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1月25日，赶最早航班去北京参加肿瘤专家会，一下飞机就看到微信，惊悉孙燕院士仙逝，悲痛万分。在会场，很多专家都是孙院士的直接或间接学生，大家都心情沉重。在开场致辞中，大会主席，也是孙院士的学生和得力助手，石远凯教授和我分别缅怀和回忆孙院士生前往事及谆谆教诲，表达深切哀思。 第一次见孙院士是2005年的3月份，他在杭州参加一肺癌学术会议。那时，我们研发的产品盐酸埃克替尼（凯美纳）接近临床前研究的尾声，准备申请临床研究，需要临床专家的指导，其时，肺癌靶向治疗刚刚兴起。在中国抗癌协会的帮助下，组织了一个小范围的肺癌靶向治疗的专家研讨会，邀请孙燕院士等肺癌专家参加，到会的有沈镇宙、廖美琳、李春海、吴一龙、蒋国梁、陆舜等教授，都是中国肿瘤界的大咖，至今引领着中国的肿瘤学术界，特别是靶向药物的临床研究。会上专家们给我们提出了很多真知灼见，指导我们的临床研究计划。 2005年3月，孙燕院士在之江饭店出席专家咨询会 2006年6月，凯美纳获得临床批文，I期临床由协和医院张力和胡蓓教授负责，特聘孙燕院士为顾问。他给了很多悉心的指导，帮助解决在剂量爬坡、病人入组和研究过程中出现的一些具体问题，确保了早期临床的顺利推进。 2008年6月，孙燕院士在杭州参加专家咨询会，与贝达团队合影 2008年6月，我们在杭州召开凯美纳Ⅱ-Ⅲ期临床研究方案讨论会，孙燕院士亲临现场，带领其他专家研究讨论，最后形成了后来被业界高度评价的Ⅲ期研究方案，即凯美纳头对头对照易瑞沙的多中心双盲研究，在全球开了个先河。虽然，无论在财务上，还是技术上，对我们挑战和压力都非常大，但我们选择迎难而上。2009年1月8日，凯美纳Ⅲ期临床研究启动会在北京陕西大厦召开，孙院士亲自主持，解读临床研究方案，布置任务，特别强调研究质量。他领导全国27家研究中心，很快完成了400多例肺癌病人的入组。在专家们共同努力下，于2010年上半年顺利完成了这项Ⅲ期临床研究，而孙燕院士作为Ⅲ期临床研究的PI，起到了最关键和核心作用。 2010年5月，孙燕院士携多位专家召开凯美纳临床数据锁定会议 2010年5月1日，凯美纳临床研究数据锁定会在贝达举行，孙燕院士和多位专家一起，对凯美纳的临床试验数据确认锁定。随后按双盲研究的规定，对临床数据进行统计和汇总，并于2010年6月15日在中国医学科学院肿瘤医院孙燕院士办公室正式揭盲。记得他当时亲手揭开从CRO公司送来的凯美纳III期临床试验的盲底，定格了令人难忘的历史瞬间。结果显示，凯美纳的疗效与对照药相当且安全性更优，现场爆发无比激动与兴奋。当时，有个很自然的想法，该召开一个新闻发布会，让大家共享这个令人振奋的好消息。但最后，大家还是决定集中精力整理数据，加快新药证书的申报，早日让病人能用上这个创新药。 2011年7月，孙燕院士在世界肺癌大会报告凯美纳研究结果 在不久后的世界肺癌大会上，孙院士向国际同行正式报告这项临床研究结果，这是第一次中国专家在世界学术大会上口头报告中国创新药的数据，引来业界高度关注。孙院士曾回忆说，当时走廊上都站满了人，赢得领域专家的高度关注和评价。 2010年7月，我们向国家药监局正式递交了凯美纳上市申请。在一次会上，他专门向桑国卫副委员长汇报了凯美纳项目，大力推动了审批进程。至今，石远凯教授还清晰地记得，在2010年11月29日召开的CDE审评会上，孙燕院士亲自作PPT汇报，解读凯美纳临床研究数据。 2011年8月，孙燕院士出席凯美纳成果发布会 2011年6月7日，凯美纳正式获批上市，也迎来高光时刻。作为国家重大新药创制专项支持的第一个上市新药，也是中国第一个小分子靶向药，国家多部门联合，于2011年8月12日在北京人民大会堂举行凯美纳成果发布会。十一届全国人大常委会副委员长、国家重大新药创制专项技术总师桑国卫院士、时任国家卫生部部长的陈竺副委员长和时任国家重大新药专项办公室主任的何维副委员长等领导出席，孙燕院士和400多位领域专家、嘉宾参会，气氛热烈，成果获大家高度赞誉。5年后，也是在北京人民大会堂，凯美纳又迎来另一高光时刻。2016年1月8日，凯美纳荣获国家科技进步一等奖，孙燕院士和石远凯教授作为获奖者代表一起领取了这个大奖。 2016年1月，孙燕院士和贝达研发团队共同领奖 转眼，凯美纳上市已近15年，已让中国100万肺癌患者受益，累计销售200多亿，赠药市场价值过140亿，成为中国医药创新的标志性成果，而这些都离不开孙院士带领专家们的努力和付出。 2016年10月，在新落成的贝达药业总部园区，举办了院士专家医药创新论坛，孙燕院士与其他11位院士专家一道出席活动，再次为医药创新和行业发展把脉定向，建言献策。此后，在恩沙替尼和其他新药的研发和上市过程中，孙燕院士持续给予关心和鼓励，还在贝达设立院士专家工作站，指导和推动贝达的创新发展。 2016年10月，孙燕院士出席“院士专家论坛” 孙燕院士以学者的严谨、医者的仁心和长者的担当，深深影响了一代医药人。与他相识相知二十年，我们亦师亦友，他早已把我和创业伙伴印祥、芬来博士当作他的学生，不惜教诲。在孙燕院士等老一辈科学家的不懈努力和推动下，我国医药创新事业实现了历史性跨越，整体实力显著提升，已经迈入世界第二梯队行列。 孙燕院士毕生追求学术和事业，育人无数，桃李满天下。他寄望的中国创新药未来，正加速到来。贝达人将始终铭记孙燕院士的谆谆教诲与殷切期望，坚定走好创新发展道路，以更多高质量创新成果造福患者，不负时代，不负先贤。 斯人已逝，风范长存。孙燕院士，一路走好！ 丁列明携全体贝达员工哀念

