Cladribine

01 藏在平凡生活下的绝境：罕见病患者，无声的终身煎熬      在大众看不见的角落，有这样一群年轻人，他们本该是家庭的支柱、职场的中坚，却在20-40岁最好的年纪，被一场终身、复发、致残、无法根治的罕见病彻底困住。      没有剧烈的剧痛，却有挥之不去的折磨：突然模糊的视力、莫名麻木的四肢、走路失衡摇晃、持续疲惫乏力、认知记忆衰退。更残忍的是，这一切都是间歇性突袭、反复无常。      这就是复发型多发性硬化（RMS），一种被纳入国家《第一批罕见病目录》的中枢神经系统自身免疫性疾病。      对无数患者而言，这场病痛从来不是一次生病，而是一场没有终点的持久战。 NBA 传奇球星 贾森・基德：事业巅峰确诊MS，终身与病共存，成为全球 MS 患者励志标杆； 德国 歌手克里斯・克劳斯：巅峰期患病，公开病情、积极科普，用自身经历为罕见病患者发声； 美国演员阿兰娜・斯图尔特：确诊后深耕罕见病公益，推动MS 科研攻坚，助力新药研发与患者救助。       初诊时，多数人辗转多家医院被误诊、漏诊，耗费数年才确诊；确诊后，更是陷入三重绝望：复发无法预判、损伤不可逆、治疗选择极度匮乏。每一次复发，都会永久性损伤神经髓鞘，让身体机能一步步倒退；每一次病情波动，都意味着失业、停工、丧失生活自理能力的风险大幅增加。       更残酷的是，长期反复的病痛折磨、未知的病情进展、高昂的治疗成本，让绝大多数患者陷入焦虑、抑郁、自我否定，不仅身体被禁锢，人生也被彻底按下暂停键。他们不敢规划未来、不敢备孕生子、不敢换工作、不敢远行，只能日复一日被动等待，盼着有新药、有新疗法、有一丝活下去、好好生活的希望。 02 世界性医学难题：罕见病临床试验，全球攻坚的极致困境       很多人不解：为什么多发性硬化患者治病这么难、新药这么少？因为罕见病的临床研究，是全球医学界公认的最难攻坚领域之一，存在多重无法轻易突破的壁垒。第一，患病人群分散，招募难度极大。罕见病单病种患者基数小、地域分布零散，无法像常见病一样快速收集足量样本，多数海外新药临床试验招募周期长达3-5年，研发进度极其缓慢。第二，疾病异质性极强，个体差异巨大。同样是多发性硬化，每位患者的发病频率、病灶位置、残疾程度、免疫状态截然不同，极大提升了药物疗效验证、安全评估的难度。第三，治疗门槛极高，试错成本巨大。多数患者长期使用各类免疫治疗药物，存在漫长的洗脱周期，想要尝试新药，需要暂停现有治疗、承担病情复发风险，很多患者被迫放弃新疗法机会。第四，海外药物无法适配中国患者。欧美为多发性硬化高发区域，全球药企研发重心偏向西方人群，东西方人种基因、免疫通路、药物耐受度差异显著，海外成熟药物的剂量、疗效、安全性数据，无法直接套用在中国患者身上，本土原创新药研究长期存在巨大缺口。      也正因如此，每一项针对中国患者的本土临床试验，都弥足珍贵，是打破治疗僵局的唯一突破口。 图片来源:网络(如有侵权请私信联系，会立马删除） 03 权威数据直击真相：中国MS患者的真实生存困境       所有的苦难，从来不是个例，而是数万中国家庭的真实缩影。以下数据均来自中华医学会神经病学分会、中国罕见病联盟、中国医疗保健国际交流促进会官方发布的权威调研报告，真实还原国内多发性硬化患者的诊疗现状。 患病概况：我国多发性硬化预估患者约3万人，发病高峰集中在20-40岁青壮年，女性患病率为男性2倍，是典型的“青壮年致残性罕见病”。（来源：《多发性硬化患者生存报告（2018）》） 分型现状：国内83%的患者为复发型多发性硬化（RMS）（复发缓解型、继发进展型伴复发），58%患者每年至少发作1次，反复复发带来不可逆神经损伤。（来源：《2021中国多发性硬化患者生存质量蓝皮书》） 确诊困境：47%患者无法一次性确诊，38%曾被误诊为颈椎病、脑梗、神经炎等疾病，平均确诊延迟超2年，错失最佳干预时机。（来源：《多发性硬化患者生存报告（2018）》） 治疗缺口巨大：国内多发性硬化规范疾病修正治疗（DMT）用药率仅18%，而欧美发达国家规范治疗率超86%，差距悬殊；超89%患者仅在复发时用激素临时缓解，缓解期无规范维持治疗。（来源：《2021中国多发性硬化患者生存质量蓝皮书》） 致残与生活困境：病程10年内25%患者丧失自主行走能力，超半数患者因病离职、失去稳定收入，多数家庭长期背负沉重的医疗与生活负担。