的、适用样本类型、检测对象以及结果解读的注意事项。 该检测是一种基于实时聚合酶链反应（real-time PCR）技术的自动化多重核酸检测方法，专门用于在配备有cobas® 5800、6800或8800系统的实验室平台上运行。 它的主要用途是对出现呼吸道感染相关症状的个体，从鼻咽拭子样本中同时进行定性检测并区分四种常见的呼吸道病毒：严重急性呼吸综合征冠状病毒（SARS-CoV-2）、甲型流感病毒（Influenza A）、乙型流感病毒（Influenza B）以及呼吸道合胞病毒（RSV）。 这些病毒引起的临床症状往往相似，因此该检测的主要价值在于帮助临床医生在面对疑似呼吸道病毒感染的患者时，更准确地区分具体是由哪一种病毒引起感染，从而为诊断提供参考依据。 但该检测并不用于检测丙型流感病毒。 该检测所针对的病毒核酸通常在感染的急性期阶段可以在鼻咽拭子样本中被检测到。 当患者出现呼吸道感染相关症状时，如果从样本中检测出特定病毒的核酸，这通常提示该患者体内存在相应的病毒，结合其他临床信息、流行病学背景以及实验室数据，可以为诊断提供支持。 然而，该检测结果不能作为诊断、治疗或其他患者管理决策的唯一依据。 也就是说，即使检测结果为阴性，也不能完全排除患者感染了SARS-CoV-2、甲型流感、乙型流感或RSV的可能性；同样地，检测结果为阳性也不意味着患者没有同时感染其他病原体，也不能确定所检出的病毒就是导致当前病症的唯一或主要原因。 性能参数 注册资料主要围绕cobas® Respiratory 4-flex检测系统的技术特性展开，重点描述了其在监管分类、预期用途、检测原理及与已上市同类产品（即对照设备BioFire Respiratory Panel 2.1，简称RP2.1）之间的技术对比情况，旨在说明该系统在技术上与市场上已有合法销售的同类核酸扩增检测产品具有实质等同性。 从整体技术特征来看，cobas® Respiratory 4-flex是一种基于实时聚合酶链反应（PCR）技术的自动化多重核酸检测方法，其设计目的、应用场景以及核心功能，与当前市场上其他用于定性检测和区分甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒（RSV）以及SARS-CoV-2病毒的合法上市核酸扩增检测产品基本一致。 这意味着它在技术原理、临床用途和监管定位等方面，均属于已被验证和接受的技术类型。 具体到与对照设备BioFire RP2.1的对比，两者在多个关键维度上具有相似之处，同时也存在一些显著差异。 首先，在监管层面，二者都遵循相同的美国法规编号（21 CFR 866.3981），同属II类医疗器械，并受到特殊控制，拥有相同的设备分类名称和产品代码（QOF）。 它们的预期用途也高度相似，都是用于对出现呼吸道感染症状的患者，通过鼻咽拭子样本进行多种呼吸道相关微生物核酸的定性检测，以辅助临床诊断。 不过，两者的检测范围有所不同：cobas® Respiratory 4-flex专注于四种主要呼吸道病毒——SARS-CoV-2、甲型流感、乙型流感和RSV，而BioFire RP2.1的检测范围更广，除了这些病毒外，还包括多种其他呼吸道病毒（如腺病毒、多种冠状病毒、人偏肺病毒、鼻病毒/肠病毒、副流感病毒等）以及若干细菌（如肺炎支原体、肺炎衣原体、百日咳杆菌等）。 在适用条件方面，两款设备均仅限于处方使用，且都接受鼻咽拭子作为检测样本。 但在样本处理和检测原理上，两者采用了不同的技术路径：cobas® Respiratory 4-flex的样本处理过程完全由cobas® 5800/6800/8800系统自动化完成，其检测基于PCR扩增与荧光探针技术，并利用罗氏特有的温度依赖性荧光淬灭机制（TAGS技术）来实现多重目标检测；而BioFire RP2.1则通过其配套系统（FilmArray 2.0或Torch）进行自动化样本处理，采用两步巢式多重PCR方法，包括逆转录、第一阶段多重PCR反应以及第二阶段的荧光双链结合染料检测，并辅以终点熔解曲线分析来识别目标扩增子。 