核心脉络 教材以中心法则为“灵魂”，系统阐述了现代分子生物学关键技术如何从理论研究走向临床应用，深刻改变了人类对疾病的认识和诊治手段。第一部分：现代分子生物学关键技术 这部分是全书的技术基础，介绍了推动医学发展的核心实验手段。 核心技术：重组DNA与基因工程 基础：限制性核酸内切酶（分子手术刀，产生黏性或平末端）。 核心：基因克隆（将目的基因插入载体，导入宿主细胞进行无性繁殖）。 扩增：聚合酶链反应（PCR，体外快速、特异性扩增DNA）。 这些技术构成了分子生物学的基石，用于研究、诊断和生产生物制品。 关键分析与操作技术 核酸分子杂交：利用碱基互补原理，用标记的“探针”检测特定核酸序列（如Southern blot）。 DNA测序：Sanger法及其自动化发展，是解读遗传信息的基础。 基因打靶 (CRISPR/Cas9)：革命性的基因组编辑工具，可精准地进行基因敲除/敲入，为遗传病治疗和功能研究开辟新道路。 基因定位 (FISH)：用荧光标记探针直接在染色体上定位基因，用于遗传病诊断和肿瘤研究。 生物芯片：高通量、并行分析基因表达（如mRNA、SNP），用于疾病分型、预后和药物筛选。 基因表达调控新机制 RNA干扰 (RNAi)：由双链RNA（siRNA）介导的转录后基因沉默，是研究基因功能、抗病毒和抗肿瘤的强大工具。 非编码RNA：  微小RNA (miRNA)：内源性短链RNA，通过抑制翻译或降解mRNA来精细调控基因表达，与发育、癌症密切相关。 长链非编码RNA (lncRNA)：长度>200nt，通过多种机制（如表观遗传、转录调控）在更高层次调控基因表达，是疾病的新型生物标志物和潜在靶点。第二部分：分子生物学技术与临床医学的关系 这部分阐述了如何利用上述技术解决医学问题。 疾病机制研究：通过比较基因组、分析基因表达与突变，深入揭示肿瘤（如ras基因点突变、病毒整合）、细胞分化（如免疫球蛋白基因重排）等过程的分子本质。 基因诊断： 直接诊断：检测已知致病基因的突变（如点突变、缺失）。 间接诊断 (连锁分析)：利用与致病基因紧密连锁的遗传标记进行推测。 技术：包括Southern blot、PCR及其衍生技术（如PCR-ASO, SSCP），以及目前高效快速的全外显子组测序。 实例：α-地中海贫血的产前诊断。 基因治疗：将正常基因导入靶细胞，以纠正基因缺陷。早期使用逆转录病毒载体，现在CRISPR/Cas9技术提供了更精准的编辑手段。已应用于ADA缺乏症、血友病、肿瘤等。 基因工程药物与疫苗：利用基因工程大规模生产人体内微量、具有治疗作用的蛋白质（如胰岛素、干扰素、t-PA、EPO）和更安全的疫苗（如乙肝疫苗）。已发展到分子靶向药物（如双特异性抗体）阶段。第三部分：表观遗传学与临床 阐述了不改变DNA序列、但可遗传的基因表达调控机制及其临床意义。 主要机制： DNA甲基化：通常抑制基因转录。肿瘤中常出现全基因组低甲基化（癌基因激活）和特定抑癌基因的高甲基化（基因沉默）。 组蛋白修饰：乙酰化通常促进转录，去乙酰化抑制转录；甲基化作用复杂。这些修饰酶（如HATs, HDACs）的异常与肿瘤相关。 基因组印记：亲本来源的等位基因选择性表达。印记紊乱与发育异常、肿瘤（如Wilms瘤）和代谢综合征有关。 RNA干扰：也属于表观遗传调控范畴。 与疾病：表观遗传调控连接了环境与基因，在肿瘤（异常甲基化、组蛋白修饰）、心血管疾病（同型半胱氨酸代谢、ERα甲基化）、代谢综合征（如瘦素基因甲基化与肥胖）中起关键作用。 治疗靶点：DNA甲基转移酶抑制剂（如5-氮胞苷）和组蛋白去乙酰化酶抑制剂（如TSA）已用于某些癌症的治疗。第四部分：信号转导与临床 介绍了细胞内外信息传递的关键通路及其在疾病（尤其是癌症）中的作用和作为药物靶点的价值。 MAPK通路：包括ERK（促进增殖）、JNK和p38（应激、凋亡、炎症）。调控细胞命运，其异常激活与肿瘤发生、发展、转移密切相关。 PI3K/AKT通路：重要的细胞存活和生长信号通路。其过度激活（如PTEN缺失）常见于肿瘤，促进细胞存活、增殖和血管生成。 TGF-β通路：具有“双重人格”，在早期抑制肿瘤，在晚期却促进肿瘤的侵袭和转移。Smad蛋白是其关键介质。 Wnt/β-catenin通路：在胚胎发育和干细胞维持中关键。β-catenin的异常稳定和积累是结肠癌等多种肿瘤的核心事件。 NF-κB通路：核心的炎症和应激反应通路，参与免疫、炎症和细胞存活。其持续激活与慢性炎症性疾病和肿瘤密切相关。 GPCR通路：最大的膜受体家族，介导多种激素、神经递质的效应。是最重要的药物靶点家族（约45%的临床药物靶向GPCR）。 AMPK通路：细胞的“能量感受器”，在能量缺乏时激活，促进ATP生成，抑制消耗。是治疗代谢性疾病（如2型糖尿病、肥胖）的新兴靶点。 EGFR通路：典型的受体酪氨酸激酶，调控增殖和存活。在多种实体瘤中过表达或突变，是肿瘤靶向治疗的成功典范（如EGFR单抗、酪氨酸激酶抑制剂TKI）。第五部分：基因组测序与临床应用 代表了分子生物学技术发展的最新阶段和精准医疗的基石。 基本概念： 全基因组：全部DNA序列。 全外显子组：所有外显子区域（占基因组1-2%），包含约85%的疾病相关突变。 全转录组：特定条件下全部转录产物。 基因突变类型：SNV/SNP（点突变）、InDel（插入缺失）、CNV（拷贝数变异）、SV（结构变异）。 测序技术与应用： 全基因组重测序：与参考基因组比对，发现所有类型的变异。成本降低使其逐渐走向临床。 全外显子组/目标区域测序：通过杂交或多重PCR捕获目标序列后测序。深度更深、成本更低、效率更高，特别适合遗传病诊断和肿瘤基因突变谱分析，是目前临床转化的主流技术。 临床意义： 推动精准医疗：通过测序明确患者的基因突变谱，指导靶向药物选择（如肺癌的EGFR、ALK突变对应吉非替尼、克唑替尼）。 揭示肿瘤异质性与进化：帮助理解肿瘤耐药机制（如EGFR T790M突变）和克隆演化（如胰腺癌的“大爆炸”模型）。 挑战与未来：虽然靶向治疗取得成效，但肿瘤异质性和基因组动态变化仍是治愈的挑战，需要将测序数据与临床更紧密结合。总结 这篇教材清晰地勾勒出现代分子生物学的发展如何彻底重塑了医学： 从“发现”到“操作”：从理解DNA结构（中心法则）到发展出切割、复制、编辑基因的工具。 从“现象”到“本质”：从描述疾病症状到在基因、表观遗传和信号通路层面揭示其根本机制。 从“通用”到“精准”：从“一刀切”的治疗模式，发展到基于个体基因组信息的诊断（基因诊断）和治疗（靶向药物、基因治疗）。 从“单一”到“网络”：认识到疾病是多基因、多通路构成的复杂网络失调的结果。 分子生物学已成为现代医学不可分割的核心基础，持续推动着医学向更精准、更有效、更个性化的方向发展。 副主任医师水平《分子生物学基础与临床》高级职称模拟试卷 （总分：100分， 考试时间：120分钟）一、 单选题（每题1分，共10题，共10分） 主要考察基础理论、指南共识、疾病诊断标准。 遗传信息传递的“中心法则”是现代分子生物学的灵魂，其核心内容是：A. DNA复制、RNA转录、蛋白质翻译B. RNA可以逆转录为DNA，蛋白质可以指导DNA合成C. 