（来源：《多发性硬化患者生存报告（2018）》） 04 读懂RMS：患者无解的困惑，全球医学界的终极瓶颈       多发性硬化（MS）是免疫介导的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病，简单来说：人体免疫系统紊乱，“误伤”大脑、脊髓、视神经的神经髓鞘（神经保护层），导致神经信号传导中断，全身神经功能持续受损。       而复发型多发性硬化（RMS）是国内最主流、最折磨人的分型，也是目前临床治疗的重点难点。无数患者常年被三大困惑困住，无解决方案： 为什么明明在治疗，依旧反复复发？     目前全球尚无根治MS的手段，传统药物多为广谱免疫抑制，仅能临时缓解症状，无法精准阻断中枢神经的异常免疫攻击，即便规范用药，仍有大量患者出现新发病灶、病情复发。 可用药物极少，副作用难以耐受？      国内获批的MS治疗药物有限，多数为注射制剂，给药繁琐、需频繁就医，长期使用易导致免疫力大幅下降、感染风险升高；适配国人的口服靶向新药极度稀缺，大量患者面临“无药可换、无药可用”的困境。 长期治疗成本高昂，普通家庭无力承担？      进口原研药物年治疗费用动辄数十万，医保报销有限，长期终身治疗让无数家庭不堪重负，最终被迫中断治疗、放任病情进展。 而这，也是全球医学界多年未能突破的核心难题：    传统药物无法穿透血脑屏障，中枢抗炎效果差；广谱免疫抑制副作用大，疗效与安全性难以平衡；东西方人群差异大，海外药物无法适配中国患者。临床亟需一款高精准、高安全、口服便捷、适配国人的全新靶向药物。 05 破局新生！国产BTK靶向新药II期临床试验全国招募      针对复发型多发性硬化的核心发病机制，知微生物全新BTK选择性抑制剂临床试验正式开启全国招募（试验登记号：CTR20261819/ZW-TM471-1-C040），为国内RMS患者带来本土创新治疗新希望。 💊 试验药物核心优势     本次试验药物为布鲁顿酪氨酸激酶（BTK）选择性抑制剂，是目前全球神经免疫领域前沿靶向药物，精准作用于RMS发病核心免疫通路：精准调控中枢异常B细胞免疫，穿透血脑屏障，靶向修复神经炎性损伤，大幅降低复发率与新发病灶，相比传统药物，靶向更精准、副作用更低、口服更便捷，完美适配国内患者长期治疗需求。 📋 研究核心信息研究人群：复发型多发性硬化（RMS）患者（复发缓解型、继发进展型伴复发）试验阶段：II期临床研究（药效与安全性重点验证阶段）分组设计：2:2:1分组（2个剂量实验组+安慰剂组），安慰剂占比仅1/5；双盲结束后，所有受试者均可免费使用试验药物开放治疗给药方式：全程口服给药，居家服用，无需医院注射，极大提升用药依从性完整研究周期：筛选期≤4周 + 双盲治疗期24周 + 开放延长治疗期24周 + 安全随访期4周访视安排：每4周1次，流程规范、时间可控，不影响正常生活 🎁 患者专属补贴（全额发放，无任何抵扣） ✨ 全程免费提供试验药物、全套检查项目，额外发放误工、交通补贴，大幅减轻患者治疗经济压力。 ✅ 入选标准（全部满足即可报名） 年龄18-55周岁； 确诊复发型多发性硬化（复发缓解型/继发进展型伴复发）； EDSS残疾评分0.0-5.0分； 满足任一疾病活动证据：近1年≥1次复发 / 近2年≥2次复发 / 近1年MRI提示活动性病灶。 ❌ 排除标准&药物洗脱要求直接排除：筛选前30天内复发、病情未稳定、病程＞10年且EDSS≤2分、严重肝肾功能异常、活动性感染、难治性高血压、既往接受BTK抑制剂/米托蒽醌/克拉屈滨/全淋巴照射治疗者。规范洗脱周期：抗CD52单抗洗脱48周；抗CD20单抗洗脱24周；那他珠单抗洗脱24周；S1P抑制剂、特立氟胺等洗脱12周；激素、干扰素等洗脱4周；MS治疗中药洗脱2周。 📑 报名所需资料 多发性硬化完整确诊病历； 既往全程治疗史资料； 近期血检、核磁影像、EDSS评分报告； 2年内复发记录或活动性MRI报告； 基础病史、用药史、临床试验史。 报名方式：扫码联系专员老师（备注：RMS报名） 🏥 全国多中心同步开展（就近入组）四川成都、河北石家庄、山西太原、重庆、广东广州、湖北武汉、北京、江苏苏州、黑龙江哈尔滨、天津、内蒙古呼和浩特、陕西咸阳、浙江温州、甘肃兰州、广西南宁、云南昆明 06 一次转发，就是一次救命的希望      罕见病的每一次进步，都源于无数人的坚守与传递。      不同于普通药物研发，罕见病临床试验没有巨额商业收益，所有科研人员、医务工作者的坚持，只为打破无药可用、用药昂贵的困境，为中国MS患者量身打造安全、便捷、可及的本土新药。      参与本次临床试验的患者，不仅能免费使用前沿靶向新药、免费享受全套专业检查、获得专属经济补贴，更能为中国多发性硬化诊疗标准的建立、本土新药的落地普及贡献力量。      