在质控方面，两者都使用了包括样本处理内参（IC）以及阳性和阴性对照在内的质量控制手段，但具体的控制机制略有不同：cobas® Respiratory 4-flex使用常规的内部对照RNA，而BioFire RP2.1则设有两个过程控制，包括RNA过程控制（IC）和PCR2控制，后者用于确认第二阶段PCR反应成功。 最后，在结果分析方式上，cobas® Respiratory 4-flex主要依靠PCR循环阈值（Ct值）进行分析，而BioFire RP2.1则结合终点熔解曲线数据来检测目标特异性扩增子。 分析灵敏度（检测限） 注册资料主要描述了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在非临床性能评估中的分析灵敏度（即检测限，Limit of Detection，简称LoD）研究，目的是确定该检测方法对四种主要呼吸道病毒——甲型流感病毒（包括H1N1和H3N2亚型）、乙型流感病毒（包括Victoria和Yamagata谱系）、呼吸道合胞病毒（RSV）以及新型冠状病毒（SARS-CoV-2）——在鼻咽拭子样本中能够可靠检测出的最低浓度水平。 分析灵敏度的研究是通过一系列稀释实验来完成的。 具体来说，研究人员将培养获得的RSV、甲型流感、乙型流感病毒以及灭活的SARS-CoV-2病毒，按照不同的浓度梯度进行稀释，并将这些病毒混悬在模拟鼻咽样本的基质中，形成多个浓度水平的测试样本组，每个浓度组至少包含五个不同的浓度，再加上空白对照。 这些样本在三个不同批次的试剂、多次运行、不同操作人员、不同实验日期以及不同检测仪器上进行了反复测试，以确保结果具有广泛的代表性和重复性。 最终，通过统计每个浓度水平下检测出阳性结果的比例（即“命中率”），确定在至少95%的重复测试中能够检测出病毒核酸的最低浓度，这个浓度即被定义为该检测系统对该特定病毒株的检测限。 研究结果显示，对于甲型流感病毒的H1N1亚型（菌株为Brisbane/02/2018），其检测限为每毫升1.00×10²个拷贝（cp/mL），在63次重复测试中有95.2%（60次）检测为阳性；甲型流感H3N2亚型（菌株A/Darwin/6/2021）的检测限稍低，为每毫升5.00×10¹个拷贝，同样在63次测试中有95.2%的阳性率；乙型流感Victoria谱系（菌株B/Austria/1359417/2021）的检测限为每毫升2.50×10²个拷贝，所有63次测试均为阳性（100%）；乙型流感Yamagata谱系（菌株Phuket/3073/13）的检测限为每毫升8.00×10²个拷贝，在63次测试中有98.4%（62次）为阳性。 对于呼吸道合胞病毒A型（菌株A2），其检测限为每毫升4.00×10³个拷贝，阳性率为98.4%（62/63）。 而对于SARS-CoV-2病毒，研究使用了世界卫生组织（WHO）的第一号国际标准（NIBSC代码20/146，为灭活病毒），测得其检测限为每毫升8.00×10¹个国际单位（IU/mL），在63次测试中同样有95.2%（60次）的阳性率。 此外，还进行了额外的研究，以验证每种病毒单独存在时的检测限与它们在混合样本中（即共同加入样本中进行检测时）的检测限是否一致。 结果表明，每种病毒株在单独测试时的检测限与其在混合样本中检测时的表现是相当的，说明该检测系统对于多病毒共检的情况下，依然能够维持对各目标病毒灵敏而可靠的检测能力。 精密度 该部分内容详细介绍了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在非临床性能评估中的精密度（Precision）和再现性（Reproducibility）研究，旨在评估该检测方法在不同实验条件下的稳定性和一致性，确保其在实际应用中能够可靠地检测出目标病毒。 首先，在精密度评估中，主要关注的是在同一实验室内，使用同一批试剂、仪器和操作流程时，检测结果的一致性。 研究通过分析包含不同细胞培养病毒株的样本组，这些样本被稳定在UTM™基质中，并模拟临床阴性样本背景。 