Larotrectinib Sulfate

近日，中国药科大学钱海团队在国际权威药物化学期刊《Journal of Medicinal Chemistry》上发表了一篇题为“针对携带KRAS G12D突变的胰腺导管腺癌的新型SHP2自噬靶向降解剂的发现”的研究论文。该研究聚焦于胰腺导管腺癌（PDAC）中携带KRAS G12D突变的肿瘤细胞，通过设计新型的SHP2自噬靶向降解剂（ATTEC），成功实现了对SHP2蛋白的高效降解，并显著抑制了肿瘤的生长和转移。这一成果不仅为靶向SHP2的药物研发提供了新的策略，也为胰腺癌的精准治疗带来了新的策略。一分钟速览研究背景胰腺导管腺癌（PDAC）是一种预后极差的恶性肿瘤，其发病率和死亡率均居高不下。KRAS基因突变是PDAC中最常见的驱动因素之一，尤其是KRAS G12D突变，它导致KRAS蛋白持续激活，进而促进肿瘤的发生和发展。然而，针对KRAS G12D突变的直接抑制剂研发面临诸多挑战。SHP2是一种重要的信号转导蛋白，它在KRAS驱动的肿瘤中发挥关键作用，通过调节KRAS的活性来促进肿瘤进展。因此，靶向SHP2成为一种潜在的治疗策略。重点内容在这项研究中，钱海团队基于自噬-溶酶体途径（ALP）设计了一系列新型的SHP2 ATTEC降解剂。这些降解剂通过招募自噬相关蛋白LC3，促进SHP2与LC3的结合，进而诱导SHP2的溶酶体降解。研究发现，其中一种优化的降解剂11n能够显著增强SHP2与LC3之间的相互作用，并在体外和体内实验中展现出对KRAS G12D突变癌细胞的高效抑制作用。11n不仅能够诱导肿瘤细胞凋亡，还能显著抑制肿瘤细胞的侵袭和转移能力，其抗肿瘤效果在小鼠模型中得到了进一步验证。研究总结该研究的创新之处在于利用自噬机制来降解SHP2蛋白，为胰腺癌的治疗提供了一种全新的思路。通过靶向SHP2这一关键信号分子，研究团队成功开发出了一种具有高效降解能力和抗肿瘤活性的新型降解剂。这一成果不仅丰富了自噬靶向降解剂的研究领域，也为未来胰腺癌的精准治疗提供了有力的候选药物。图片来源：ACS详细阅读01Background研究背景胰腺导管腺癌（PDAC）是一种起源于胰腺的致命恶性肿瘤，占所有胰腺癌的约90%，其发病率在过去几十年中不断增加。PDAC早期症状隐匿，约80%的患者在确诊时已处于晚期，且胰腺组织的复杂位置使得手术干预效果有限。目前，吉西他滨为基础的联合疗法仍是主要治疗选择，但分子靶向药物如厄洛替尼、奥拉帕尼和拉罗替尼等相较于化疗并无显著优势。KRAS基因突变是PDAC中最常见的驱动因素，尤其是KRAS G12D亚型，其突变导致KRAS蛋白无法从GTP活性形式转变为GDP非活性形式，从而持续激活并促进肿瘤发生。尽管Mirati Therapeutics开发的KRAS G12D选择性抑制剂MRTX1133显示出潜力，但其存在内在和获得性耐药、单药疗效有限和口服生物利用度低等问题，因此迫切需要开发针对KRAS G12D突变PDAC的安全有效的新疗法。SHP2是一种由PTPN11基因编码的蛋白酪氨酸磷酸酶，其在KRAS驱动的癌症中作为鸟苷酸交换因子（GEF）介导KRAS-GDP与KRAS-GTP之间的转换，并增强GRB2-SOS1与KRAS的结合以激活KRAS。此外，SHP2还被证明可以延缓肿瘤进展并提高癌症免疫治疗的疗效。然而，由于SHP2的药理学抑制存在诸多挑战，目前尚未有高效且特异性的SHP2抑制剂。近年来，靶向蛋白质降解（TPD）技术为创新药物研发开辟了新途径，其中蛋白降解靶向嵌合体（PROTACs）是主要的TPD技术。与之相比，自噬-溶酶体途径（ALP）是另一种细胞降解机制，主要负责清除大分子蛋白、蛋白聚集体、细胞器和细胞外蛋白。