你不是孤军奋战，你的每一次参与，都是照亮数万病友的微光；你的每一次转发，都可能拯救一个深陷绝境的家庭。       愿每一位被病痛困住的患者，都能遇见新生；愿每一份小众的苦难，都能被看见、被治愈。       恳请大家动动小手，转发扩散，让更多RMS患者抓住这份来之不易的治疗曙光！ 📚 专业内容参考来源[1] 中华医学会神经病学分会, 中国医疗保健国际交流促进会. 《多发性硬化患者生存报告（2018）》[R]. 2019国际罕见病日官方发布（央广网、人民网、梅斯医学权威收录）.[2] 中国罕见病联盟, 中国医疗保健国际交流促进会. 《中国多发性硬化患者健康洞察蓝皮书暨2021版中国多发性硬化患者生存质量报告》[R]. 2021官方发布.[3] 国家卫生健康委员会. 《第一批罕见病目录》（2018），多发性硬化正式纳入罕见病管理范畴.[4] 国内中枢神经系统脱髓鞘疾病注册研究（CNRIDD）：中国多发性硬化流行病学与诊疗现状权威数据.[5] 临床试验官方登记平台：知微生物ZW-TM471-1-C040临床试验，登记号CTR20261819，试验信息真实可查。 感谢您的关注♥♥♥（https://www.xzmedtech.com/） 免责声明： 信息来源与目的本站所转载的文章、资料来源于公开发布的相关文献或官方网站（部分内容已注明具体来源），所发布的招募项目均为经过国家药品监督管理局药品审评备案或相关监管机构批准的合法试验项目。本站发布内容的主要目的是普及医学健康知识、传递最新医疗资讯，帮助公众更好地了解相关领域的动态与信息。 知识共享与版权声明本站所有转载文章、图片及其他内容的版权均归原作者或原权利人所有。若涉及侵权问题，请联系我们，我们将在收到通知后的24小时内删除相关内容或采取适当措施。 非医疗建议声明本站所发布的所有科普内容、案例介绍及相关信息仅供参考或学习之用，不作为具体医疗建议、诊断或治疗依据。患者如有健康问题，应及时咨询专业医疗机构或医生。本站不承担因误用或不当理解内容而引发的任何法律责任或后果。 风险告知参与任何临床试验或接受医疗治疗前，用户需详细阅读并签署知情同意书，并在专业医生指导下进行选择。本站信息仅为辅助参考，未对用户的任何医疗决策负责。

2026年2月发表在《iScience》杂志上的一篇文章《临床前药物筛选发现：WEE1抑制剂联合长春花生物碱可作为Li-Fraumeni综合征相关髓母细胞瘤的联合治疗方案》。 研究要点 药物筛选结果显示，阿达沃西布（WEE1激酶抑制剂）联合长春新碱对Li-Fraumeni综合征相关SHH型髓母细胞瘤抑瘤效果最优。 患者基因表达特征提示，TP53突变型SHH髓母细胞瘤对阿达沃西布具有药物敏感性。 动物实验证实，该联合用药方案在Li-Fraumeni综合征小鼠模型中毒性较低。 敲低阿达沃西布的作用靶点WEE1，可抑制TP53突变型SHH髓母细胞瘤模型的肿瘤生长。 摘要 Li-Fraumeni综合征（李-弗劳梅尼，LFS）以TP53胚系致病性突变为特征，患者恶性肿瘤发病风险显著升高，其中也包括SHH型髓母细胞瘤（SHH-MB）。对于LFS患者，放疗及DNA损伤类药物不仅疗效有限，还易诱发继发恶性肿瘤。为筛选出适用于LFS相关SHH型髓母细胞瘤的高效、安全化疗方案，本研究在TP53突变型脑肿瘤细胞系中对333种化合物开展体外药物筛选。结果显示，WEE1抑制剂阿达沃西布联合长春花生物碱类药物长春新碱的抑瘤活性最强，该结果也在TP53突变型SHH型髓母细胞瘤患者来源类器官模型中得到验证。研究分别利用LFS成纤维细胞（体外）与LFS小鼠模型（体内）证实，该组合用药基因毒性较低。尽管此方案在患者来源异种移植（PDX）动物模型中疗效欠佳，但在TP53突变型SHH型髓母细胞瘤的体外及体内模型中，敲低WEE1基因均可显著抑制肿瘤生长。综上，本研究证实WEE1是治疗LFS相关SHH型髓母细胞瘤的潜力靶点，提示WEE1抑制剂联合长春新碱有望成为新的化疗策略。 引言 Li-Fraumeni综合征（LFS）是一类遗传性肿瘤易感综合征，全球发病率约为1/3000~1/10000。绝大多数患者存在TP53基因胚系突变，该基因编码一种关键的抑癌基因。Li-Fraumeni综合征患者的高发肿瘤主要包括肉瘤、乳腺癌、肾上腺皮质癌及脑部肿瘤。在儿童群体中，TP53突变型SHH型髓母细胞瘤（SHH-MB）是该综合征最常见的脑部合并肿瘤，此类患者整体预后极差。 Li-Fraumeni综合征患者的肿瘤治疗难题，不仅体现在肿瘤发病风险升高。