表观遗传信息可以独立于DNA序列进行传递D. 基因表达受非编码RNA和信号通路的精细调控答案：A解析： 中心法则由Crick提出，其最经典和核心的内容是遗传信息从DNA（复制）流向RNA（转录），再从RNA流向蛋白质（翻译），以及DNA的自我复制。选项B描述的是中心法则的补充（逆转录和朊病毒假说），但不是核心。C和D描述的是基因表达的调控机制，属于中心法则的延伸和应用，而非法则本身。 在重组DNA技术中，能够识别特定DNA序列并在其内部进行切割，产生黏性或平末端的工具酶是：A. DNA连接酶B. 限制性核酸内切酶C. 逆转录酶D. DNA聚合酶答案：B解析： 限制性核酸内切酶是基因工程的“分子手术刀”，能特异性地识别并切割双链DNA，产生黏性末端或平末端。DNA连接酶用于连接DNA片段（A错）。逆转录酶以RNA为模板合成DNA（C错）。DNA聚合酶催化DNA的合成（D错）。 下列哪项是聚合酶链反应（PCR）技术能够特异性扩增目标DNA片段的最关键因素？A. 使用耐热的Taq DNA聚合酶B. 循环进行变性、退火、延伸三个步骤C. 使用一对与模板DNA两端互补的特异性引物D. 反应体系中包含四种dNTP答案：C解析： PCR的特异性主要由引物决定。一对特异性引物能够准确识别并结合到目标DNA片段的两侧，从而限定扩增区域。耐热聚合酶（A）保证了反应的连续性，三个步骤的循环（B）实现了指数扩增，dNTP（D）是合成原料，它们都是必要条件，但决定“扩增什么”的是引物。 CRISPR/Cas9基因编辑技术中，负责引导Cas9蛋白到达基因组特定靶位点的核心组分是：A. TracrRNAB. CrRNAC. 单链向导RNA (sgRNA)D. PAM序列答案：C解析： 在简化后的CRISPR/Cas9系统中，将tracrRNA和crRNA融合成一条单链向导RNA (sgRNA)。sgRNA既包含与靶DNA互补的序列（引导功能），也包含与Cas9蛋白结合的结构，是靶向特异性的直接决定者。PAM序列是Cas9识别并切割所必需的邻近基序，存在于基因组DNA上，并非Cas9系统的组分。 荧光原位杂交（FISH）技术在临床肿瘤诊断中的主要优势在于：A. 能够检测单个碱基的突变B. 能够定量检测基因的表达水平C. 能够在细胞水平直接观察染色体的结构异常和基因定位D. 能够高通量地筛查全基因组的单核苷酸多态性（SNP）答案：C解析： FISH是一种细胞遗传学技术，使用荧光标记的DNA探针与染色体上的互补序列杂交，可在显微镜下直接观察基因缺失、扩增、易位等染色体结构异常及其在染色体上的位置。它不擅长检测点突变（A错，那是测序或ASO的功能），也不是主要用于定量mRNA（B错，那是qPCR或芯片的功能）或高通量SNP筛查（D错，那是基因芯片的功能）。 目前临床诊断单基因遗传病最常用且高效的分子生物学技术是：A. Southern印迹杂交B. 聚合酶链反应-等位基因特异性寡核苷酸杂交（PCR-ASO）C. 全外显子组测序D. 单链构象多态性分析（PCR-SSCP）答案：C解析： 全外显子组测序能够一次性对个体基因组中所有蛋白质编码区域（外显子）进行测序，高效、全面地检测致病突变，尤其适用于临床表型复杂、致病基因未知或候选基因众多的单基因遗传病诊断，已成为一线诊断工具。A、B、D等技术多用于已知突变位点的检测或科研筛查，通量和效率不及外显子组测序。 在肿瘤的表观遗传学改变中，通常与抑癌基因失活（沉默）相关的是：A. 基因组整体DNA低甲基化B. 抑癌基因启动子区CpG岛的高甲基化C. 组蛋白的广泛乙酰化D. 微小RNA（miRNA）的表达上调答案：B解析： 抑癌基因启动子区域的CpG岛发生高甲基化，会阻碍转录因子结合，招募抑制性复合物，导致该基因转录沉默，这是肿瘤中抑癌基因失活的重要机制。基因组整体低甲基化（A）常导致基因组不稳定和癌基因激活。组蛋白乙酰化（C）通常与基因激活相关。miRNA表达上调（D）可能靶向抑制抑癌基因的mRNA，但这不是DNA水平的表观遗传沉默。 在非小细胞肺癌的靶向治疗中，检测到EGFR基因第19号外显子缺失或第21号外显子L858R点突变，预示着患者对下列哪类药物可能具有良好疗效？A. 抗血管生成药物（如贝伐珠单抗）B. ALK抑制剂（如克唑替尼）C. EGFR酪氨酸激酶抑制剂（如吉非替尼、厄洛替尼）D. 免疫检查点抑制剂（如帕博利珠单抗）答案：C解析： EGFR基因的敏感突变（如19-del， L858R）会导致EGFR蛋白持续活化，促进肿瘤生长。EGFR-TKI类药物（吉非替尼等）可竞争性抑制ATP与EGFR酪氨酸激酶域的结合，从而阻断下游信号通路，对这些突变患者疗效显著。其他选项针对的是不同的靶点或机制。 G蛋白偶联受体（GPCR）信号通路在人体内功能广泛，同时也是最重要的药物靶点家族。其受体结构最典型的特征是：A. 具有细胞内酪氨酸激酶活性结构域B. 由单个跨膜α螺旋构成C. 具有7次跨膜α螺旋结构D. 与配体结合后形成同源或异源二聚体答案：C解析： GPCR最显著的结构特征是具有7个跨膜的α螺旋区段，因此也被称为七次跨膜受体。这是其与具有单个跨膜结构（B错）的受体或具有细胞内激酶域（A错，如受体酪氨酸激酶）的受体相区别的关键。二聚化（D）是许多受体（包括一些GPCR）激活的常见方式，但非其最典型的定义性结构特征。 AMPK（AMP激活的蛋白激酶）作为细胞的“能量感受器”，其活性的直接激活信号是：A. 细胞内ATP水平升高B. 细胞内AMP/ATP比值升高C. 胰岛素信号通路激活D. 生长因子信号通路激活答案：B解析： AMPK能够感知细胞的能量状态。当细胞处于应激状态（如缺氧、葡萄糖缺乏）时，ATP消耗增加，AMP生成增多，导致AMP/ATP比值显著升高。AMP通过与AMPK的γ亚基结合，变构激活AMPK，并促进其被上游激酶磷酸化，从而开启分解代谢、关闭合成代谢以恢复能量平衡。A、C、D情况通常与能量充足相关，会抑制或与AMPK激活无关。二、 多选题（每题2分，共10题，共20分） 难度高于单选，侧重疾病鉴别诊断、并发症、治疗方案的综合选择等核心知识点。 