2019年，Lu团队首次提出了基于自噬体标记物LC3的自噬体靶向化合物（ATTEC）策略。本研究中，作者基于SHP-099（一种SHP2的变构抑制剂）和LC3配体AN2，设计了一系列新型的SHP2 ATTEC降解剂，旨在通过自噬机制实现SHP2的降解，为KRAS G12D突变PDAC提供新的治疗策略。图片来源：ACS02Drug Design药物设计与评价①药物设计作者首先基于TCGA和GTEx数据库分析了胰腺腺癌与非匹配正常组织之间SHP2和LC3B基因表达的显著差异，并通过Western blotting验证了SHP2和LC3B在PANC-1和AsPC-1癌细胞中的高表达，表明利用自噬途径实现SHP2的高效降解是合理的策略。随后，作者设计了一系列基于自噬的SHP2靶向自噬体靶向化合物（ATTECs），这些化合物包含SHP2配体、柔性连接链和LC3配体，旨在通过招募SHP2和LC3来触发自噬体融合和溶酶体介导的降解。为了探索AN2结构修饰的合理性及其被自噬体吞噬的能力，作者合成了一个带有FITC荧光探针的LC3识别探针（AN2-FITC），并通过细胞热位移分析（CETSA）和共聚焦显微镜成像验证了其与LC3B的结合能力和进入自噬体的能力。基于SHP-099（一种SHP2变构抑制剂）的结构，作者进一步设计并合成了一系列SHP2靶向ATTEC降解剂，并通过细胞实验评估了这些降解剂对SHP2蛋白降解的效率，发现随着连接链长度的增加，降解效率逐渐提高，其中某些化合物展现出较好的降解活性。图片来源：ACS②降解活性构效探究作者详细评估了一系列新型SHP2靶向自噬体靶向化合物（ATTEC）降解剂的降解效率和抗增殖活性。研究发现，这些降解剂在PANC-1细胞（携带KRAS G12D突变）中能够有效触发SHP2蛋白的降解，且随着连接链长度的增加，降解效率逐渐提高。特别是当连接链长度为五到七个碳原子时，降解效率显著提升，其中化合物11h在10.0 μM浓度下展现出最高的降解率（70.59%）。此外，基于聚乙二醇（PEG）连接链的降解剂（如11k和11l）也表现出良好的降解潜力，其降解效率是四碳连接链化合物11e的两倍以上。为了进一步优化降解剂的结构，作者还对SHP2抑制剂的二氯苯基部分进行了替换，发现含有苯并呋喃基、噻吩基和三氟甲基苯基的降解剂（如11n和11o）具有与11l相当的降解效率，显示出良好的降解活性和选择性。在抗增殖活性方面，这些高效降解SHP2的化合物在体外对多种胰腺导管腺癌（PDAC）细胞系（包括携带KRAS G12D突变的PANC-1和AsPC-1细胞，以及野生型KRAS的BxPC-3和4T1细胞）表现出显著的抑制效果。特别是化合物11h、11k、11l、11n和11o在PANC-1和AsPC-1细胞中的抑制活性显著优于SHP2抑制剂SHP-099，其半数抑制浓度（IC50）值远低于SHP-099。此外，这些降解剂对正常细胞HEK-293T的毒性较低，表明其具有较好的选择性。综合来看，这些结果表明，基于自噬机制的SHP2降解剂在抑制KRAS G12D突变的PDAC细胞增殖方面具有显著的潜力，且通过合理设计连接链和替换基团可以进一步优化其降解效率和抗肿瘤活性。图片来源：ACS03In vitro In Vivo体内外评价①化合物11n与SHP2和自噬相关蛋白LC3之间的相互作用及其诱导SHP2有效降解的机制研究发现，11n能够以剂量依赖的方式显著降低胰腺腺癌细胞中SHP2蛋白的水平，其在PANC-1和AsPC-1细胞中的半数降解浓度（DC50）分别为0.14 μM和0.10 μM。