目前针对该疾病已建立并推行了多套完善的筛查与监测方案，但针对LFS相关肿瘤，学界尚未形成统一的抗肿瘤治疗策略。传统抗肿瘤方案多采用化疗与放疗，二者均会造成DNA损伤；大量持续的DNA链断裂通常可诱导细胞凋亡。由于LFS患者本身存在DNA损伤应答机制缺陷，因此对这类常规治疗普遍应答不佳。 此外，多项研究证实，DNA损伤类药物与LFS患者继发恶性肿瘤的发生存在明确因果关联。因此，临床上亟需研发对LFS相关肿瘤有效、且对正常组织低毒的新型疗法。联合用药相比单药治疗优势更为突出：两种及以上药物联用可通过靶向多条信号通路提升疗效，降低交叉耐药风险，同时还能克服肿瘤内部及肿瘤间的异质性问题。 本研究旨在筛选可有效抑制LFS相关髓母细胞瘤细胞活性、且不会对正常组织造成基因毒性损伤的药物。研究首先利用两种TP53突变型脑肿瘤细胞系及正常LFS成纤维细胞，对大容量药物库开展体外筛选；随后在TP53突变型SHH型髓母细胞瘤患者来源异种移植（PDX）模型与LFS小鼠体内模型中验证药效。本研究发现的新型化疗方案，有望丰富LFS相关SHH型髓母细胞瘤的治疗选择，并为后续临床试验改善患者预后提供依据。 结果 体外药物筛选在Li-Fraumeni综合征相关脑肿瘤细胞系中筛选出多种有效药物类别 本研究开展高通量药物筛选，旨在筛选疗效确切且毒性较低的联合用药方案。筛选药物库共包含333种化合物，作用靶点覆盖61种人体蛋白。其中激酶抑制剂占比最高，达56.8%；其余依次为传统化疗药物（15.6%）、雷帕霉素类似物（5.1%）、分化调控剂/表观遗传调节剂（9.9%）、凋亡调节剂（6.6%）、代谢调节剂（1.5%）及其他类药物（4.5%）。截至2025年，库中79%的化合物已获批上市或处于临床试验阶段。 研究选取两株TP53突变型脑肿瘤细胞系开展单浓度梯度、单次重复单药筛选，分别为SJGBM-2（TP53p.R273C）与UW228-2（TP53p.T155N）。本研究采用药物敏感度评分3（DSS₃）作为药效评价指标，将两株细胞的DSS₃均≥20判定为有效候选药物。依据该标准，共筛选得到66种活性化合物。 对比两株细胞的筛选结果可见，UW228-2细胞整体药物敏感性显著低于SJGBM-2细胞（中位DSS₃分别为9.5、1.3，威尔科克森检验：p＜0.05）。传统化疗药物、激酶抑制剂、分化/表观遗传调节剂、凋亡调节剂这几类药物，在两株细胞中的DSS₃差异均具有统计学意义。针对具体药物靶点分析：PI3K、AKT、DNA-PK抑制剂对UW228-2细胞的抑瘤效果更强；而E3连接酶、极光激酶、周期蛋白依赖性激酶（CDK）抑制剂则对SJGBM-2细胞作用更显著，两类靶点对应的药物在两株细胞间的中位DSS₃差异最为突出。 激酶抑制剂与微管相关化合物对体外培养的Li-Fraumeni综合征正常细胞毒性及基因毒性微弱 将上述66种高活性化合物，采用与肿瘤细胞相同的实验条件，作用于Li-Fraumeni综合征正常成纤维细胞。筛选标准设定为：正常细胞的药物敏感度评分（DSS₃）≤10，且肿瘤细胞与正常细胞的DSS₃差值（dDSS₃）＞20。据此筛选出24种对正常细胞无明显细胞毒性的化合物。其中4种化合物（克拉屈滨、氟尿苷、硫唑嘌呤、甲氨蝶呤）因已有研究证实，其在LFS体外及体内模型中可造成DNA损伤，故予以剔除。最终保留20种化合物开展基因毒性检测。 本研究采用微核试验开展基因毒性筛选，检测药物处理后LFS成纤维细胞的微核形成情况。以丝裂霉素C作为阳性对照，若化合物检测结果与阳性对照存在统计学差异（p＜0.05），则判定为无基因毒性。20种化合物中，共有11种未表现出基因毒性。 对于微管相关化合物，其引发的微核现象无法区分是源于染色体断裂，还是该类药物固有作用机制——即结合微管蛋白、造成有丝分裂纺锤体功能异常所致。但结合既往研究，这类药物不会在TP53突变细胞中诱发可致肿瘤发生的显著DNA损伤，因此这3种微管相关化合物仍纳入后续研究。 剩余14种候选药物，在两株TP53突变脑肿瘤细胞系（SJGBM-2、UW228-2）及LFS成纤维细胞中，扩大药物浓度范围（0.1~10000纳摩尔）并设置三组重复实验进行复筛。将肿瘤细胞中最大药效（Eₘₐₓ）不足50%的化合物剔除。最终共得到8种药效达标化合物：2种ATM/ATR抑制剂（AZD6738、BAY-1895344）、2种CHK1/2抑制剂（PF-477736、AZD7762）、WEE1抑制剂（阿达沃西布），以及3种微管相关药物（来立布林、紫杉醇、长春新碱）。 