关于RNA干扰（RNAi）技术及其在医学中的应用，下列描述正确的有：A. RNAi是由双链RNA（dsRNA）触发的转录后基因沉默现象B. siRNA与RISC复合物结合，通过碱基互补配对引导切割靶mRNAC. miRNA是内源性短链非编码RNA，主要通过完全互补配对抑制靶mRNA翻译或促使其降解D. RNAi技术已成功用于研发治疗黄斑变性的靶向VEGF的药物E. RNAi技术目前没有任何局限性，已广泛应用于临床各种疾病的治疗答案：A, B, D解析： A、B是RNAi作用机制的核心正确描述。C错误在于，miRNA通常通过不完全互补配对（尤其是“种子区”）结合靶mRNA的3‘-UTR，主要抑制翻译，在高度互补时也可导致mRNA降解。D正确，例如FDA已批准siRNA药物用于治疗某些类型的黄斑变性。E错误，RNAi技术虽前景广阔，但面临体内递送效率、脱靶效应、稳定性、免疫原性等挑战，其临床应用仍有限。 全外显子组测序（WES）在临床诊断中具有重要价值，其相对于全基因组测序（WGS）的优势包括：A. 测序成本显著降低B. 对编码区域的覆盖深度更深，数据质量更高C. 能够检测所有的非编码区调控序列变异D. 能够检测拷贝数变异（CNV）和结构变异（SV）E. 适用于绝大多数（约85%）由DNA编码区变异引起的孟德尔遗传病答案：A, B, E解析： WES仅针对占基因组1-2%的外显子区域，因此成本远低于WGS（A对），且可用相同成本获得更深的覆盖深度，有利于发现罕见变异（B对）。约85%的致病突变位于外显子区，因此WES对多数单基因病诊断效率高（E对）。WES的局限性在于无法检测非编码区变异（C错），对部分CNV/SV的检测能力也不如WGS（D错，但需注意，通过生物信息学分析，WES数据也能推断出部分大的CNV）。 下列信号通路中，其异常激活已被证实与多种肿瘤的发生、发展、侵袭转移密切相关的有：A. Ras/Raf/MEK/ERK通路B. PI3K/AKT/mTOR通路C. Wnt/β-catenin通路D. TGF-β/Smad通路（在肿瘤晚期）E. NF-κB通路答案：A, B, C, D, E解析： 所有选项均为教材中重点阐述的与肿瘤密切相关的信号通路。A（MAPK通路）促进细胞增殖；B促进细胞存活和代谢；C与干细胞特性、增殖相关，β-catenin异常积累常见于结肠癌等；D具有“双重角色”，在肿瘤晚期可促进上皮-间质转化（EMT）和转移；E与炎症、细胞存活和增殖相关，其持续激活促进肿瘤发生和发展。 关于基因诊断，下列陈述正确的有：A. 直接基因诊断适用于致病基因和突变类型已知的疾病B. 间接基因诊断（连锁分析）需要完整的家系样本和合适的遗传标记C. 聚合酶链反应（PCR）技术因其高灵敏度，可用于微量标本（如单细胞、血痕）的基因分析D. 对于血红蛋白病（如α-地中海贫血）的产前诊断，可采用基于限制性片段长度多态性（RFLP）的Southern印迹杂交E. 基因诊断只能用于遗传病，不能用于感染性疾病和肿瘤答案：A, B, C, D解析： A、B是基因诊断两种基本策略的正确描述。C正确，PCR的高度敏感性是其核心优势之一。D正确，教材中以α-地中海贫血为例说明了RFLP结合Southern杂交的应用。E错误，基因诊断已广泛应用于感染性疾病病原体检测（如HPV、HBV分型）和肿瘤的分子分型、预后判断及靶向药物伴随诊断。 CRISPR/Cas9技术在疾病治疗中的应用前景广阔，目前已在以下哪些方面取得临床研究进展？A. 在患者来源的诱导多能干细胞（iPSC）中修复杜氏肌营养不良（DMD）相关基因B. 在体细胞中对β-地中海贫血相关基因HBB进行编辑C. 用于敲除艾滋病患者细胞中的HIV病毒基因组D. 已作为常规疗法广泛应用于各种遗传病的新生儿治疗E. 在CAR-T（嵌合抗原受体 T 细胞免疫疗法）细胞治疗中，用于敲除免疫检查点基因以增强抗肿瘤活性答案：A, B, C, E解析： A、B是教材中明确列举的临床前/临床研究范例。C是当前热点研究领域，旨在实现HIV的功能性治愈。E是肿瘤免疫治疗中的一个重要探索方向，利用CRISPR编辑T细胞。D错误，CRISPR/Cas9基因治疗仍处于临床试验和早期研究阶段，远未达到“常规广泛应用”的程度，且涉及重大的伦理和安全考量。 DNA甲基化作为一种重要的表观遗传修饰，其异常与多种疾病相关。下列描述正确的有：A. 肿瘤细胞常表现为全基因组范围的DNA低甲基化和特定抑癌基因启动子的高甲基化B. DNA甲基转移酶（DNMT）抑制剂（如5-氮胞苷）可通过去甲基化重新激活沉默的抑癌基因C. 同型半胱氨酸（Hcy）水平升高会干扰甲基化供体代谢，与动脉粥样硬化相关D. 基因组印记现象与DNA甲基化无关E. 叶酸和维生素B12缺乏可影响甲基化代谢，可能导致发育异常答案：A, B, C, E解析： A是肿瘤表观遗传的经典“双向性”特征。B是DNMT抑制剂的作用机制和应用。C、E阐述了营养代谢（叶酸/B12/Hcy循环）与DNA甲基化及疾病（心血管、发育）的关系，教材中有明确论述。D错误，基因组印记的建立和维持高度依赖于DNA甲基化。 在非小细胞肺癌（NSCLC）的精准医疗实践中，分子病理检测对于指导靶向治疗至关重要。需要常规检测的驱动基因包括：A. EGFRB. KRASC. ALKD. ROS1E. BRAF答案：A, B, C, D, E解析： 根据国内外非小细胞肺癌诊疗指南（如NCCN、CSCO），上述基因均为重要的驱动基因，其突变或融合状态直接影响一线及后线靶向药物的选择。例如，EGFR敏感突变用EGFR-TKI；KRAS G12C突变有对应抑制剂；ALK/ROS1融合用相应TKI；BRAF V600E突变可用BRAF抑制剂联合MEK抑制剂。 关于长链非编码RNA（lncRNA），下列哪些说法是正确的？A. 其长度通常大于200个核苷酸，缺乏蛋白质编码能力B. 可位于细胞核或细胞质中，通过多种机制调控基因表达C. HOTAIR、ANRIL等lncRNA的异常表达与多种癌症的不良预后相关D. lncRNA的作用具有高度特异性，一个lncRNA只调控一个靶基因E. BACE1-AS作为APP基因的反义lncRNA，与阿尔茨海默病的病理过程有关答案：A, B, C, E解析： A、B是lncRNA的基本定义和特性。C、E是教材中列举的lncRNA与疾病（癌症、AD）相关的具体实例。D错误，lncRNA的作用机制复杂，一个lncRNA可以通过作为“支架”、“诱饵”、“引导”等角色，参与调控多个基因的表达或影响多条信号通路，并非“一对一”的关系。 