实验设置了两个不同的病毒浓度水平：一个是接近检测限（约1倍LoD）的水平，另一个是高于检测限（约3倍LoD）的水平。 每个浓度水平进行了216次重复测试，总共跨越三个试剂批次、六台检测仪器、五名操作人员以及十二个不同的测试日。 所有样本均通过全自动化cobas® 5800/6800/8800系统完成整个检测流程，因此所报告的精密度结果涵盖了检测过程中的所有环节。 研究结果显示，在接近检测限的浓度水平（约1倍LoD）和高于检测限的浓度水平（约3倍LoD），该检测系统均表现出极高的检测稳定性与一致性。 具体来说，在约3倍LoD的浓度下，所有目标病毒（包括甲型流感H3N2、乙型流感Victoria、RSV A以及SARS-CoV-2）的检测阳性率均达到了100%；而在约1倍LoD的浓度下，除RSV A有99.07%的阳性率、乙型流感Victoria有99.54%的阳性率之外，其余目标也均保持了极高的检测率，且空白对照样本没有出现假阳性结果。 从数据统计来看，各目标病毒在不同浓度水平下的阳性结果命中率非常高，并且通过计算得出的置信区间也显示出结果具有高度的可靠性。 此外，还针对每个浓度水平下PCR扩增过程中获得的循环阈值（Ct值）进行了进一步分析，以评估检测结果在不同实验条件下的细微变异程度。 数据显示，在各个浓度水平下，无论是仪器之间、批次之间、天与天之间，还是单次运行内部，Ct值的变异系数（CV%）都保持在较低水平，表明检测结果不仅稳定，而且重复性良好。 例如，在约1倍LoD的甲型流感H3N2样本中，虽然Ct值在不同因素间存在轻微波动，但总体变异不大，显示出系统在接近检测限的情况下依然能够提供一致的结果。 其次，在再现性评估中，研究进一步拓展了评估范围，旨在验证该检测系统在不同实验室条件、不同试剂批次、不同检测仪器、不同操作人员以及不同测试日等多种变量影响下的整体表现。 实验设置更为复杂，包括多个测试地点（三个）、多台检测系统（九台）、多个试剂批次（三个），并在六个测试日内进行，每个病毒目标均设置了两个浓度水平（约1倍LoD和约3倍LoD），每个浓度水平进行了504次重复测试，其中还包含了一个所有病毒均为阴性的对照样本。 研究结果表明，该系统在整体上表现出了优异的再现性。 对于阴性样本，检测结果显示出99.6%的阴性符合率，说明系统在面对不含目标病毒的样本时，几乎不会产生假阳性结果。 对于各个病毒目标，在约1倍LoD和约3倍LoD的浓度水平下，绝大多数样本均获得了预期的检测结果，阳性符合率基本达到100%，即使有个别样本因技术原因出现无效结果，也不影响整体数据的可靠性。 例如，在乙型流感Victoria的约1倍LoD水平下，有501个有效阳性结果，符合率达到99.4%；而在约3倍LoD水平下，则503个样本全部为有效阳性，符合率达到了100%。 从Ct值的统计分析来看，在不同实验变量（如检测地点、试剂批次、测试日、运行批次等）之间，Ct值的变异程度均保持在较低水平，总体标准偏差（SD）和变异系数（CV%）普遍较小，说明检测结果在不同条件下的波动非常有限。 尤其是在约3倍LoD的浓度水平下，几乎所有病毒目标的Ct值变异都非常小，显示出系统在较高病毒浓度下具有极佳的稳定性和再现性。 即使在约1倍LoD这种接近检测限的挑战性条件下，绝大部分目标病毒的检测结果依然保持一致，仅有个别指标显示出轻微的变异，但总体仍符合高度可靠的检测标准。 包容性 注册资料主要描述了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在病毒检测范围上的包容性（Inclusivity）评估，即该检测方法对于不同流感病毒（包括甲型和乙型流感）、呼吸道合胞病毒（RSV）以及新型冠状病毒（SARS-CoV-2）的各种已知毒株是否均能有效检测的能力。 评估的核心目标是验证该检测系统能否广泛识别不同谱系、不同亚型或变异株的目标病毒，确保其在面对病毒变异和多样性时依然具备可靠的检测性能。 