WEE1抑制剂阿达沃西布联合长春新碱可降低体外LFS相关脑肿瘤细胞的活性 本研究在两株脑肿瘤细胞系（SJ-GBM2、UW228-2）中，对筛选得到的候选化合物（5种激酶抑制剂、2种微管相关药物）开展联合用药评价。由于来立布林、紫杉醇在儿童脑肿瘤临床中应用有限，本联合筛选改用髓母细胞瘤常规治疗药物长春碱（长春花生物碱类）替代上述两种微管药物。 ATM、ATR、CHK1、CHK2及WEE1抑制剂作用于同一细胞周期检查点通路，因此彼此间不进行联用。根据协同评分结果，长春碱、长春新碱分别与各类激酶抑制剂联用均表现为相加效应，未出现拮抗作用。综合排名显示，阿达沃西布+长春新碱、BAY-1895344+长春新碱两组联用方案抑瘤效果最优。 两种药物在LFS相关SHH型髓母细胞瘤细胞（UW228-2）与正常对照LFS成纤维细胞中的作用特征相近：阿达沃西布、BAY-1895344作用于UW228-2细胞的药物敏感度评分分别为10.4、12.8，而二者对LFS成纤维细胞的药物敏感度评分均为0。 为提升研究的临床参考价值，本研究梳理了两种药物的临床试验数据及血肿瘤屏障穿透能力相关报道（数据统计截止至2023年5月26日）：阿达沃西布相关临床试验共61项，其中纳入儿童患者的试验5项；BAY-1895344相关临床试验共9项，仅1项纳入儿童患者。药物瘤内浓度数据显示，胶质母细胞瘤患者瘤内阿达沃西布浓度可达858纳摩尔，小鼠模型中BAY-1895344瘤内浓度为495纳摩尔。 综合以上信息判断，相较于BAY-1895344，阿达沃西布更适合快速应用于LFS相关SHH型髓母细胞瘤的联合治疗。因此后续所有实验均选用阿达沃西布作为联用药物。 阿达沃西布的直接作用靶点为WEE1激酶，该蛋白负责调控G2/M期细胞周期检查点转换。在TP53功能缺失的肿瘤细胞中，抑制WEE1会造成DNA损伤持续累积、复制应激加剧，最终引发有丝分裂崩溃。蛋白检测结果证实，两株细胞经阿达沃西布处理后，CDK1磷酸化水平下降，提示该药物可有效作用于目标靶点。 TP53突变型SHH髓母细胞瘤的生长依赖WEE1激酶活性 为证实TP53突变脑肿瘤细胞的生长依赖WEE1活性，本研究在SJGBM-2、UW228-2两株细胞中对内源性WEE1蛋白进行基因敲低。借助小干扰RNA实现WEE1敲低后，实验组细胞增殖能力较对照组显著下降：SJ-GBM2细胞平均活性降至25.5%（p＜0.05），UW228-2细胞平均活性降至70.3%（p＜0.01）。 在UW228-2细胞中，低浓度长春新碱（0.5纳摩尔）联合WEE1敲低的抑瘤效果显著优于单药处理：单用长春新碱组细胞平均活性为80.2%，联合组为61.8%；联合组与单药组、单纯敲低组相比差异均有统计学意义（分别为p＜0.001、p＜0.01）。 在SJ-GBM2细胞中，仅联合用药组与单用长春新碱组的细胞活性存在显著差异（单用长春新碱：62.9%，联合组：16.2%，p＜0.01），单纯WEE1敲低组与联合组相比无统计学差异（p＞0.05）。两株细胞的布利斯协同评分分别为−0.2、−5.14，提示该联用方案在两种细胞中均表现为相加效应。 敲低WEE1可显著激活SJ-GBM2与UW228-2细胞内半胱天冬酶-3。长春新碱单药对半胱天冬酶-3活性无明显影响，这也符合该药物在TP53突变肿瘤细胞中以抑制增殖为主、而非直接杀伤细胞的作用特点；同时长春新碱不会削弱WEE1敲低所诱导的促凋亡效应。 本研究另外选取两种WEE1抑制剂（Debio0123、ZN-c3）在TP53突变脑肿瘤细胞中开展药效验证，其作用强度与阿达沃西布相近。半数抑制浓度数据如下：SJ-GBM2细胞中，阿达沃西布43.4nM、Debio0123147.1nM、ZN-c369.7nM；UW228-2细胞中，阿达沃西布272.7nM、Debio0123270.5nM、ZN-c3271.1nM。与阿达沃西布一致，这两种药物分别联合长春新碱使用时，也均呈现相加作用。 利用TP53突变型SHH髓母细胞瘤患者来源类器官完成候选药物验证 为提升研究结果的临床参考价值，本研究进一步在TP53突变型SHH髓母细胞瘤患者来源类器官（PDO）模型中，验证阿达沃西布联合长春新碱的作用效果。 受试的3种类器官模型均显示两药联用为相加效应，未出现拮抗作用，协同评分区间为−6.35~2.52，与传统细胞系实验结论一致。 单药药效对比结果显示：长春新碱降低类器官代谢活性的作用有所减弱，其半数抑制浓度均值为6.8nM（范围1.38~11.9nM），而该药物在传统细胞系SJ-GBM2、UW228-2中的半数抑制浓度分别仅为1.1nM、0.9nM。 