下列哪些技术属于高通量生物信息获取技术，能够一次性分析成千上万个基因？A. 基因芯片（DNA microarray）B. 全外显子组测序（WES）C. 荧光原位杂交（FISH）D. 实时定量PCR（qPCR）E. 下一代测序（NGS）技术答案：A, B, E解析： 基因芯片（A）可同时检测数万至数十万探针点的杂交信号，用于表达谱或SNP分析。WES（B）和基于NGS平台的其他测序（E）是典型的高通量测序技术。FISH（C）一次通常只针对少数几个基因位点进行检测，是“低通量”的细胞遗传学技术。qPCR（D）虽然通量高于普通PCR（可做多重），但通常一次反应检测的靶基因数量有限（通常<10），不属于高通量技术。 PI3K/AKT信号通路的过度激活可促进肿瘤发生，其机制包括：A. 磷酸化并失活促凋亡蛋白BAD，抑制细胞凋亡B. 磷酸化并抑制GSK-3β，稳定cyclin D1和β-catenin，促进细胞周期进程C. 磷酸化mTOR，促进蛋白质合成和细胞生长D. 磷酸化并促进p21和p27的降解，解除其对CDK的抑制E. 该通路的负调控因子PTEN的缺失或失活是常见的激活原因答案：A, B, C, D, E解析： 本题全面考察PI3K/AKT通路促进肿瘤生长的下游机制。A是抗凋亡机制；B、D是促进细胞周期进展的机制（B通过稳定周期蛋白，D通过解除周期蛋白依赖性激酶抑制因子）；C是促进合成代谢的机制；E是该通路最重要的上游负调控机制，PTEN作为脂质磷酸酶，可降解PIP3，其功能缺失导致通路持续激活。三、 共用题干单选题（A3/A4型题）（每题2分，共5个题干，每个题干3-4问，共15问，30分） 以临床真实病例为题干，考察从病史采集、体格检查、辅助检查到诊断、治疗、预后的全流程思维。 【题干一】（21-23题）患者，男性，45岁，因“咳嗽、咳痰伴痰中带血2个月”入院。吸烟史20年。胸部CT示右肺上叶近肺门处占位性病变，伴纵隔淋巴结肿大。支气管镜活检病理提示：中分化肺腺癌。 为进一步明确分子分型以指导精准治疗，首选的分子病理检测项目是：A. 免疫组化检测PD-L1表达B. 下一代测序（NGS）检测肺癌相关驱动基因 panel（包括EGFR， ALK， ROS1， KRAS， BRAF等）C. PCR法单独检测EGFR基因突变D. FISH检测ALK基因重排答案：B解析： 对于新诊断的晚期肺腺癌，国内外指南推荐尽可能进行多基因的并行检测。NGS panel能够一次性、高效地检测所有关键驱动基因的突变、融合、扩增等多种变异形式，是当前最优选的初诊检测策略。单独检测某个基因（C、D）效率低，可能延误治疗。PD-L1检测（A）主要用于指导免疫治疗，应在驱动基因阴性或后续治疗中考虑。 若NGS检测结果显示存在EGFR基因第19号外显子缺失突变，且PD-L1表达为低水平（TPS<1%）。该患者的一线治疗首选方案是：A. 含铂双药化疗B. 帕博利珠单抗（抗PD-1）单药免疫治疗C. 吉非替尼或厄洛替尼（EGFR-TKI）靶向治疗D. 化疗联合免疫治疗答案：C解析： 对于存在EGFR敏感突变（19-del， L858R）的晚期NSCLC患者，一线标准治疗是EGFR-TKI类靶向药物（如吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、奥希替尼等），其疗效和生存获益显著优于传统化疗。PD-L1低表达且存在明确驱动基因突变时，不首选免疫单药（B）或化疗联合免疫（D）。 该患者接受一线EGFR-TKI治疗10个月后出现疾病进展。此时，最重要的下一步分子检测是：A. 重新检测原EGFR突变类型B. 检测血液或肿瘤组织中的EGFR T790M突变C. 扩大NGS panel检测其他可能的耐药突变（如MET扩增， HER2突变等）D. 再次检测PD-L1表达答案：B解析： 使用一代/二代EGFR-TKI（如吉非替尼、厄洛替尼）治疗后耐药，约50-60%的患者是由于出现了EGFR T790M突变。检测T790M突变对于后续治疗选择至关重要：阳性者可换用三代TKI奥希替尼，能取得良好疗效。因此，在TKI耐药后，检测T790M是标准且关键的步骤。虽然C（扩大检测）也有价值，但临床实践中通常先进行T790M这一最经典、最高发耐药机制的检测。 【题干二】（24-26题）一对夫妇，表型正常，生育过一个患有“重型β-地中海贫血”的男孩。现妻子再次怀孕，孕18周。 为进行产前诊断，首先应对先证者（患病男孩）进行的分子遗传学检查是：A. 染色体核型分析B. 用PCR结合反向点杂交或测序法，检测β-珠蛋白基因（HBB）的突变类型C. 用Southern印迹杂交检测HBB基因的大片段缺失D. 用基因芯片进行全基因组拷贝数变异（CNV）分析答案：B解析： β-地中海贫血绝大多数由HBB基因的点突变或小片段插入缺失引起。因此，首先应通过PCR结合测序或特异性探针杂交等方法，明确先证者的具体突变位点。这是进行后续父母携带者验证和胎儿产前诊断的前提。大片段缺失（C）在β-地贫中罕见。染色体分析（A）和基因组CNV芯片（D）主要用于检测染色体病和大片段拷贝数变异，不是β-地贫的首选诊断方法。 经检测，先证者为HBB基因CD41-42（-CTTT）纯合突变。对其父母进行验证，最可能的结果是：A. 父母均为该突变的杂合子B. 父母一方为该突变的杂合子，另一方正常C. 父母一方为该突变的纯合子，另一方正常D. 父母中有一人为该突变的杂合子，另一人突变类型不同答案：A解析： 患儿为常染色体隐性遗传病的纯合患者，其表型正常的父母必然是各自带有一个致病等位基因的杂合子（携带者）。在β-地贫高发区，父母携带相同突变类型的情况很常见。 获取胎儿标本进行产前诊断的最佳方法是：A. 孕早期绒毛穿刺取样（CVS）B. 孕中期羊膜腔穿刺术C. 孕晚期脐带血穿刺D. 无创产前检测（NIPT）答案：B解析： 孕18周属于孕中期，此时进行羊膜腔穿刺获取羊水细胞是产前诊断单基因病的经典、安全且可靠的方法。CVS（A）通常在孕早期（11-13周）进行。脐血穿刺（C）主要用于孕晚期、快速核型分析或某些血液病诊断。NIPT（D）目前主要用于染色体非整倍体筛查，对单基因病的检测应用有限且需先证者信息，并非本例首选的确诊方法。 【题干三】（27-29题）患者，女性，38岁，因“进行性肌无力、肌肉萎缩2年”就诊。