在评估方法上，研究人员选取了与每个目标病毒相关的多种代表性毒株，包括不同流感病毒亚型（如甲型流感的H1N1、H3N2、H5N1、H7N9等，乙型流感的Victoria和Yamagata谱系）、多种SARS-CoV-2变异株（如B.1.1.7、B.1.351、P.1、B.1.617.2、B.1.1.529等），以及不同类型的RSV（A型和B型）。 针对每一个毒株，研究在接近检测限（LoD）的浓度条件下进行了测试，初始浓度从大约3倍LoD开始，每个毒株至少测试三个重复样本，逐步调整浓度直到找到能够达到100%检测命中率的最低浓度。 这个浓度即表明在该水平下，系统对相应毒株的检测具有全面而稳定的识别能力。 具体来说，在SARS-CoV-2方面，评估涵盖了包括早期毒株（如USA-WA1/2020）和多个在全球范围内广泛传播的重要变异株（如英国株B.1.1.7、南非株B.1.351、巴西株P.1、印度株B.1.617.2、奥密克戎株B.1.1.529等）。 研究显示，这些变异株在约3倍LoD的浓度下均能被100%检测到。 此外，还通过生物信息学（in silico）分析对SARS-CoV-2检测所使用的引物和探针结合区域进行了评估，分析对象包括NCBI和GISAID两大国际病毒序列数据库中的大量已知病毒序列（NCBI超过832万条，GISAID超过1596万条），结果显示该检测方法理论上能够覆盖几乎所有已知的SARS-CoV-2序列，预测失败率极低，表明其对当前及潜在的SARS-CoV-2变异株具有广泛的包容性。 对于甲型流感病毒，评估包括了季节性H1N1、H3N2亚型，以及高致病性禽流感如H5N1、H5N2、H5N3、H7N2、H7N8、H7N9和H9N7等不同亚型。 测试涵盖了从常见的季节性流行株到较为罕见的禽类相关毒株，所有测试毒株在约3倍或稍高的LoD浓度下都达到了100%的检测命中率，显示出系统对甲型流感病毒的高度包容性。 乙型流感病毒的评估则包括Victoria和Yamagata两大主要流行谱系，以及一些其他未明确分类的乙型流感毒株。 这些毒株在约3倍LoD浓度下也均被系统100%检测到，表明该检测方法对乙型流感的不同谱系同样具有广泛的识别能力。 对于呼吸道合胞病毒（RSV），研究选取了A型和B型中的多个代表性毒株，包括常见的临床分离株和实验室标准株。 这些毒株在约3倍LoD的浓度水平下同样实现了100%的检测率，证明该检测系统对RSV的不同类型也具有稳定的检测包容性。 基质效应 注册资料评估了鼻咽拭子和稳定于UTM™的模拟临床基质之间的等效性。 将混合的阴性个体临床样本（鼻咽）和稳定于UTM™的模拟临床基质用两种共配制的检测板进行加标，这些检测板含有RSV、流感A和SARS-CoV-2以及流感B，浓度水平约为检测限（LoD）的2倍。 每种样本类型测试了42个重复样本。 所有用2倍LoD检测板测试的重复样本在两种基质中对相应的病毒目标均为阳性，命中率为100%。 分析特异性（交叉和干扰） 注册资料全面描述了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在非临床性能评估中关于分析特异性（analytical specificity）的多个方面，包括交叉反应性、微生物干扰、内源性干扰物质、药物干扰、潜在共感染情况下的竞争性干扰以及样本间交叉污染的评估，旨在验证该检测方法在复杂样本环境中的准确性与特异性，确保其只对目标病毒产生反应，而不受其他无关微生物、物质或环境因素的影响。 首先，在分析特异性中的交叉反应性评估中，研究人员通过向检测系统中加入一系列可能在呼吸道中存在的微生物，包括细菌、真菌和病毒，以评估这些非目标微生物是否会导致假阳性结果。 这些微生物涵盖了常见的呼吸道定植菌、机会致病菌以及一些其他呼吸道或全身性病毒，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、白念珠菌、博德特氏菌、巨细胞病毒、EB病毒、麻疹病毒、中东呼吸综合征冠状病毒（MERS-CoV）以及SARS冠状病毒（SARS-CoV）等。 测试时，这些微生物的浓度被设定为较高水平（细菌和真菌为每毫升10⁶单位，病毒为每毫升10⁵单位），并且分别在单独存在以及与目标病毒（RSV、甲型流感、乙型流感、SARS-CoV-2，浓度约为3倍LoD）共同存在的情况下进行检测。 