阿达沃西布在类器官模型中的半数抑制浓度均值为166.5nM（范围117.4~215.3nM），高于SJ-GBM2细胞（43.4nM）、低于UW228-2细胞（272.7nM）。 两种药物的作用均高度依赖细胞周期，这类药效差异在二维传代细胞系与三维类器官对比实验中十分常见：类器官的增殖与细胞周期运转速度更慢、基因表达模式存在差异，且药物难以穿透三维结构，最终导致离体培养的类器官对药物敏感性下降。其中SJ-GBM2细胞对药物的敏感度更是达到类器官的3~8倍。 综上，在全部3种TP53突变型SHH髓母细胞瘤患者来源类器官模型中，均证实阿达沃西布与长春新碱联用可产生相加作用，有效抑制细胞代谢活性。 相较于其他儿童脑部肿瘤，SHH型髓母细胞瘤的WEE1表达水平与阿达沃西布敏感评分更高 本研究依托已发表的儿童原发性脑部肿瘤数据集，分析药物靶点及预测性生物标志物的表达特征。对Roth与Northcott队列的mRNA表达数据进行分析后发现：髓母细胞瘤组织中WEE1的mRNA表达水平显著高于正常小脑组织；在各亚型髓母细胞瘤里，SHH型髓母细胞瘤的WEE1表达量最高（p＜0.01）。在SHH型髓母细胞瘤内部，SHH-α亚型（SHH_3，包含LFS相关髓母细胞瘤病例）、SHH-β亚型（SHH_1）及SHH-δ亚型（SHH_4）的WEE1 mRNA表达水平位居前列。 既往研究显示，在不同肿瘤类型中，WEE1表达量与细胞对阿达沃西布的敏感性并无明确关联。因此本研究采用一套经验证的儿童肿瘤阿达沃西布敏感性特征谱开展深度分析。结果显示，原发性髓母细胞瘤的阿达沃西布敏感评分（AdSS）显著高于多数儿童脑部肿瘤（p＜0.01），仅与非典型畸胎样/横纹肌样瘤（ATRT）相近（差异无统计学意义）。各髓母细胞瘤亚型对比：SHH型的阿达沃西布敏感评分与WNT亚型、第3组亚型无明显差异，但显著高于第4组亚型（p＜0.001）；而包含LFS相关髓母细胞瘤的SHH-α（SHH_3）亚型，在所有SHH亚型中敏感评分最高（p＜0.01）。单独的TP53突变状态与髓母细胞瘤的药物敏感评分无相关性，这也与阿达沃西布相关临床试验结论相符，即TP53突变不能作为预测该药物疗效的生物标志物。 体内实验证实：抑制WEE1活性可阻碍TP53突变型SHH髓母细胞瘤患者来源异种移植模型的肿瘤生长 本研究采用阿达沃西布联合长春新碱，对LFS相关SHH髓母细胞瘤DKFZ-BT084患者来源异种移植（PDX）模型开展体内给药实验。结果显示，该方案对肿瘤生长及荷瘤动物生存期均无显著影响（对数秩检验：p＞0.05）。各组荷瘤小鼠自检出肿瘤后的中位生存期分别为：对照组17.5天、阿达沃西布单药组9天、长春新碱单药组20.5天、联合用药组28天。为验证阿达沃西布在体内是否发挥靶点作用，本研究在另外两株LFS相关SHH髓母细胞瘤PDX模型中检测CDK1磷酸化水平。结果显示，阿达沃西布联合长春新碱处理组与对照组的磷酸化CDK1表达量无明显差异，提示该药物在体内未有效作用于目标靶点。推测原因可能为药物血脑屏障穿透能力不足，这也是其体内药效不佳的主要诱因。 为进一步验证肿瘤在体内的生长依赖WEE1活性，本研究利用短发夹RNA（shRNA）稳定敲低LFS原发SHH髓母细胞瘤PDX模型细胞的WEE1基因，观察肿瘤形成与生长特征。WEE1敲低组共5只小鼠，其中3只（60%）长出肿瘤；转染乱序对照shRNA的对照组5只小鼠全部（100%）成瘤（费希尔精确检验：p=0.44）。两组动物生存期存在显著差异：观察期内对照组5只小鼠均因肿瘤进展死亡，而WEE1敲低组仍有2只存活（p=0.044）。 阿达沃西布联合长春新碱在LFS小鼠模型中未见明显毒性反应 本研究初筛药物时，已将基因毒性作为核心筛选标准，旨在为DNA损伤易感的LFS患者筛选低毒药物。本研究采用Trp53+/-LFS小鼠模型（品系：Trp53tm1Tyj/J），评估阿达沃西布与长春新碱的体内毒性。在给药及观察期间，实验动物未出现不良反应，体重保持稳定。对照组、单药组及联合用药组动物存活率均为100%。动物解剖结果显示，各脏器均未出现提示肿瘤发生的肉眼病变；对脑、肾、肝、脾组织开展组织学检测，也未发现异常。各组脏器中γH2AX阳性细胞核数量无统计学差异。上述结果证实：在Trp53缺陷型小鼠模型中，单用或联用长春新碱、阿达沃西布，均基本无基因毒性及脏器毒性。 讨论 本研究对333种化合物开展筛选，旨在探索Li-Fraumeni综合征相关髓母细胞瘤的新型治疗方案。