通过预处理自噬抑制剂（如Bafilomycin A1、Chloroquine和NH4Cl），可以成功逆转11n诱导的SHP2降解，表明11n诱导的SHP2降解依赖于自噬和SHP2蛋白本身。此外，CETSA实验显示，11n能够显著稳定SHP2蛋白，使其在较高温度下不易变性，表明11n与SHP2具有较强的结合能力。Co-IP实验进一步证实了11n能够促进SHP2与LC3之间形成三元复合物。通过分子对接模拟，作者发现11n能够与SHP2的关键活性口袋结合，其氨基与SHP2的Glu 250形成氢键，而其末端的自噬基序则有助于与LC3蛋白的识别。定量蛋白质组学分析也表明，11n处理后SHP2蛋白水平显著下降，进一步验证了11n通过促进SHP2与LC3的相互作用，有效诱导了SHP2的自噬降解。图片来源：ACS②化合物11n对KRAS G12D突变胰腺导管腺癌（PDAC）细胞中KRAS活性状态的影响研究发现，11n能够选择性地降低KRAS G12D突变细胞中磷酸化ErK1/2的表达水平，而对野生型KRAS细胞中的磷酸化ErK1/2没有显著影响。磷酸化ErK1/2是KRAS下游信号通路的关键蛋白，其活性与KRAS的活性状态密切相关。此外，11n还显著降低了c-Myc的表达，c-Myc是一种与KRAS信号通路相关的转录因子，其在PDAC中通常高表达并与肿瘤的增殖和存活相关。这些结果表明，11n通过抑制KRAS信号通路的活性，选择性地将KRAS G12D突变的PDAC细胞推向失活状态，从而发挥其抗肿瘤作用。这一发现进一步证实了11n作为一种潜在的靶向治疗药物，能够特异性地影响KRAS G12D突变细胞的信号传导，为胰腺癌的精准治疗提供了新的策略。图片来源：ACS③化合物11n对PANC-1和AsPC-1细胞凋亡的影响实验结果显示，11n能够显著促进这两种细胞进入早期和晚期凋亡阶段，并且这种效果是剂量依赖的。在1.0 μM的浓度下，经过24小时处理后，PANC-1和AsPC-1细胞的总凋亡率分别达到了29.5%和31.3%。此外，Hoechst 33258染色实验观察到，11n处理后的细胞核呈现出明显的浓缩和染色增强现象，这进一步证实了细胞凋亡的发生。为了深入了解11n诱导凋亡的分子机制，作者通过Western blot实验检测了凋亡相关蛋白的表达变化。结果表明，11n显著上调了促凋亡蛋白cleaved caspase-3和Bax的表达，同时下调了抗凋亡蛋白Bcl-2和caspase-3的表达水平。这些变化表明11n能够激活细胞内的凋亡信号通路，从而有效地诱导PANC-1和AsPC-1细胞的凋亡。这一发现不仅揭示了11n的细胞毒性作用机制，还为其作为潜在的抗肿瘤药物提供了重要的实验依据。图片来源：ACS④化合物11n对PANC-1和AsPC-1细胞侵袭和转移能力的影响实验结果表明，11n能够显著抑制这两种细胞的侵袭能力，并且这种抑制作用是浓度依赖的。通过Transwell实验，作者观察到11n处理后的细胞侵袭能力明显降低。此外，在分子水平上，11n能够显著上调E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达，同时显著下调N-钙黏蛋白（N-cadherin）和波形蛋白（vimentin）的表达。这些蛋白是上皮-间质转化（EMT）的关键标志物，其表达变化与肿瘤细胞的侵袭和转移能力密切相关。免疫荧光实验进一步验证了11n处理后细胞中vimentin表达的下调。这些结果表明，11n通过调节EMT相关蛋白的表达，显著抑制了PANC-1和AsPC-1细胞的侵袭和转移能力，从而在体外实验中展现出良好的抗肿瘤转移潜力。图片来源：ACS⑤化合物11n在体内模型中对肿瘤生长的抑制作用研究中使用了PANC-1细胞建立的皮下异种移植瘤模型，通过给药实验评估了11n的抗肿瘤效果。