结果显示，当样本中仅含有这些非目标微生物时，检测系统未产生任何阳性结果；而当这些微生物与目标病毒共同存在时，系统仅对目标病毒产生了阳性反应，对其他微生物均未出现交叉反应。 这充分证明了该检测系统对于常见呼吸道微生物及其他潜在干扰病原体具有高度的特异性，不会因它们的存在而误判。 其次，在内源性干扰物质评估中，研究考察了可能存在于临床样本中的一些天然物质，如粘液（浓度为0.3–0.5% w/v）和血液（浓度为1.5–3.0% v/v），是否会干扰检测结果。 测试表明，在这些物质存在的情况下，无论是否同时含有目标病毒（浓度约为3倍LoD），检测系统均能正常工作，未出现性能下降或结果偏差。 此外，还评估了几种不同品牌和类型的鼻咽拭子样本采集保存液（如M4RT、M5、M6以及VACUETTE®病毒稳定管），包括未加标和加标目标病毒的样本，结果同样显示这些替代性采集介质不会对检测结果造成干扰，说明该检测方法对于不同临床采样和保存条件下获得的样本均具有良好的适应性。 在药物干扰评估中，研究人员测试了一系列可能用于呼吸道感染治疗或预防的药物成分，包括鼻喷剂、含药漱口水、眼药水、鼻用软膏、抗生素注射剂以及抗病毒药物等，如氟替卡松、莫匹罗星、布地奈德、苯佐卡因、氯己定、氧甲唑啉、妥布霉素、扎那米韦、奥司他韦等。 这些药物在存在和不存在目标病毒的情况下分别进行了测试，结果显示，除两种特殊物质外，其余药物均未对检测结果造成干扰。 特别地，FluMist®（一种鼻喷式四价流感疫苗，含有活的减毒流感病毒）在单独测试时，系统正确地检测出了其中的甲型和乙型流感病毒成分，而对其他目标未产生反应；而Snuff Tobacco（鼻烟烟草，含尼古丁）则被确认为一种潜在干扰物，在不含病毒但含有0.1%浓度鼻烟烟草的样本中，检测系统出现了无效结果，提示该物质可能对检测流程造成一定干扰。 在共感染（竞争性干扰）评估中，为验证当样本中同时存在多种病毒且浓度差异较大时，高浓度病毒是否会抑制低浓度病毒的检测，研究人员设计了包含不同病毒组合的测试样本，每个组合中一种病毒以高浓度（≥10⁶单位/mL）存在，另一种目标病毒则以较低浓度（约3倍LoD）存在。 总共测试了12种不同的病毒组合，包括甲型流感与SARS-CoV-2、乙型流感与SARS-CoV-2、RSV与SARS-CoV-2等相互组合。 结果显示，在所有组合中，高浓度的病毒均未对低浓度目标病毒的检测产生竞争性抑制，系统能够准确识别出所有低浓度目标病毒的存在，说明该检测方法在面对潜在的共感染情况时，依然能够可靠地检测出每一种目标病毒，不受其他高浓度病毒的影响。 最后，在交叉污染评估中，通过设计包含大量阴性样本与高浓度阳性样本（SARS-CoV-2，约6.5×10⁸颗粒/mL）交替排列的检测方案，模拟实际检测过程中可能出现的样本间交叉污染情况。 测试在cobas® 5800和cobas® 6800/8800系统上分别进行了多次运行，总共检测了480份阴性模拟样本和430份高滴度阳性样本。 最终结果显示，所有480份阴性样本均未出现假阳性结果，交叉污染率为0%（单侧95%置信区间上限为0.62%），表明该检测系统在实际运行中具有极高的防交叉污染能力，能够有效避免样本间的相互干扰，确保检测结果的纯净与准确。 临床评估（前瞻性样本） 该部分内容聚焦于cobas® Respiratory 4-flex检测系统在真实临床环境中的性能评估，通过将其检测结果与一种已获美国FDA 510(k)许可的同类对比检测方法进行比较，全面验证了该系统在实际应用于呼吸道病毒感染患者鼻咽拭子样本时的临床准确性，包括其对不同目标病毒（甲型流感、乙型流感、呼吸道合胞病毒和SARS-CoV-2）的检测能力。 研究采用了前瞻性收集的临床样本，这些样本来自2022-2023和2023-2024两个呼吸道病毒流行季，在多个采样点采集后分为新鲜样本（即采后即测）和冷冻样本（采集后经冷冻保存再检测）两类。 