神经系统检查提示四肢近端肌力减退，肌电图符合肌源性损害。血清肌酸激酶显著升高。有家族史，其哥哥有类似症状。 为明确遗传性肌病的诊断，下列检查中效率最高的是：A. 肌肉活检进行组织病理和免疫组化染色B. 一代Sanger测序逐一排查已知的肌病相关基因C. 采用目标基因捕获 panel 进行高通量测序（涵盖数百个神经肌肉病相关基因）D. 全基因组测序（WGS）答案：C解析： 遗传性肌病具有高度的遗传异质性，涉及基因众多。目标基因捕获 panel测序可以一次性分析所有已知的相关基因，是目前诊断这类疾病最有效、性价比最高的首选分子诊断方法。肌肉活检（A）有创，且只能提供线索，不能最终确定基因诊断。一代测序（B）通量太低，不适合作为初筛。WGS（D）成本高，数据分析复杂，且对非编码区变异的解读困难，通常不作为一线诊断手段。 若基因检测发现DMD基因（编码抗肌萎缩蛋白）存在大片段外显子缺失，导致阅读框破坏，最可能的诊断是：A. 肢带型肌营养不良2型（LGMD2）B. 面肩肱型肌营养不良（FSHD）C. 杜氏肌营养不良（DMD）D. 强直性肌营养不良1型（DM1）答案：C解析： DMD基因突变是杜氏肌营养不良（DMD）和贝氏肌营养不良（BMD）的病因。大片段缺失导致阅读框破坏，通常产生截短的无功能蛋白，表型更重，符合DMD的诊断。如果缺失保持阅读框，则可能为表型较轻的BMD。 随着CRISPR/Cas9等基因编辑技术的发展，针对此类单基因遗传病的新兴治疗策略可能包括：A. 使用腺相关病毒（AAV）载体递送CRISPR系统，在体内肌肉细胞中修复DMD基因突变B. 使用CRISPR技术敲除肌肉细胞中的肌生长抑制素（MSTN）基因，促进肌肉肥大C. 将患者成纤维细胞重编程为iPSC，在体外用CRISPR修复突变后，再分化为肌肉前体细胞回输D. 以上所有策略均是目前有潜力的研究方向答案：D解析： A是直接的体内基因治疗策略，是当前DMD基因治疗的热点。B是一种功能性治疗策略，通过解除肌肉生长抑制来代偿肌营养不良表型，也在研究中。C是基于细胞的离体基因治疗策略，具有个性化治疗的潜力。这三种策略在教材提及的DMD修复研究背景下，都属于有前景的探索方向。 【题干四】（30-32题）患者，男性，60岁，因“腹痛、黄疸、消瘦3个月”入院。腹部CT提示胰头部肿块。血清CA19-9显著升高。行超声内镜引导下细针穿刺活检，病理确诊为胰腺导管腺癌。 考虑到胰腺癌的高度异质性和不良预后，为指导潜在的治疗和预后评估，除常规病理外，还应考虑：A. 检测肿瘤组织的DNA错配修复（MMR）蛋白表达或微卫星不稳定性（MSI）B. 进行肿瘤组织的二代测序（NGS），寻找可靶向的驱动突变（如KRAS， TP53， CDKN2A， SMAD4等）C. 检测循环肿瘤DNA（ctDNA），用于监测治疗反应和早期发现耐药D. 以上都是答案：D解析： 现代肿瘤诊疗强调分子分型。A：MSI-H/dMMR状态可预测免疫治疗疗效，是重要的生物标志物。B：虽然胰腺癌靶向药物有限，但NGS可揭示分子特征（如KRAS G12C新药），了解SMAD4等基因状态也有预后意义，且有助于临床试验入组。C：ctDNA是“液体活检”的核心，对于监测胰腺癌这种难以反复穿刺的肿瘤尤其有价值。因此，综合性的分子检测（D）对患者的管理至关重要。 若NGS检测结果显示KRAS基因第12号密码子存在G12D突变，而其他可靶向突变均为阴性。目前针对此突变最直接的治疗策略是：A. 使用针对KRAS G12D的特异性小分子抑制剂（如MRTX1133等，尚在临床试验阶段）B. 使用上游EGFR抑制剂（如西妥昔单抗）C. 使用下游MEK抑制剂（如曲美替尼）D. 该突变目前尚无FDA批准的靶向药物，治疗以化疗为主答案：D解析： KRAS突变曾被认为是“不可成药”靶点。尽管针对特定KRAS G12C突变的口服抑制剂已获批（用于肺癌、肠癌），但针对最常见的G12D突变的特异性抑制剂（如A选项所言）大多仍处于临床前或早期临床试验阶段，尚未成为标准治疗。西妥昔单抗（B）在结直肠癌中对KRAS野生型有效，对突变型无效。MEK抑制剂（C）单药疗效有限。因此，当前标准治疗仍以化疗（如FOLFIRINOX或吉西他滨+白蛋白紫杉醇）为核心。 该患者在接受化疗期间，利用ctDNA监测发现了新出现的KRAS G12D突变等位基因频率（AF）进行性升高，而影像学评估仍为稳定（SD）。这最可能提示：A. 治疗无效，应立即更换方案B. 发生了继发性耐药，肿瘤克隆正在演变，预示即将出现影像学进展C. ctDNA检测不准确，应以影像学为准D. 化疗起到了良好的杀伤作用，释放了肿瘤DNA答案：B解析： ctDNA动态变化可比影像学提前数周至数月预测治疗反应和疾病进展。在治疗过程中，ctDNA中驱动突变AF的持续升高，通常提示存在对当前治疗耐药的肿瘤克隆扩增，是疾病分子水平进展的标志，往往预示着后续的影像学进展。这为早期干预和调整治疗策略提供了宝贵的时间窗口。 【题干五】（33-35题）患者，女性，28岁，因“反复自发性流产3次”就诊于生殖遗传门诊。夫妇双方染色体核型分析均正常。 为进一步寻找复发性流产的遗传学病因，下一步最合理的检查是：A. 对夫妇双方进行全外显子组测序（WES）B. 对流产绒毛组织进行染色体微阵列分析（CMA）C. 对女方进行凝血功能、免疫学等非遗传因素检查D. 对夫妇双方进行地中海贫血基因筛查答案：B解析： 在夫妇染色体正常的情况下，早期复发性流产最常见的原因是胚胎染色体非整倍体或拷贝数变异。对流产的胚胎/绒毛组织进行CMA（一种高分辨率的CNV检测芯片），可以直接明确该次流产是否由胎儿的染色体异常引起，是病因诊断的关键一步。WES（A）主要用于单基因病诊断，在复发性流产中并非首选。C是必要的，但本题问的是“遗传学病因”。D针对特定单基因病，与本题情景不符。 若对第三次流产的绒毛组织CMA检测结果为“arr[hg19] 22q11.21(18, 879, 855-21， 445, 775)x1”， 提示22号染色体q11.21区域存在约2.57Mb的缺失。该结果最可能对应的临床综合征是：A. 唐氏综合征（21三体）B. DiGeorge综合征/22q11.2缺失综合征C. 特纳综合征（45， X）D. 