意外的反向开发，“真正”的自免CAR-T？

2023-09-29

免疫疗法孤儿药细胞疗法信使RNA

在实体瘤中，免疫原性化疗结合检查点阻断剂可增强CAR-T细胞的招募并提高其抗肿瘤功效。基于此，一些CAR-T选择将免疫检查点抑制效果直接“装”在自己的CAR结构中。2023年9月，一款表达CD19和抑制N2RF6的DuraCAR-T在进入其靶向实体瘤的体外实验制备过程中，发现其本该抑制NR2F6基因mRNA表达的siRNA产生了相反的结果，从而可能产生适用于抑制自身免疫病的CAR-T细胞。这一款DuraCAR-T来自一家专注于使用mRNA和小分子疗法治疗癌症和自身免疫性疾病的公司Regen BioPharma。其技术平台包括shRNA、双重适配体、激活和抑制NR2F6基因的小分子和脂肪来源干细胞。靶点NR2F6：免疫检查点+调节T细胞分化衰竭NR2F6是一个在黑色素瘤中发现的免疫检查点靶点，属于核激素受体(NRs)家族的一员。NRs家族：NRs在正常细胞中控制增殖、代谢、特化细胞功能和免疫细胞活动的调节途径；在激素相关性肿瘤中，NRs则失调，并且起到调节肿瘤细胞与TME通讯的作用。不同NRs在肿瘤中的作用也不同。例如，激活肝脏X受体可诱导黑色素瘤生态位内的载脂蛋白E表达，以减弱MDSC的活性，从而更有效地抑制转移；而肿瘤来源的视黄酸则可诱导单核细胞分化为免疫抑制性肿瘤相关巨噬细胞(TAM)，从而抑制ICT影响。Endocrine Reviews孤儿核受体NR2F6：又称Ear-2或COUP-TFIII，是NR2F亚家族的成员，在结构上与NR2F1和NR2F2蛋白相关。NR2F6已被认为是中枢神经系统炎症和抗肿瘤反应的免疫抑制中心检查点。NR2F6在人类卵巢癌、宫颈癌、淋巴瘤、白血病、胃腺癌、子宫内膜癌、膀胱尿路上皮癌、乳腺侵袭性癌组织和结直肠癌等多种肿瘤中的表达明显高于非肿瘤组织。从机制上讲，淋巴细胞表达的NR2F6在T淋巴细胞活化过程中充当关键调节因子，在体外和体内有效拮抗抗原受体诱导的细胞因子反应。NR2F6的DNA结合在TCR诱导的PKC信号传导的直接控制下，后者已知可积极调整CD3 T细胞的活化阈值。NR2F6还在Th17细胞谱系中起到重要作用。在免疫细胞中，NR2F6被认为能够微调适应性免疫和抑制编码IL-2、IFN-γ、IL-17和IL-21等细胞因子的基因转录能力。肿瘤细胞内源性NR2F6表达控制T细胞浸润。在具有NR2F6消融的遗传小鼠模型中，NR2F6能造成肿瘤浸润效应T细胞活性增强，从而分泌更多的IFN-γ和IL-2，同时加强CD8 T细胞记忆，从而表现出炎症加速发展、呈自身免疫表型和肿瘤生长减弱，显示出较单独PD-1治疗更好的效果。此外，抑制NR2F6也能增强PD-1治疗反应。Chinese Journal of Biotechnology,NR2F6 KO肿瘤表现出明显更多的祖细胞耗尽CD8 T 细胞比 WT 肿瘤，这种效应在终末期耗尽的 T 细胞（++图3F），表明NR2F6缺乏增加了功能完整亚群的丰度耗尽的CD8 T细胞可以更好地控制肿瘤生长。基因沉默：从抑制衰竭分化到诱导抑制分化Regen BioPharma的DuraCAR-T表达CD19和抑制NR2F6，设计目的是旨在通过其专有的NR2F6 shRNA抑制T细胞衰竭、促进活性，以解决CAR-T在实体瘤中的抗药性。此次，该研究体外实验的第一阶段成功地合成并在转染细胞中表达靶向CD19和NR2F6的CAR构建。然而，第二组实验产生了意想不到的结果，其中设计用于沉默NR2F6 mRNA表达的siRNA产生了相反的结果，可能造成对自身免疫的抑制作用。该公司聘请了一个独立于CRO的合同研究组织使用公司专有的shRNA NR2F6抑制技术去进行后续实验，以确定这些令人惊讶的发现是否可重复。对于NR2F6这个黑色素瘤免疫抑制检查点而言，相比PD-1，它对于T细胞分化的调节使其能成为一个免疫细胞疗法的潜在靶点，这也正是其能够反向作用于自身免疫性疾病的可能性。小结在CAR-T治疗肿瘤相对“内卷”、技术难题待克服的环境下，靶向自免的CAR-T管线也有不少。靶向性靶点依然以CD19和BCMA为主，目前进展最快的是Cartesian的Descartes-08，已经进入到2期临床。国内药明巨诺和驯鹿生物都有参与这一赛道。但是，这些CAR-T结合利用mRNA的目的通常是在于使用mRNA瞬时转染，降低CAR-T的毒性，例如减少病毒载体量、降低细胞因子释放毒性风险等。Regen的这款DuraCAR-T则是让mRNA对T细胞的分化产生直接的调节作用，更针对免疫调节的直接机制。肿瘤和自免实为系统免疫的一体两面。在基因层面调节的过程中，选择一方就会存在另一方向的“副作用”。是否能通过单一siRNA调节来限制其变化以及出现“副作用”之后的毒性风险，则是下一步药物开发的关注点。参考文献：1.biospace新闻https://www.biospace.com/article/releases/studies-on-regen-biopharma-inc-s-duracar-indicate-potential-suppression-of-autoimmunity-company-retains-contract-research-organization-to-conduct-additional-confirmatory-studies/2..Kim H, Feng Y, et al.Melanoma-intrinsic NR2F6 activity regulates antitumor immunity. Sci Adv. 2023 Jul 7;9(27):eadf6621. doi: 10.1126/sciadv.adf6621. Epub 2023 Jul 5. PMID: 37406115; PMCID: PMC10321753.3.Klepsch V, Pommermayr M, et al. Targeting the orphan nuclear receptor NR2F6 in T cells primes tumors for immune checkpoint therapy. Cell Commun Signal. 2020;18(1):8. Published 2020 Jan 14. doi:10.1186/s12964-019-0454-z4.Linjie Zhao, Shengtao Zhou, Jan-Åke Gustafsson, Nuclear Receptors: Recent Drug Discovery for Cancer Therapies, Endocrine Reviews, Volume 40, Issue 5, October 2019, Pages 1207–1249, https://doi.org/10.1210/er.2018-002225.Huang L, Liu JH, Zhu Y, et al. The role of nuclear receptor transcription factor NR2F6 in tumor. Chinese Journal of Biotechnology, 2021, 37(8): 2595-2602.