新鲜样本主要在2023-2024流行季由11个采样点采集，并在4个检测点使用cobas® 6800/8800系统进行检测；冷冻样本则分别来自2022-2023流行季的7个采样点和2023-2024流行季的14个采样点，之后在3个检测点进行检测。 总共纳入了4,475份鼻咽拭子样本，其中1,869份为新鲜样本，2,606份为冷冻样本。 经过筛选和检测流程后，最终有4,378份样本（1,832份新鲜样本和2,546份冷冻样本）在cobas® Respiratory 4-flex系统和对比方法上均完成了检测，但有部分样本由于仪器故障、样本处理失误、运输丢失或样本量不足等原因未能检测或被排除分析，最终有4,341份样本（1,827份新鲜样本和2,514份冷冻样本）被认定为有效评估样本。 研究重点评估了cobas® Respiratory 4-flex系统对四种主要呼吸道病毒——甲型流感、乙型流感、呼吸道合胞病毒（RSV）和SARS-CoV-2——的检测性能，主要通过两个核心指标来衡量其临床准确性：阳性符合率（Positive Percent Agreement，PPA，即真阳性率，指系统和对比方法同时检出目标病毒的比例）和阴性符合率（Negative Percent Agreement，NPA，即真阴性率，指系统和对比方法同时未检出目标病毒的比例）。 这些指标反映了该检测系统在实际临床使用中与已获批对比方法之间的一致性程度。 具体而言，在甲型流感的检测上，无论是新鲜样本还是冷冻样本，cobas® Respiratory 4-flex均表现出很高的阳性与阴性符合率。 综合新鲜和冷冻样本来看，其阳性符合率为96.4%，意味着在所有确实感染甲型流感且被对比方法检出的病例中，该系统也成功检测出了96.4%的病例；而阴性符合率高达99.7%，说明在所有未被对比方法检出甲型流感的样本中，该系统也正确地给出了阴性结果的比例非常高。 类似地，对于乙型流感，该系统同样展示了卓越的性能，总体阳性符合率为98.9%，几乎能够检测出所有真正感染乙型流感的患者，而阴性符合率更是达到了99.9%，几乎无假阴性情况出现。 在呼吸道合胞病毒（RSV）的检测方面，尽管其阳性符合率略低于甲型和乙型流感，但仍保持在较高水平，总体达到89.7%。 特别是在冷冻样本中，阳性符合率为90.4%，而在新鲜样本中为88.7%。 其阴性符合率则继续保持优异，所有样本的阴性符合率均达到100%，表明当患者未感染RSV时，该系统几乎不会误报。 对于SARS-CoV-2的检测，cobas® Respiratory 4-flex同样展现了出色的临床性能。 综合新鲜与冷冻样本，其阳性符合率为97.3%，意味着在几乎所有真正感染新冠病毒的患者中，该系统均能准确识别；而阴性符合率为98.5%，说明在未感染新冠病毒的样本中，该系统正确判断的比例也非常高。 无论是新鲜样本还是冷冻样本，SARS-CoV-2的阳性与阴性符合率都保持在相近的高水平，进一步验证了该系统对新冠病毒检测的可靠性。 临床评估（回顾性样本） 该部分内容主要描述了cobas® Respiratory 4-flex检测系统在回顾性临床样本中的性能评估结果，通过将系统检测数据与已获批的对比检测方法进行比对，进一步验证了该系统在实际临床应用中对于甲型流感、乙型流感和呼吸道合胞病毒（RSV）的检测准确性和可靠性。 与前瞻性研究使用新鲜或冷冻的近期样本不同，回顾性研究采用的是2014至2022年间收集并保存的冷冻鼻咽拭子样本（保存于UTM或UVT基质中）。 这些样本来自有呼吸道病毒感染症状的患者，当初在采集时已通过某种检测方法得到了历史检测结果，因此可以根据这些已知结果来评估cobas® Respiratory 4-flex的检测表现。 研究选取了770份此类回顾性样本，在美国三个检测点使用cobas® 6800/8800系统进行检测，并以一种经美国FDA批准的分子检测方法作为对比方法，用于评估两者之间的一致性。 在样本筛选过程中，部分样本因各种原因被排除分析，包括cobas® Respiratory 4-flex检测结果无效、对比方法检测失败或结果无效等。 