爱德华兹综合征（18三体）答案：B解析： 22q11.2区域（DiGeorge临界区）的微缺失是DiGeorge综合征/腭心面综合征的分子病因，是导致复发性流产、先天性心脏病、免疫缺陷、腭裂等表现的常见基因组疾病。CMA报告的“x1”表示单倍体剂量不足，即缺失。 针对这一检测结果，对这对夫妇的遗传咨询内容应包括：A. 该缺失为新发（de novo）突变的可能性大，但需验证父母来源以评估再发风险B. 如果缺失来自表型正常的父母一方，则再发风险为50%C. 下次妊娠时，必须进行产前诊断（如羊水CMA）以确认胎儿是否携带该缺失D. 以上全部答案：D解析： 正确的遗传咨询应包括：解释变异性质（A），确定其来源（父母验证）并据此评估再发风险（B：如果父母一方是携带者，则为常染色体显性遗传，子代风险50%），并提供具体的产前干预建议（C）。因此D包含了所有核心咨询要点。四、 案例分析题（每题5分，共4题，共40分） 题干为复杂疑难病例，问题涵盖诊断、鉴别诊断、检查项目选择、治疗原则、病情监测要点、预后评估等。 【案例一】患者，男性，52岁，因“乏力、腹胀、皮肤巩膜黄染1个月”入院。有慢性乙型肝炎病史20年。查体：肝掌、蜘蛛痣，腹部移动性浊音阳性。实验室检查：ALT 150 U/L， AST 180 U/L， TBil 85 μmol/L， Alb 28 g/L， AFP >1000 ng/mL。腹部B超及增强CT提示：肝硬化，肝右叶巨大占位（直径8cm），门静脉癌栓形成。 请列出该患者可能的诊断及诊断依据。 为明确肝癌的分子特征并寻找潜在的靶向治疗机会，应优先进行哪些分子病理检测？为什么？ 若分子检测未发现明确的靶向驱动基因突变，后续的系统性治疗策略有哪些？请说明选择依据。 答案与解析： 诊断： 原发性肝细胞癌（HCC）， IIIa期（BCLC分期）或 T3N0M0（TNM分期）。依据：慢性乙肝病史（高危因素）；典型症状体征（黄疸、腹水、肝掌蜘蛛痣）；AFP显著升高；影像学显示肝硬化背景下的肝脏占位并侵犯门静脉。 乙型肝炎肝硬化失代偿期。依据：慢性乙肝病史，出现腹水、低白蛋白血症等门脉高压和肝功能减退表现。 慢性乙型病毒性肝炎活动期。依据：ALT/AST升高。 优先分子病理检测及原因： 原因：①寻找靶向治疗机会：检测TSC1/TSC2、FGF19扩增等可能与mTOR抑制剂（依维莫司）或FGFR抑制剂敏感的变异；检测VEGF高表达相关特征，为抗血管生成药物（索拉非尼、仑伐替尼等）提供理论依据。②了解突变谱：TP53、CTNNB1（β-catenin）、AXIN1等突变在HCC中常见，具有预后意义。③探索免疫治疗生物标志物：如肿瘤突变负荷（TMB）、MSI状态等，尽管在HCC中阳性率不高。 甲胎蛋白异质体（AFP-L3）和异常凝血酶原（PIVKA-II/DCP）：作为HCC更特异的血清学标志物，辅助诊断和监测。 肿瘤组织二代测序（NGS）： PD-L1免疫组化检测：评估肿瘤免疫微环境，为考虑免疫检查点抑制剂（如阿替利珠单抗、信迪利单抗等）提供参考。 系统性治疗策略及依据： 一线治疗：  阿替利珠单抗（抗PD-L1）联合贝伐珠单抗（抗VEGF）：依据IMbrave150研究，该方案在不可切除HCC中疗效和生存期显著优于索拉非尼，已成为一线标准治疗（如果患者无相关禁忌症如活动性出血、严重高血压等）。 仑伐替尼：一种多靶点TKI（抑制VEGFR， FGFR， PDGFR等），疗效非劣于索拉非尼，尤其对亚洲患者、乙肝相关肝癌效果较好。 多纳非尼：我国自主研发的新型多靶点TKI，在ZGDH3研究中显示优于索拉非尼。 索拉非尼：传统的一线标准靶向药，在上述新方案不可用时仍可选择。 选择依据：该患者为晚期（门静脉癌栓），已无手术或局部治疗指征。治疗决策需综合肝功能（Child-Pugh分级）、体力状况（ECOG评分）、经济因素及药物可及性。目前“免疫+抗血管”联合治疗是优选。若无免疫治疗条件，则选择TKI单药。 二线治疗：若一线TKI治疗失败，可考虑换用另一种TKI（如瑞戈非尼、卡博替尼）或免疫单药/联合治疗。 抗病毒治疗：贯穿始终，必须使用强效低耐药的核苷（酸）类药物（如恩替卡韦、替诺福韦）持续抑制HBV复制，以防肝炎活动和肝癌复发。 【案例二】患者，女性，35岁，因“发现双侧乳房肿块1周”就诊。无疼痛。查体：双乳可触及多个质韧、边界不清的肿块，最大约2cm，腋下未触及明显肿大淋巴结。母亲有乳腺癌病史。乳腺钼靶提示双乳多发致密影，BI-RADS 4B类。 针对该患者强烈的家族史和多发病灶，首选的定性诊断方法是什么？为进一步评估遗传风险，应建议进行什么基因检测？ 若穿刺活检病理为“浸润性导管癌”，且BRCA1基因检测发现致病性胚系突变。请阐述该突变对患者治疗方案选择的指导意义。 请为该患者制定一个综合性的治疗和管理计划（包括局部治疗、全身治疗、降低对侧风险及随访）。 答案与解析： 诊断方法与基因检测建议： 定性诊断方法：超声引导下空芯针穿刺活检（CNB）。因其可对多发、深在病灶进行精准取材，获得组织学诊断，是首选的微创诊断方法。 遗传风险评估基因检测：应建议进行乳腺癌/卵巢癌易感基因的胚系突变检测，重点包括BRCA1， BRCA2， 根据家族史情况可扩展至PALB2， TP53， PTEN， CDH1等其他中高风险基因。采用多基因panel进行NGS检测是高效的选择。 BRCA1胚系突变的治疗指导意义： 全身治疗：  铂类化疗敏感性：BRCA1/2突变导致同源重组修复缺陷（HRD），肿瘤对引起DNA双链断裂的药物（如铂类、PARP抑制剂）特别敏感。在新辅助或辅助化疗中，含铂方案可能更有效。 PARP抑制剂靶向治疗：对于HER2阴性的晚期或复发性乳腺癌，PARP抑制剂（如奥拉帕利、他拉唑帕利）是BRCA突变患者的标准靶向治疗，能显著延长无进展生存期。 局部治疗：  预防性对侧乳房切除术：可显著降低对侧乳腺癌风险。 乳房重建时机：因可能需术后放疗，可能影响即刻乳房重建的效果，需与外科医生详细讨论。 风险评估：显著增加对侧乳腺癌（40-60%终生风险）和卵巢癌（40-50%终生风险）。 综合性治疗与管理计划： 局部治疗：  手术治疗：根据肿块分布，可能行双侧乳房切除术+前哨淋巴结活检/腋窝淋巴结清扫。鉴于BRCA1突变和多灶性，保乳手术需非常谨慎。可同期或二期进行乳房重建。 放疗：如果保乳或淋巴结阳性，需进行术后放疗。 全身治疗： 化疗：根据肿瘤分期、分级、分子分型（如三阴性可能性大）决定。