最终确定WEE1抑制剂阿达沃西布联合长春花生物碱类药物长春新碱为疗效佳且毒性低的最优组合。两种药物在Li-Fraumeni综合征体外、体内模型中均无基因毒性，联用后对肿瘤细胞表现为相加作用。 尽管该药物组合在动物体内给药实验中未显现明显疗效，但在患者来源异种移植（PDX）模型中对WEE1进行基因敲低后，肿瘤生长受到抑制，免疫缺陷小鼠生存期也得以延长，证实WEE1是治疗Li-Fraumeni综合征相关SHH型髓母细胞瘤的潜力靶点。值得注意的是，该联用方案的作用并不局限于TP53突变型SHH髓母细胞瘤：TP53突变肿瘤对其敏感，TP53野生型肿瘤同样可能产生应答。由于阿达沃西布与长春新碱基本无基因毒性，后续也可探索该方案用于治疗其他类型的Li-Fraumeni综合征相关肿瘤。 本研究证实，无论体外还是体内实验，TP53突变型SHH髓母细胞瘤的生长均依赖WEE1活性。从作用机制来看，TP53突变会造成G1/S细胞周期检查点调控功能缺陷，这也是Li-Fraumeni综合征肿瘤细胞对传统化疗耐药的重要原因。与此同时，细胞分裂异常加快，使得肿瘤细胞必须依靠G2/M检查点完成DNA损伤修复，才能顺利进入分裂期。 阿达沃西布靶向调控G2/M期转换的WEE1激酶，会迫使细胞提前进入分裂阶段，进而加剧基因组不稳定性，最终诱发有丝分裂崩溃。因此多项研究认为，TP53突变可作为预判阿达沃西布疗效的潜在生物标志物，但成人临床试验却得出了相互矛盾的结论。 目前临床主流治疗方案以传统化疗为主，难以实现Li-Fraumeni综合征相关SHH型髓母细胞瘤患者的长期无进展生存，该类患者5年无进展生存率仅为20%。长春新碱已是这类肿瘤的常规治疗用药；阿达沃西布则正开展儿童恶性脑肿瘤的早期临床试验（试验编号：NCT02095132）。截至目前，尚无证据表明WEE1抑制剂能让髓母细胞瘤患者显著获益，且专门针对TP53突变型SHH髓母细胞瘤的临床数据仍处于空白状态。 多项研究表明，WEE1是髓母细胞瘤极具开发价值的药物靶点。Keller等人2022年发表的系统性综述指出，WEE1抑制剂及其他细胞周期激酶抑制剂，无论单药还是联合放化疗，都是治疗髓母细胞瘤最具前景的药物。Harris团队通过整合基因组分析，同样证实WEE1是髓母细胞瘤中可靶向的有效靶点。 血脑屏障是限制脑部肿瘤药物疗效的关键因素。已有研究报道了阿达沃西布的体内血脑屏障穿透能力：Pokorny团队发现，在原位胶质母细胞瘤PDX模型中，药物在肿瘤组织内分布不均，瘤内药物浓度仅为血药浓度的5%，穿透效果较差，这一结果也与两项成人胶质母细胞瘤Ⅰ期临床试验（NCT01849146）结论相符。但另一项胶质母细胞瘤患者药代动力学研究显示，单次口服给药后，阿达沃西布血脑屏障穿透性良好，肿瘤内游离药物浓度与血浆药物浓度中位比值达3.2。两种结果存在差异的原因在于：胶质母细胞瘤的血管存在窗孔样结构，而SHH型髓母细胞瘤的血脑屏障结构完整。结合阿达沃西布本身穿透血脑屏障能力有限这一特点，也解释了为何该药物难以在SHH型髓母细胞瘤治疗中发挥作用。 脑部肿瘤体内模型实验显示，阿达沃西布单药或联合化疗，可有效抑制皮下接种的脑肿瘤细胞生长，但在颅内原位接种模型中的疗效却参差不齐。Pokorny与Moreira的研究均证实，原位模型对药物的敏感性显著低于异位皮下模型，进一步说明血脑屏障通透性会直接影响阿达沃西布的体内药代特征，导致肿瘤部位药物浓度不足。加之SHH型髓母细胞瘤PDX模型的血脑屏障结构本身存在变异，也让相关实验结果的解读更为复杂。本研究已明确WEE1具备成药价值，因此后续研究重心应放在研发高血脑屏障穿透性的WEE1抑制剂。目前已有多款候选药物进入临床阶段，如ZN-c3（NCT04158336）、Debio0123（NCT03968653）。本实验证实，二者在TP53突变脑肿瘤模型中的药效与阿达沃西布相当；另有研究显示，Debio0123在胶质母细胞瘤原位模型中疗效确切，且可有效穿透血脑屏障。此外，新型药物递送技术也在持续探索中，包括纳米颗粒、聚合物胶束等载体系统。目前正在胶质瘤中开展临床评估的微泡联合聚焦超声无创技术，也有望提升WEE1抑制剂的血脑屏障穿透效率。若能筛选出Li-Fraumeni综合征特异性的阿达沃西布疗效预测标志物，也可进一步挖掘该药物的应用潜力，但这类研究受限于该病相关SHH型髓母细胞瘤患者样本稀少，推进难度较大。 对于肿瘤易感综合征患者，新型疗法的基因毒性是必须考量的核心问题。采用DNA损伤类药物治疗Li-Fraumeni综合征患者，会大幅提升继发肿瘤风险，因此本研究重点评估了候选药物引发DNA双链断裂及持续性DNA损伤的能力。