实验结果显示，11n能够显著抑制肿瘤的生长，且这种抑制作用具有剂量依赖性。具体来说，11n以15 mg/kg和30 mg/kg的剂量给药时，肿瘤体积显著减小，其中30 mg/kg剂量组的肿瘤抑制率达到了75.16%。此外，11n在体内表现出良好的药代动力学特性，具有较长的半衰期（T1/2 = 1.19小时）和较高的血浆暴露量（AUC = 4158.65 ng·h/mL），能够有效维持药物浓度，从而发挥抗肿瘤作用。在实验过程中，11n的给药并未引起小鼠体重的显著变化，表明其具有较好的耐受性。组织学检查显示，11n处理的小鼠主要器官（如心、肝、脾、肺和肾）未出现明显的病理损伤，进一步证实了其在体内的安全性。此外，免疫组化分析显示，11n能够显著降低肿瘤组织中Ki-67和SHP2的表达水平，同时减少肿瘤细胞的侵袭能力。这些结果表明，化合物11n在体内模型中不仅能够有效抑制肿瘤生长，还具有良好的安全性和耐受性，为后续的药物开发和临床应用提供了有力的实验支持。图片来源：ACS总结KRAS G12D突变是胰腺导管腺癌（PDAC）的关键驱动因素之一，而SHP2作为一种重要的信号转导蛋白，被认为是治疗KRAS G12D突变PDAC的潜在靶点。然而，开发高效且特异性的SHP2抑制剂一直面临挑战。本研究基于自噬体靶向化合物（ATTEC）策略，设计并合成了一系列新型的SHP2降解剂。其中，化合物11n表现出显著的SHP2降解能力和抗肿瘤活性。研究结果表明，11n能够通过增强SHP2与自噬相关蛋白LC3之间的相互作用，有效诱导SHP2的溶酶体降解。在体外实验中，11n显著抑制了KRAS G12D突变癌细胞的增殖、侵袭和转移能力，并诱导细胞凋亡。在体内实验中，11n显著抑制了PDAC肿瘤的生长，且未引起明显的毒副作用。这些发现不仅证明了基于自噬机制的SHP2降解剂在治疗KRAS G12D突变PDAC中的潜力，还为开发新型抗肿瘤药物提供了重要的理论和实验依据。参考来源：https://doi.org/10.1021/acs.jmedchem.4c02682声明：发表/转载本文仅仅是出于传播信息的需要，并不意味着代表本公众号观点或证实其内容的真实性。据此内容作出的任何判断，后果自负。若有侵权，告知必删！长按关注本公众号   粉丝群/投稿/授权/广告等请联系公众号助手 觉得本文好看，请点这里↓

近日，中国国家药监局药品审评中心（CDE）官网最新公示，诺诚健华申报的1类新药卓乐替尼片上市申请获得受理。据诺诚健华称，这是该公司在研的第二代泛TRK抑制剂zurletrectinib（ICP-723）。这是一类“不限癌种”新药，本次申报上市的适应症为用于治疗携带NTRK融合基因的晚期实体瘤成人和青少年（12周岁≤年龄<18周岁）。卓乐替尼是新一代泛TRK抑制剂，其核心优势在于能够有效解决第一代TRK抑制剂（如拉罗替尼、恩曲替尼）的耐药性问题。根据诺诚健华2024年年报披露的关键注册性II期临床试验数据，该药在NTRK融合阳性晚期实体瘤患者中展现出卓越疗效，总缓解率（ORR）达85.5%，且部分患者缓解持续时间超过36个月。此外，卓乐替尼的脑渗透性和颅内活性显著优于同类药物，对存在脑转移的晚期实体瘤患者具有潜在治疗价值。研究显示，该药对野生型TRK及耐药突变型TRK（如TRKA G595R、TRKA G667C）均表现出强效抑制作用，为耐药患者提供了新的治疗选择。运营｜李木子声明：健识局原创内容，未经许可请勿转载体检越来越贵，客户年年减少，美年健康怎么办？卷出新高度！今年的第一批流感疫苗，4月已经上市了新规 | 国家启动整顿“神药”广告，严查宣称治愈绝症、近视