最终，针对不同病毒目标，分别有数量不等的样本被排除，剩余可供评估的样本数量为：甲型流感657份、乙型流感647份、RSV 659份。 研究同样采用阳性符合率（PPA）和阴性符合率（NPA）这两个核心指标来评价检测性能。 阳性符合率指的是当对比方法和cobas® Respiratory 4-flex均检测出目标病毒时，系统正确识别出阳性样本的比例；阴性符合率则是指当两种方法均未检测出目标病毒时，系统正确判断为阴性的比例。 结果显示，在甲型流感的检测上，cobas® Respiratory 4-flex表现出了极高的准确性：所有61份被对比方法判定为阳性的样本，该系统也全部正确检出，阳性符合率达到100%；而在596份被对比方法判定为阴性的样本中，该系统也正确识别出了589份，阴性符合率为98.8%。 这表明该系统在检测甲型流感时，不仅能够准确识别出真正感染的患者，同时也能可靠地排除未感染的患者。 对于乙型流感，cobas® Respiratory 4-flex同样展示了良好的检测性能：在40份阳性样本中，系统正确检测出了39份，阳性符合率为97.5%；在607份阴性样本中，系统正确判断了603份，阴性符合率达到99.3%。 尽管阳性符合率略低于甲型流感，但仍处于非常高的水平，说明该系统对乙型流感的检测同样具有高度的准确性。 在呼吸道合胞病毒（RSV）的检测方面，cobas® Respiratory 4-flex的表现尤为突出：所有104份被对比方法判定为阳性的样本均被该系统正确检出，阳性符合率为100%；而在555份阴性样本中，系统也正确识别出了551份，阴性符合率为99.3%。 这进一步证明了该系统在检测RSV时的高度灵敏度和特异性。 临床评估（等效性评估） 在临床研究中，所有样本均使用cobas® 6800/8800系统上的候选检测方法进行了测试，随后随机选择的子集样本又在cobas® 5800系统上进行了测试。 将每个系统的检测结果与相应的对照检测方法进行了评估，并直接比较了两种系统之间的阳性百分比一致率（PPA）和阴性百分比一致率（NPA）。 两种仪器系统之间的结果是等效的。 三个关键问题 好，和之前一样，最后我用三个关键问题把这份审评报告的相关内容串联起来。 第一个问题，cobas® Respiratory 4-flex在非临床性能评估中，具体的分析灵敏度是如何确定的？ 分析灵敏度（Limit of Detection, LoD）是通过分析一系列稀释的样本确定的，这些样本混合了培养的不同病毒（如RSV、流感A、流感B和灭活SARS-CoV-2），并在鼻咽基质中进行稀释。 研究使用了至少五个浓度水平的样本，每个浓度水平进行多次测试，以确保结果的可靠性和重复性。 测试在三个不同的试剂批次、多次运行、不同操作员和仪器上进行，以确保结果的广泛适用性。 最终，确定每个病毒的LoD是其95%阳性结果的最高稀释浓度。 第二个问题，在临床性能评估中，前瞻性样本和回顾性样本的测试方法和结果有何不同？ 前瞻性样本是在2023-2024年呼吸道病毒季节收集的新鲜和冷冻鼻咽拭子样本，这些样本在收集后直接进行测试，以评估cobas® Respiratory 4-flex的最新性能。 回顾性样本则是在2014-2022年间收集的冷冻鼻咽拭子样本，这些样本在收集后保存一段时间，再进行测试以评估其在不同时间点的性能。 前瞻性样本更能反映当前季节的病毒流行情况，而回顾性样本则提供了历史数据，有助于评估长期稳定性和可靠性。 第三个问题，cobas® Respiratory 4-flex在处理高浓度样本时是否存在交叉污染的风险？ 根据注册资料中的交叉污染评估，cobas® Respiratory 4-flex在处理高浓度样本时的交叉污染率为0%。 研究通过对480个阴性模拟临床基质样本和430个高浓度SARS-CoV-2样本进行测试，结果显示所有阴性样本均未出现阳性结果，表明设备在高浓度样本处理过程中能够有效避免交叉污染。 声明：本微信注明来源的稿件均为转载，仅用于分享，不代表平台立场，如涉及版权等问题，请尽快联系我们，我们第一时间更正。