阿达沃西布兼具放化疗增敏作用，但既往临床试验尚未明确其单用是否会造成DNA损伤。本研究发现，Li-Fraumeni综合征正常细胞经阿达沃西布长期处理后，γH2AX病灶与微核形成数量并未增加。长春新碱属于微管靶向药物，采用微核试验评估其基因毒性易出现结果偏差，但既往多项体内外实验均证实，长春花生物碱不会在Li-Fraumeni综合征模型中造成明显DNA损伤、诱发肿瘤。同时，在Trp53缺陷型Li-Fraumeni综合征小鼠模型中，单用或联用两种药物均未观察到与基因缺陷相关的不良反应及脏器毒性。综上可以判定，阿达沃西布联合长春新碱可安全应用于Li-Fraumeni综合征患者。 本类临床前研究也存在局限性，实验模型的选择会影响研究结果向临床转化的价值。目前成熟、能够精准模拟TP53突变型SHH髓母细胞瘤的体外模型数量十分有限。现阶段针对SHH型髓母细胞瘤的靶向治疗探索整体进展缓慢：Pak团队发现，组蛋白去乙酰化酶抑制剂可与药物抵抗型髓母细胞瘤形成有效联用方案，但该结论仍需临床试验验证；Endersby团队证实CHK1抑制剂对第3组髓母细胞瘤有效，却对TP53突变型SHH髓母细胞瘤PDX模型无效；Simovic团队发现碳离子放疗对Li-Fraumeni综合征相关SHH髓母细胞瘤疗效显著，但联合聚腺苷二磷酸核糖聚合酶抑制剂后并未进一步提升效果。本中心的临床数据也证实，放疗能够延长这类患者的生存期，具备明确临床价值。针对其他Li-Fraumeni综合征相关脑部肿瘤，Reed团队依托转录组测序精准医疗平台，发现1例Li-Fraumeni综合征胶质母细胞瘤患者存在STAT1/STAT2高表达，对芦可替尼敏感，据此制定个体化方案后，患者病情得到有效控制。 当前新药研发常借助患者来源模型开展药物筛选，以此挖掘针对单个患者或小众患者群体的驱动基因与靶向药物。在临床前研究中，基因编辑动物模型、患者来源异种移植模型等体内体系的药效验证至关重要。与此同时，类器官体外检测技术作为功能化精准医疗手段，也在多项临床试验中得到推广应用（NCT03896958、NCT03336931、NCT03133273）。 总结：本研究通过药物筛选与多轮验证，确定WEE1抑制剂阿达沃西布联合长春新碱是治疗Li-Fraumeni综合征相关髓母细胞瘤的潜力组合，具备开展临床试验的价值。该方案对Li-Fraumeni综合征正常细胞基因毒性低，在相关肿瘤模型中抑瘤效果显著，且在基因编辑Li-Fraumeni综合征小鼠模型中证实安全性良好。尽管该组合在本研究的体内给药实验中未显现疗效，但结合靶点验证结果可知：若能解决药物血脑屏障穿透难题，WEE1抑制剂联合长春新碱可纳入Li-Fraumeni综合征相关SHH型髓母细胞瘤的治疗方案。后续需开展临床试验，验证高穿透性WEE1抑制剂联合长春新碱，在该类肿瘤以及其他Li-Fraumeni综合征相关肿瘤中的实际疗效。 研究局限性 本研究主要围绕筛选得到的长春新碱联合阿达沃西布组合，探索其作为Li-Fraumeni综合征相关SHH型髓母细胞瘤新型疗法的应用潜力。本次筛选所用药物库中的化合物，大多为已获批上市或处于临床研发阶段的药物。药物初筛仅采用两株TP53突变脑肿瘤细胞系开展实验，但后续已在三株可真实模拟该类肿瘤的TP53突变型SHH髓母细胞瘤患者来源类器官中完成候选药物验证。本研究另一项不足为：LFS小鼠模型体内毒性实验的观察周期较短（仅4周），无法评估药物长期毒性，例如治疗诱发的新发肿瘤。不过，实验未检测到DNA损伤标志物明显升高，提示该方案诱发治疗相关继发肿瘤的风险较低。最后，本研究采用的动物模型无法完全复刻LFS患者的各项特征，包括TP53突变谱、血脑屏障结构等，均与人体存在差异。 原文：Kolodziejczak AS, Selt F, Peterziel H, et al. Preclinical drug screen identifies WEE1 inhibitor and vinca alkaloid as a combination treatment concept for Li-Fraumeni syndrome medulloblastoma. iScience. 2025 Dec 29;29(2):114564. doi: 10.1016/j.isci.2025.114564. PMID: 41585496; PMCID: PMC12828543. Li-Fraumeni综合征病友群（LFS之家）联系人：徐若木 微信：Rome-Xu