考虑使用含铂方案。 PARP抑制剂：如果是晚期或高危早期三阴性乳腺癌，可考虑在标准治疗后在辅助阶段使用奥拉帕利（根据OlympiA研究）。 内分泌治疗/抗HER2治疗：根据最终的激素受体和HER2状态决定。 降低对侧风险：强烈建议预防性对侧乳房切除术。同时，在完成生育后，建议在35-40岁后行预防性双侧输卵管卵巢切除术，以大幅降低卵巢癌风险。 随访与监测：  乳腺癌随访：常规体检、对侧乳房及患侧胸壁影像学检查。 卵巢癌筛查：在未行预防性切除前，每6-12个月进行经阴道超声和血清CA-125检查（但筛查效果有限）。 遗传咨询：告知直系亲属（姐妹、女儿）进行遗传咨询和基因检测的必要性。 【案例三】患者，男性，65岁，因“头晕、记忆力减退、性格改变2年，加重伴行走不稳半年”入院。既往有高血压病史。MRI显示广泛脑皮质萎缩，以颞叶、海马为著，脑室扩大。神经心理学评估提示重度认知功能障碍。 该患者最可能的临床诊断是什么？需要与哪些主要疾病进行鉴别诊断？ 为进一步支持诊断并探索潜在的分子病理机制，可进行哪些分子生物学或体液标志物检测？（请分别列举针对脑脊液和血液的检测项目） 目前针对该病核心病理过程的疾病修饰治疗药物有哪些？其作用靶点是什么？请简述其局限性。 答案与解析： 临床诊断与鉴别诊断： 最可能诊断：阿尔茨海默病（Alzheimer‘s Disease， AD），很可能AD。依据：隐袭起病、进行性加重的认知障碍（记忆力减退为核心），伴有精神行为症状和步态异常；MRI提示颞叶内侧和海马萎缩的典型模式。 主要鉴别诊断：   血管性痴呆：常有卒中病史，认知障碍呈阶梯式进展，MRI可见多发梗死或白质病变。 额颞叶痴呆：早期突出表现为人格行为改变或语言障碍，记忆损害相对较轻，影像学以额叶和/或颞叶前部萎缩为主。 路易体痴呆：波动性认知障碍、视幻觉、帕金森综合征。 正常压力脑积水：痴呆、步态障碍、尿失禁三联征，影像学脑室扩大与皮质萎缩不成比例。 分子与体液标志物检测： 血浆磷酸化tau（p-tau181， p-tau217等）：已证实与脑脊液p-tau及脑内tau病理高度相关，是AD特异且敏感的血液标志物。 血浆Aβ42/Aβ40比值：检测技术（如Simoa）进步使其可靠性提高。 神经丝轻链蛋白：反映轴索损伤，在多种神经退行病中升高，特异性不如p-tau。 Aβ42水平降低，或 Aβ42/Aβ40比值降低：反映脑内Aβ斑块沉积。 总tau蛋白（t-tau）升高：反映神经元损伤。 磷酸化tau蛋白（p-tau）升高：反映神经原纤维缠结病理。 组合分析：Aβ42↓ + p-tau↑ 对诊断AD具有高特异度和敏感度。 脑脊液（CSF）检测（AD诊断的生物学标志物“金标准”）： 血液检测（无创，是研究热点和未来方向）： 其他：PET成像（Aβ-PET， tau-PET）可直接显示脑内病理蛋白沉积，但昂贵。 疾病修饰治疗药物及局限性： 靶向Aβ的单克隆抗体：  药物：阿杜卡努单抗（Aducanumab）、仑卡奈单抗（Lecanemab）、多奈单抗（Donanemab）。 作用靶点：清除脑内已形成的Aβ斑块（阿杜卡努、多奈单抗靶向聚集形式的Aβ；仑卡奈单抗靶向可溶性Aβ原纤维）。 局限性：①疗效争议：只能一定程度延缓认知下降（约25-30%），不能逆转或停止疾病。②副作用：可能引发淀粉样蛋白相关影像学异常，表现为脑水肿或微出血。③价格极其昂贵。④需通过PET或脑脊液证实存在Aβ病理才适用。 局限性总结：现有药物均非“治愈性”疗法，疗效有限，副作用需严密监测，且仅适用于特定阶段（早期）的患者。对tau蛋白、神经炎症等其他病理通路的药物研发仍在进行中。 【案例四】患儿，男，3岁，因“生长迟缓、发育落后、反复肺部感染”就诊。查体：特殊面容（眼眶宽、低鼻梁），有先天性心脏病（室间隔缺损）体征。免疫学检查提示：T细胞数量显著减少，功能严重缺陷，B细胞数量正常但抗体产生低下。血钙偏低。 根据临床表现和免疫学特征，该患儿最可能的诊断是什么？其分子遗传学基础是什么？ 为确诊该病，应首选哪种分子遗传学检测技术？并解释为何此技术最适合。 该病的根本性治疗方法是什么？请简述其原理和目前面临的挑战。 答案与解析： 诊断与分子基础： 最可能诊断：DiGeorge综合征/22q11.2缺失综合征（亦称腭心面综合征）。 分子遗传学基础：绝大多数病例（>90%）由22号染色体长臂11.2区域（22q11.2）的微缺失引起。该区域包含TBX1等多个与心脏、胸腺、甲状旁腺、面部发育相关的关键基因。缺失导致第三、四咽囊衍生物发育异常，从而出现经典的四联征：先天性心脏病（Cardiac）、特殊面容（Abnormal facies）、胸腺发育不良所致免疫缺陷（Thymic hypoplasia）、低钙血症（Hypocalcemia， 因甲状旁腺功能减退），合称“CATCH-22”。 确诊检测技术及原因： 首选技术：染色体微阵列分析或基于微阵列的比较基因组杂交。 原因：该病的致病变异是染色体片段的微缺失（通常约3Mb或1.5Mb），无法通过常规染色体核型分析（分辨率低，约5-10Mb）检出。CMA技术具有高分辨率（可达kb级别），能够准确、高效地检测出22q11.2区域的拷贝数缺失，是诊断此类基因组疾病的一线标准和首选方法。FISH技术虽可靶向检测该区域，但无法确定缺失的具体边界和大小，且通常只作为CMA的验证或快速筛查。 根本性治疗方法及挑战： 根本性治疗方法：胸腺组织移植或胸腺上皮细胞移植，以及未来可能的基因治疗。 原理：该病免疫缺陷的核心是胸腺缺如或发育不良，导致T细胞无法正常发育和成熟。移植功能性的胸腺组织（通常来自无关供体手术切除的胸腺），可以为患者自身的造血干细胞提供T细胞发育的微环境，从而重建T细胞免疫。基因治疗的目标是纠正22q11.2区域的单倍体剂量不足，但技术极为复杂，尚处探索阶段。 面临的挑战： 供体来源稀缺：合适的胸腺组织供体有限。 移植相关风险：包括移植物抗宿主病（GVHD）、排斥反应、感染等。 免疫重建不完全：移植后T细胞数量和功能可能无法完全达到正常水平，B细胞功能可能仍受损。 多系统管理：即使免疫重建成功，患者仍需终身管理其先天性心脏病、内分泌问题（低钙、生长发育激素缺乏）、神经精神问题（学习困难、精神分裂症风险增高等）等其他系统症状。 基因治疗难度：大片段缺失的纠正目前在技术上不可行。